(72) 발명자 박가람 경기수원시영통구영통로 174 번길 68, 302 호 ( 망포동 ) 임동현 서울시마포구신촌로 28 마길 40, 2 층 ( 아현동 ) 주세진 인천광역시남동구논현동 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 SA 부처명 중소기업청

Similar documents
Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

- 2 -


명세서청구범위청구항 1 과불소알킬아크릴레이트단량체및불포화이중결합을갖는아크릴레이트단량체를계면활성제가포함된분산용액에첨가한후 65 내지 80 에서 4 내지 5시간동안교반하여불소가포함된발수제를제조하는단계 ; 왁스를계면활성제가포함된분산용액에첨가하고 60 내지 70 에서 4 내지

(72) 발명자 정종수 서울특별시 서대문구 모래내로 319, 101동 405호 (홍은동, 진흥아파트) 김정환 서울특별시 구로구 구로동로21길 7 (구로동) - 2 -

(72) 발명자 이상현 부산남구오륙도로 85, 101 동 605 호 ( 용호동, 오륙도 SKVIEW 아파트 ) 김미향 부산남구신선로 566, 308 동 1404 호 ( 용호동, GS 하이츠자이 ) 전명제 부산사하구신산북로 63, 나동 301 호 ( 신평동, 중앙쉐르빌

<B4D9BDC3BEB4C0AFB1E2C8ADC7D02D34C6C72D35BCE2C3D6C1BE28B1B3BBE7292E687770>

위해충전효율및온도변화를측정하는신호측정센서층을포함하여구성되는것을그구성상의특징으로한다. 본발명은인체삽입형의료기기의성능평가용인체유사팬텀의제조방법에관한것으로서, 보다구체적으로는인체유사팬텀의제조방법으로서, (1) 정제수, 액체상태의아가로오스 (agarose) 및소듐클로라이드 (


특허청구의범위청구항 1 물을여과하는필터부 ; 상기필터부에물을유동시키는정수관 ; 상기정수관에설치되고, 상기정수관의수류를이용하여전기를발생시키는발전모듈 ; 및상기정수관에배치되고, 상기발전모듈에서발생된전기가공급되고, 상기정수관을따라유동되는정수를전기분해하여살균하는살균모듈 ; 을

Product Description Apoptosis 혹은 necrosis등에의하여죽거나손상된세포에서방출되는 Lactate dehydrogenase(ldh) 의양을고감도로측정함으로써 cytotoxicity/cytolysis를간단하게측정할수있는 kit 입니다. Cytot


(52) CPC 특허분류 B01D 53/62 ( ) Y02C 10/10 ( ) (72) 발명자 이정현 대전광역시서구대덕대로 246 넥서스밸리 B 동 1417 호 박영철 대전광역시유성구반석동로 33 반석마을 5 단지아파트 505 동 201 호 이발명

(52) CPC 특허분류 A23L 1/3002 ( ) A23L 1/337 ( ) A61K 2236/19 ( ) - 2 -

등록특허 (51) Int. Cl. (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) C22B 9/10 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2007 년 09 월 21 일 심사청구일자 2007

농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 : ~ ) 과제의최종보고서로제출합니다 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 (

2016 학년도약학대학면접문제해설 문제 2 아래의질문에 3-4분이내로답하시오. 표피성장인자수용체 (epidermal growth factor receptor, EGFR) 는수용체티로신인산화효소군 (receptor tyrosine kinases, RTKs) 의일종으로서세

도 1 색인어 감귤, 미숙성온주밀감, 온주밀감, 진지향, 팔삭, 미백, 화장료조성물 명세서 도면의간단한설명 도 1 은실시예 1 3 에의한조성물의미백효과를육안으로조사한결과를보여주는그래프이다. 도 2 는실시예 1 3 에의한조성물의미백효과를크로마미터로조사한결과를보여주는그래프

의약품의_품목허가·신고_심사 체크리스트_및_세부_업무_매뉴얼.hwp

특허청구의범위청구항 1 수지조성물에있어서, 수지바인더 50~80 중량부 ; 와, 차열소재 10~20 중량부 ; 와, 수용성합성고무수지 SBR(styrene butadiene rubber) 15~25 중량부 ; 와, 자외선차단제 0.5~2 중량부 ; 와, 분산제 0.5~

- 1 -

FOMBLIN HC 요약자료

특허청구의 범위 청구항 1 복수개의 프리캐스트 콘크리트 부재(1)를 서로 결합하여 연속화시키는 구조로서, 삽입공이 형성되어 있고 상기 삽입공 내면에는 나사부가 형성되어 있는 너트형 고정부재(10)가, 상기 프리캐스 트 콘크리트 부재(1) 내에 내장되도록 배치되는 내부

최민지 / 세계무역기구과 / :16:24-2 -

(72) 발명자 이영애 경기도수원시영통구원천동 35 원천주공아파트 102 동 1304 호 쳉퀼링 헹디안인더스트리얼존, 동양시티, 제지앙프로빈스,322118, 중국 우유리앙 헹디안인더스트리얼존, 동양시티, 제지앙프로빈스,322118, 중국 리징 헹디안인더스트리얼존, 동양

<4D F736F F D205FBAD9C0D3325F B3E2B5B520BCB3B9AEC1B6BBE720B0E1B0FA20BAB8B0EDBCAD5F322E646F63>

(72) 발명자 김화용 서울특별시관악구봉천 2 동동아아파트 109 동 803 호 강병희 서울특별시관악구봉천 11 동 번지미림연립 305 호 - 2 -

(52) CPC 특허분류 A61K 8/97 ( ) A61Q 19/00 ( ) A23V 2200/318 ( ) (72) 발명자 김효진 대전광역시유성구가정로 175 ( 주 )LG 생활건강기술연구소 이상화 대전광역시유성구가정로 175 ( 주

본 발명은 난연재료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 케이블이나 전선의 시스체로 쓰이는 저발연, 저독성을 가진 열가소성 난연재료 조성물에 관한 것이다. 종래의 선박용 케이블은 그 사용 용도와 장소에 따라 다양한 제품들로 구별된다. 근래 들어 해양 구조물 및 선박에

목차 1. 서론 줄기세포의간세포분화능평가시고려사항 간세포분화능평가시험법 분

(72) 발명자이광식충남천안시쌍용 2동현대6차홈타운 114동 704호이상길충남천안시두정동세광엔리치빌 203동 403호 이건국 서울강동구둔촌동현대아파트 4 차 102 동 1305 호 - 2 -

<312E20B9DDB5E5BDC320BECFB1E2C7D8BEDF20C7D220C8ADC7D020B9DDC0C0BDC42E687770>

등록특허 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (45) 공고일자 2014년02월04일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2014년01월24일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) C08L 79/08

저작자표시 - 동일조건변경허락 2.0 대한민국 이용자는아래의조건을따르는경우에한하여자유롭게 이저작물을복제, 배포, 전송, 전시, 공연및방송할수있습니다. 이차적저작물을작성할수있습니다. 이저작물을영리목적으로이용할수있습니다. 다음과같은조건을따라야합니다 : 저작자표시. 귀하는원

특허청구의범위청구항 1 복수의영상검출부로부터출력되는영상의히스토그램 (histogram) 을계산하는단계 ; 상기복수의영상검출부로부터출력되는영상을히스토그램평활화 (histogram equalization) 하는단계 ; 상기복수의영상검출부중하나의영상검출부를선택하는단계 ; 및

한것으로스마트단말기에의하여드론조종앱을설치하는제 1 단계 ; 스마트단말기에의하여드론의불루투스통 신부에부여된고유식별번호를입력저장하고드론의불루투스를인식하며드론의블루투스통신부로부터회신되 는신호의수신레벨을분석하여최대통신거리를확인하여저장하는제 2 단계 ; 스마트단말기에의하여최대통

