RESEARCH ARTICLE Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 4, 509-515, August 2015 소리쟁이잎추출물이 B16F10 세포의멜라닌형성억제와피부에미치는영향 박주아동부산대학교뷰티피부미용과 Melanin Inhibitory Activity and Skin Effect of Rumex crispus L. leaf extracts in B16F10 Melanoma Cellse Ju-A Park Department of Beauty and Aesthetic, Dong-Pusan College Abstract By using the Rumex crispus L. leaf ethanol extract, the attempt is undertaken to measure the melanin inhibitory activity and tyrosinase inhibitory activity and cell viability in B16F10 melanoma cells, melanin inhibitory activity and the essence and pack manufactured by applying to the melanin and erythema values were also studied in a way of reviewing the function as the functional cosmetics composition. As a result, the inhibition of the tyrosinase was shown its effect at the density of 125 ug/ml of extracted material. For the B16F10 cell, the cell viability show the higher than 90% survived in concentration under 100ug/mL. The tyrosinase activation control was shown to be 8.0% at 100 ug/ml while the melanin inhibitory activity was for 13.0%. The change of the melanin and erythema value of skin was shown to have the noticeable difference (p<.001) in the experiment group following the time of use for the index prior to experiment compared to the contrast group. According to this result, the Rumex crispus L. leaf extract had affected for the skin to brighten and showed possibility material of functional cosmetics. It looks like there needs to be continuing research about this matter. Keywords: B16F10, Rumex crispus L., Tyrosinase, Melanin, Erythema 아름다운노후에대한욕구가증가되고있는시대에피부는 미용학적측면에서중요한관심의대상이되고있으며맑은피 부는아름다움의필수요소로여겨지고있다 ( 한정선과이동희, 2012; 김나영, 2014). 뷰티기술의발달로항노화화장품과피 부를맑고깨끗하게도움을주는미백화장품산업이크게성장 하고있는추세에있고그기능성소재에대한연구도활발히 진행되고있다 ( 최연선과최태부, 2014). 피부표면에나타나 는홍반은진피내혈관이확장되어혈류량의증가로일시적으 Corresponding author: Ju-A Park, Department of Beauty and Aesthetic, Dongbusan College, 60 Unbonggil, Haeundae-gu, Busan-si 612-715, Republic of Korea Email: jua1130@hanmail.net Received July 2, 2015; Revised August 13, 2015; Accepted August 22, 2015; Published August 30, 2015 로붉어지는피부상태와자외선에의하여발생하였다가수시간후사라지거나통증을동반한염증이발생될수있으며, 기미 주근깨등피부에나타나는색소침착은표피내에서멜라닌 (melanin) 의증가에기인한다 ( 김대성등, 2006, 오수정등, 2010). 