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희주 여
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Yoon, Kang-Hyun Kim, Oc-Sung Moon and Hyoung-Chin Kim* Biomedical Mouse Resource Center, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), Ochang, Korea In order to assess the

1 Lab. Anim. Res. 2010: 26(3), Microbiological Contamination of Laboratory Mice and Rats in Korea from 2007 to 2008 Young-Suk Won, Hyo-Jung Kwon, Sang-Woon Kim, Jong-Tak Han, Sae-Bhom Lee, Ki-Hoan Nam, Won-Kee Yoon, Kang-Hyun Kim, Oc-Sung Moon and Hyoung-Chin Kim* Biomedical Mouse Resource Center, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), Ochang, Korea In order to assess the microbiological contamination of laboratory mice and rats in Korea over the 2-year period from 2007 to 2008, we monitored animals housed in mouse and rat facilities equipped with barrier systems. In a barrier animal facility in Korea, the most important viruses in the identified pathogen were the mouse hepatitis virus (MHV) and Pasteurella (Pa.) pneumotropica, and Staphylococcus aureus was identified as the most common bacterial pathogen in Korea. The most commonly detected parasite in the identified pathogen was Trichomonas spp. in the mouse facilities and Entamoeba spp. in the rat facilities. In many cases, these pathogen-contaminated animals were genetically modified animals obtained from the university. Currently, consistent with the increased transfer of genetically modified animals between domestic and foreign animal facilities, the Pa. pneumotropica and parasites infection rates were shown to have increased as compared to those of the period. Indeed, the MHV infection rate has been maintained at almost 20% in Korean animal facilities over the past 10 years. These results showed that effective quarantine programs for contaminated genetically engineered mutant mice and the monitoring of regular or irregular MHV monitoring in animal colonies should help to reduce pathogen contamination in Korean animal facilities. Key words: Micobiological monitoring, Sendai virus, Pa. pneumotropica Received 3 March 2010; Revised version received 23 June 2010; Accepted 1 September 2010 동물실험의정확성과재현성은실험동물의미생물감염상태로부터심각한영향을받는다. 따라서좋은미생물학적품질을가지는동물을사용하는것은실험동물질병에의한동물실험결과의왜곡현상을막을수있으며, 또한동물실험에서사용되는동물의수를줄임으로써실험동물의복지에도중요한영향을미친다. 실험동물의미생물모니터링은높은품질의미생물학적상태를유지하는실험동물생산및시험기간중고품질의미생물상태를유지하고있는가를파악하는것이다. 실험동물의경우병원체를보유하고있는동물을실험에사용할경우실험처치가자극이되어질병이일어나므로병원체가감염되어있는실험동물을연구용으로부적절하다고할수있다. 