1 2 자료조사 및 디자인 개인별 주제에 대한 발표 소재 선정 자료조사 및 디자인 조사한 자료에 대한 발표 작업지시서 작성 3 4 작업지시서 작성 작업지시서에 따른 일정 확인 작업지시서에 따른 공정 방법 확인 갑피 패턴 작성 복사본, 기본본, 작업본 만들기 5 재단 소

PowerPoint 프레젠테이션

(72) 발명자 박세웅 서울특별시관악구신림동산 56-1 서울대학교뉴미디어통신공동연구소 최진구 서울특별시영등포구당산동 2 가대우메종아파트 101 동 909 호 - 2 -

(72) 발명자 김동식 광주북구오룡동 1 번지광주과학기술원신소재공학과 이경재 광주북구오룡동 1 번지광주과학기술원신소재공학과 - 2 -

특허청구의 범위 청구항 1 앵커(20)를 이용한 옹벽 시공에 사용되는 옹벽패널에 있어서, 단위패널형태의 판 형태로 구성되며, 내부 중앙부가 후방 하부를 향해 기울어지도록 돌출 형성되어, 전면이 오 목하게 들어가고 후면이 돌출된 결속부(11)를 형성하되, 이 결속부(11

1

명 세 서 청구범위 청구항 1 하기 화학식 1로 표현되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 재생 또 는 주름개선용 조성물. [화학식 1] 청구항 2 하기 화학식 1로 표현되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분

130 화재안전점검매뉴얼 유별성질품명지정수량 1. 산화성고체 : 고체로서산화력의잠재적인위험성또는충격에대해민감성이있는것 * 고체 : 액체 (1 기압및 20 에서액상또는 20 초과 40 이하에서액상 ) 또는기체 (1 기압및 20 에서기상 ) 외의것 2. 가연성고체 : 고체

PowerPoint 프레젠테이션

<31325F FBEC8C0CEBCF72CB1E8C1F6C7FD2CC0AFC8B8BCF E687770>

(72) 발명자 김도규 서울특별시성북구장위 3 동 박준일 서울특별시강서구등촌동 서광아파트 103 동 803 호 유형규 경기도광명시광명 4 동한진아파트 101 동 1801 호 - 2 -

본 발명은 중공코어 프리캐스트 슬래브 및 그 시공방법에 관한 것으로, 자세하게는 중공코어로 형성된 프리캐스트 슬래브 에 온돌을 일체로 구성한 슬래브 구조 및 그 시공방법에 관한 것이다. 이를 위한 온돌 일체형 중공코어 프리캐스트 슬래브는, 공장에서 제작되는 중공코어 프

(72) 발명자 송, 양 중국 , 지앙수, 리아니운강, 더 10 인더스트리얼서브 - 존오브디벨로프먼트존 리우, 샤오펭 중국 , 지앙수, 리아니운강, 더 10 인더스트리얼서브 - 존오브디벨로프먼트존 장, 춘홍 중국 , 지앙수, 리아니운강,

특허청구의범위청구항 1 에멀젼조성물이생분해성고분자 10~20중량 %, 상기생분해성고분자용해용용제 30~40중량 %, 유화제 10~20중량 % 및, 물 20~40중량 % 로구성되고, 상기한에멀젼내콜로이드의평균입도가 1~5μm인채과용생분해성발수에멀젼조성물. 청구항 2 제1

(72) 발명자 최면 강원춘천시동면만천로 107, 102 동 502 호 ( 한일유앤아이아파트 ) 장영수 강원도횡성군횡성읍상 /1 왕지강 강원도춘천시한림대학길 1 생명과학관 5 층 8510 호 이수경 강원춘천시서부대성로 327, 102 동 601 호 ( 후평

등록특허 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (45) 공고일자 2013년12월27일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2013년12월20일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) C07D 493/04

- 2 -

- 목차 - 제 1 장의약외품 1 Ⅰ. 의약외품허가 신고일반 1 Q1. 과산화수소함유량에따른치아미백제의분류 1 Q2. 기허가와다른함량의외용소독제 1 Q3. 기허가품목과동일품목수입의경우제품명 1 Q4. 기시법또는안유통지서와허가신청시제조원이상이한경우 2 Q5. 산화형염모제

(72) 발명자서상호전북군산시나운동주공5차아파트 506동 106호송준혜대전유성구관평동한화꿈에그린 우완종대전유성구신성동 208-8번지들빛촌 203호이성우대전유성구신성동대림두레아파트 110동 905호 - 2 -

< 서식 5> 탐구보고서표지 제 25 회서울학생탐구발표대회보고서 출품번호 유글레나를이용한산소발생환경의탐구 소속청학교명학년성명 ( 팀명 ) 강서교육청서울백석중학교 3 임산해 [ 팀원이름 ]

이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호 A 부처명 지식경제부 연구관리전문기관 연구사업명 IT핵심기술개발 연구과제명 융합형 포털서비스를 위한 이용자 참여형 방송기술개발 기여율 주관기관 전자부품연구원 연구기간 2008년 03월 01일 ~ 2


(52) CPC 특허분류 A61Q 19/00 ( ) A61Q 19/08 ( ) C12N 2310/3183 ( ) (72) 발명자 엄선영 경기도수원시권선구동수원로 145 번길 동 1201 호 ( 권선동, 수원아이파크시티 2 단

등록특허 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) G01R 29/08 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2011 년 12 월 28 일 심사

α α α α α

(72) 발명자 이영일 경기안양시동안구비산동은하수청구아파트 107 동 405 호 전병호 서울금천구독산 3 동

(52) CPC 특허분류 B33Y 50/02 ( ) C08J 3/075 ( ) G01B 11/24 ( ) G06T 17/00 ( ) - 2 -

Glutathione Excellose handbook - Purification of GST fusion proteins - Looking for more detail Purification protocol? - Glutathione Excellose Spin Kit

(72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구매탄동주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 이양구 서울특별시도봉구방학동 한충섭 충청남도천안시서북구성정동 823 선경아파트 1 동 1108 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호

(72) 발명자오윤택경기도오산시오산동 대동아파트 박충현서울강남구역삼동 명우빌딩 6층 이현정 서울강남구역삼동 명우빌딩 6 층 - 2 -

이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 방송통신위원회 연구사업명 방송통신기술개발사업 연구과제명 안전한 전자파환경 조성 주관기관 한국전자통신연구원 연구기간 ~

Regulation on Approval of Consumer Chemical Products subject to Safety Check without promulgated Safety Standard.hwp

(72) 발명자 한재건 강원춘천시퇴계동퇴계주공 3 차 306 동 1003 호 하지혜 강원도춘천시퇴계동퇴계주공아파트 402 동 1505 호 오성호 강원도춘천시효자 3 동 김영 강원도춘천시효자 2 동강원대학교 권민철 강원도춘천시석사동 곽형

DBPIA-NURIMEDIA

- 1 -

(72) 발명자 오인환 서울 노원구 중계로 195, 101동 803호 (중계동, 신 안동진아파트) 서혜리 서울 종로구 평창14길 23, (평창동) 한훈식 서울 강남구 언주로71길 25-5, 301호 (역삼동, 영 훈하이츠) 이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호

13È£³»Áö-1

- 1 -

이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 미래창조부 연구관리전문기관 한국산업기술평가관리원 연구사업명 산업융합원천기술개발 연구과제명 단일노드 48TB 이상을지원하는개방형하둡스토리지어플라이언스 (Hadoop Storage Appliance) 개발 기

