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지명 영
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1 Korean J. Pl. Taxon. 44(3): (2014) ISSN Korean Journal of Plant Taxonomy Intraspecific variation and geographic study of Lonicera insularis (Caprifoliaceae) based on chloroplast DNA sequences Keum Seon Jeong, Mi Sun Kim, Woong Lee and Jae-Hong Pak* Department of Biology Kyungpook National University 1370 Sankyuk-dong, Buk-gu, Daegu , Korea (Received 12 July 2014; Revised 10 September 2014; Accepted 16 September 2014) 엽록체 DNA를이용한섬괴불나무 (Lonicera insularis Nakai) 의종내변이및지리학적연구 정금선 김미선 이웅 박재홍 * 경북대학교자연과학대학생물학과 ABSTRACT: Lonicera insularis Nakai (Caprifoliaceae) is Korean endemic plant that lives along the shore of Ulleungdo and Dokdo. The aim of this study is to construct a phylogenetic relationship within six species (L.maackii, L.chrysantha, L.subsessilis, L. harai, L. morrowii) of genus Lonicera L. and Wigela subsessilis as outgroup and intraspecific variation of L. insularis using chloroplast DNA five regions sequences. Sequence analysis revealed that both L. insularis and L. morrowii showed complete homologies in the intergenic regions of trnl-trnf, trns-trng, psbm-trnd and matk coding region. However, sequence in the petn-psbm intergenic region showed a single nucleotide difference between both species, thus we designated them as CP01 and CP02. The plants having CP01 are prevalent in the Ulleungdo and Dokdo, while L. insularis and L. morrowii from Ulleungdo and of Dokdo, and Japan have CP02. This confirmed the existence of two cp DNA lineages with different geographical distributions. We can infer the allopatric speciation by geographical barrier. The result will provide the important basal data to study speciation and specie evolution of ocean islands such as Ulleungdo and Dokdo. Keywords: Lonicera insularis, Ulleungdo, Dokdo, Chloroplast DNA, intraspecific variation 적요 : 섬괴불나무 (Lonicera insularis Nakai) 는인동과 (Caprifoliaceae) 인동속 (Lonicera L.) 에속하는관목으로울릉도와독도의해안가지역에분포하는한국특산식물이다. 섬괴불나무와인동속의근연종인괴불나무, 청괴불나무, 각시괴불나무, 길마가지나무, L. morrowii, 병꽃나무 7 분류군과의유연관계를밝히고, 섬괴불나무의종내변이를확인하기위해엽록체 DNA 5 개영역의염기서열을분석하였다. 분석결과전체 3.2kb 의염기서열이결정되었고, 섬괴불나무와 L. morrowii 에서 2 개의엽록체 DNA haplotype(cp01-02) 이결정되었다. 