대한진단검사의학회지 : 제 24 권제 1 호 2004 Korean J Lab Med 2004; 24: 67-71 수혈의학 전북대학교병원에서동정된비예기항체의빈도및분포 조용곤 김달식 이혜수 최삼임 전북대학교의과대학진단검사의학과학교실 The Frequency and Distribution of Unexpected Antibodies in Surgical Patients at Chonbuk National University Hospital Yong Kohn Cho, M.D., Dal Sik Kim, M.D., Hye Soo Lee, M.D., and Sam Im Choi, M.D. Department of Laboratory Medicine, Chonbuk National University Medical School, Jeonju, Korea Background : Unexpected antibody screening and identification tests using a column agglutination method are very important in elective surgical patients. We compared the frequency and distribution of unexpected antibodies in our elective surgical patients with other results. Methods : We analyzed the results from 6,500 antibody screening tests performed for elective surgical patients at Chonbuk National University Hospital during the recent five-year period. Screening and identification of unexpected antibodies were carried out using a column agglutination method with the DiaMed-ID system (DiaMed, Cressier, Morat, Switzerland). Results : Unexpected antibodies were detected from 42 samples (0.64%) out of all 6,500 samples. Clinically significant antibodies were found in 0.32% of all the population. Of these, 13 samples showed anti-e, 3 samples showed anti-e+c, 3 samples showed anti-d, 1 sample showed anti-fy b and another one sample showed anti-kp a. Conclusion : The results of frequency and distribution of unexpected antibodies in Chonbuk National University Hospital were not different from others. We have verified that the antibody screening and identification test using the column agglutination technique would have had a higher detection rate for clinically relevant antibodies such as anti-rh antibodies than other methods. (Korean J Lab Med 2004; 24: 67-71) Key Words : Unexpected antibodies, Column agglutination method, Fequency 서 수혈전검사로시행하는교차시험은 ABO 혈액형검사결과를확인하고, 환자의혈청중에존재하는비예기항체를검출하여용혈성수혈부작용을예방하려는목적으로이루어지고있다. 교차시험의종류에는여러가지가있으나, 대개실온식염수법, 37 접수 : 2003 년 8 월 27 일접수번호 : KJLM1698 수정본접수 : 2003 년 11 월 21 일교신저자 : 조용곤우 561-712 전북전주시덕진구금암동 634-18 전북대학교의과대학진단검사의학교실전화 : 063-250-1215, Fax: 063-250-1200 E-mail: cyk6772@mail.chonbuk.ac.kr 론 가온알부민법그리고항글로불린법의 3단계로시행한다. 첫번째단계인실온식염수법만으로도 ABO 혈액형검사결과를확인할수있기때문에다음단계로시행하는 37 가온알부민법이나항글로불린법은모두비예기항체를검출하기위한것이라고할수있다. 한등 [1] 은비예기항체에의한급성용혈성수혈부작용을일으킨보고예중모든예에서실온식염수법과 37 가온알부민법에서는응집이없었음에도불구하고항글로불린법에는응집을보인점을감안하여수혈전교차시험을항글로불린단계까지철저하게시행할것을주장하였다. 그러나비예기항체에의한용혈성수혈부작용에대한보고 [2-8] 가최근에도지속적으로이루어지고있는점으로미루어볼때교차시험이항글로불린단계까지철저하게시행되지않고있음을짐작할수있다. 67