(72) 발명자김은혜경기도용인시기흥구용구대로 1920 ( 보라동 ) 나용주경기도용인시기흥구용구대로 1920 ( 보라동 ) 강승현경기도용인시기흥구용구대로 1920 ( 보라동 ) 채병근경기도용인시기흥구용구대로 1920 ( 보라동 ) 한상훈경기도용인시기흥구용구대로 1920

안전확인대상생활화학제품지정및안전 표시기준 제1조 ( 목적 ) 제2조 ( 정의 )

항은 발명의 상세한 설명에는 그 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자 (이하 통상의 기술자 라고 한다)가 용이하게 실시할 수 있을 정도로 그 발명의 목적 구성 및 효과를 기재하여야 한다고 규정하고 있다. 이는 특허출원된 발명의 내용을 제 3자가 명세서만으로

112 Ⅰ. 서론 울금은 (CurcumalongaL.) 생강과 Zingiberaceae 의근경으로 phenol 류및그배당체,monoterpene 배당체,tannin, 기타 sucrose 등의성분으로항염 증작용, 항알레르기작용, 항균작용, 중추억제, 위 액분비억제, 진경

3.. :. : : 2015 ~ : 5.. : (C10),,,, (C26), (C28). : (10720), (26221),. (26222), (26291), (26293), (26299), (28902) ( : ) ( m2 ) (%) 106,

<BDC7C7E820C6F3BCF620C0FAC0E5BFEBB1E220C6F8B9DF20BEC6C2F7BBE7B0ED B3E220BFACB1B8BDC720BEC6C2F7BBE7B0EDBBE7B7CA20B0F8B8F0C0FC20C3D6BFECBCF6C0DB292E687770>

(71) 출원인 나혜원 대구 달서구 도원동 1438 대곡사계절타운 나혜리 대구 달서구 도원동 1438 대곡사계절타운 (72) 발명자 나혜원 대구 달서구 도원동 1438 대곡사계절타운 나혜리 대구 달서구 도원동 1438 대

(72) 발명자 이정복 경기도안성시금광면신양복리홍익아파트 117 동 103 호 황지선 광주광역시북구첨단과기로 123, 광주과기원생명과학부 415 호 ( 오룡동 ) 최재환 대전광역시유성구유성대로 1741, 동 903 호 ( 전민동, 세종아파트 ) 김희택 충청북

(72) 발명자 김재환 인천광역시남동구남동동로 84 한국산업단지 303 호 이도원 인천시남동구남동동로 84 한국산업단지 303 호 ( 주 ) 스피덴트기술연구소 김민성 인천광역시남동구남동동로 84 한국산업단지 303 호 - 2 -

붙임2-1. 건강영향 항목의 평가 매뉴얼(협의기관용, '13.12).hwp

(72) 발명자 한재건 강원도춘천시석사동퇴계주공아파트 306 동 1003 호 하지혜 강원도춘천시석사동퇴계주공아파트 402 동 1505 호 오성호 강원도강릉시포남동진달래아파트다동 302 호 정명훈 강원도춘천시후평동대우아파트 3 동 203 호 김승섭 강원도원주시명륜 2 동

이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 교육과학기술부 연구사업명 기초사업연구-일반연구자지원사업-기본연구지원사업(유형II) 연구과제명 시공간 부호 협력 통신을 위한 동기 알고리즘 연구 기 여 율 1/1 주관기관 서울시립대학교 산학협력단

함으로써, 세포내자유라디칼소거를하고, 지질과산화, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의활성을억제하도록하고, 상기해조류혼합발효물을함유하는화장료조성물을제공함으로써, 피부염증, 알러지및아토피피부를개선하고, 피부자극에대한부작용이없도록하는항염, 항알러지및아토피피부개선효과를가지는해조

실용신안 등록청구의 범위 청구항 1 톤백마대가 설치될 수 있도록 일정간격을 두고 설치되는 한 쌍의 지지프레임과, 상기 지지프레임과 지지프레임의 상부를 서로 연결하는 한 쌍의 연결프레임과, 상기 연결프레임의 상부에 일정간격을 두고 다수 설치되어 상기 톤백마대와 그 투입구

특허청구의범위청구항 1 투입된음식물을분쇄하는분쇄기 ; 상기분쇄된음식물을가열할수있는마그네트론 ; 및탈취작용을하는저온촉매필터를포함하는음식물처리기에있어서, 상기마그네트론이상기저온촉매필터를일정온도로가열할수있는것을특징으로하는, 청구항 2 제 1 항에있어서, 상기음식물처리기는상기

특허청구의 범위 청구항 1 제1 내지 제6 암이 각각의 관절부를 가지며 형성되며, 상기 제1 내지 제6 암 각각은 제1 내지 제6 링크에 의해 링크되고, 상기 제1 내지 제6 암 내부에는 각각의 암을 구동하는 구동모듈이 각각 내장되며, 상기 구동모듈 각각의 선단에는 1

(73) 특허권자철강융합신기술연구조합경상북도포항시남구청암로 67( 효자동 ) ( 주 ) 포스코엠텍경상북도포항시남구형산강북로 131 ( 효자동 ) - 2 -

(00-1) Journal of Life.hwp

May leaflet_final.pdf

특허청구의범위청구항 1 강화상이포함된 Al-Si계합금을가열하여용융시켜용탕을제조하는단계 ( 단계 1); 상기단계 1에서제조된용탕에금속잉곳또는합금잉곳을첨가한후교반하여혼합용탕을제조하는단계 ( 단계 2); 및상기단계 2에서제조된혼합용탕을가스와함께분무하여금속복합분말을제조하는단계

특허청구의범위청구항 1 나한과 ((Siraitia grosvenorii) 를 2중건조후절단하는제 1단계 : 상기제 1단계를거쳐얻어진건조물을추출용매로가열추출하는제 2단계 : 상기추출된침출액을 1차여과하는제 3단계 : 상기 1차여과된침출액을 1차농축하는제 4단계 : 상기농

(72) 발명자 박병희 충청북도 청원군 부용면 부강행산로 232, 구 바자지 바랏 대전시 유성구 신성동 19 박병기 대전시 유성구 어은동 한빛A 이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호

(72) 발명자유, 밍화중국후베이 이창쳉동로드 168 야오, 주안중국후베이 이창쳉동로드 168 리, 페이중국후베이 이창쳉동로드 168 리, 쿠중국후베이 이창쳉동로드 168 리우, 젱팡중국후베이 이창쳉동로드

특허청구의범위청구항 1 1,3-부틸렌글리콜, C1 내지 C4의저급알코올및프로필렌글리콜중에서선택되는 1가지추출용매로추출한장딸기추출물과말의지방육을녹인후여과하여제조한마유를유효성분으로함유하는것을특징으로하는보습또는주름개선용화장료조성물. 청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 제

목 차

Transcription:

(19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (45) 공고일자 2015년09월23일 (11) 등록번호 10-1554999 (24) 등록일자 2015년09월16일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 8/97 (2006.01) A61K 36/899 (2006.01) A61P 17/00 (2006.01) A61Q 19/02 (2006.01) (21) 출원번호 10-2013-0115733 (22) 출원일자 2013 년 09 월 27 일 심사청구일자 2013 년 09 월 27 일 (65) 공개번호 10-2015-0035659 (43) 공개일자 2015 년 04 월 07 일 (56) 선행기술조사문헌 JP2003238343 A* KR1020130001842 A* * 는심사관에의하여인용된문헌 (73) 특허권자 ( 주 ) 지에프씨 경기도용인시기흥구흥덕 1 로 13, 타워동 309 호 ( 영덕동, 흥덕아이티밸리 ) (72) 발명자 강희철 경기수원시영통구영통로 154 번길 51-16, 303 동 901 호 ( 망포동, 센트럴하이츠아파트 ) 홍소영 경기수원시영통구영통로 154 번길 51-16, 303 동 901 호 ( 망포동, 센트럴하이츠아파트 ) ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 특허법인아주양헌전체청구항수 : 총 4 항심사관 : 윤준호 (54) 발명의명칭피부미백용조성물 (57) 요약 본발명은피부미백용조성물에관한것이다. 한구체예에서상기피부미백용조성물은상기옥수수추출물은옥수수의잎 (leaf), 껍질 (husk), 줄기 (stalk), 뿌리 (root), 배아 (embryo) 및수염 (silk) 부위를 1:0.1~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3 의중량비로포함하는혼합물을발효추출한것이며, 상기발효추출은유기용매, 열수또는초음파에의해추출된추출물에균주를접종하여 20~40 에서 1~10 일간배양한것을특징으로한다. 대표도 - 도 3-1 -

(72) 발명자 박가람 경기수원시영통구영통로 174 번길 68, 302 호 ( 망포동 ) 임동현 서울시마포구신촌로 28 마길 40, 2 층 ( 아현동 ) 주세진 인천광역시남동구논현동 57-10 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 SA114112 부처명 중소기업청 연구관리전문기관 한국산업기술평가관리원 연구사업명 중소기업기술혁신개발사업 연구과제명 옥수수지상부유래의미백기능성화장품소재및화장품개발 기여율 1/1 주관기관 ( 주 ) 서울화장품 연구기간 2011.10.01 ~ 2013.09.30-2 -

명세서청구범위청구항 1 옥수수추출물을유효성분으로포함하고, 상기옥수수추출물은옥수수의잎 (leaf), 껍질 (husk), 줄기 (stalk), 뿌리 (root), 배아 (embryo) 및수염 (silk) 부위를 1:0.1~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3의중량비로포함하는혼합물을발효추출한것이며, 상기발효추출은유기용매, 열수또는초음파에의해추출된추출물에균주를접종하여 20~40 에서 1~10일간배양한것을특징으로하는피부미백조성물. 청구항 2 제 1 항에있어서, 상기옥수수추출물은상기조성물총중량에대하여 0.01 중량 % 내지 20 중량 % 로포함되는것 을특징으로하는피부미백용조성물. 청구항 3 삭제청구항 4 삭제청구항 5 삭제청구항 6 삭제청구항 7 삭제청구항 8 삭제청구항 9 제1항에있어서, 상기균주는바실러스아밀로리퀴파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스코아귤란스 (Bacillus coagulans), 바실러스퓨지포미스 (Bacillus fusiformis), 바실러스퓨밀러스 (Bacillus pumilus), 바실러스서브틸리스 (Bacillus subtilis), 바실러스불가리스 (Bacillus vulgaris) 및바실러스웨이헨스테판넨시스 (Bacillus weihenstephanenesis) 중에서 1종이상포함하는것을특징으로하는피부미백용조성물. 청구항 10 제 1 항, 제 2 항, 및제 9 항중어느한항에있어서, 상기피부미백용조성물은화장품, 의약품또는의약부외품 용도로사용되는피부미백용조성물. - 3 -

발명의설명 [0001] 기술분야 본발명은피부미백용조성물에관한것이다. 더욱상세하게는옥수수를열수, 유기용매또는발효추출을이 용하여수득한추출물을유효성분으로포함하는피부미백용조성물에관한것이다. [0002] [0003] [0004] [0005] [0006] [0007] [0008] [0009] [0010] 배경기술태양에노출된멜라닌세포는멜라닌합성이촉진되며, 합성된멜라닌은자외선을차단하여피부를보호하는이로운작용을하지만과도한멜라닌의생성이나분포이상은기미, 주근깨및피부반점을형성하고피부노화및피부암을유발하는것으로알려져있다. 멜라닌은표피의기저층에위치한피부세포의한종류인멜라닌세포에의해합성되어다른피부세포인각질형성세포로이동되어이세포가각질형성과정을통해피부밖으로나와피부로부터분리될때까지지속적으로존재하여피부색을결정하게되는요인이된다. 멜라닌세포는성숙되면서돌기를형성하게되고이돌기를통해주변의각질형성세포에멜라닌을전달하게되며피부색뿐만아니라머리카락등의색깔도결정하게된다. 피부내멜라닌의생성기전은 tyrosinase, TRP-1(tyrosinase related protein)-1, TRP-2 등의일련의효소반응에의하여생성되며, 멜라닌생성에가장중요한역할을하는효소는 tyrosinase이다. 멜라닌생합성에서초기단계를촉매하는속도조절인자로서, 이효소에의해 tyrosine이 DOPA, DOPA quinone으로변환되어붉은계열의 eumelanin과갈색계열의 pheomelanin이합성된다. 따라서, tyrosinase의활성을저해하거나, tyrosinse의생성을억제하는것이멜라닌생성속도를줄여서피부를밝게할수있다고알려져있다. 지금까지여러가지멜라닌생성억제제가합성되고있지만합성물질은자연계에존재하지않는전혀새로운물질인경우가많아서생분해가되지않거나암의발생등악영향을미칠가능성이크므로, 천연물에서지금까지알려지지않은미백효과가우수한새로운물질을찾고자하는요구가증대되고있다. 한편, 옥수수 (corn, Zea mays L.) 는외떡잎식물벼목화본과의한해살이풀로높이는 1~3m이다. 꽃은단성화로웅화수는줄기끝에달리고, 자화수는줄기중앙의잎겨드랑이에달린다. 옥수수는멕시코에서남아메리카북부에걸친지역이원산지로전세계에서재배된다. 도 1은일반적인옥수수를나타낸것이다. 상기도 1을참조하면, 옥수수 (1000) 는연장된줄기 (120) 의하부에는뿌리 (130) 가위치하고, 상기연장된줄기 (120) 의둘레를따라열매 (100) 및잎 (110) 이위치하며, 상기열매 (100) 는상기줄기 (120) 으로부터연장된뼈대둘레에종자 (24) 가성장되어있고, 그위에수염 (10) 이위치하며, 상기종자 (24) 의주변은껍질 ( 표엽, 22) 이감싸고있다. 또한, 상기옥수수의종자 (24) 는다시배유 (endosperm), 배아 (germ 또는 embryo), 외피 (bran layer) 등으로구분할수있다. 상기옥수수의수염 (corn silk) 은체내에있는노폐물을배출시켜주기때문에피부가매끄러워지고여드름과같은잡티제거효과, COX-2 저해효과 (Kim et al., 2005) 및당뇨억제효과 (Rau et al., 2006) 등의효능이알려져있으며, 대한민국공개특허번호 2007-0118423호에는옥수수수염추출물을함유하는숙취해소제와관련하여개시하고있다. 또한, 옥수수의씨눈 (corn embryo) 의효능으로는토코페롤이라는비타민 E 성분이풍부하게들어있기때문에피부의노화와건조를막아주고습진에대한저항력을높여주며, 성인병예방에효과가있다고알려져있다. 하지만, 상기옥수수의멜라닌생성억제및미백효과에대해서는지금까지보고된바가없었다. 발명의내용 해결하려는과제 - 4 -

