(72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구매탄동주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 이양구 서울특별시도봉구방학동 한충섭 충청남도천안시서북구성정동 823 선경아파트 1 동 1108 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호

Size: px

Start display at page:

Download "(72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구매탄동주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 이양구 서울특별시도봉구방학동 한충섭 충청남도천안시서북구성정동 823 선경아파트 1 동 1108 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호"

도진 유
6 years ago
Views:

1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2011년07월19일 (51) Int. Cl. A61K 35/64 ( ) A61P 17/00 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2010 년 01 월 11 일 심사청구일자 전체청구항수 : 총 5 항 2010 년 01 월 11 일 (71) 출원인 대한민국 ( 관리부서 : 농촌진흥청장 ) 경기수원시권선구서둔동 250 동성제약주식회사 서울도봉구방학동 (72) 발명자 한상미 충청남도서산시인지면모월리 354 번지 이광길 경기도수원시권선구탑동 42-1 우방 APT 105 동 307 호 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 한라특허법인 (54) 봉독을유효성분으로함유하는피부미백및피부질환예방및치료용조성물 (57) 요약 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부미백및피부질환예방및치료용조성물에관한것으로서, 더욱상세하게는피부상의기미및주근깨제거에효과적이며, 각종피부질환, 특히염증성피부질환과병원균으로인하여발생할수있는무좀과같은피부질환을사전예방하고제거, 치료하기위한화장품및비누, 정제, 캡슐, 밴드, 연고형태등의의약품을특징으로, 다양한성분으로이루어진봉독은미백효과가우수하며, 염증발생을억제할뿐만아니라항균, 살균작용이우수하여피부미백과피부질환예방및치료에효과적인조성물에관한것이다. 대표도 - 도 1-1 -

2 (72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구매탄동주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 이양구 서울특별시도봉구방학동 한충섭 충청남도천안시서북구성정동 823 선경아파트 1 동 1108 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 농촌진흥청 연구관리전문기관 연구사업명 바이오그린21 연구과제명 국내산봉독의기준물질및대량생산체계확립 기여율 주관기관 농촌진흥청 연구기간 2007년 01월 01일 ~ 2010년 12월 31일 - 2 -

3 특허청구의범위 청구항 1 봉독을유효성분으로함유하는것을특징으로하는피부질환예방및치료용조성물. 청구항 2 제 1 항에있어서, 상기피부질환은아토피, 무좀또는비듬인것을특징으로하는조성물. 청구항 3 봉독을유효성분으로함유하는것을특징으로하는피부질환예방및개선용기능성식품. 청구항 4 봉독을유효성분으로함유하는것을특징으로하는피부미백용조성물. 청구항 5 봉독을유효성분으로함유하는것을특징으로하는피부미백용기능성식품. 명세서 [0001] 기술분야 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부미백및피부질환예방및치료용조성물에관한것이다. [0002] [0003] 배경기술피부질환은사람을포함하는동물의피부에서나타나는모든이상소견을말한다. 피부는신체의표면을덮고있으므로자외선과같은외부로부터의자극이나여러병원체에직접접촉될기회가많고, 체내로부터영향을강하게받는다. 또한, 유전, 염증, 양성및악성종양, 호르몬, 외상, 퇴행변성등의병적변화에영향을받으므로다양한원인에의하여질환이유발된다. 염증성피부질환이란피부상피내에일련의임상적징후와증상이유발되는질환을말한다. 염증성피부질환으로는아토피성피부염 (atopic dermatitis), 접촉성피부염 (contact dermatitis), 지루성피부염 (seborrhoic dermatitis) 및여드름등이알려져있다. 비만세포는아토피성피부염과같은다양한염증성피부질환의병인론에관여하는데, 비만세포는피부에존재하면서다양한염증성세포활성물질을분비한다. 비만세포는면역학적또는비면역학적자극으로활성화된후, 히스타민 (Histamin), β-헥소사미니데이즈 (hexosaminidase), 프로테아제 (protease), 아데노신 (adenosine), 가수분해효소와프로테오글리칸 (proteoglycan) 을포함한다양한매개물질을분비한다. 아토피성피부염과같은염증성피부질환의치료를위해서주로스테로이제, 항히스타민제, 비타민연고, 부신피질호르몬제가사용되어왔다. 그러나, 이러한약물은임상효과의탁월함과동시에다양한부작용을발현하는약제들이다. 따라서, 보다부작용이적고안전성이높아안심하고사용할수있는약제의개발이절실히요구된다. 무좀은곰팡이의일종인백선균이원인이되어손발에생기는피부병으로고온다습한여름철에주로손과발에발생하였으나, 생활환경, 직업, 면역상태및무좀균의종류등에따라신체의어느부위에나발생이가능하다. 일반적으로무좀균은피부의각질을파고들어가기때문에완치가상당히어렵고따라서종래의무좀약으로는일시적인효과는볼수있지만재발가능성이큰것으로알려져있다. 또한, 비듬은피부사상균이원인으로생기는피부병으로두피가건조해지면서각질이일어나심한가려움증을수반하기도하며, 특히모발에기름기가많고, 두피에피지분비량이많은지루성비듬은모발에먼지가잘달라붙어지저분하고냄새가발생되는것 - 3 -