섬괴불나무는한개의염기치환으로 CP01 type 과 CP02 type 으로구별되었으며, 일본의 L. morrowii 와는 CP02 type 을공유하였다. 섬괴불나무에서확인된두개의 CP type 은 1) 진화적으로뚜렷한두개이상의계통을가지며, 이는하나이상의유입경로를통해울릉도로유입되었을가능성을높게지지한다. 그리고, 2) 형태학적으로구별되는섬괴불나무와 L. morrowii 의 CP type 의공유는두종의지리적인장벽에의한이소적종분화의결과로추론할수있다. 본연구에서확인된울릉도와독도의섬괴불나무의종내변이및다양성에관한결과는울릉도및독도식물의분자생물지리학적연구로대양섬의생물학적진화양상과종분화과정에중요한기초자료로활용될것이다. 주요어 : 섬괴불나무, 울릉도, 독도, 엽록체 DNA, 종내변이 *Author for correspondence: jhpak@knu.ac.kr Copyright 2014 the Korean Society of Plant Taxonomists 202

2 Intraspecific variation and geographic study of Lonicera insularis (Caprifoliaceae) based on chloroplast DNA sequences 203 섬괴불나무 (Lonicera insularis Nakai) 는인동과 (Caprifoliaceae) 인동속 (Lonicera L.) 에속하는관목으로울릉도와독도의해안가지역에분포하는한국특산식물이다. 인동속은약 200여종이전세계에분포하고있으며, 중국 ( 약 100여종 ), 일본 ( 약 25여종 ), 한국 ( 약 30여종 ) 을중심으로동아시아지역이주요분포지로알려져있다 (Nakai, 1927; Cronquist, 1981; Ohwi, 1984; Chung, 1985). 울릉도와독도는해저화산활동으로기원된대륙과한번도연결된적이없는대양섬으로 (Kim, 1985), 지리적으로한반도와러시아대륙, 일본열도에둘러싸여있다. 이러한지리적인위치는울릉도와독도식물들의다양한방법을통한원거리분산의가능성을높여식물의유입과진화과정에도큰영향을미쳤을것이다 (Lee and Pak, 2010). 울릉도는다른비슷한면적의섬지역에비해특산종의비율이높으며, 지금까지약 30여종의특산식물이보고되어있다. Sun and Stuessy(1998) 는이들중대부분은대륙선구종들이원거리분산에의해울릉도와독도에정착한후향상진화 (anagenesis) 를통해종의진화가이루어졌을것이며, 지금의형태학적유전학적다양성을획득하게되었을것으로생각하였다. 식물종들의현재분포양상은이주와멸종의결과로돌연변이, 유전적부동및유전자확산등여러가지요인에의해그유전적변이의분포양상이다양하게나타난다 (Hewitt, 2000). 유전적변이에의해확인되는다양한유전적분포양상은식물의기원과진화를밝히기위한중요한정보이다. 이러한식물의기원과진화에관한연구방법으로는주로분자학적연구가많이이루어지고있으며, 그중엽록체 DNA는느린진화율과재조합하지않는특성때문에집단형성경로를찾기위한유용한 marker 로이용된다 (Rendell and Ennos, 2003; Heuertz et al., 2004). 엽록체 DNA를이용한분자학적연구는계통유연관계분석뿐만아니라유전자이동, 유전자확산그리고지리적분포를조사하는데유용한정보를제공하고있다 (Schaal et al., 1998; Taberlet et al., 1998). 울릉도에분포하는식물종에대한분자생물지리학적연구로는섬단풍나무와우산고로쇠의엽록체 DNA 염기서열을이용한연구가있으며, 울릉도의섬단풍나무와우산고로쇠는각각한반도의당단풍나무와고로쇠나무에서유래되었을가능성을제시하였다 (Sun and Stuessy, 1998; Jakubowsky et al 2006). 또한최근의 Lee and Pak(2010) 의연구에서는울릉도와독도의자생하는섬기린초의엽록체 DNA 염기서열분석을통해섬기린초의종내변이와뚜렷한 haplotype 의분포양상을확인하고, 진화적으로서로다른두개이상의계통이있음을추정하였다. 울릉도와독도에분포하는섬괴불나무는소지가비어있고, 꽃은 5-6월에개화하고꽃색은백색에서황색으로변한다. 식물체전체에밀생하는부드러운융모는다른분류군들과구별짓는주요고유형질이다 (Nakai, 1927). 섬괴불나무의계통학적연구와기원에관한연구는 Sun (2002), Jeon(1993) 등의연구가있다. Jeon (1993) 의연구는섬괴불나무를포함한 sect. Ochranthae 분류군들의외부형태학적형질을이용한계통학적연구로섬괴불나무는소포가완전히분리되거나기부만이유합되는공통적인특징으로각시괴불나무, 물앵도나무, 괴불나무와가까운유연관계를확인하였다. 그러나, RAPD 를이용한분자학적연구에서는섬괴불나무는길마가지나무와더가까운유연관계를확인하여형태학적연구와는다른결과를나타내었다 (Jeon, 1993). Sun(2002) 은일본의북해도와혼슈의동해지역에자생하고있는 L. morrowii A. Gray 를울릉도에자생하는섬괴불나무의기원종으로추론하여, 일본의 Oki 섬으로부터독도와울릉도로유입되었을가능성을제시했다. 