[0011] [0012] [0013] [0014] 본발명의목적은기존에사용되는미백제품보다인체안정성및미백효과가우수한피부미백용조성물을제공하는것이다. 본발명의다른목적은세포독성이없고인체에무해하며, 피부자극이적은피부미백용조성물을제공하는것이다. 본발명의또다른목적은경제성이우수한피부미백용조성물을제공하는것이다. 본발명의또다른목적은화장품, 의약품및의약부외품의피부외용제등의분야에서사용될수있는피부미백용조성물을제공하는것이다. [0015] [0016] [0017] [0018] 과제의해결수단본발명의하나의관점은피부미백용조성물에관한것이다. 상기피부미백조성물은옥수수추출물을유효성분으로포함하고, 상기옥수수추출물은옥수수의잎 (leaf), 껍질 (husk), 줄기 (stalk), 뿌리 (root), 배아 (embryo) 및수염 (silk) 부위를 1:0.1~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3의중량비로포함하는혼합물을발효추출한것이며, 상기발효추출은유기용매, 열수또는초음파에의해추출된추출물에균주를접종하여 20~40 에서 1~10일간배양한것을특징으로한다. 한구체예에서상기옥수수추출물은상기조성물총중량에대하여 0.01 중량 % 내지 20 중량 % 로포함되는것을특징으로한다. 한구체예에서상기균주는바실러스아밀로리퀴파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스코아귤란스 (Bacillus coagulans), 바실러스퓨지포미스 (Bacillus fusiformis), 바실러스퓨밀러스 (Bacillus pumilus), 바실러스서브틸리스 (Bacillus subtilis), 바실러스불가리스 (Bacillus vulgaris) 및바실러스웨이헨스테판넨시스 (Bacillus weihenstephanenesis) 중에서 1종이상포함하는것을특징으로한다. 삭제 [0019] 삭제 [0020] 삭제 [0021] 삭제 [0022] 삭제 [0023] 삭제 [0024] 한구체예에서상기피부미백용조성물은화장품, 의약품또는의약부외품용도로사용될수있다. [0025] 발명의효과본발명의피부미백용조성물은기존에사용되는미백제품보다 tyrosinase의활성억제효과가우수하여특히단백질수준에서도 tyrosinase의활성억제효과가뿐만아니라, 세포에대한독성이없어인체에무해하고, 피부자극이적고, 낮은생산단가및높은생산성을가져경제성이우수하며, 화장품, 의약품및의약부외품의피부외용제등의분야에서사용될수있다. - 5 -

[0026] 도면의간단한설명 도 1 은일반적인옥수수를나타낸것이다. 도 2는본발명의실시예및본발명에따른비교예의세포독성정도를비교한그래프이다. 도 3은본발명의실시예및본발명에따른비교예의멜라닌세포에서의멜라닌생성저해활성을측정하여비교한그래프및사진이다. 도 4는본발명의실시예및본발명에따른비교예의세포내 tyrosinase의활성억제효과를비교한그래프및사진이다. 도 5는본발명의실시예및본발명에따른비교예의세포내 tyrosinase 단백질발현억제효능을측정하여나타낸그래프이다. 도 6은본발명의실시예의농도변화및본발명에따른비교예의 western blotting 결과를나타낸그래프및사진이다. [0027] [0028] [0029] [0030] 발명을실시하기위한구체적인내용본발명을설명함에있어서관련된공지기술또는구성에대한구체적인설명이본발명의요지를불필요하게흐릴수있다고판단되는경우에는그상세한설명은생략할것이다. 그리고후술되는용어들은본발명에서의기능을고려하여정의된용어들로써이는사용자, 운용자의의도또는관례등에따라달라질수있으므로그정의는본발명을설명하는본명세서전반에걸친내용을토대로내려져야할것이다. 한편, 본명세서에서사용되는 피부미백 은멜라닌색소의합성을저해함으로써피부톤을밝게할뿐만아니라, 자외선, 호르몬또는유전에기인한기미나주근깨등의피부과색소침착의개선을의미하는것으로정의하도록한다. 또한, 본명세서에서사용되는 옥수수 는옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 종자, 배아또는수염등의특정한일부를의미하거나, 또는옥수수의모든부위를의미하는것으로정의하도록한다. [0031] [0032] [0033] [0034] [0035] [0036] 본발명의하나의관점은옥수수추출물을유효성분으로포함하는피부미백조성물에관한것이다. 한구체예에서상기옥수수추출물은옥수수의잎 (leaf), 껍질 (husk), 줄기 (stalk), 뿌리 (root), 배아 (embryo) 및수염 (silk) 중하나이상의부위를사용하여추출할수있다. 또한, 본발명에서는추출효율을높이기위해, 상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염부위를분절또는분쇄한다음추출을실시할수있다. 한구체예에서상기옥수수의줄기부위를포함하여열수, 유기용매또는발효를이용하여추출할수있다. 상기방법으로추출시상기옥수수에포함된유용성분이용이하게추출되어본발명의미백효과가우수할수있다. 다른구체예에서상기옥수수는잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염중에서하나이상의부위를포함하여열수, 유기용매, 초음파또는발효를이용하여추출할수있다. 상기방법으로추출시상기옥수수에포함된유용성분이용이하게추출되어본발명의미백효과가우수할수있다. 상기옥수수추출물은상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염부위를 1: 0.1~5: 0.1~5: 0.1~5: 0.1~5: 0.1~5의중량비로포함하여추출될수있다. 바람직하게는 1:0.1~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3:0.5~3의중량비로포함될수있다. 더욱바람직하게는 1:1:1:1:1:1의중량비로포함될수있다. 상기와같이중량비로포함하여추출시상기각추출물에포함된유용성분의상승효과가우수하여멜라닌생성억제활성이증진되고, 멜라닌생성에직접적으로작용하는세포내 tyrosinase의활성억제효과를증진시킬수있으며, 피부미백효과를더욱효과적으로증진시킬수있다. 상기열수추출은상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염중에서선택되는하나이상의부위와물 - 6 -