4 으로확실한원인조차밝혀지지않고있다. 비듬의치료에는징크피리티이온 (Zincpyrithiione) 을이용하고있으나, 안전성등에대한우려로인하여그사용이제한되고일부에국한하여사용되고있는실정이다. 또한, 이물질이지속적으로체내에축적될경우만성독성, 발암성, 돌연변이유발성등으로인하여인체에부작용이적은천연물질을이용한추출물의항균력에관한연구가많이진행되고있으나, 합성보존료에비해그효과가떨어지는경향이있으며, 추출물자체가맛, 향및색택에많은영향을미치므로아직까지무좀과비듬의치료에실요화되지못하고있는실정이다. [0004] [0005] [0006] 기미는일반적으로멜라닌색소가침착되어생성되는것으로서기미의원인으로는여성호르몬복용, 자외선노출, 스트레스, 유전등이다. 현재, 기미의발생에대한예방은물론그치료가중요시되고있는데, 그예방으로는햇볕으로인한자외선노출을줄이고체내에노폐물이쌓이지않도록주의를기울여야하며일단발생된기미를제거하는데있어서는어떠한부작용도없이기미를완전히제거하는것이바람직하여또한그치료기간이짧을수록바람직하다. 이러한기미를제거하기위한종래의치료법으로는내복약및외용제가있으나기미가완전히소실되지않고부분적으로남아있을수있다는점, 부작용을유발할수있다는점에서오히려기미의악화를초래할수있다. 국내산꿀벌 (Apis mellifera) 의봉독은전기충격법을이용한봉독채집장치를이용하여꿀벌의피해없이순수한봉독만을다량으로채취하여, 이물질을제거한후동결건조하여정제봉독을얻을수있다. 이렇게얻어진봉독에는다양한성분이복합적으로구성되어있는데이들성분들은항염증과항균작용, 진통작용, 면역증강등의역할을한다. 피부미백및피부질환에대한봉독의효과에대해서는아직연구보고된바없다. 발명의내용 [0007] [0008] 해결하려는과제이에, 본발명자들은상기와같은문제점을해결하기위하여연구노력한결과, 봉독이 β-헥소사미니데이즈방출억제로인한아토피성피부염과같은염증성피부질환의예방과치유뿐아니라백선균에의해발생되는무좀, 사상균이원인인비듬의치료, 멜라닌생성을억제하여기미및피부미백에효과가있음을확인함으로써본발명을완성하게되었다. 따라서, 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부미백및피부질환예방및치료용조성물을제공하는데그목적이있다. [0009] [0010] 과제의해결수단 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부미백조성물을그특징으로한다. 또한, 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부질환예방및치료용조성물도포함한다. [0011] 발명의효과본발명에따른봉독을함유한피부질환예방및치료뿐만아니라미백효과를갖는봉독을함유한화장품및의약품을개발로인하여국민의삶의질이향상되리라생각되며, 국내산봉독의고부가가치용도개발로인한양봉농가의소득증대에기여할것이다. [0012] 도면의간단한설명 도 1 은비만세포에대한봉독의세포독성을나타낸것이다. 도 2는봉독의아토피피부염의원인인 β-헥소사미니데이즈방출억제효과를나타낸것이다. 도 3a는봉독의아토피피부염의원인인염증유발인자 TNF-α 과발현억제효과를나타낸것이다. 도 3b는봉독의아토피피부염의원인인염증유발인자 IL-8 과발현억제효과를나타낸것이다. 도 4는봉독의티로시나제활성억제효과를나타낸것이다. 도 5는봉독의멜라닌생성억제효과를나타낸것이다