68 조용곤 김달식 이혜수외 1 인 최근수혈로인한부작용을최소화하고수혈의안전성을높이기위한노력이계속되면서수혈을시행하는의료기관중에비예기항체선별검사를실시하는기관이증가하고있다. 비예기항체선별검사방법으로는시험관법, micro-plate법그리고 1980년대초 Lapierre 등 [9] 에의해개발된원주응집법이있으며, 각기관의검사목적이나사정에따라다양한검사방법을채택하고있다. 이러한방법의차이로국내비예기항체의분포에대한연구결과도서로다른결과를보이고있는데, 시험관법을이용한연구 [10-14] 에서는항-Le a, 항-P 1, 항-Le b 등주로실온에서반응하면서임상적으로큰문제가없는한랭항체가대다수를차지하였고, 원주응집법을이용한연구 [15-19] 에서는항-E와항-c 등임상적으로문제를일으킬수있는온난항체가항-Le a 보다높은빈도를나타내고있다. 이와같이비예기항체의검출빈도및분포는검사방법뿐아니라연구대상군, 그인구집단의혈액형, 유전자빈도, 그리고판독자의능력등에따라큰차이를보이는것으로알려져있다 [20]. 이에저자들은전북대학교병원에서 1998년부터수술예정환자를대상으로원주응집법을이용하여시행된비예기항체선별및동정검사의결과를기존의연구결과와비교하고비예기항체의빈도및분포의차이를분석하였다. cell의 LISS/Coombs 카드의판독법에따라음성에서 4+ 까지나누어판정하였다. 자가대조검사는미리만들어둔환자의 1.0% 적혈구부유액 50 L를 antiglobulin gel이들어있는 microtube에넣고환자혈청 25 L를첨가한후위와동일한방법으로시행하였다. 2) 비예기항체동정검사 1.0% 적혈구부유액인 11개 (1-11) 의 panel cell을각각 antiglobulin gel이들어있는 11개의 microtube에 50 L씩넣고환자혈청 25 L를첨가하였다. 이를비예기항체선별검사와동일한방법으로검사하고판독하였다. 자가대조용적혈구부유액은선별검사와동일한방법으로제조하여선별검사와동일한방법으로검사하고판독하였다. 3) 비예기항체선별검사환자의수혈기왕력검색비예기항체선별검사를실시한수술예정환자 6,500명에대해검사전수혈여부를조사하고검사전수혈여부에따른비예기항체의양성률과그분포를비교하였다. 3. 통계 1. 대상 대상및방법 수혈기왕력에따른두군간비예기항체선별검사양성률은비모수적검정법인 2 법으로분석하였으며, 동정된비예기항체성상의분포의차이는 t검정으로분석하였다. 1998년 7월 1일부터 2003년 6월 20일까지전북대학교병원에서수혈이요청된수술예정환자중수혈전검사로비예기항체선별검사가의뢰된 6,500명의혈청검체를대상으로하였다. 1. 비예기항체의빈도 결 과 2. 방법 혈액은행에의뢰된수술예정환자 6,500예중 6,458예 (99.35%) 가음성이었으며, 양성은 42예 (0.65%) 이었다 (Table 1). 검사전 1) 비예기항체선별검사 1.0% 적혈구부유액인 panel I, II (DiaMed, Cressier, Morat, Switzerland) 를각각 antiglobulin gel이들어있는 microtube에 과거수혈여부에따른비예기항체의검출빈도는과거수혈이있었던경우 (27예, 0.42%) 가없었던경우 (15예, 0.23%) 보다통계적으로유의하게높은결과를보였다 (P<0.05). 50 L씩넣고환자혈청 25 L를첨가하였다. 이를 37 에서 15분간반응시킨후 910 rpm에서 ID-centrifuge 12S (DiaMed, Cressier, Morat, Switzerland) 로 10분간원침하였다. 