을포함하는혼합물을가열하여추출할수있다. [0037] [0038] [0039] [0040] [0041] [0042] [0043] [0044] [0045] [0046] [0047] 상기열수추출시상기옥수수 100 중량부에대하여물 100~500 중량부를포함하여추출될수있다. 바람직하게는물 200~400 중량부를포함할수있다. 한구체예에서상기열수추출은 30 ~100 에서 1~10 시간동안가열하여추출할수있다. 바람직하게는 60 ~90 에서 3~8 시간동안가열하여추출할수있다. 상기조건에서상기옥수수에포함된유용성분이손상되지않으면서용이하게추출될수있다. 상기열수추출이후, 교반추출, 환류냉각추출, 냉침추출, 초음파추출또는초임계추출등의통상적인추출방법을사용할수있으며, 바람직하게는환류냉각추출한후수득한추출액을여과, 감압농축또는건조하여상기옥수수추출물을수득할수있다. 상기유기용매추출은여과액 100 중량부에물 10~100 중량부및유기용매 100~350 중량부를첨가하여추출될수있다. 바람직하게는상기여과액 100 중량부에물 30~80 중량부및유기용매 150~300 중량부를첨가하여추출될수있다. 상기조건에서상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염에포함된유용성분이손상되지않으면서용이하게추출될수있다. 이때상기여과액은상기옥수수 100 중량부에유기용매 50~200 중량부를첨가하고 5~7일동안숙성한다음여과된것일수있다. 상기방법으로여과시옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염에포함된유효성분을더욱효과적으로추출할수있다. 상기여과는통상적인방법으로실시하며, 예를들면여과지를사용할수있으나, 이에한정되지않는다. 또한, 상기여과된여과액은통상적인방법으로더농축할수있다. 예를들면, 회전진공농축장치에투입하여상기여과액을농축할수있으나, 이에제한되지않는다. 상기여과액제조및상기유기용매추출에서사용될수있는유기용매로는아세톤, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름, 헥산및탄소수 1~10의알코올등이사용될수있다. 이들은단독또는 2종이상혼합하여사용될수있다. 상기와같은유기용매를사용시상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염에포함된유용성분이손상되지않으면서용이하게추출될수있다. 또한, 상기유기용매에사용되는알코올로는예를들면, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 펜탄올, 헥사놀등의저급 1 가알코올, 1,2-펜탄디올, 1,5-펜탄디올, 헥산디올, 헵탄디올, 옥탄디올, 데칸디올등의중급 2가알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린등저급 3가알코올등이사용될수있다. 이들은단독또는 2종이상혼합하여사용될수있다. 한구체예에서상기유기용매는헥산, 부탄올및에틸아세테이트를 1:0.1~5:0.1~5의부피비로혼합하여사용할수있다. 상기혼합비율의유기용매를사용하여상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염의유용성분을추출하여분획 ( 分劃 ) 한다음감압농축또는건조하여본발명의옥수수추출물을수득할수있다. 상기초음파추출은상기옥수수 100 중량부에물 100~500 중량부를포함하는혼합물을 15 ~30 에서 20~50 khz의초음파를이용하여 0.5~5 시간동안추출하여추출액을수득할수있다. 이때, 상기수득한추출액을여과, 감압농축또는건조하여상기옥수수추출물을수득할수있다. 상기방법으로여과시옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염에포함된유효성분이손상되지않으면서효과적으로추출될수있다. 상기발효추출은균주가배양된배지에전술한유기용매, 열수또는초음파에의해추출된추출물을접종하고배양하여발효추출물을수득할수있다. 한구체예에서멸균한배지에균주를접종한다음, 20 ~40 에서 20~50시간동안배양하고, 상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염중하나이상의부위를전술한유기용매또는열수로추출된추출물을접종하여 20 ~40 에서 1~10일간배양하여얻을수있다. 상기조건으로발효추출시옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염을이용한발효물을효과적으로추출할수있다. 상기배지는균주의발효에통상적으로사용되고있는배지가있다면, 제한없이사용가능하다. 예를들면, 천연배지, 합성배지및반합성배지등을사용할수있다. 더욱구체적으로, 효모추출물배지, 무아미노산효모질소원배지, 맥아추출물배지, 펩톤배지, 폴리펩톤배지, 트립톤배지, 탈지분유배지, 카사미노산배지, 소이톤배지, 밀기울배지, 탈염간장배지, 콘스팁리쿼배지, 육즙추출물배지, 메주가루배지, 청국장가루배지, 고춧가루배지, 영양배지, 감자배지, 사브로드포도당배지, 트립틱콩배지, 크자펙-독스 (Czapek-Dox) 배지, TSA(Trypticase Soy Agar) 배지, TSB(Tryptic Soy Broth) 배지, BHI(Brain heart infusion) 배지, LB(Luria-Bertani) 배지, TBS(Tris-Buffered Saline) 배지, SD(Sabouraud Dextrose) 배지및 MRS(de Man, Rogosa and Sharpe) 배지등을사용할수있으나, 이에제한되지않는다. - 7 -

[0048] [0049] 한구체예에서는멸균수를 TBS(Tryptic soy broth) 에 15~35 g/l를첨가하여, ph 6.0~7.5, 온도 30 ~40 로유지시켜사용할수있으나, 이에제한되지않는다. 한구체예에서상기발효에사용되는균주로는바실러스아밀로리퀴파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스코아귤란스 (Bacillus coagulans), 바실러스퓨지포미스 (Bacillus fusiformis), 바실러스퓨밀러스 (Bacillus pumilus), 바실러스서브틸리스 (Bacillus subtilis), 바실러스불가리스 (Bacillus vulgaris), 및바실러스웨이헨스테판넨시스 (Bacillus weihenstephanenesis) 등을사용할수있다. 이들은단독또는 2종이상혼합하여사용할수있다. 상기종류의균주를사용시상기옥수수의잎, 껍질, 줄기, 뿌리, 배아및수염에포함된유용성분을효과적으로추출할수있다. [0050] 상기옥수수추출물은멜라닌생성억제활성이증진되고, 멜라닌생성에직접적으로작용하는세포내 tyrosinase의활성억제효과를증진시킬수있으며, 단백질 (protein) 수준에서도 tyrosinase의양을억제시키는효과가우수하고, 특히일정한중량비율로포함할때, 이러한효능을더욱월등하게증진시킬수있다. 또한, 상기피부미백조성물은유사한효과를갖는다른제품과비교할때낮은생산단가및높은생산성을가질수있어경제성이우수할수있다. [0051] [0052] 한구체예에서본발명에따른피부미백조성물은화장품, 의약품또는의약부외품 ( 醫藥部外品 ) 용도로사용될수있다. 상기피부미백조성물은상기화장품, 의약품또는의약부외품용도로사용되어피부미백에이용할수있다. 이때, 상기옥수수추출물은상기피부미백조성물전체중량에대하여 0.01~20 중량 % 포함할수있다. 바람직하게는 0.1~15 중량 % 포함할수있다. 더욱바람직하게는 0.5~10 중량 % 포함할수있다. 상기범위에서피부자극, 세포독성이없으면서멜라닌생성억제효과와 tyrosinase의활성억제, tyrosinase의단백질수준에서의발현억제를통하여피부미백효과가우수할수있다. [0053] [0054] 본발명의피부미백조성물은화장품용도로사용시, 일반적인유화제형및가용화제형의형태로제조할수있다. 상기화장품의제형으로는예를들면, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스터로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이새도우등이있으나, 이에제한되지않는다. 상기피부미백조성물을상기화장품에사용시포함되는성분으로는담체, 부형제또는희석제로정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산알코올, 지방산에스테르, 계면활성제, 흡습제 (humectant), 증점제 (thickening agent), 항산화제, 점도안정화제 (viscosity stabilizer), 킬레이팅제, 완충제및저급알코올등을포함할수있지만, 이에제한되는것은아니다. [0055] [0056] 또한, 본발명의피부미백조성물은상기의약품용도로사용시고형제, 반고형제, 용액제, 유제, 분산제, 미셀, 리포좀등의제형으로제조될수있다. 본발명의피부미백조성물을의약품용도로사용시경구또는비경구로투여할수있으며, 일반의약품제제의형태로투여될수있다. 상기와같이제제화될경우통상적인충진제, 중량제, 결합제, 습윤제또는계면활성제등의희석제또는부형제를사용하여조제될수있다. 이때, 상기의약품은약학적으로허용되는성분을추가로포함할수있다. 상기약학적으로허용되는성분으로는완충액, 주사용멸균수, 일반식염수또는인산염완충식염수, 슈크로오스, 히스티딘또는폴리솔베이트등을포함할수있다. [0057] 본발명의피부미백조성물을의약부외품용도로사용시유액, 연고, 크림, 로션또는팩의제형으로제조될 수있다. 상기제형으로사용시본발명의피부미백조성물이피부내에용이하게침투하여미백작용, 멜라닌 생성억제작용이우수하고, 피부에장기간체류하기적합한형태일수있다. - 8 -