이는독도의지사학적연령이울릉도보다더오래되었고, 과거에는독도가현재보다더큰화산으로형성되어훨씬더다양한환경을이루었을가능성때문일것으로설명하고있다. 두종은외부형태학적으로섬괴불나무는 L. morrowii 에비해잎이넓으며화관이 5 열하지않는형태학적차이를보이고있어 (Lee, 1996) 형태적으로구별되지만, 두종의명확한유연관계파악을위해서는형태학적, 유전학적등의연구가필요하다. 또한, 현재독도에분포하고있는섬괴불나무는 Kim(1998) 의분포기록에의하면, 1974 년부터 1996 년까지울릉도로부터총 425 그루가식재된것으로확인되며이후현재까지그중몇개체만이잔존하는것으로추정하고있어독도섬괴불나무의기원에관한연구가필요하다. 본연구에서는울릉도와독도에분포하는특산식물인섬괴불나무의엽록체 DNA 염기서열을이용한분자학적연구를통해근연종간의유연관계를밝히고, 기원을추정하여울릉도와독도의식물지리학적중요성과보전의필요성을설명하는데필요한기초자료로활용하고자한다. 재료및방법 재료울릉도, 독도, 한반도로부터섬괴불나무, 각시괴불나무, 길마가지나무, 괴불나무, 청괴불나무, 병꽃나무와일본 Oki 섬에서채집한 L. morrowii A. Gray 등 7 개분류군의증거표본을만들었다. 원기재문과참고문헌 (Nakai, 1927, 1938; Lee, 1979; Ohwi, 1984) 을이용하여동정하고경북대학교표본실 (KNU) 에보관하였다. 엽록체 DNA 의염기서열분석에이용한분류군에대한채집지를 Table 1 에정리하였다. DNA 추출, PCR 과염기서열및계통수작성 DNA 추출은생체또는건조표본을이용하였다 (Table 1). DNA 추출은 Dolye and Dolye (1987) 의 CTAB (Cetyltrimethyl-ammonium Bromide) 방법과 DNeasy Plant Mini Kits (Qiagen, Valencia, California) 를이용하였다. DNA 증폭은 10 ng 의주형 DNA, 10 pmol 의양방향 primer, 1 unit 의 Taq

3 204 Keum Seon Jeong, Mi Sun Kim, Woong Lee and Jae-Hong Pak Table 1. Sampling site of Lonicera L. used for morphological and molecular analysis. Species Locality Sample No. Coordinates (N/E) L. insularis Nakai ( 섬괴불나무 ) Gyeongsangbuk-do, Is. Ulleung, Dodong La1~15 37 o 29' 04.7'' N, 130 o 54' 45.8'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Ulleung, Summok La16~18 37 o 32' 29.2'' N, 130 o 54' 54.5'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Ulleung, Cheonbu La19~35 37 o 32' 33.0'' N, 130 o 53' 09.4'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Ulleung, Namyang La36~39 37 o 27' 28.4'' N, 130 o 52' 14.4'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Ulleung, Hyeonpo La40 37 o 31' 30.7'' N, 130 o 49' 12.8'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Dokdo, Dong-do La41~43 37 o 14' 30.4'' N, 131 o 51' 51.9'' E Gyeongsangbuk-do, Is. Dokdo, Seo-do La44~45 37 o 14' 37.9'' N, 131 o 51' 33.3'' E L. maackii (Rupr.) Maxim ( 괴불나무 ). Gyeonggi-do pocheonsi soheul-eub Lm1 37 o 55' 22.5'' N, 127 o 23' 09.8'' E Gyeongsangbuk-do, Mt. Unmun-san Lm2 35 o 40' 02.7'' N, 128 o 57' 57.5'' E L. chrysantha Turcz ( 각시괴불나무 ) Jeonllabuk-do Mt. Deogyu-san Lc1 35 o 51' 44.9'' N, 127 o 44' 