결과는 panel Table 2. The distribution of unexpected antibodies identified Transfusion history Table 1. The frequency of unexpected antibodies detected Antibody specificity Yes No Total Number (%) Unexpected antibody screening test Positive (%) Negative (%) Total Number (%) Transfusion Yes 27 (0.42)* 1,897 (29.18) 1,924 (29.60) history No 15 (0.23) 4,561 (70.17) 4,576 (70.40) Total 42 (0.65) 6,458 (99.35) 6,500 (100.00) *significantly higher than group without transfusion history (P<0.05). Anti-E 7 6 13 (59.09) Anti-E+c 3 0 3 (13.63) Anti-D 1 2 3 (13.63) Anti-Le a 0 1 1 (4.55) Anti-Fy b 0 1 1 (4.55) Anti-Kp a 0 1 1 (4.55) Total 11 11 22 (100.00)
The Frequency and Distribution of Unexpected Antibodies in CNUH 69 2. 비예기항체의분포 42예의비예기항체양성검체중항체동정검사를실시하여그성상이밝혀진경우는 22예로, 항-E 가 13예로가장많았고, 항-E 와항-c 가함께검출된경우가 3예, 항-D가 3예, 항-Le a 가1예, 항-Fy b 가 1예, 항-Kp a 가 1예이었으며, 그가운데온난항체가 21 예, 한랭항체는 1예이었다 (Table 2). 비예기항체의성상이밝혀진 22예중비예기항체선별검사를하기전에수혈받은과거력이있는환자는 11예이었다. 수혈기왕력에따른비예기항체의분포는큰차이가없었으나, 항-E+c는수혈기왕력이있는환자에서, 항-Le a, 항-Fy b, 그리고항-Kp a 은수혈기왕력이없는환자에서만관찰되었다. 고찰비예기항체란 A형의항-B나 B형의항-A와같이일정하게출현하는예기항체와대별되는개념으로검사를하기전에는어떤사람의혈청내에어떤항원에대한항체가존재할것인지예측할수없는경우로써, ABO 및일부 P 혈액형항체이외의대부분의혈액형항체들이이에속한다. 이런비예기항체는실온에서반응하는한랭항체와 37 에서반응하는온난항체로구분할수있는데, 수혈로인한용혈성수혈부작용이나신생아동종면역성용혈성질환을일으키는것은주로온난항체들이다. 이러한비예기항체의존재는혈액형검사및교차시험을어렵게하고, 임상적으로의의가있는항체가발견되지않은상태에서상응하는항원을가진적혈구를수혈받았을경우에는심한수혈부작용을유발할수도있으므로이들항체에대한선별및동정검사는수혈전검사의중요항목으로인식되고있으며, 미국혈액은행협회에서는수혈전검사로 ABO, Rh 혈액형검사와함께환자의혈청이나혈장내에임상적으로의의가있는항체의검사및혈청학적또는컴퓨터를이용한교차시험을포함하도록하고있다 [21]. 일반적으로비예기항체의검출빈도및종류는연구대상군, 그인구집단의혈액형, 유전자빈도, 검사방법그리고판독자의능력등에따라그결과에큰차이를보이는것으로알려져있다 [20]. 기존의비예기항체선별검사는시험관법이나 microplate법을이용하여시행하였다. 시험관법은통상적으로실온식염수, 가온알부민, 항글로불린의 3단계검사를시행하며, 검사실에따라서는저이온강도식염수를사용하기도한다 [22]. 시험관법은특별한기구나장비없이여러가지조건에서응집유무를관찰할수있고, 검사비용이적게드는장점이있으나, 원심분리후바닥에가라앉은적혈구를다시흔들어응집반응을관찰함으로검사자에따라결과의판독이다를수있고, 특히응집이약할때는판독이어려운단점이있다 [9]. 최근소개된겔 (gel) 을이용한원주응집법은적혈구와항체를겔 (gel) 상단의반응공간에서반응시킨후, 응집여부를 규정된원침과정을통해쉽게판독할수있도록개발된검사로서검사의표준화가쉽고, 예민도가높은장점이있다 [9, 23, 24]. 본연구에서는 1998년 7월부터 2003년 6월까지 5년동안에걸쳐수술예정환자 6,500명을대상으로수술전에원주응집법에의한비예기항체선별검사를실시하였다. 국내에서의비예기항체의빈도와분포에대한연구결과는원주응집법이도입된이후다른양상을보여주고있다. 즉, 기존의시험관법이나 microplate법으로시행한비예기항체양성률은 0.58-1.5% 내외를보인반면 [10-12, 14], 최근도입된원주응집법으로시행한비예기항체양성률은 0.46-0.54% 내외로나타났다 [17, 25]. 외국에서는미국 0.3-2% [26, 27], 독일 0.38%, 덴마아크 1.35%[28] 등으로보고되고있으며연구자와연구대상에따라다양하였으나, 본연구에서는 0.65% 로대체로우리나라의다른연구자들의보고와유사한빈도를보였다. 