[0058] 이하, 본발명의바람직한실시예를통해본발명의구성및작용을더욱상세히설명하기로한다. 다만, 하기실시예는본발명의이해를돕기위한것으로, 본발명의범위가하기실시예에한정되지는않는다. 여기에기재되지않은내용은이기술분야에서숙련된자이면충분히기술적으로유추할수있는것이므로그설명을생략하기로한다. [0059] [0060] [0061] 실시예 1: 옥수수열수추출옥수수의줄기를세척하여이물질을제거하고, 음지에서건조시킨다음, 분쇄기를사용하여약 30초간분쇄하여분쇄물을제조하였다. 상기제조된분쇄물 2kg와증류수 4.5kg를혼합하고 70 에서 3시간동안가열한혼합물을회전진공농축장치 (rotary vacuum evaporator)(eyela, Japan) 를사용하여농축하고동결건조하여분말상태의추출물을수득하였다. [0062] [0063] [0064] 실시예 2: 옥수수유기용매추출상기실시예 1과동일한방법으로제조된분쇄물 2kg을 70% 에탄올 2kg에첨가하고 1주일동안상온에서숙성한다음, 여과지로여과하여여과액을수득하였다. 상기여과액을회전진공농축장치 (rotary vacuum evaporator)(eyela, 일본 ) 를사용하여농축하였다. 상기농축된여과액 1kg과물 0.5kg 및유기용매 2kg을혼합하였다. 이때상기유기용매로는헥산, 에틸아세테이트및부탄올을 1:1:2의부피비로혼합하여사용하였다. 상기혼합된여과액을감압농축하여추출물을수득하였다. [0065] [0066] [0067] 실시예 3: 옥수수발효추출 TBS(DIFCO, U.S.A) 배지에균주 ( 바실러스아밀로리퀴파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens)) 를접종하고 ph를 5.7로조절하여배양실온도를 23 ~27 로유지하고일장은 16day/8night으로조절되는환경하에서 48시간동안배양하였다. 상기실시예 2와동일한방법으로수득된추출물을상기배양된균주가포함된배지에접종하여 36 에서 7일동안배양하여발효물을수득하였다. 상기발효물을면필터로여과한뒤, 상기면필터상에있는여과물을원심분리하고상층액을취하여추출물을수득하였다. [0068] [0069] [0070] [0071] 실험예실험예 1: 세포활성실험 WST 분석법은살아있는세포를측정하는방법으로세포내의 mitochondrial dehydrogenase 활성을측정한다. WST는수용성의 tetrazolium salt로서살아있는세포와반응하여오렌지색수용성의 formazan을생성한다. 이 formazan을측정하여시료에대한세포독성을확인한다. 상기실시예 1~4의옥수수추출물이세포에자극적이지않으며미백활성효과를나타낼수있는지를확인하기위해멜라닌세포 (B16-F10 melanoma) 에대한독성을측정하였다. 대식세포를 96-well 플레이트에 1 10 4 cells/well 씩동일하게 hemacytometer를이용하여계수한후, 분주하였다. 24시간동안배양한대식세포에상기실시예 1~3을 30 μg / ml의농도로각 well에넣고, DMEM 배지 100 μl에서 37, 5% CO 2 incubator에서 24시간 동안배양하였다. 그후, 상등액을제거하고 DMEM 배지와 WST solution(ez-cytox) 을 9:1의중량비율로혼합한뒤, 2시간동안 37, 5% CO 2 incubator에서반응시키고, 450nm에서흡광도를측정하였다. 세포독성정도 (cell viability) 는실시예 1~3과같은용매를사용한대조군의흡광강도를기준으로백분율 (%) 로표시하여, 상기실시예 1~3의세포활성정도 (%) 를하기표 1 및도 2에나타내었다. 상기표 1 및도 2를참조하면, 본발명의 - 9 -

실시예 1~3 에서는대조군과유사한세포활성도를나타내며세포독성을보이지않음을알수있었다. [0072] 구분 세포활성정도 (%) 대조군 100 실시예 1 103.3 실시예 2 97.2 실시예 3 105.4 표 1 [0073] [0074] [0075] [0076] 실험예 2: 멜라닌생성저해효과멜라닌세포를 α-msh로자극시키면여러 pathway를활성화시키고, tyrosinase의발현이증가하게되어멜라닌이생성된다. 생성된멜라닌은세포배양액과세포내에존재하게되며배양액과세포의 pellet은멜라닌에의하여검은색을띄게된다. 상기실시예 1~3 및뛰어난미백물질로알려진알부틴 (α-arbutin)( 비교예 1) 의멜라닌생성저해효과를비교하기위해, 멜라닌생성유도물질인 α-msh(melanocyte-stimulating Hormone) 를처리한멜라닌세포에서생성된멜라닌을측정하는실험을실시하였다. 세포외로분비되는 (extra-cellular) 멜라닌의측정은 α-msh를처리하지않은멜라닌세포를양성대조군으로, α-msh를처리한대식세포를음성대조군으로하여, 상기실시예 1~3 및비교에 1을각각 30 μg / ml농도로처리한후배양액을채취하여 96 well plate에분주한후 450nm의흡광도로 microplate reader를이용하여측정하여멜라닌생성량을하기표 2 및도 3에나타내었다. [0077] 구분 세포외멜라닌생성정도 (%) 양성대조군 100 음성대조군 250.7 실시예 1 128.3 실시예 2 123.5 실시예 3 111.4 비교예 1 140.7 표 2 [0078] 또한, 세포내로분비되는 (intra-cellular) 멜라닌은배양액이제거된배양접시에서부착된대식세포를탈부착시킨후 tube에모아 1N NaOH를이용하여용해시킨후상층액을 96 well plate에분주하여상기세포외로분비되는멜라닌과동일한방법으로측정하였다. α-msh를처리하지않은대식세포를양성대조군으로, α-msh를처리한대식세포를음성대조군으로하여, 상기와같이실시예 1~3 및비교에 1을각각 30 μg / ml농도로처리한멜라닌생성량을하기표 3 및도 4에나타내었다. [0079] 구분 세포내멜라닌생성정도 (%) 양성대조군 100 음성대조군 183.1 실시예 1 134.5 실시예 2 121.5 실시예 3 112.8 비교예 1 138.7 표 3 [0080] 상기표 2, 표 3, 도 3 및도 4 를참조하면, 실시예 1~3 에따른옥수수추출물은뛰어난미백물질로알려진알 부틴 ( 비교예 1) 보다멜라닌생성저해효과가상대적으로우수한것을알수있었다. [0081] 실험예 3: 세포내 tyrosinase 활성억제효과 - 10 -