5 [0013] [0014] [0015] [0016] [0017] [0018] [0019] [0020] [0021] [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] 발명을실시하기위한구체적인내용이와같은본발명을더욱상세히설명하면다음과같다. 본발명은피부상의기미및주근깨제거에효과적이며, 각종피부질환, 특히염증성피부질환과병원균으로인하여발생할수있는무좀과같은피부질환을사전예방하고제거, 치료하기위한화장품및비누, 정제, 캡슐, 밴드, 연고형태등의의약품을특징으로, 다양한성분으로이루어진봉독은미백효과가우수하며, 염증발생을억제할뿐만아니라항균, 살균작용이우수하여피부미백과피부질환예방및치료에효과적인조성물에관한것이다. 본발명에서봉독은염증성피부질환, 특히아토피피부염의원인중에하나인 β-헥소사미니데이즈응집저해와활성화된비만세포에서과발현되는염증관련사이토카인인 TNF-α 와 IL-8의발견을강하게억제하였다. 또한, 봉독은기미와주근깨의원인인멜라닌의생성및티로시나제활성을억제함으로써미백효과를보였다. 무좀의원인균으로알려진백선균과비듬의원인균인피부사상균에대하여봉독조성물은강한항균력을갖고있었다. 따라서, 피부질환예방및치료뿐만아니라미백효과를갖는봉독을함유한화장품, 기능성식품및의약품개발이가능할것으로본다. 본발명에따른봉독함유조성물에서봉독의함량은정제봉독기준으로 ~ 10 %(w/v) 을함유하는것이바람직하며, 더욱바람직하기로는 0.01 ~ 1 %(w/v) 를함유하는것이적합하다. 만일 %(w/v) 미만으로사용하게되면항균및항염효과가낮아효능이반감될수있고, 10 %(w/v) 초과를사용할경우엔세포독성을초래할수있다. 상기봉독을유효성분으로함유하는조성물은피부질환예방및치료용으로사용가능하다. 상기피부질환으로는아토피, 무좀, 비듬등이바람직하다. 또한, 상기봉독을유효성분으로함유하는조성물은피부미백용으로사용가능하다. 본발명에따른조성물은유효성분외에약제학적으로허용가능한담체, 부형제또는희석제를포함할수있다. 본발명의조성물은경구또는비경구의여러가지제형일수있다. 제제화할경우에는보통사용하는충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제등의희석제또는부형제를사용하여조제된다. 경구투여를위한고형제제에는정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제등이포함되며, 이러한고형제제는하나이상의화합물에적어도하나이상의부형제예를들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스 (sucrose) 또는락토오스 (lactose), 젤라틴등을섞어조제된다. 또한, 단순한부형제이외에스테아린산마그네슘, 탈크등과같은윤활제들도사용된다. 경구투여를위한액상제제로는현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제등이해당되는데흔히사용되는단순희석제인물, 리퀴드파라핀이외에여러가지부형제, 예를들면습윤제, 감미제, 방향제, 보존제등이포함될수있다. 본발명의조성물은경구또는비경구로투여될수있으며, 비경구투여시드레싱제, 패취제, 밴드, 연고제등의피부외용제또는주사제로가능하다. 본발명의조성물의투여량은환자의체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율및질환의중증도에따라그범위가다양하며, 일일투여량은젤라티효소분해물의양을기준으로 0.1 내지 100 mg/kg 이고, 바람직하게는 30 내지 80 mg/kg이고, 더욱바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ~ 6 회투여될수있다. 또한, 기존의피부질환예방및치료제또는피부미백제와병용하여사용하는것도가능하다. 또한, 본발명은봉독을유효성분으로함유하는피부미백및피부질환예방및개선용기능성식품을포함한다. 본발명에따른기능성식품은, 예를들어, 츄잉껌, 캐러멜제품, 캔디류, 빙과류, 과자류등의각종식품류, 청량음료, 미네랄워터, 알코올음료등의음료제품, 비타민이나미네랄등을포함한건강기능성식품류일수있다. 본발명의봉독을그대로첨가하거나다른식품또는식품성분과함께사용될수있고, 통상적인방법에따라 - 5 -