멜라닌은인체피부에서자외선이나외부유해인자들로부터피부를보호하는중요한역할을하지만, 과잉생성되어피부에축적될경우기미와주근깨, 피부반점등을유발하며멜라닌전구물질의독성으로인한세포의사멸및피부암과같은질병을초래할수있다 ( 서희등, 2011, 김가람등, 2014). 멜라닌생성은멜라닌세포의멜라노좀에서티로신 (tyrosine) 이티로시나제 (tyrosinase) 이외에도 dopachrome conversion factor, prostaglandin (PG), interferon (IFN), melanocyte stimulating hormone (MSH), Vit D3, histamine 등인자들에의해멜라닌을생성하는것으로알려져있다 ( 김대성등, 2006). 현재개발된 tyrosinase 저해제로 arbutin, kojic acid, retinoids, hydroquinone, ascorbic acid, azelaic acid 등이있 www.kosac.or.kr 509
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 4, 509-515, August 2015 으나피부의안전성과제형안정성등의문제로사용에있어서어려움이있다 ( 이진수등, 2007, 허선정등, 2010, 한상미등, 2010). 이에따라 non-mutagenic한미백제를찾기위해약용식물및천연물로부터활성물질에대한연구가진행되고있으며, 지금까지보고된바에의하면백합 ( 윤훈석등, 2014), 감초 ( 문연자등, 2002), 뽕나무 ( 진종언, 2002), 도깨비부채 ( 최상윤등, 2006), 목단피 ( 유진균등, 2009), 짝자래나무 ( 서은종등, 2010), 천화분 ( 문연자등, 2000), 교맥 ( 노성택등, 2007) 등이있다. 소리쟁이 (Rumex crispus L.) 는마디풀과에속한다년초식물로들이나밭둑, 개울가등의습지근처에서자생하고있다 ( 김현정등, 2010). 소리쟁이잎은양제엽 ( 羊蹄葉 ) 이라고하며, 잎에함유되어있는성분으로는퀘르시트린 (quercitrin) 이들어있다. 퀘르시트린은퀘르시틴 (quercetin) 의배당체로식물계에널리분포하는플라보노이드 (flavonoid) 로서항산화, 항염, 항바이러스, 이뇨작용, 모세혈관강화, 혈압강하등다양한생리활성을가지고있다 ( 박종철등, 1995, 김영소등, 1999). 본초강목 에서는맛은달고성질을활 ( 滑 ) 즉, 미끄러우며차고독이없다고기록되어있고, 어린순은식용으로이용된다. 주로장풍변비 ( 腸風便秘 ), 설종 ( 舌腫 ), 개선 ( 疥癬 ) 의치료제로사용되며, 위장염, 소화불량증, 장출혈에효과가있다고알려져있다. 국내화장품산업은천연화장품소재로서식물추출물과해양식물등을응용되어져왔지만소리쟁이잎추출물에대한화장품소재로활용된보고는거의없다. 따라서본연구에서는소리쟁이잎추출물을이용하여 B16F10 세포에서멜라닌형성억제효과와로션과팩을제조하여피부에적용시켜미백가능성을확인하여새로운천연물기능성화장품소재로서의가능성을연구하였다. 1. 재료및시료의추출소리쟁이잎을 3회수세한후음건 ( 陰乾 ) 세절 ( 細切 ) 하여 heating mentle에서시료중량의약 10배의 absolute ethanol로 3회반복환류추출하였다. 시료의추출물은여과지 (Whatman No.2, Tokyo, Japan) 를이용하여여과한후회전감압농축기 (Rotavapor R-215, BUCHI, Switzerland) 로농축한후동결건조하여 -20 에보관하여사용하였다. 2. 사용시약및기기본연구시약에는 Mushroom Tyrosinase, L-3,4- dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), Minimum Essential Medium (MEM), Fetal Bovine Serum (FBS) 등 Sigma Chemical Co. (St. Louis, Mo, USA) 에서구입하여사용하였고, 그외사용된시약은모두 1급이상의등급을사용하였다. 기기에는회전감압농축기, Microplate reader (Molecular Devices, USA), CO 2 Incubator (Hanback Sientific Co., Korea), Mexameter (Courage and Khazaka electronic GmbH, Cologe Germany) 등을사용하였다. 