[0082] [0083] 상기실시예 1~3 및뛰어난미백물질로알려진알부틴 (α-arbutin)( 비교예 1) 의멜라닌생성저해효과를측정하기위해, 멜라닌생성유도물질인 α-msh를처리한멜라닌세포에서의생성된멜라닌을측정하는실험을실시하였다. 세포내 tyrosinase의활성을측정하기위해세포내단백질을추출하였고방법은하기와같다. B16 멜라노마세포 (ATCC사 CRL6745) 를 10% 소혈청과 1% 의항생제를첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium) 에 1 10 5 세포의밀도로접종하고 5% CO 2 및 37 의 incubator 에서 24 시간동안배양시켰다. 그후 α- MSH 가처리된 DMEM 10% 배지로갈아준후상기실시예 1~3 및비교예 1 을 30 μg / ml의농도로 well 에처리하여 3 일간배양하였다. [0084] 상기에서각각처리된세포를탈부착시킨후 tube에따대식세포만모아서단백질분해억제효소가첨가된 cell lysis를이용하여세포를용혈시켰다. 원심분리기를이용하여단백질이함유되어있는상층액만취한후 BCA 정량법으로단백질정량을실시하여총단백질양을측정하였다. 총단백질 100μg과 L-DOPA를혼합한후 37 에서 1시간 incubation을시킨후 450nm의파장에서흡광도를측정하여하기표 4 및도 5에나타내었다. [0085] 구분 세포내 tyrosinase 활성억제정도 (%) 양성대조군 100 음성대조군 241.2 실시예 1 160.5 실시예 2 153.6 실시예 3 128.9 비교예 1 176.9 표 4 [0086] 상기표 4 및도 5 를참조하면, 상기실시예 1~3 은뛰어난미백물질로알려진알부틴 ( 비교예 1) 보다세포내 tyrosinase 활성억제효과가상대적으로우수한것을알수있었다. [0087] [0088] 실혐예 4: Tyrosinase 발현억제효과 α-msh를처리하지않은멜라닌세포를양성대조군으로, α-msh를처리한멜라닌세포를음성대조군으로하여, 상기실시예 3 및비교예 1에대하여멜라닌세포에서단백질을수득하여 tyrosinase의발현양을알아보기위하여 western blot을실시하였다. 멜라닌세포를 PBS로세척한다음, cell lysis buffer(750mm NaCl, 250mM Tris, 5% Igepal, 1M DTT, Protase inhibitor) 를이용하여용혈시키고, 원심분리하여단백질용액을얻었다. BCA 정량법을이용하여단백질용액을정량한다음, 30μg을취하여 sample buffer(nupage LDS Sample buffer(x4), invitrogen, U.S.A.) 와혼합하였다. 100 에서 5분간가열하여단백질변성을유도하였다. 변성된단백질을 10% acrylamide gel에서전기영동을수행한다음 nitrocellulose membrane으로전위시키고 5% BSA/TBS-T로상온에서 1시간동안반응시켜비특이적인항체반응을억제시켰다. tyrosinase 및 β-actin에대한 1차항체를 1% BSA/TBS-T에서 1:2,000으로희석하여 membrane과 4 에서 overnight하여반응시키고 TBS-T buffer로세척한다음 Anti-mouse, rabbit 혹은 goat IgG conjugated Horseradish peroxidase 2차항체를 1% BSA/TBS-T에서 1:10,000으로희석하여 membrane과상온에서 1시간동안반응시켰다. TBS-T로세척한다음 ECL reagent kit로발색시키고 chemi-doc XRS+ 에서감광시키는방법으로분석하여, 상기실시예 3의농도변화및비교예 (30 μg / ml ) 에따른 western bloting 결과를하기표 5 및도 6에각각나타내었다. [0089] 구분 tyrosinase 발현정도 (ratio) 대조군 1 실시예 3의농도 ( 3.75 0.807 μg / ml ) 7.5 0.684 15 0.567 30 0.489 비교예 1((30 μg / ml ) 0.803 표 5-11 -

[0090] 상기표 5 및도 6에나타낸것과같이상기양성대조군, 음성대조군, 옥수수추출물, 알부틴과비교하였을때, 실시예 1~3의경우 tyrosinase의발현을감소하는효과가비교예 1보다우수한것을확인할수있었고, 이를통하여본발명의옥수수추출물은상기알부틴 ( 비교예 1) 보다단백질수준에서도피부미백효과를확인할수있었다. [0091] 상기실험예 1~4의결과를종합해보면, 상기실시예 1~3은우수한미백물질로알려진알부틴 ( 비교예 1) 보다세포독성시험, 멜라닌생성저해실험, 세포내 tyrosinase 활성저해실험및멜라닌의생합성에가장큰요인으로작용하는 tyrosinase의발현억제효과까지의전반전인생리활성연구에서효과가우수하였으며, protein 수준에서도피부미백효과를확인할수있었다. [0092] 또한, 본발명에따른피부미백조성물의제제예를하기에설명하고자하나, 이는본발명의이해를돕기위한 것으로, 본발명의범위가하기제제예에한정되지는않는다. [0093] [0094] 제제예 1: 의약부외품 ( 국소투여용약제 ( 패취제 )) 의제조 하기표 6 의조성과같이, 상기실시예 3 의추출물을유효성분으로포함하는국소투여용약제 ( 패취제 ) 를통상 의방법에따라제조하였다. [0095] 구분 성분 함량 ( 단위 : 중량 %) 1 실시예 3의옥수수추출물 0.5 2 β-1,3 글루칸 3.0 3 헥실렌글리콜 5.0 4 디에틸아민 0.2 5 폴리아크릴산 0.2 6 아황산나트륨 0.1 7 폴리옥시에틸렌라우릴에테르 (E.O=9) 2.0 8 폴리히드록시에틸렌세틸스테아릴에테르 (Cetomacr 1.0 ogol 1000) 9 파라핀오일 5.0 10 카프릴산에스테르 3.0 11 폴리에틸렌글리콜 2.0 12 정제수 22.0 합계 100 표 6 [0096] [0097] 제제예 2: 화장품 ( 팩 ) 의제조하기표 7의조성과같이, 상기실시예 3의추출물을유효성분으로포함하는화장품 ( 크림 ) 을제조하였다. 우선정제수, 부틸렌글라이콜, 글리세린, 카보머, 트리에탄올아민및방부제를표 2의함량으로 78 에서교반하면서가열하였다. 그다음에글리세릴스테아레이트에스이, 소르비탄세스퀴올리에이트, 글리세릴스테아레이트, 세틸알코올, 스테아릭애씨드, 비즈왁스, 미리스틸알코올, 스쿠알렌및카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드를표 2의함량으로 78 에서교반하며가열하여상기교반된혼합물에투입한다음유화하였다. 상기유화된혼합물을교반하여 50 로냉각한다음, 상기실시예 3의추출물을하기표 7의함량으로상기유화된혼합물에투입하여 35 로냉각하여제조하였다. [0098] 구분 성분명 함량 (%) 1 실시예 3의옥수수추출물 0.5 2 부틸렌글라이콜 4.0 3 글리세린 4.0 표 7-12 -

4 카보머 0.2 5 트리에탄올아민 0.2 6 방부제 0.2 7 글리세릴스테아레이트에스이 1.0 8 소르비탄세스퀴올리에이트 0.5 9 글리세릴스테아레이트 2.0 10 세틸알코올 1.5 11 스테아릭애씨드 2.0 12 비즈왁스 1.5 13 미리스틸알코올 1.5 14 스쿠알렌 4.0 15 카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드 4.0 16 정제수 72.9 합계 100 [0099] [0100] 제제예 3: 화장품 ( 로션 ) 의제조하기표 8의조성과같이, 상기실시예 3의추출물을유효성분으로포함하는화장품 ( 로션 ) 을제조하였다. 우선정제수, 부틸렌글라이콜, 글리세린, 카보머, 트리에탄올아민및방부제를하기표 8의함량으로 78 에서교반하면서가열하였다. 그다음에글리세릴스테아레이트에스이, 소르비탄세스퀴올리에이트, 폴리소르베이트60, 글리세릴스테아레이트, 세틸알코올, 스테아릭애씨드및카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드를하기표 8의함량으로 78 에서교반하며가열하여상기교반된혼합물에투입한다음유화하였다. 상기유화된혼합물을교반하여 50 로냉각한다음, 옥수수추출물을표의함량으로상기유화된혼합물에투입하여 35 로냉각하여제조하였다. [0101] 구분 성분명 함량 (%) 1 실시예 3의옥수수추출물 0.5 2 부틸렌글라이콜 3.0 3 글리세린 2.0 4 카보머 0.2 5 트리에탄올아민 0.2 6 방부제 0.2 7 글리세릴스테아레이트에스이 2.0 8 소르비탄세스퀴올리에이트 0.5 9 폴리소르베이트 60 0.5 10 글리세릴스테아레이트 0.5 11 세틸알코올 1.0 12 스테아릭애씨드 1.0 13 카프릴릭 / 카프릭트리글리세라이드 4.0 14 정제수 84.4 합계 100 표 8-13 -

도면 도면 1 도면 2-14 -

도면 3 도면 4-15 -

도면 5 도면 6-16 -