6 적절하게사용될수있다. 될수있다. 유효성분의혼합양은사용목적 ( 예방, 건강또는위생 ) 에따라적합하게결정 [0027] [0028] [0029] [0030] 본발명의기능성식품은여러가지향미제또는천연탄수화물등을추가성분으로서함유할수있다. 상술한천연탄수화물은포도당, 과당과같은모노사카라이드, 말토스, 수크로스와같은디사카라이드, 및덱스트린, 사이클로덱스트린과같은폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨등의당알콜이다. 감미제로서는타우마틴, 스테비아추출물과같은천연감미제나, 사카린, 아스파르탐과같은합성감미제등을사용할수있다. 상기천연탄수화물의비율은본발명의건강식품 100 중량부당 0.01 ~ 0.04 중량부, 바람직하게는약 0.02 ~ 0.03 중량부범위에서선택하는것이바람직하다. 상기외에본발명의기능성식품은여러가지영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산및그의염, 알긴산및그의염, 유기산, 보호성콜로이드증점제, ph 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에사용되는탄산화제등을함유할수있다. 그밖에본발명의기능성식품은천연과일주스, 과일주스음료및야채음료의제조를위한과육을함유할수있다. 이러한성분은독립적으로또는조합하여사용할수있다. 한편, 본발명은봉독을유효성분으로함유하는화장료를포함한다. 상기봉독함유화장료는화장품분야에서통상적으로사용되는기제, 보조제및첨가제를사용하여액체또는고체형태로제조될수있다. 액체또는고체형태의화장품으로는예를들면, 이에한정되지는않으나화장수, 크림제, 로숀제및입욕제등의형태를포함할수있다. 화장품분야에서통상적으로사용되는기제, 보조제및첨가제는특별히제한되지않으며, 예를들면, 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올및유동파라핀등을포함할수있다. 본발명에따른화장료는피부의산화에의한손상, 예를들면, 반점 ( 갈색반 ), 주근깨, 피부균열, 자외선손상 ( 햇볕에탐 ) 등을예방하는데매우유용하게사용될수있다. [0031] 이하, 본발명은다음실시예에의거하여구체적으로설명하겠는바, 본발명이이에한정되는것은아니다. [0032] [0033] [0034] [0035] [0036] 실시예 1 : 봉독의유효성분측정서양종꿀벌 (Apis meliffera L.) 을봉독채집장치를이용하여봉독을채집하고, 채집한건조봉독을증류수로용해, 원심분리, 여과한후동결건조하여순수한봉독만을얻어실험에사용하였다. 액체크로마토그래피 (AKTA explorer, Pharmacia, USA) 를사용하여확인하였다. Sephadex TM75 및 Source 15RPC ST 컴럼을사용하였으며, 봉독성분중에멜리틴, 아파민, 포스포리파아제 A2 함량은다음수학식 1로결정하였다. 그결과는다음표 1과같다. 봉독중에멜리틴, 아파민, 포스포리파아제 A2 함량이다음표 1과같은범위의정제봉독을사용하였다. 수학식 1 [0037] 표 1 [0038] 성분함량아파민 (apamine) 2.8 a (2.0~3.2) b - 6 -