시험관법을이용한한등 [10] 의연구에서는한랭항체인항-Le a, 항-P 1 등이대다수 (47.7%) 를차지하였고, 송등 [12] 의연구에서도 Lewis 계열항체가 42.6% 를차지한반면, 원주응집법으로시행한이등 [17] 의연구에서는항-E+c 30.3%, 항-E 17.4% 등온난항체가 50% 이상이었고, 정등 [25] 의연구에서도항-E 26.8%, 항-E+c 8.9%, 항-C 7.1%, 항-D 5.4% 등온난항체가 55.4% 를나타내었다. 본연구에서도비예기항체의양성이 27예 (0.65%) 를보였고, 그중온난항체가 21예 (77.8%) 를보여기존의연구와비슷한결과를나타내었다. 비예기항체는대부분악성종양, 면역질환, 수혈경험자, 임신등에서많이발견된다고알려져있다 [14]. 본연구에서도비예기항체의검출빈도가검사전수혈미경험자에서보다수혈경험자에서통계적으로유의하게높음을확인할수있었다. 그러나수혈여부에따른동정항체의분포의차이는관찰되지않았다. 단, 소수였지만항-E+c는수혈기왕력이있는환자에서만동정되었고, 항- Le a, 항-Fy b, 그리고항-Kp a 은수혈기왕력이없는환자에서만동정되었다. 수술예정환자에서의비예기항체검사는본래 Type and Screen 법의도입으로시행되었고, 귀중한헌혈에의해제공된혈액이효율적으로사용되도록하기위해적용되었다. 수술중수혈이이루어지는경우에는환자들의의식이없는상태이기때문에용혈성수혈부작용이일어나더라도환자의임상증상을볼수없어일찍발견하기힘들기때문에, 수술환자에대한출고혈액의안전성확보는더욱중요하다고할수있다. 하지만교차시험을 3단계까지마치려면 30-40분정도의시간이소요되고, 만약환자의혈청내에비예기항체가존재하면혈액형의결정이나교차시험의판독이어려워지고시간이지연되므로혈액은행업무의혼란및차질을일으키는요인이될수있다. 기존의시험관법에서는임상적으로의미가없는 Lewis 계열의항체가높은빈도로검출되어교차시험시한랭항체로인한혈액은행업무의지연이초래되는경우가적지않았다. 그러나최근원주응집법을도입함으로써한랭항체의검출률은낮아지고임상적으로의미가있는 Rh 계열의항체를포함한온난항체의검출률이증가됨으로써혈액은행업무의효율성이증가
70 조용곤 김달식 이혜수외 1 인 될뿐아니라안전하고적합한혈액을찾아수혈할수있게되었다. 따라서원주응집법은비예기항체의선별및동정에효율적으로사용될수있으리라사료된다. 요약배경 : 예정수술의경우의뢰된준비혈액에대해교차시험을 3단계까지하는데에는어려움이있을수있다. 비예기항체가존재하는경우교차시험의판독이어렵게되고, 이로인해혈액은행의업무가지연되거나혼란스럽게된다. 최근소개된원주응집법에의한비예기항체선별및동정검사는기존의시험관법에의한비예기항체검사에비하여판독이객관적이며비교적간편하고빠르게검사할수있는장점이있어수술예정환자에서안전하고적합한혈액을공급하는데많은도움이되리라생각한다. 방법 : 1998년 7월부터 2003년 6월까지본원혈액은행에의뢰된수술예정환자 6,500명을대상으로원주응집법 (DiaMed, Cressier, Switzerland) 를이용하여검사를시행하였다. 결과 : 수술예정환자 6,500예에대한비예기항체선별검사결과를분석한결과 0.65% 인 42예에서양성을보였고, 동정검사를시행하여그성상이밝혀진 22예중항-E 가 13예로가장많았고, 항-E와항-c가함께검출된경우가 3예, 항-D가 3예, 항-Le a 가 1예, 항-Fy b 가 1예, 항-Kp a 가 1예있었다. 수혈기왕력에따른비예기항체의분포는큰차이가없었다. 결론 : 전북대학교병원에서동정된비예기항체의빈도및분포는국내의타지역에서보고된결과와크게다르지않았다. 원주응집법에의한비예기항체검사는시험관법이나 microplate법을이용한검사에비해임상적으로의의가있는 Rh 계열의항체를포함한온난항체를더많은빈도로검출할수있음을확인할수있었다. 참고문헌 1. 한규섭, 조한익, 김상인. 용혈성수혈부작용을일으킨비예기항체에대한검색. 대한혈액학회지 1989; 24: 27-33. 2. 정경원, 김흥업, 강정훈, 김현진, 장정순, 이종석등. 항-Fy b 항체에의한용혈성수혈부작용1예. 대한혈액학회지1999; 34: 125-30. 3. 허미나, 한복연, 한규섭, 유원희, 안혁, 이동엽등. 항-Jk b 항체에의한심한용혈성수혈부작용 2예. 대한수혈학회지 1997; 8: 139-45. 4. Hillman NM. Fatal delayed hemolytic transfusion reaction due to anti-c+e. Transfusion 1979; 19: 548-51. 5. Joshi SR. Immediate haemolytic transfusion reaction due to Anti- Inb. Vox Sang 1992; 63: 232-3. 