3. 세포배양 B16F10 (Mouse melanoma) 세포는 MEM 배지에 10% FBS와항생제 (Antibiotic, antimycotic) 를혼합하여배지로사용하였다. 모든세포주는한국세포주은행에서구입하여, 5% CO 2 가공급되는 37 의습윤화된 incubator 에서적응시켜배양하였다. 4. 세포생존율측정 B16F10 세포생존율측정은 Carmichael의방법 (Carmichael et al., 1987) 에의하여실시하였다. 24 well plate에 logarithmic phase에도달한세포를 1 10 5 cells/well의농도가되도록조절하여분주후 24 h 배양하여부착화및안정화를시행하였다. 24 h 배양이끝난후추출물의최종농도 10, 20, 50, 100, 200, 400 ug/ml 되게용액에희석하여세포주에처리한후 24 h 동안배양하였다. 배양완료후각 well에 MTT용액 (5 mg/ml in PBS) 10 μl씩첨가하여 37, 5% CO 2 의습윤배양기에서 4 h 동안반응하여 MTT가환원되도록하였다. 각 well에생성된 formazan 결정을 DMSO에잘녹여서 96 well plate에옮겨 microplate reader를이용하여 540 nm에서흡광도를측정하였다. 5. Tyrosinase 활성저해 Tyrosinase의작용결과생성되는 dopachrome을비색법에의해측정하는 Yagi et al., (1986) 의방법에따라실시하였다. 즉, 반응구는 0.175 M phosphate buffer (ph 6.8) 0.2 Table 1. Ingredients of emulsion having RCL Ingredient A (wt%) B (wt%) D.I. Water 85.9 83.9 RCL 0.0 2.0 Water part 1,3-B.G 2.0 2.0 Carbomer 0.1 0.1 Jojoba oil 6.0 6.0 Oil part Cetyl alcohol 1.0 1.0 Emulsifying wax 5.0 5.0 Total volume 100.0 100.0 A: 0% RCL, control, placebo group, B: RCL 510 www.kosac.or.kr
소리쟁이잎추출물이멜라닌형성억제와미백효과 ml에 L-DOPA (10 mm) 를녹인기질액 0.2 ml 및시료용액 0.5 ml의혼합액에 mushroom tyrosinase (110 unti/ml) 0.1 ml 첨가하여 35 에서 10 min 반응시켜반응액중에생성된 dopachrome을 475 nm에서흡광도를측정하였다. Tyrosinase 활성저해는 [1-( 시료첨가구의흡광도 / 무첨가구의흡광도 )] 100으로하였다. 대조군의팩제조는 Table 2와같이정제수, 폴리비닐알콜을실온에서용해시킨후계면활성제를첨가한후 Homo disper를이용하여균일하게혼합시켰다. 시험군은대조군의팩을기질로사용하여기질에 RCL 4% 를첨가하여제조하였다. 로션과팩은제조한후실온에서 7일간숙성시켜냉장보관하여사용하였다. 6. B16F10 세포에서 tyrosinase 활성저해 B16F10 세포을배양하여 24 well plate에각 well당세포를 1 10 5 cell/well로각각의세포생존율에따라농도를처리한후 48 h 배양하였다. 48 h 배양한후각 well를 10 mm PBS로세척하였으며, 1% Triton X-100을함유한 10 mm PBS 100 μl에현탁시켰다. 현탁된이액을 vortexing 한후 1000 rpm 에서 5 min 동안원심분리하여상등액을활성측정효소액으로사용하였다. 96 well plate에이효소액을 40 μl 넣고기질인 L-DOPA (2 mg/ml) 100 μl를첨가하였다. 37 에서 1 h 동안반응을진행시킨뒤, microplate reader를이용하여 405 nm에서흡광도를측정하였다. Tyrosinase의활성도는대조군의흡광도에대한백분율로계산하였다 (Roberts, 1969). 7. B16F10 세포에서 melanin 형성억제효과 Melanin 생성량측정은 Hosoi 등 (Hosoi et al., 1985) 의방법을변형하여사용하였다. B16F10 세포을배양하여 24well plate에각 well당세포를 1 10 5 cell/well로각각의세포생존율에따라농도를처리한후 48 h 배양하였다. 