33.0'' E L. subsessilis Rehder ( 청괴불나무 ) Gyeongsangbuk-do youngyang-gun Ls1 36 o 40' 40.5'' N, 129 o 05' 46.0'' E Gangwon-do Mt. Seorak-san Ls2 37 o 32' 19.3'' N, 128 o 14' 55.1'' E E L. harai Makino ( 길마가지나무 ) Jeju-do, Aewol-eup Lh1 33 o 27' 55'' N, 126 o 46' 40'' E L. morrowii Gray Shimane Is. Oki, Japan Lw1,2 36 o 17' 45'' N, 133 o 21' 45'' E W. subsessilis L.H.Bailey ( 병꽃나무 ) Gyeongsagnam-do Mt. Gaji-san Ws1 35 o 40' 21.7'' N, 128 o 58' 18.6'' E Table 2. Primers used for amplification of intergenic and coding regions of chloroplast genes in this study. Falnaking Genes Primer sequence Tm( o C) References trnl-trnf trns-trng petn-psbm psbm-trnd F 5' AGG GTT CAA GTC CCT CTA TCC C 3' R 5' GAT TTG AAC TGG TGA CAC GAG G 3' F 5' AGA TAG GGA TTC GAA TTC GAA CCC TCG GT3' R 5' TTT TAC CAC TAA ACT ATA CCC GC 3' F 5' GTC TTG CTT GGG CTG CTT TAA TGG 3' R 5' TTC TTG CAT TTA TTG CTA CTG C 3' F 5' GCA GTA GCA ATA AAT GCA AGA A 3' R 5' GGG ATT GTA GTT CAA TTG GT 3' F 5' TGT CAT AAC CTG CAT TTT CC 3' matk R 5' TGG GTT GCT AAC TCA ATG G 3' F: forward, R: reverse, Tm: annealing temperature 50 Taberlet et al.(1991) 59 Hamilton(1999) 55 Lee and Wen(2004) 55 Lee and Wen(2004) 55 Johnson and Soltis(1994) DNA polymerase(takara사의 Ex Taq) 를포함한 20 ul 증폭용반응액을제작하여, Perkin Elmer사의 PE 2400기계를이용하였다. 증폭을위한 primer는 trne-trnf intergenic region, trns-trng intergenic region, petn-psbm intergenic region, psbmtrnd intergenic region, matk gene을이용하였다 (Table 2). 증폭반응은 95 o C에서 3분간 incubation후, 94 o C 1분간 denaturation, 50 o C-59 o C 1분간 annealing, 72 o C에서 1분간 extension을 35-38회반복하였으며, 72 o C에서 10분간 final extension을수행하였다 (Hamilton, 1999; Johnson and Soltis, 1994; Lee and Wen, 2004). 증폭반응후, 증폭여부및증폭산 물의농도는 λdna 를 marker 로이용하여 1% agarose gel 상에서전기영동후확인하였다. 각분류군의엽록체 DNA region 의염기서열은 CLUSTAL X (Thompson et al., 1997) program 을이용하여정리한후, BIOEdit program 을사용하여보정하였다. 계통분석 (phylogenetic analysis) 은인동속의 6 분류군과외군인병꽃나무로부터얻어진엽록체 DNA region 의염기서열을근거로 PAUP 4.0b10 program (Swofford, 2002) 을이용하여수행하였다. 전체염기서열중 gap 은모두결여형질 (missing character) 로처리하였으며정렬된염기서열의모든 character 는 unordered, unweighted,

Intraspecific variation and geographic study of Lonicera insularis (Caprifoliaceae) based on chloroplast DNA sequences 205 Table 3. Gene bank numbers of submitted sequences for Lonicera L.