7 포스포리파아제 A2(phospholipase A2) 멜리틴 (melittin) a: 평균치 b: 최고치와최저치의평균범위 12.8(10.8~14.5) 50.7(48.5~67.2) [0039] [0040] [0041] 실시예 2 : 봉독의아토피성피부염억제활성측정 1) 비만세포분리및세포독성측정 흰쥐복강에 30 ml정도의티로드완충용액 B(137 mm NaCl, 5.3 mm 글루코스, 12 mm NaHCO 3, 2.7 mm KCl, 0.3 mm NaH 2 PO 4 ) 를주입하고복부를 2분정도마사지한후, 복막을조심스럽게열어서파스퇴르파이펫으로복강내세포를포함하고있는티로드완충용액 B를수거하였다. 세포함유용액을 150 g에서 10분동안원심분리하여세포를침전시키고침전된세포에티로드완충용액 B를강하여파이펫팅한후, 22.5% 메트리자마이드용액위에살짝적층한다음 400 g에서 15분동안원심분리하여침전된세포만을얻었다. 전기침전된세포에 50% FBS를함유한 α-mem을가하고톨루이딘블루염색방법으로비만세포가 95% 이상임을확인하고시험에사용하였다. [0042] 봉독에대한비만세포의독성을평가하기위하여 6 웰플리에트에 cell/ml 로하여분주하여하 루동안배양하여부착시키고새로운배지로교환한다음다양한농도의벌독을처리하였다. 37, 5% CO 2 배양기에서 48 시간배양한후세포생존율을 MTT(methylthiazol-2-yl-2.5-diphenyl tetrazolium bromide) 시약 으로처리하여 ELISA 리더로 540 nm 에서흡광도를측정하여봉독의비만세포독성을평가하였다. [0043] 그결과는도 1 과같이봉독의용량은 1% 이하일때는비만세포에대한세포독성을나타내지않으나, 10% 로처 리했을경우엔강한세포독성을보였다. [0044] [0045] 2) β-헥소사미니데이즈방출억제효과측정정제된비만세포가 cells/ ml의되도록조정한후 37 에서 10분간배양하여세포를안정화시켰다. 안정화된비만세포에다양한농도로봉독를첨가하고, 37 에서 30분동안처리한다음복강비만세포를자극하는컴파운드 48/80을 6.0 μg / ml의농도로 10분동안처리하였다. 반응종료후 400 g에서원심분리하여상층액과세포를분리하였다. β-헥소사미니데이즈정량은 0.1 M 구연산염완충액에녹인 1 mm ρ-니트로- 페닐-N-β-D-글루코사미드 (ρ-nitro-phenyl-n-β-d-glucosaminide) 50 μl를동량의샘플에 37 에서 1시간동안처리한다음 405 nm의흡광도로측정하였다. β-헥소사미니데이즈생성억제율은다음수학식 2로계산하였다. 수학식 2 [0046] [0047] [0048] [0049] A: 봉독을첨가하지않았을때의 β-헥소사미니데이즈양 B: 봉독을첨가했을때의 β-헥소사미니데이즈양실험결과, 세포독성을보였던 5, 10% 에서는강한 β-헥소사미니데이즈방출억제효과를보였으며, 0.01% 이상의봉독을처리했을경우에도 50% 이상의방출억제효과를갖는것으로확인되었다. 그결과는도 2와같다. [0050] 3) 봉독의 TNF-α 및 IL-8 방출억제효과측정 - 7 -