또한질병보유동물의경우생산성이저하되며, 질병의종류에따라사육관리자나실험자에감염의위험이있 *Corresponding author: Hyoung-Chin Kim, Biomedical Mouse Resource Center, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Yangcheong-ri, Ochang-eup, Cheongwon, Chungbuk , Korea Tel: Fax: hckim@kribb.re.kr 는경우도있으므로실험동물들의질병에대해서적극적인모니터링이필요하다 (Mahler and Nicklas, 2004). 미생물모니터링은사육중인검사대상동물집단에대해선택된병원성미생물을정기적그리고반복적으로검사하는작업이다. 이를통해실험동물군에서특정병원성미생물감염여부를판단하고더나아가이러한미생물을사육집단내에서제거하여고품질의실험동물을사육및유지하는것이다 (Waggie et al., 1994). 최근유전자조작돌연변이동물 (genetically engineered mutant (GEM) animals) 의이동이국내혹은국외로부터점점증가하고있다. 이에따라여러가지미생물의감염사례가마우스와랫드에서보고되어왔다 (Baker, 1998; Rehg and Toth, 1998; Itoh, 1999). 특히 Yamamoto et al. (2001) 이일본내형질전환동물의감염정도를조사한바에의하면일반적인실험동물회사에서판매하는동물에비해유전자변형마우스의경우감염정도가심하고여러가지병원체에광범위하게감염된현상을발견하였으며, 일본내에서이동연구되는마우스에비해해외에서도입되는마우스의경우좀더높은빈도로여러병원체에감염되어있음을확인하였다. 또한최근새로운병원체출연예 249

2 250 Young-Suk Won et al. 를들자면 Helicobacter spp., Norovirus 등이면역부전동물및 GEM 동물에서보고되었다 (Fox et al., 1994; Fox and Lee, 1997; Itoh, 2000; Karst, 2003). 이러한병원체들은실험동물의생리, 생화학적인변화에따라병원성을다르게나타낸다. 따라서일반적인동물의감염시아무런임상증상이없는상태를유지하나면역겹핍동물이감염될경우심각한질병을야기할수있다. 현재국내실험동물의연구분야에서도계속적으로외국으로부터신규의유전자변형동물의도입이증가되고있는상황이다. 이러한계속변화하는국내실험동물을이용한연구동향과함께실험동물감염실태파악은국내실험동물연구자들에게가장중요하고도필수적인일일것이다. 한국생명공학연구원은 1999년부터 2007년까지 ICLAS General Assembly로부터태국의 Mahidol University의 National Laboratory Animal Center와함께 ICLAS Monitoring Subcenter로인증받은후국내의많은실험동물사육시설에대해모니터링을실시해왔으며, 1994년부터현재까지 13년간누적합계 3만여마리의소동물을미생물모니터링함으로써국내의독보적인모니터링전문기관이라고할것이다. 1994년 1개기관에서 16마리의랫드미생물모니터링을시작으로현재연평균국내 50여개기관 4,000여마리의동물을모니터링하는전문기관으로성장하였으며, 이는국내실험동물산업및연구의성장을반영하는것이라하겠다. 본연구는 2007년부터 2008년까지 2년간국내 43개의마우스청정동물사육시설과 21개의랫드청정동물사육시설에대한모니터링결과를정리하였다. 재료및방법 시료본연구에서는국내 43개청정동물사육시설로부터미생물모니터링을의뢰한 3,603마리의마우스와 21개사육시설의 547마리의랫드를시험하여얻은결과를정리하였다 (Table 1). 한국생명공학연구원의사육동물과대형실험동물공급회사의동물은본연구에서제외되었다. 모든실험동물들은에테르를이용해흡입마취한후채혈및방혈을통해희생시켰다. 혈액학적검사한국생명공학연구원은 27가지의마우스병원체와 24가지랫드병원체를검사해왔다. 이들병원체는바이러스, 세균, 곰팡이, 기생충을포함하며본연구에서는그중국내발생빈도가높은 19개의마우스병원체와 20개의랫드병원체를선정하여검사를실시하였다 (Table 2). 모든바이러스및 Tyzzer s disease (Clostridium piliforme) 와 Mycoplasma pulmonis는혈청학적으로검사하고 enzymeliked immunosorbent assay (ELISA) 를통해 1차진단을실시하였고, 양성으로의심되는혈청에대해 indirect immunofluorescent antibody (IFA) 방법을통해확진하였다. 모든 ELISA plate 및 IFA slide는 ICLAS Monitoring Center (Kawasaki, Japan) 의해생산된것을사용하였다. ELISA에의한검사방법을간단히요약하자면희석된혈청과양성대조혈청을 ELISA plate에넣은후 37 o C에서 60분간배양하였다. 그후 0.25% Tween 20이첨가된 phosphate-buffered saline (PBS-Tween) 으로수세한후 enzyme conjugated protein A 혹은 anti-rat IgG를넣은후 37 o C에서 60분간배양하였다. PBS-Tween으로수세한후이 plate에기질로써 O-phenylenediamine dihydrochloride (Sigma, St. Louis, USA) 를첨가하여발색하였다. 