48 h 배양한후각 well를 PBS로세척한후 0.2N NaOH 용액 400 μl를첨가하고 60 에서 1 h 동안용해하였으며, microplate reader를이용하여 405 nm에서흡광도를측정하였다. 8. 소리쟁이잎추출물을함유한로션과팩의제조대조군의로션제조는 Table 1과같이수상과유상을 80 에서완전용해시켜 Homo mixer를이용하여 3,500 rpm에서 5min 동안유화시킨후 30 로냉각시켰다. 시험군은대조군의로션을기질로사용하여기질에소리쟁이잎추출물 (Rumex crispus L. leaf extracts; RCL) 2% 를첨가하여제조하였다. Table 2. Ingredients of creamy facial pack having RCL Ingredient A (wt%) B (wt%) D.I. Water 86.6 82.6 RCL 0.0 4.0 Polyvinyl alcohol 13.0 13.0 Tween 80 0.4 0.4 Total volume 100.0 100.0 A: 0% RCL, control, placebo group,b: RCL 9. 피부상태측정 1) 대상자인체시험을위한피험자는 K대학의 20대초반여대생 (20~22세) 20명을대상으로피부질환이나특정한병력이없으며, 본연구의목적을이해하고연구에참여하기를동의한후실시하였다. RCL이포함되지않는제품을도포한그룹 (Group A) 10명과 RCL을함유한제품을도포한그룹 (Group B) 10명으로총 20 명의여학생에게 8주동안실시하였다. 2) 인체폐쇄첩포시험피부에대한안전성평가를위해 finn chamber가부착된테이프 (Hill Top chamber) 를전박부에 24 h 동안부착시킨후제거하고 1h 안정후피부자극여부를판독하였다. 2차첩포시험은 48 h 동안부착한후제거하여판독하였다 ( 이유신, 1970). 3) 처치방법로션은아침과저녁세안후도포량이 1 mg/cm 2 씩두드리듯이바르도록하였으며 ( 고진아, 2003), 팩은주 2회얼굴에충분히도포하여 15 min 후제거하고세안후로션을바르도록하였다. 4) 멜라닌 홍반량측정멜라닌 홍반량의측정은 Mexameter를이용하여색소지수인멜라닌지수 (Melanin index; MI) 와홍반지수 (Eerythema index; EI) 을측정하였다. 환경조건은 23±2 의실내온도와 48±4% 상대습도가유지된실내에서비침습적방법으로이마 ( 미간에서수직위 2 cm 지점 ) 와, 볼 ( 눈꼬리와코의외방이교차하는지점 ) 을제품사용전, 사용 4주후, 사용 8주후총 3회실시하였다. 10. 통계처리본연구의모든결과는 3회반복실험에대한평균 (mean)± 표준오차 (standard deviation; SD) 로나타내었고, 통계분석은 Student s t-test를적용하였으며 p<.05 이하인경우에통계적으로유의한것으로보았다. www.kosac.or.kr 511
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 4, 509-515, August 2015 Figure 1. Effect of RCL on purified tyrosinase activity. Purified tyrosinase was mixed with RCL and incubate with 10 mm L-DOPA for 10min at 35. Data are expressed as percent (%) of control and each column represents the mean±sd of at least three experiments each are performed in triplicate. Figure 2. Effects of RCL on viability of B16F10 cells. Cells were treated with indicated concentrations of RCL for 24 h. Levels of the cell viability were measured using the MTT assay. The viability of untreated control cells was defined as 100%. The value represents mean±sd of three different experiments. 