4 Intraspecific variation and geographic study of Lonicera insularis (Caprifoliaceae) based on chloroplast DNA sequences 205 Table 3. Gene bank numbers of submitted sequences for Lonicera L. used in this study. Species trnl-trnf trns-trng petn-psbm psbm-trnd matk* L. harae AB AB AB AB a L. chrysantha AB AB AB AB a L. maackii AB AB AB AB a L. morrowii AB AB AB969768) AB a L. subsessilis AB AB AB AB a L. insularis AB AB AB969763(CP01) AB969764(CP02) AB a W. subsessilis AB AB AB AB a *a: Not yet given the accession number of those sequences from NCBI character 로설정하였다. 계통분석은 heuristic search 를이용하여수행하였으며계통수는병꽃나무를외군으로선정하여 rooting 하였다. Bootstrap value 를얻기위해 parsimony analysis 에사용한선택사항을모두적용하여 heuristic search 를 1000 번반복하였다. 본연구에서얻은모든염기서열자료는 GeneBank 에제출하였다 (Table 3). Fig. 1. The petn-psbm cpdna sequences of 2 haplotype (CP01-02) of Lonicera insularis and L. morrowii. 결과및고찰 엽록체 DNA의 non-coding region 염기서열분석섬괴불나무, 괴불나무, 청괴불나무, 각시괴불나무, 길마가지나무, L. morrowii, 병꽃나무 7분류군에대한 cp DNA 5개영역의염기서열은 trnl-trnf region에서 385bp, trns-trng region에서 700bp, petn-psbm region 545bp, psbmtrnd region 780bp, matk gene region 840bp로총 3.2kb의염기서열을결정하였다. 섬괴불나무는 4개 cp DNA region(trnl-trnf region, trns-trng region, psbm-trnd region, matk gene region) 의약 2.6 kb의염기서열에서는일본 L. morrowii와완전히일치하였다. 그러나, petn-psbm intergenic region에서는한염기치환으로두 TYPE(CP01, CP02) 으로구별되었다. 울릉도섬괴불나무 40개체, 독도섬괴불나무 4개체와 L. morrowii의 petn-psbm 염기서열에서는한개의염기치환으로 CP01, CP02의 haplotype로구별되었다 (Fig. 1). 울릉도에서채집한섬괴불나무에서는 haplotype CP01과 CP02 가확인되었고, 독도의동도개체에서는 haplotype CP02, 서도의개체에서는 haplotype CP01이확인되었다. 일본 Oki섬에서채집한 L. morrowii 개체에서는 CP02가관찰되었다. 집단간유연관계를결정하고확인하기위해 neighbor-joining(nj) tree를 Fig. 2에나타내었다. 울릉도와독도의섬괴불나무와일본의 L. morrowii는 100% bootstrap value로그룹지어졌다. 엽록체 DNA 의 petn-psbm region 에서 haplotype 분석엽록체 DNA 의 petn-psbm region 에서확인된 7 haplotype Fig. 2. NJ trees based on the all sequences of the spacer, gaps, among the cpdna of Lonicera insularis, L. morrowii, L. maackii, L. subsessilis, L. chrysantha, L. harai and Weigela subsessilis. Numbers along internodes show the bootstrap probability in percentage based on 1,000 replicate analyses. 은울릉도, 독도, 한반도, 일본에서나타났다. 울릉도와독도의섬괴불나무에서확인된 CP01 은울릉도의도동, 현포, 남양, 섬목, 천부등해안가일대와독도의동도에분포하는것으로확인되었다. 울릉도의도동, 현포, 남양, 섬목

5 206 Keum Seon Jeong, Mi Sun Kim, Woong Lee and Jae-Hong Pak Fig. 3. Localities and distribution of petn-psbm cpdna haplotype of 47 sample of of Lonicera insularis (La) and L. morrowii (Lw); cpdna haplotype = CP01:, CP02:. 지역과독도의서도의섬괴불나무와일본 Oki 섬의 L. morrowii 에서 CP02 가확인되었다 (Fig. 3). 고 찰 울릉도와독도섬괴불나무의종내변이와기원인동속의분류군들은꽃의색이흰색에서점차황색으로변하며열매는장과로 2 개씩달리는형질을공유한다. 섬괴불나무와 L. morrowii 는형태학적으로매우유사하다. 이들두분류군은화경의길이가 10 mm 이상으로다른절내다른분류군들에비해길고, 열매가 7-8 월에붉게성숙한다. 또한울릉도와독도 ( 동도및서도 ) 의섬괴불나무개체에서는형태학적차이를보이지않았으며, 다른종에비해잎전체에융모가밀생한다. 