이반응은 10분후 3.5 N H 2 SO 4 를첨가하여중지시킨후흡광도를 ELISA reader (Tecan, Durham, USA) 를이용해 495 nm에서측정하였다. ELISA를통해양성으로판단된혈청에대해다음과같은방법으로 IFA를실시하였다. 아세톤으로고정된 IFA slide에양성대조혈청과시험혈청을넣은후 37 o C에서 20분간배양하였다. Slide를 PBS로수세한후 FITC-conjugated anti-mouse 혹은 anti-rat IgG를첨가하고, 37 o C에서 20분간배양한후이 slide를다시 PBS로수세한후형광현미경을통해관찰하였다. 배양검사배양검사는 Citrobacter rodentium (Ci.), Corynebacterium (Co.) kutscheri, Pasteurella (Pa.) pneumotropica, Salmonella spp., Pseudomonas (Ps.) aeruginosa, Staphylococcus (Sta.) aureus, Bordetella bronchiseptica, Streptococcus (Str.) pneumoniae의항목에대해실시하였다. 호흡기병원성미생물을채취하기위해비강점액과기관지에서채 Table 1. Number of organizations and animals investigated in this study Classification Mouse Rat No. of organizations No. of animals No. of organizations No. of animals Company University 31 2, Research institute Total 43 3,

3 Microbiological contamination of laboratory animals 251 Table 2. Selected pathogen list for microbiological monitoring in this study Classification Name of pathogens Mouse Rat Virus Bacteria Parasite Ectromelia virus Hanta virus (Hemorrhagic fever with renal syndrome) Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) Mouse hepatitis virus (MHV) Sendai virus Sialodacryoadenitis (SDA) virus Bordetella bronchiseptica Citrobacter rodentium Corynebacterium kutscheri Mycoplasma spp. Pasteurella pneumotropica Pseudomonas aeruginosa Salmonella spp. Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae Tyzzer s disease Pinworms Tritrichomonas spp. Hexamita spp. Chilomastix spp. Entameoba spp. Octomitus spp. Giardia spp. Ectoparasites 취한미생물을 blood agar에접종배양하였으며, 장내병원성미생물의분리를위해맹장내용물을 DHL agar (Merck, Darmstadt, Germany), Vogel Johnson agar (Merck), Pseudomonas selective agar (Merck) 에접종하였다. 37 o C 에서 24시간혹은 48시간배양후세균집락을선택하여생화학적인동정, 항생제내성시험등을실시하였다. 기생충검사기생충학적인시험은직접도말및셀로판테이프시험등을통해외부기생충및장내원충그리고 pinworm 등을검사하였다. 십이지장과맹장내용물은직접도말법에의해시험하였으며, 생리식염수를이용한습윤 mounting 후현미경으로관찰하였다. 기생충은현미경상에서형태와움직임을보고동정하였으며, Pinworm, Tritrichomonas spp., Hexamita spp., Chilomastix spp., Entameoba spp., Octomitus spp., Gialdia spp., 그리고외부기생충으로분별하였다. 통계처리전체마우스 43개및랫드 21개청정동물사를대상으로바이러스, 세균및원충에대한감염동물사의비율을백분율로나타내었다. 결 청정동물사에서사육중인마우스의미생물감염률 2007년에서 2008년까지한국생명공학연구원에서실시한모니터링결과를분석한결과금번조사에서가장두드러진특징은 년도발생되지않았던마우스 Sendai virus 감염률이 년도조사에서 25.0% 로증가한후 년의조사에서는 2.3% 의감염률을나타내어최근 10년간의미생물감염을조사한이래가장급격한감염률변화를나타내었다 (Won et al., 2006; Won et al., 2007) 년에가장높은감염률을나타낸바이러스는 mouse hepatitis virus (MHV) 로써조사기관 43개기관중 11개기관이감염되어 25.6% 의감염률을나타내었다 (Figure 1A). 이바이러스는 연구에서는국내감염율이 19.2% 를나타내어, 기간중바이러스에의한실험동물사의감염이예년에비해증가된것으로판단된다. MHV의경우국내병원체감염률을조사한이래꾸준히약 20% 정도의감염률을나타내어국내바이러스감염원중가장일반적이고광범위하게감염되는바이러스로판단된다. 이바이러스는카테고리 B에속하는바이러스로서전염성이높고, 실험에중대한영향을미치는 과