1. RCL에의한 Tyrosinase 활성저해멜라닌생성에있어 tyrosinase는멜라닌합성과정에서초기단계를촉매하는속도조절인자로서가장주요한조절적단계를나타내는효소이다 ( 이계원등, 2010, 최소영등, 2011). RCL에의해 tyrosinase의활성저해정도를알아보기위해 RCL을농도별 (30, 62.5, 125, 250, 500 μg/ml) 로측정하였다 (Figure 1). 그결과 RCL은농도의존적으로 8.7, 12.9, 28.6, 35.6, 39.7% 로 Tyrosinase의활성저해를나타냈다. 양성대조군으로사용된 vitamin C 보다 tyrosinase를저해시키는효능이낮지만 125 μg/ml에서 vitamin C와비슷한효과를보임을알수있다. 2. RCL에의한 B16F10 세포생존율 RCL이 B16F10 세포생존율에미치는영향을알아보기위하여 RCL을농도별 (10, 20, 50, 100, 200, 400 μg/ml) 로처리하고, 24 h 후, 세포생존율을측정하였다 (Figure 2). 그결과농도의존적으로 102.5, 98.9, 95.84, 90.5, 77.8, 71.0% 로세포생존율을나타냈으며, 100 μg/ml 이하의농도에서 90% 이상의생존율이확인되었다. 3. RCL에의한 B16F10 세포에서의 tyrosinase 활성저해피부의색은멜라닌, 헤모글로빈 (hemoglobin), 카로틴 (carotene) 등에의해결정되며이중표피, 진피의경계에있는멜라닌이가장중요한인자이다. 미백효과를위해멜라닌의합성을억제하려고한다면 tyrosine을산화시키는 tyrosinase의합성을저해하거나활성을억제시키는것이중요하다 ( 김지수, 2015). 멜라닌생합성에관여하는 tyrosinase에대한영향을 알아보기위하여멜라닌세포주 B16F10 세포에서생존율의농도에따라 100 μg/ml에서처리한결과 8% 로 tyrosinase 활성저해를나타내었다 (Figure 3). 4. RCL에의한 B16F10 세포에서의멜라닌형성억제효과미백효과의검정을위해서는멜라닌세포에서멜라닌색소의형성억제정도를밝히는것이중요하다 ( 송종석, 유동열, 2008). B16F10 세포에서의멜라닌형성억제에 RCL이미치는영향을측정한결과 100 μg/ml 이하농도에서 melanin 생성량이증가하였고, 100 μg/ml 처리에서는대조군에비해 13% 로 melanin 생성량이억제된것으로나타났다 (Figure 4). B16F10 세포에서 RCL의 10 μg/ml 농도에서멜라닌형성이증가함을보이는것은 tyrosinase가활성되어나타난것으로사료된다. 5. 연구대상자의동질성검증과안전성평가피부표면에나타나는멜라닌 홍반량값의동질성을독립 t-test를실시한결과, 대조군과실험군사이통계적으로유의한차이 (p>0.5) 를보이지않았으며, 두집단간동질성이검증되었다. 인체폐쇄첩포시험에따른안전성평가는 RCL을피험자 20명의전박부에 24 h, 48 h 시행한후육안으로관찰하였을때수포발생 (-), 홍반 (-), 부종 (-), 알러지 (-) 등의변화는관찰되지않았다. 6. 피부표면의멜라닌지수변화피부표면의색은여러가지요인에의해결정되지만멜라닌세포에서생성되는멜라닌은피부색이결정되는가장큰요소이다 ( 송종석과유동열, 2008). RCL을함유한로션과팩을사용하여이마부위멜라닌량의변화를관찰한결과대조군은관 512 www.kosac.or.kr
소리쟁이잎추출물이멜라닌형성억제와미백효과 Figure 3. Inhibitory effect of various RCL on tyrosinase activity. The effect on tyrosinase activity was tested with various doses of RCL in B16F10 cells for 48 h. Data are expressed as percent (%) of control and each column represents the mean±sd of at least three experiments each are performed in triplicate. Figure 4. Inhibitory effect of various RCL on melanin production in B16F10 cells. Melanin were determined in the cell after 48 h incubation. Data are expressed as percent (%) of control and each column represents the mean±sd of at least three experiments each are performed in triplicate. 