8 [0051] 봉독이염증성세포활성물질인 TNF-α 와 IL-8 방출억제효과를알아보기위하여, 실험예 1 에서얻어진비만세 포를 cells/ ml의되도록조정한후 37 에서 10분간미리배양한다음, 봉독을첨가하여 30분동안반응시킨후자극제인 PMA(paramethocyamphetamin) 와 Ca-ionophore로 8시간동안반응시켰다. 반응종료후 400 g에서원심분리하여상층액과세포를분리한다음분리된상층액중 TNF-α 및 IL-8의단백질수준을 ELISA kit를사용하여측정하였다. 염증성세포활성물질인 TNF-α와 IL-8 모두비만세포가활성화되었을경우봉독처리에의해 0.01% 이상처리했을경우 50% 이상억제되는효과를보였다. 그결과는도 3과같다. [0052] [0053] [0054] 실시예 3 : 무좀및비듬균에대한항균작용 1) 무좀균에대한항균력측정무좀의원인균으로알려진 Trichophyton rubrun, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccusum에대한항균효과를구하였다. Disc diffusion법을이용하여멸균된페트리디쉬 (87 15 mm) 를이용하여 saboraud dextrose agar 배지에무좀균주를각각 100 μl씩도말하고, 멸균된 paper disc(8 mm) 에다양한농도의정제봉독을첨가하여배지에올려놓았다. 36 에서 7일간배양하여 paper disc 주위의저해환 (mm) 의크기로항균력을측정하였다. 봉독은무좀을일으키는 3종류의원인균모두에서강한항균효과를보였다. 그결과는다음표 2와같다. [0055] 구분 저해환크기 (mm) 봉독농도 (%, w/v) Trichophyton rubrun 1.0± ± ± ± ± ±0.1 표 2 Trichophyton mentagrophytes 2.2± ± ± ± ± ±0.2 Epidermophyton floccusum 1.5± ± ± ± ± ±0.2 [0056] [0057] 2) 비듬균에대한항균력측정비듬의원인균으로알려진 Pityrosporum ovale에대한항균효과를구하였다. Disc diffusion법을이용하여멸균된페트리디쉬 (87 15 mm) 를이용하여 saboraud dextrose agar 배지에비듬균주를각각 100 μl씩도말하고, 멸균된 paper disc(8 mm) 에다양한농도의정제봉독을첨가하여배지에올려놓았다. 36 에서 7일간배양하여 paper disc 주위의저해환 (mm) 의크기로항균력을측정하였다. 봉독은비듬을일으키는 Pityrosporum ovale 원인균에서강한항균효과를보였다. 그결과는다음표 3과같다. [0058] 구분 저해환크기 (mm) 봉독농도 (%, w/v) Pityrosporum ovale 1.0± ± ± ± ± ±0.1 표 3 [0059] [0060] [0061] 실시예 4 : 피부미백작용 1) 티로신의 hydroxyoation 억제활성측정멜라닌생합성에관여하는 mushroom tyrosinase를이용하여봉독의멜라닌합성저해활성을측정하였다. 0.3% 티로신용액 50 μl와다양한농도의봉독수용액 50 μl를 96 마이크로웰플레이트에넣고분광광도계를이용하여 475 nm에서흡광도를측정하였다. 이후 mushroom tyrosinase 50 μl를첨가하였다. 37 에서 10분간배양한후, 475 nm에서흡광도를측정한다. 시료를첨가하지않은무첨가대조군과활성을비교하였으며, 다음수학식 3에따라계산하였다

9 수학식 3 [0062] [0063] 그결과는봉독을처리했을경우티로시나제활성을강하게억제하였으며, 도 3 과같다. [0064] [0065] 2) 멜라닌생성억제활성측정봉독의멜라닌생성억제효과를확인하기위하여, B16F10 세포를이용하여봉독처리후멜라닌함량을측정하였다. B16F10 세포는 10% FBS와 1% penicillin-streptomycin이함유된 DMEM 배지를사용하여 37, 5% CO 2 조건에서배양하였다. B16F10 세포를 24 웰플레이트에 cell/well이되도록접종하여배양하였 다. 24시간후부터, 각각 10 nm의 α-msh(α-melanocyte Stimulate Hormone) 와함께다양한농도의봉독과양성대조군으로 PTH(phenylthiourea, 10 μg /ml) 를 3일동안처리하였다. 배양한세포에서배지를제거한후세포를 10 mm, ph 7.4인 PBS로세척한다음세포를회수하였다. 회수된세포를 10 mm PBS로다시세척하고, 4, 8,000 rpm으로 10분간원심분리하여얻어진 cell pellet에 10% DMSO가포함된 1 N NaOH을첨가한후, 60 에서 3시간동안배양하여멜라닌을용해시킨후, 405 nm에서 475 nm에서흡광도를측정하였다. 봉독은기미와주근깨등의원인이되는멜라닌의생성을효과적으로억제하는것으로확인되었으며, 그결과는도 4와같다. [0066] [0067] 실시예 5: 봉독의독성시험봉독에대한독성을알아보기위하여, 봉독 0.5 ~ 5 mg/kg을 24 마리의생쥐에게복강내투여하여행동관찰후 24 시간생존여부를확인하였다. 그결과, 봉독을 2 ~ 3 mg/kg을투여한생쥐 6 마리중 3 마리가생존하고나머지 3 마리는희생당하였음을알수있었다. 반면에, 1 mg/kg 미만의용량을투여한생쥐의경우는모두생존하였으며, 행동관찰상약물을투여하지않았던생쥐와비교하여통계학상의유의성있는차이를보이지않았다. 이상의결과를고려할때, 생쥐에서봉독의대략적인반수가생존할독성용량은 2.5 mg/kg으로판단된다. [0068] [0069] 제제예 1 : 드레싱제의제조상기실시예 1에서얻어진봉독 0.1 g과알긴산염 1 g을골고루혼합하고, 증류수 5 ml를넣어잘섞은후, 60 온도의핫플레이트상에서투명해질때까지잘섞고유리판으로옮겨유리막대를이용하여얇게펴주었다. 이때, 봉독과알긴산염및물의비율은치료하고자하는상처또는화상부위, 상태에따라조절이가능하며, 드레싱의크기, 두께, 공극등은어떠한형태로든제조가능하다. 또한, 알긴산염을대신하여히알루론산등과같은통상의젤매트릭스재료가사용가능하다. 이와같이제조된상처또는화상치료용드레싱은도 5와같다. [0070] [0071] [0072] [0073] 제제예 2 : 연고제의제조상기봉독을유효성분으로이용하여다음과같은조성으로연고제를제조하였다. [ 조성 ] 봉독 1.0 중량 %, 밀납 10 중량 %, 폴리솔베이트 중량 %, 피이지-60 경화피마자유 2.0 중량 %, 솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량 %, 바셀린 5.0 중량 %, 유동파라핀 10.0 중량 %