4 252 Young-Suk Won et al. Figure 1. The microbiological contamination in the mouse breeding facilities. The indicated values shown are prevalence in animal facilities. Several pathogens not listed in Figure 1 were not isolated in this study. A: The prevalence of bacteria, virus and parasite in mouse facilities, B: The prevalence of intestinal parasites in mouse facilities. 병원체 (Waggie et al., 1994) 로서이전연구에서와마찬가지로국내실험동물을이용한전임상혹은 in vivo 연구에있어서커다란장애요인으로작용하고있다. 세균으로서 Pa. pneumotropica와 Sta. aureus가모든병원체중가장많이발견되었으며, 43개기관중 17개그리고 20개의청정동물사에서각각발견되어 39.5% 와 46.5% 의감염률을나타내었다 (Figure 1A). Pa. pneumotropica 는카테고리 C에속해있었으나최근기회감염세균으로즉카테고리 D에속하는세균으로 ICLAS Monitoring Center에서제안하고있다 (Hayashimoto et al., 2005). Sta. aureus 역시카테고리 D에속하는세균으로 ICLAS Monitoring Center에서제안하고있다 (Waggie et al., 1994). 이들세균의감염률또한 의조사결과와비교하여 Pa. pneumotropica의경우 30.0% 에서 39.5% 로증가되었으며 Sta. aureus 역시 25% 에서 46.5% 로감염률이증가하였다. 이러한기회감염세균의감염률증가는유전자변형동물및돌연변이질환모델동물의연구증가와함께증가되어왔으며이에대응한적절한조치가없을경우유전자변형마우스를이용한연구환경변화와함께유입된동물에의해지속적인감염증가및감염유지가예상된다. 그밖에 Ps. aeruginosa 가 2.3% 의동물사에서감염이발견되었으며바이러스로서인수공통전염병을일으키는 LCMV와동물의집단폐사를유발하는 Ectromelia virus는국내실험동물사에서는발견되지않았다. 또한세균으로써 Mycoplasma spp., Ci. rodentium, Co. kutscheri, Tyzzer s disease, 그리고인수공통전염병으로서 Salmonella spp. 등은발견되지않아국내청정사육실에서사육되는마우스에서는지난번조사에이어금번조사에서도인수공통전염병의감염을발견할수없었다 (Figure 1A).

5 Microbiological contamination of laboratory animals 253 Figure 2. The microbiological contamination in the rat breeding facilities. The indicated values shown are prevalence in animal facilities. Several pathogens not listed in Figure 2 were not isolated in this study. A: The prevalence of bacteria, virus and parasite in rat facilities, B: The prevalence of intestinal parasites in rat facilities. 청정동물사에서사육중인랫드의미생물감염률마우스의경우와마찬가지로 Sendai virus의감염률변화를살펴보면 년도약 6% 정도불과하던랫드 Sendai virus 감염률은 년도에서 30.0% 로급격히증가한후 년의조사에서는모든기관에서 Sendai virus 감염이관찰되지않았다. 따라서 2004 년말부터시작된 Sendai virus 감염은현재국내실험동물사내에서사라진듯보이나검사를실시하지않은다른기관에대한추가적인조사가필요할것으로생각된다. 또한랫드코로나바이러스인 sialodacryoadenitis (SDAV) 는 21개기관중 2개기관에서양성으로나타나 9.5% 의감염률을나타내었다 (Figure 2A). 세균감염률조사에서 Pa. pneumotropica 감염률이랫드의병원체중가장높은빈도를나타냈으며, 총 21개조사기관중 10개의기관에서양성으로나타나 47.6% 의감염률을나타내었다. 