리전 180.30±11.08 MI, 4주후 178.10±17.23 MI, 8주후 175.50±15.35 MI로나타났고, 시험군은관리전 184.40± 29.17 MI, 4주후 177.09±27.26 MI, 8주후 171.10±41.11 MI로나타나사용전보다 8주사용후대조군은 2.7%, 시험군은 7.8% 감소하였다. 볼부위멜라닌량변화를관찰한결과대조군은관리전 123.07±12.33 MI, 4주후 121.25± 13.25 MI, 8주후 119.59±13.70 MI로나타났고, 시험군은관리전 125.09±19.56 MI, 4주후 120.19±19.31 MI, 8주후 115.77±16.15 MI로나타나사용전보다 8주사용후대조군 은 2.9%, 시험군은 8.0% 감소하였다 (Table 3). 강석남등 (2002) 은유기산을돈육에살포한후관찰한결과 CIE L* 값 (lightness) 이대조구에비하여높게나타나표백현상이일어났음을확인되었다. RCL의유기산함량분석에서 malic acid, tartaric acid, citric acid가검출되어멜라닌량이감소하는데영향을미치는것으로사료된다 ( 박주아등, 2010). 7. 피부표면의홍반지수변화 RCL을첨가한로션과팩을사용하여이마부위홍반량변화를관찰한결과대조군은관리전 290.4±27.41 EI, 4주후 Table 3. The changes of melanin index on the skin surface MI Item Forehead Cheek Group Before 4 Weeks 8 Weeks Mean SD A 180.30 11.08 178.10 17.23 175.50 15.35 a: 5.518*** b: 0.105 B 184.40 29.17 177.09 27.26 171.10 41.11 c: 3.182** A 123.07 12.33 121.25 13.25 119.59 13.70 a: 5.213*** b: 0.132 B 125.09 19.56 120.19 19.31 115.77 16.15 c: 3.215** A: 0% RCL, control, placebo group, B: RCL, Mean SD(mean standard deviation), a: group, b: days of measure, c: group days of measure, **p<.01, ***p<.001 F Table 4. The changes of erythema index on the skin surface EI Item Forehead Cheek Group Before 4 Weeks 8 Weeks Mean SD A 290.4 27.41 289.8 34.16 286.7 32.34 a: 5.314*** b: 0.145 B 291.6 85.41 268.1 80.53 258.6 70.29 c: 1.657 A 232.6 26.27 231.5 27.75 230.6 27.01 a: 7.572** b: 0.353 B 227.5 37.16 223.5 46.24 215.1 39.26 c: 0.267 A: 0% RCL, control, placebo group, B: RCL, Mean SD(mean standard deviation), a: group, b: days of measure, c: group days of measure, **p<.01, ***p<.001 F www.kosac.or.kr 513
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 4, 509-515, August 2015 289.8±34.16 EI, 8주후 286.7±32.34 EI로나타났고, 시험군은관리전 291.6±85.41 EI, 4주후 268.1±80.53 EI, 8주후 258.6±70.29 EI로나타나사용전보다 8주사용후대조군은 1.3%, 시험군은 12.8% 를감소하였다. 볼부위홍반량변화를관찰한결과대조군은관리전 232.6±26.27 EI, 4주후 231.5±27.75 EI, 8주후 230.6±27.01 EI로나타났고, 시험군은관리전 227.5±37.16 EI, 4주후 223.5±46.24 EI, 8주후 215.1±39.26 EI로나타나사용전보다 8주사용후대조군은1.3%, 시험군은 5.8% 감소하였다 (Table 4). 