10 [0074] [0075] [0076] [0077] 제제예 3 : 패취제의제조상기봉독을유효성분으로이용하여다음과같은조성으로패취제를제조하였다. [ 조성 ] 봉독 1.2 중량 %, 헥실렌글리콜 20.0 중량 %, 디에킬아민 0.7 중량 %, 폴리아크릴산 1.0 중량 %, 아황산나트륨 0.1 중량 %, 폴리옥시에틸렌라우릴에테르 1.0 중량 %, 폴리히드록시에틸렌세틸스테아릴에테르 1.0 중량 %, 점성의파라핀오일 2.5 중량 %, 카프릴산에스테르 / 카프르산에스테르 2.5 중량 %, 폴리에틸렌글리콜 중량 %, 탈이온수 100 중량 %. [0078] [0079] 제제예 4: 기능성식품의제조 < 음료의제조 > [0080] [0081] [0082] [0083] [0084] [0085] 봉독구연산올리고당매실농축액타우린정제수를가하여전체 100 mg 1000 mg 100 g 2 g 1 g 900 ml [0086] [0087] 통상의건강음료제조방법에따라상기의성분을혼합한다음, 약 1시간동안 85 에서교반가열한후, 만들어진용액을여과하여멸균된 2 l용기에취득하여밀봉멸균한뒤냉장보관한다음본발명의음료조성물제조에사용한다. 상기조성비는비교적기호음료에적합한성분을바람직한실시예로혼합조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도등지역적, 민족적기호도에따라서그배합비를임의로변형실시하여도무방하다. [0088] [0089] [0090] [0091] 제조예 5: 화장료의제조봉독을유효성분으로이용하여다음과같은조성으로에센스를제조하였다. [ 조성 ] 유효성분 10.0 mg, 글리세린 3.0 mg, EDTA 0.05 mg, 벤조페논 mg, 카르복시비닐폴리머 0.2 mg, 트리에탄올아민 0.18 mg, 옥시도테세스 mg, 글리세릴모노스테아레이트 1.0 mg, 방부제 0.01 mg, 향료 0.01 mg, 정제수잔량

11 도면 도면 1 도면

12 도면 3a 도면 3b 도면

13 도면

(72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구인계로 165, 주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 ( 매탄동 ) 박관규 대구광역시수성구지범로 46 길 43, 송정타운 105 동 701 호 ( 범물동 ) 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호

(72) 발명자 여주홍 경기도수원시영통구인계로 165, 주공 5 단지 APT 523 동 1203 호 ( 매탄동 ) 박관규 대구광역시수성구지범로 46 길 43, 송정타운 105 동 701 호 ( 범물동 ) 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 35/64 (2006.01) A61P 25/28 (2006.01) A61P 25/16 (2006.01) A61P 25/00 (2006.01) (21) 출원번호 10-2010-0000564 (22) 출원일자 2010 년 01 월 05 일 심사청구일자