이는 년연구결과 35.0% 에비해많은수가증가한것으로원인에대한추가적인 연구가필요한상황이다. Sta. aureus의경우양성율이 52.4% 를나타내어 년도 60% 에비해감소하였으며, Ps. aeruginosa 역시 10% 에서 4.8% 로감소되어일부세균을제외한나머지항목은감염률이감소하는경향을나타내었다. Mycoplasma spp., Co. kutscheri, Salmonella spp., Bordetella bronchiseptica, 그리고 Str. pneumoniae 등은분리및동정되지않았다 (Figure 2A). 실험용마우스및랫드의원충감염국내청정동물사육실에서사육중인마우스의장내원충감염률은 년도 44.2% 에서 년도에는 53.5% 로크게증가하였으며, 가장높은감염률을나타내는원충은 Trichomonas spp. 로서전체 43기관중 15개기관에서검경되어 34.9% 의감염률을나타내었다. Entameoba spp. 는 12개시설에서발생해 27.9% 의감염률을나타내었으며, Chilomastix spp. 역시 12개시설에서발생해 27.2% 의감염률을기록하였다. 또한 Octomitus

6 254 Young-Suk Won et al. spp. 30.2% 의감염률을나타내어, 년도조사결과와마찬가지로가장높은발생률을나타내는원충중상위 4가지모두는비병원성원충으로나타났다 (Figure 1B). 하지만동물의상태를알아볼수있는표지마커로지정된 Pinworm 의경우 18.6% 가감염되어 년도전혀발생되지않은것에 (Won et al., 2007) 비해감염률이증가하는경향을보였으며다양한비병원성원충류역시최저 8% 에서최고 20% 까지감염률이증가하여비병원성기생충에대한국내여러연구기관에서적극적인청정화노력이이루어지지않음을알수있었다 (Figure 1B). 랫드의경우청정동물사육실 21기관중 5곳에서 Entamoeba spp. 와 Pinworm이발견되어가장많이감염된기생충이었으며마우스와마찬가지로 년도조사와비교할때높은발생률을나타내었다 (23.8%). 그밖에 Chilomastix spp. 와 Trichomonas spp. 는각각 2곳과 1곳의동물사에서발견되어 9.5% 와 4.8% 의감염률을나타내었다 (Figure 2B). 고찰 본연구는국내청정실험동물사육구역의미생물학적인감염상태를 2007년부터 2008년까지 2년간관찰하였다. 최근 5년간국내실험용마우스및랫드의미생물감염생태에서가장두드러진특징은 Sendai virus의비약적인감염률증가와이후감염률의급격한하락이다. 국내다수의연구자및실험동물사가 2004년후반부터 2005년후반까지 Sendai virus에의해피해를보았고, 그동안감염된동물의처리와감염된동물사의복구를위해많은돈과시간을소비하였으며, 국가적으로도연구실적의후퇴를가져올수밖에없었다 (Won et al., 2007). 하지만본연구에서조사한바와같이 년간실험동물사에서 Sendai virus가감염된기관은마우스에서단 1개기관으로써감염이진행중이던 년에감염률 25% 에비해급격한하락을나타냈다. 하지만모든마우스가이바이러스에청정화를이루고있다고보기는힘들며금번조사에서 1개기관이감염을나타낸것을고려할때, 조사대상이아니었던일부동물사에서는감염이계속적으로발생하는것으로추측된다. 이바이러스는호흡기 -구강경로 (respiratory-oral routes) 로직접적인접촉에의해빠르게전파하며비강으로부터방출되는비말핵 (droplet nuclei) 으로도사육공간간의감염이빠르게발생된다 (Waggie et al., 1994). 따라서추후 Sendai virus 감염동물사에대한적극적인관리및감염추이파악이없다면또다른전국적인감염의원인으로작용할가능성이높을것으로사료된다. 지난 10년간의바이러스감염추이와마찬가지로금번연구에서도역시 MHV는국내에서가장많이발생하는 바이러스병원체로밝혀졌다. 하지만 년도연구에서는약 25.6% 의동물사에서 MHV감염이발견되었으며 (Figure 1A) 이는조사가시작된 1999년이래가장높은감염률이었다. 감염이증가된원인에대해확실히밝혀지지않았지만대부분의경우 MHV가감염된동물사육시설이가까이위치하거나국내외에서입수한동물을사육하고있었으며부가적으로대부분의감염은저병원성 MHV에의해발생되었다. 따라서국내실험동물 MHV감염은감염시설의관리및동물입수와관련이있는것으로사료된다. 이와관련하여 MHV 감염률을낮추기위해동물도입과정에서검역강화및추가적인조사없이는계속적인국내동물사감염은피할수없을것으로판단된다. MHV의감염을줄이기위해정기적인모니터링및검역을포함한부정기모니터링이필요한상황이지만국내의 GLP기관에서조차자체미생물모니터링실시율이 57% 에불과한상황이며모니터링수역시 5마리미만의검사가전체 GLP 기관의 70% 를차지하는등 (Lee et al., 2008) 국내미생물모니터링실적은저조한상황이다. 또한국내에서미생물모니터링수행방법을조사한바에의하면 32% 의기관만이자체실험실에서직접수행하거나외부기관에의뢰하였으며대부분의경우구매처의시험성적서로대치하는경우가많아 (41%) 구매처의감염사고에대한대처가미흡하고기관별검역기능이매우취약해외부감염동물의유입차단이매우쉽게이루어지는상황이다 (Shim et al., 2008). 현재각종실험동물질병을근절하기위해충분한수의모니터링을실시할수있도록지원과관심그리고국내실험동물사운영자의모니터링에대한인식제고가필요한상황이다. 세균감염에있어서 Pa. pneumotropica와 Sta. aureus의감염이마우스와랫드모두에서높게나타났다. 