천연보습인자 (natural moisturizing factor; NMF) 의주성분인아미노산의함량은각질층의생리기능과밀접한관련을가지고있다 ( 주경미등, 2012). RCL의아미노산분석에서 glutamic acid, lysine, arginine 등이검출되어피부보습및피부트러블을완화시켜주는기능으로 RCL이안면부위의홍반량감소에영향을미치는것으로사료된다 ( 박주아등, 2010). RCL이기능성화장품조성물로서의가능성을확인하고자 B16F10 세포에서의 tyrosinase 활성저해및멜라닌형성억제효과와 RCL을함유한로션과팩을제조하여피부의멜라닌량과홍반량의변화를측정하였다. RCL을처리한결과 tyrosinase 저해율은 125 μg/ml의농도에서 vitamin C와비슷한효과를나타냈다. B16F10 세포에서의세포생존율은 100 μg/ml의이하의농도에서세포독성이나타나지않았고, tyrosinase 활성억제는 100 μg/ml 에서 8% 로나타났으며, 멜라닌형성억제는 13% 로억제되었다. RCL을함유한로션과팩을 8주사용한결과멜라닌량과홍반량의변화는시험군이대조군에비하여사용시점에따라유의한차이 (p<.001) 를나타내어미백효과가있는것으로사료된다. 따라서 RCL은 B16F10 세포에서멜라닌형성억제효과가확인되었으며, 피부적용에서는멜라닌과홍반에대해개선효과가우수하게나타나미백화장품조성물로써이용한다면미백개선에기여할것으로사료된다. 강석남, 장애라, 이상옥, 민중석, 이무하. 유기산처리가돈육의 VBN, TBARS, 색깔, 관능적특성에미치는영향. 한국동물자원과학회지, 44: 443-452, 2002. 고진아. 사람피부에있어서몇가지천연물의미백작용에관한연구. 서울산업대학교석사학위논문, 2003. 김가람, 차훈, 송희경, 이유나, 안규중, 안인숙, 안성관. 당유자미숙과동결건조추출물이멜라닌생성에미치는영향. 대한피부미용학회지, 12: 403-408, 2014. 김나영. 황금추출물의항산화와멜라닌생성저해효과. 대한피부미용학회지, 12: 41-47, 2014. 김대성, 노성택, 이장천, 임규상, 신미란, 우원홍, 문연자. 교맥에탄올추출물의멜라닌생성억제효과. 한국전통의학지, 15: 70-76, 2006. 김영소, 어성국, 김홍진, 이도익, 김기호, 한성순. 천연 Quercitrin 의항허피스바이러스작용과 Nucleoside 계항허피스바이러스제와의병용효과. 한국응용약물학회지, 7: 158-163, 1999. 김지수, 정민영, 김종한, 최정화, 박수연. 희첨추출물이 B16F10 세포에서 Melanin 생성과 Tyrosinase 활성에미치는억제효과. 한방안이비인후피부과학회지, 28: 11-22, 2015. 김현정, 황은영, 임남경, 박수경, 이인선. 소리쟁이추출물의항산화활성과이를첨가한양념돈육의품질특성. 한국식품과학회지, 42: 445-451, 2010. 노성택, 김대성, 이성진, 박대중, 이장천, 임규상, 우원홍, 문연자. 교맥에탄올추출물의피부미백기전연구. 동의생리병리학회지, 21: 1243-1249, 2007. 문연자, 김진, 임난영, 이승연, 곽섭, 황충연, 우원홍. 감초물추출물의멜라닌형성억제효과. 동의생리병리학회지, 16: 1230-1235, 2002. 문연자, 이성원, 임숙정, 송채석, 이관순, 임규상, 우원홍. 천화분추출물이 B16 흑생종세포의멜라닌생성억제효과. 한국전통의학지, 10: 149-159, 2000. 박종철, 전순실, 김성환. 참죽나무잎의조리시 quercitrin의함량변화. 한국식품조리과학회지, 11: 303-308, 1995. 박주아, 최미옥, 김한석. 소리쟁이 (Rumex crispus L.) 부위별일반성분및이화학적특성분석. 대한피부미용학회지, 8: 193-201, 2010. 서은종, 홍은숙, 최민희, 김기선, 이성준, 짝자래나무추출물의항산화및미백효과. 한국식품과학회지, 42: 750-754, 2010. 서희, 서근영, 고수지, 박영현. 하수오와백하수오의에탄올추출물에의한 B16/F10 Melanoma 세포주의멜라닌생성억제효과. 한국식품영양과학회지, 40: 1086-1091, 2011. 송종석, 유동열. 赤何首烏의멜라닌생성억제와작용기전에관한연구. 대한한방부인과학회지, 21: 59-75, 2008. 오수정, 김광상, 김기영, 김경례, 김경란. 생리활성물질을이용한여드름피부개선에따른멜라닌, 홍반, ph값의변화도. 514 www.kosac.or.kr
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