엽록체 DNA 를이용한인동속식물의유연관계분석에서울릉도와독도의섬괴불나무는일본의 L. morrowii 는 100% bootstrap value 로가까운유연관계를확인하였다 (Fig. 2). 울릉도와독도의섬괴불나무의엽록체 DNA 분석결과에서두가지패턴 (CP01, CP02) 이확인되었다. 엽록체 DNA CP01 type 은울릉도와독도의개체로부터만확인되었으며, 엽록체 DNA CP02 type 은울릉도와독도의개체뿐만아니라일본의 L. morrowii 에서도확인되었다. 울릉도와독도의섬괴불나무에서엽록체 DNA CP type 의뚜렷한지리적인분포양상은확인되지않았으나, 두개의엽록체 DNA CP type 은섬괴불나무가진화적으로뚜렷한두개이상의계통을가지며, 하나이상의유입경로를가지고유입되었을가능성을높게지지하고있다. 또한, 섬괴불나무에서확인된엽록체 DNA type 은본연구에서이용한한반도의인동속식물에서는확인되지않았으며, 일본의 L. morrowii 와엽록체 DNA CP02 type 을공유하고있다. 이전연구에서 Sun(2002) 은형태학적유사성과지리학적연구로섬괴불나무의기원종이 L. morrowii 일가능성을제시한바있다. 본연구결과에서확인된두종의엽록체 DNA CP type(cp02) 의공유는 Sun(2002) 가설을지지하고있지만, 울릉도와독도의섬괴불나무유입경로에대한연구는좀더명확한근거자료가필요할것으로생각된다. 독도에분포하고있는목본식물에대해서는과거여러식재사업등이이루어진바있다 (Kim, 1998). 분포기록에관한조사문헌에서는섬괴불나무의분포기록에대해 1974 년이후식재를시작으로 1996 년까지총 425 그루의섬괴불나무를울릉도로부터이식하여식재된것으로기록하고있다. 그러나현재독도의동도와서도의섬괴불나무는각각 10 개체와 5-6 개체로극히일부개체만이분포하고있어이전문헌의보고와는다소차이가있다. 또한본연구에서는독도에분포하는섬괴불나무는서도와동도에서각각다른 DNA CP type 이확인되어식재에관한확인연구는좀더이루어져야할것으로생각된다. 독도는대양섬으로내륙과연결된적이없고, 얕은토양층과여러환경적인요인이목본식물이생육하기에는열악한환경을가지고있다. 뿐만아니라, 울릉도와독도의종의유입과산포등에관한이전연구결과는거의전무하다. 다양한종의종자산포중섬괴불나무의열매와같이과육을가지는열매의경우주로조류와같은장거리산포에유리한척추동물에의해이루어지고있는것으로추측된다 (How and Smallwood, 1982). 그러나울릉도와독도의식물유입과산포에관한연구는거의이루어져있지않아, 본연구에서정확한정보를제시하기엔충분하지않다. 울릉도와독도에분포하는섬괴불나무의유입경로에관한연구는엽록체 DNA coding region 그리고핵 DNA 분석과종자산포등의연구와같은다양한측면에서의

6 Intraspecific variation and geographic study of Lonicera insularis (Caprifoliaceae) based on chloroplast DNA sequences 207 연구가더이루어져야할것으로생각된다. 본연구에서는울릉도와독도의섬괴불나무의종내변이및다양성을분석하고지리적분포양상을확인하였다. 본연구결과는울릉도및독도식물의분자생물지리학적연구로대양섬의생물학적진화양상과종분화과정에중요한기초자료로활용될것이다. 사 사 이논문은 2012 학년도경북대학교학술연구비에의하여연구되었습니다. 인용문헌 Chung, M. K Trees of China. Vol. 2: Cronquist, A An intergrated system of classification of flowering plants. Columbia Univ. Press. Pp Doyle, J. J. and J. L. Doyle A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochemical Bulletin 19: Hamilton, M. B Four primer pairs for the amplification of chlotoplast intergenic regions with intraspecific variation. Molecular Ecology 8: Heuertz, M., S. Fineschi and M. Anzidei Chloroplast DNA variation and postglacial recolonization of common ash (Fraxinus excelsior L.) in Europe. Molecular Ecology 13: Hewitt, G The genetic legacy of the Ice Ages. Nature 405: Howe, H. F. and J. Smallwood Ecology of seed dispersal. Annual Review of Ecology and Systematics 13: Jeon, S. H Taxonomic Studies on the Genus Lonicera in Korea. MS Thesis. Seoul National University. (in Korea) Johnson, L. A., and D. E. Soltis matk DNA-sequences and phylogenetic reconstruction in Saxifragaceae s-str. Systematic Botany 19: Kim, Y. S Plant ecosystem of Ulleung and Dokdo islands. A Synthetic Research of Ulleung and Dokdo islands, Pp Yeungnam University Institute of Korean Culture, Gyeongsan. (in Korean) Lee, C. and J. Wen Phylogeny of Panax using chloroplast trnc-trnd intergenic region and the utility of trnc-trnd in interspecific studies of plants. Molecular Phylogenetics and Evolution 31: Lee, T. B Illustrated flora of Korea. Hyangmunsa, Seoul. Pp Lee, W. T Lineamenta Florae Koreae. Acadamy Press, Seoul. (in Korean) Lee, W. and J.