6. Judd WJ, Steiner EA, Abruzzo LV, Davenport RD, Oberman HA, Pehta JC, et al. Anti-causing acute hemolysis following a negative immediate-spin crossmatch. Transfusion 1992; 32: 572-5. 7. Arndt PA, Garratty G, Marfoe RA, Zeger GD. An acute hemolytic transfusion reaction caused by an anti-p1 that reacted at 37. Transfusion 1998; 38: 373-7. 8. Pradhan D and Chaudhary R. Acute intravascular haemolytic transfusion reaction due to anti-c undetected by conventional pretransfusion cross-matching tests. Am J Hematol 1999; 61: 82-3. 9. Lapierre Y, Rigal D, Adam J, Josef D, Meyer F, Greber S, et al. The gel test: a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990; 30: 109-13. 10. 한규섭, 오원일, 박명희, 김의종, 김상인. 한국인의비예기항체에관한연구. 대한혈액학회지 1989; 24: 145-53. 11. 최경미, 조동희, 김현옥. 임산부와수혈예정환자에성의비예기항체검출빈도. 대한임상병리학회지 1997; 17: 847-52. 12. 송달효, 문인석, 홍석주, 박재학, 김종규, 전동석. 한국인의비예기항체빈도와분포. 대한수혈학회지 1998; 9: 191-200. 13. 송은영, 한복연, 황동희, 최중환, 박성섭, 김의종등. 신생아용혈성질환의원인항체분석. 대한수혈학회지 1998; 9: 235-41. 14. 김현옥, 원동일, 권오헌. 수혈대상환자의비예기항체빈도및그임상적의의. 대한수혈학회지 1993; 4: 35-41. 15. 오흥범, 조연정, 김상인, 김두성, 한규섭. 분만력이있는여성헌혈자군에서의비예기항체양성률. 대한수혈학회지 1997; 8: 39-46. 16. 신정원, 정석훈, 남정현, 김현옥, 권오헌. Antiglobulin Gel Technique을이용한직접항글로불린검사및비예기항체선별검사. 대한임상병리학회지 1996; 16: 411-8. 17. 이운형, 김신영, 김현옥. 수혈대상환자에서의비예기항체빈도. 대한수혈학회지2000; 11: 99-103. 18. 채석래, 방광한, 장은아, 차영주. Gel test에의한비예기항체선별검사의유용성. 대한수혈학회지 1998; 9: 31-6. 19. 장순희, 이난영, 최영철, 유봉재, 서장수. Column agglutination test를이용한제대혈의비예기항체검색. 대한수혈학회지 1997; 8: 65-72. 20. Brecher ME ed. Technical manual. 14th ed. Bethesda: American Association of Blood Banks, 2002: 393-7. 21. Vengelen-Tyler V, ed. Technical manual. 13th ed. Bethesda: American Association of Blood Banks, 1999: 577-600. 22. Shirey RS, Boyd NS, Ness PM. Polyethylene glycol versus lowionic-strength solution in pretransfusion testing: a blinded comparison study. Transfusion 1994; 34: 368-70. 23. Reis KJ, Chachowski R, Cupido A, Davies D, Jakway DJ, Setcavage TM. Column agglutination technology: the antiglobulin test. Transfusion 1993; 33: 639-43. 24. 오귀영, 허정원, 이미애, 정화순. Column agglutination test를이용한비예기항체선별및동정검사의유용성. 대한임상병리학회지 2000; 20: 98-102. 25. 정동길, 이난영, 배혜경, 권은희, 박성화, 서장수. LISS/Coombs gel test 를이용한비예기항체양성률. 대한임상병리학회지 2001; 21: 422-5.
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