특히 Pa. pneumotropica의경우 년의조사와비교하여마우스및랫드에서 10% 이상의감염률증가가조사되었다. 최근몇년간의급격한 Pa. pneumotropica의감염경향은신규로도입되는동물에대한검역부재혹은기회감염세균이므로적절한조치를취하지않아감염개체의축적등의원인으로향후높은감염률이계속유지될것으로판단되며지속적으로관리하지않을경우국내실험동물사에서상당기간높은비율의감염상태가유지될것으로예상된다. 또한 Pa. pneumotropica 감염동물을청정화하기위한비용역시증가할것으로예상되어국내실험동물연구자들에게큰부담으로작용할것으로예상된다. 따라서계통보존구역에대한보다적극적인 Pa. pneumotropica 감염에대한검역기능의강화그리고이에대한대응및청정화노력이있어야이세균에감염률이저하될것으로판단된다. 그밖에 Ps. aeruginosa와 Mycoplasma spp. 등의감염률은지난번조사와크게달라지지않았다.

7 Microbiological contamination of laboratory animals 255 원충의감염에있어서전체동물사중기생충이감염되어있는동물사는마우스의경우 37.5% 에서 53.5% 로증가하였다. 특히예년과마찬가지로비병원성원충인 Entamoeba spp., Chilomastix spp., Octomitus spp. 및 Trichomonas spp. 의감염률이마우스에서가장높게나타났다. 이러한비병원성원충역시 Pa. pneumotropica와마찬가지로국내에서수입되는형질전환동물이계속적으로증가하며함께증가하는것으로판단되며그밖에 다른원인으로이들원충들이동물에게질병을야기하지않음으로검역시발견했더라도별다른연구장애가발생되지않고청정화를실시할때비용및시간소모가발생됨으로인해실험동물사관리자및연구자에의해적절한조치가이루어지지않고있다고추측할수있다. 따라서이러한병원체에대한실험동물사의대응방식의변화가없을경우향후지속적인높은감염률이유지될것으로예상된다. 결론적으로우리는 2007년부터 2008년까지의국내실험동물사의감염실태를파악하였으며, 마우스및랫드에서가장일반적인바이러스감염원은 Rodent corona virus 로서 MHV 및 SDAV였다. 세균으로써 Pa. pneumotropica 와 Sta. aureus등기회감염균이었으며기생충으로써는 Tritrichomonas spp. 와 Entameoba spp. 였다. 이들병원체의감염률은 년도조사에비해증가되었으며이는형질전환및질환모델동물을이용한실험의증가와함께국내로유입된실험동물과관련이있을것으로추정된다. 추후이들병원체에대한적절한조치가없을경우병원성이약한기회감염세균및비병원성기생충류등이장기간국내동물사에서높은감염률을나타낼것으로판단된다. 감사의글 본연구는 KRIBB기관고유사업의연구비지원에의해한국생명공학연구원의생명마우스센터에서수행된결과의일부이며이에감사하는바입니다. 참고문헌 Baker, D.G. (1998) Natural pathogens of laboratory mice, rats, and rabbits and their effects on research. Clin. Microbiol. Rev. 11, Fox, J.G. and Lee, A. (1997) The role of Helicobacter species in newly recognized gastrointestinal tract diseases of animals. Lab. Anim. Sci. 47, Fox, J.G., Dewhirst, F.E., Tully, J.G., Paster, B.J., Yan, L., Taylor, N.S., Collins, M.J.Jr., Gorelick, P.L. and Ward, J.M. (1994) Helicobacter hepaticus sp. nov., a microaerophilic bacterium isolated from livers and intestinal mucosal scrapings from mice. J. Clin. Microbiol. 32, Hayashimoto, N., Aiba, T., Itoh, K., Kato, M., Kawamoto, E., Kiyokawa, S., Morichika, Y., Muraguchi, T., Narita, T., Okajima, Y., Takakura, A. and Itoh, T. (2005) Identification procedure for Pasteurella pneumotropica in microbiologic monitoring of laboratory animals. Exp. Anim. 54, Hsu, C.C., Wobus, C.E., Steffen, E.K., Riley, L.K. and Livingston, R.S. (2005) Development of a microsphere-based serologic multiplexed fluorescent immunoassay and a reverse transcriptase PCR assay to detect murine norovirus 1 infection in mice. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 12, Itoh, T. (1999) Quality testing system for SPF animals in Japan and problems in the management of such systems. In: Microbial and Phenotypic Definition of Rats and Mice, pp , National Academy Press, Washington DC. Itoh, T. (2000) Emerging diseases in mice and rats. In: Microbial Status and Genetic Evaluation of Mice and Rats, pp National Academy Press, Washington DC. Karst, S.M., Wobus, C.E., Lay, M., Davidson, J. and Virgin, H.W. (2003) STAT1-dependent innate immunity to a Norwalk-like virus. Science 299, Lee, B.C., Jang, M.K., Chae, K.R., Hwang, D.Y., Kim, B.G., Jee, S.W., Shim, S.B., Lee, S.H., Sin, J.S., Bae, C.J. Woo, J.M. Cho, J.S. Joo, K.S. and Kim, C. K. (2008) Survey on the current status of laboratory animal quality control program in Korea. Lab. Anim. Res. 24, Mahler M. and Nicklas W. (2004) Health monitoring. In The laboratory mouse (Hendrich, H.J.), pp , Elsevier academic press, London. Rehg, J.E. and Toth, L.A. (1998) Rodent quarantine programs: purpose, principles, and practice. Lab. Anim. Sci. 48, Shim, S.B., Hwang, D.Y., Kim, C.K., Kim, Y.K., Jee, S.W., Lee, S.H., Hwang, Y.M., Lee S.H., Seo, S.J. Kang, H.G. and Cho, J.S. (2006) Survey on current status of laboratory animals for establishing new national policy. Lab. Anim. Res. 22, Waggie, K., Kagiyama, N., Allen M.A. and Nomura, T. (1994) Manual of Microbiologic Monitoring of Laboratory Animals, 2nd ed., NIH Publication, Maryland. Won, Y.S., Jeong, E.S., Park, H.J., Lee, C.H., Nam, K.H., Kim, H.C., Hyun, B.H., Lee, S.K. and Choi, Y.K. (2006) Microbiological contamination of laboratory mice and rats in Korea from 1999 to Exp. Anim. 55, Won, Y.S., Kwon, H.J., Choi, Y.K., Kim, S.W., Lee, H.J., Koo, B.C., Lee, S.B., Nam, K.H., Moon, O.S., Jeong, E.S. and Kim, H.C. (2007) Microbiological contamination of laboratory mice and rats in Korea from 2004 to Lab. Anim. Res. 23, Yamamoto, H., Sato, H., Yagami, K., Arikawa, J., Furuya, M., Kurosawa, T., Mannen, K., Matsubayashi, K., Nishimune, Y., Shibahara, T., Ueda, T. and Itoh, T. (2001) Microbiological contamination in genetically modified animals and proposals for a microbiological test standard for national universities in Japan. Exp. Anim. 50,

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386-390.hwp 386 HANYANG MEDICAL REVIEWS Vol. 29 No. 4, 2009 우리나라 미숙아의 통계와 의료비용 Statistics and Medical Cost of Preterm in Korea 윤혜선 을지대학교 노원을지병원 소아청소년과학교실 Hye Sun Yoon, M.D., Ph.D., Department of Pediatrics, Nowon