-H. Pak Intraspecific sequence variation of trnl/f intergenic region (cpdna) in Sedum takesimense Naku (Crassulaceae) and aspects of geographic distribution Korean Journal of Plant Taxonomy 40: Nakai, T Trees and shrubs indigenous in Japan Proper. Tokyo, Vol.1: Nakai, T A new classification of the genus Lonicera in the Japanese Empire together with the diagnoses of new species and new varieties. The Journal of Japanese Botany Vol. XIV(6): Ohwi, J Flora of Japan. National Science Museum. Tokyo. Pp Jakubowsky, M. G., P. M. Schluter, T. Fer, H. Kato, T. F. Stuessy and B.-Y. Sun Evolution of Dystaenia takesimana (Apiaceae) edemic to Ulleung Island, Korea. Plant Systematics and Evolution 256: Rendell, S. and R. A. Ennos Chloroplast DNA diversity of the dioecious European tree Ilex aquifolium L. (English holly). Molecular Ecology 12: Schaal, B. A., D. A. Hayworth, K. M. Oseni, J. Rauscher and W. A. Smith Phylogeographic studies in plants: problems and prospects. Molecular Ecology 7: Sun, B. Y. and T. F. Stuessy Preliminary observations on the evolution of endemic angiosperms of Ulleung Island, Korea. Evolution and Speciation of island plants. Combridge University Press, UK. Pp Sun, B. Y., M. R. Sul, J. A. Im, C. H. Kim and T. J. Kim Evolution of endemic vascular plants of Ulleungdo and Dokdo in Korea-floristic and cytotaxonomic characteristics of vascular flora of Dokdo. Korean Journal of Plant Taxonomy 32: Swofford, D. L PAUP *. Phylogenetic analysis using parsimony (*and other method). Version 4.0b10. Sinauer Associates, Sunderland, Mass. Taberlet, P., L. Gielly, G. Pautou and J. Bouvet Universal primer for amplification of three non-coding regions of chloroplast DNA. Plant Molecular Biology 17: Taberlet, P., L. Fumagali, A. G. Wust-Saucy and J. F. Cosson Comparative phylogeography and postglacial colonization routes in Europe. Molecular Ecology 7: Thompson, J. D., T. J. Gibson, F. Plewniak, F. Jeanmougin and D. G. Higins The CLUSTAL X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. Nucleic Acids Research 22:

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Æ¯ÇãÃ» '' - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - ' - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - Super-Bio Co., Ltd. KWON, Suk-Tae Thermostable DNA Polymerase-encoding Gene from Thermus sp. X-1 an d Amino Acid Sequence