대한한의학회지제 32 권제 1 호 (211 년 1 월 ) J Korean Oriental Med 211;32(1):13-14 Original Article 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 양형주, 우홍정 경희대학교한의과대학간계내과학교실 Effects of Chunghyuljihwang-tang on Phenylhydrazine-induced Hemolytic Anemia in Rats Hyeong-ju Yang, Hong-jung Woo Department of Internal Medicine, College of Oriental Medicine, Kyung Hee University Objectives: This study was performed in order to investigate the anti-hemolytic effect of Chunghyuljihwang-tang (, Qingxuedihuang-tang) on phenylhydrazine-induced hemolytic anemia in Rats. Materials and Methods: Hemolytic anemia model of rats were induced by phenylhydrazine(phz, 4mg/kg/day, i.p.) for 3days. Male Sprague-Dawley rats were divided into three groups for their treatment. group was injected normal saline for 3 days with distilled water(d.w.) orally, control group was injected PHZ for 3 days with d.w. and group was injected PHZ for 3 days with administration of for 1 days. RBC(Red blood cell), Hb (hemoglobin), mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, reticulocyte were determined on day, 4, 7, 1. Body weight was investigated on day, 2, 4, 6, 8, 1 and the weight of spleen was measured on day 1. Results: For group, the levels of RBC and Hb were significantly higher than control group on day 4, and the concentration of hemoglobin on day 7 was increased more than control group. Moreover, reticulocyte was significantly decreased on day 1 more than control group. These results could be concluded that suppressed the hemolytic anemia by PHZ and improved hematological values of anemia earlier. Key Words : Chunghyuljihwang-tang, hemolytic anemia, phenylhydrazine 緖論빈혈은임상에서빈번히관찰되는소견중의한가지로서, 순환혈액내의적혈구수 (RBC), 혈색소량 (hemoglobin), 혹은적혈구용적률 (hematocrit) 이정상이하로감소되어조직내산소요구량을충족시키지못하여여러가지증상을야기하게된다 1,2). 용혈 성빈혈은적혈구가말초혈액내에서약 12일정도의정상적수명을다하기전에파괴되어일어나는질환으로서 3), 골수의생산능력이적혈구파괴속도를따라가지못하여빈혈이발생하게된다 4). 淸血地黃湯은凉血, 淸血의요약인犀角地黃湯 ( 醫方集解 ) 에서犀角대신升麻를가하고止血작용이있는大薊, 鬱金, 側柏葉과上中焦之火를瀉하 Received:8 December 21 Revised:11 January 211 Accepted:12 January 211 Correspondence to: 우홍정 (Hong-Jung Woo) 서울시동대문구회기동 1 번지경희의료원한방병원간계내과학교실 (13-72) Tel:+82-2-958-9118, Fax:+82-2-958-9258, E-mail:hjwoo@khu.ac.kr 13
양형주외 1 인 : 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 (131) 는黃芩, 上焦之火를瀉하는黃連및引血歸經하는當歸를가한처방으로각종출혈증에광범하게사용되는처방이다. 용혈성빈혈은한의학적으로脾氣虛弱과氣血兩虛陰虛血熱型으로변증할수있는데, 淸血地黃湯은陰虛血熱型에사용되는가장대표적인처방이다 5). Phenylhydrazine( 이하 PHZ) 은적혈구막을손상시켜용혈성빈혈을유발하며 6), 과거에는적혈구증가증에서사용되었을만큼강력한적혈구감소를유발할수있다 7-8). PHZ으로용혈성빈혈을유발한후빈혈의회복에대한효과나조혈작용에대해살펴본다수의보고가있으나 9-14), 용혈성빈혈유발의억제효과를함께살펴본보고는거의없으며, 淸血地黃湯의효능에관한실험적연구또한부족한실정이다. 따라서본연구에서는淸血地黃湯의용혈성빈혈유발억제효과및빈혈회복효과를살펴보기위하여, 흰쥐에 PHZ를이용한용혈성빈혈모델을적용하여, 혈액학적소견과체중, 비장의변화를살펴보았다. 方法 1. 재료 1) 동물및사육조건실험동물은체중 3g(9주 ) 전후의 Sprague- Dawley 수컷흰쥐 (( 주 ) 샘타코 ) 를사용하였다. 실험동물은멸균한 polycarbonate cage에방사선멸균한고형사료 ( 대한실험동물센터 ) 와물을충분히공급하였으며, 1주일동안명암주기 12시간간격, 실온 25±2, 습도 55% 의실험실환경에적응시킨후본실험을시작하였다. 실험기간동안명암주기 12시간간격, 온도 25±2, 습도 55% 로실험실환경을유지하였다. 동물실험은경희의료원실험동물윤리위원회의승인 (KHMC-IACUC 1-44) 을얻고수행하였다. 2) 약재본실험에사용한淸血地黃湯 () 의구성약재는경희대부속한방병원에서구입하여엄선한것을사용하였으며, 처방 1첩의내용및용량은 Table 1과같다 (Table 1). 3) 淸血地黃湯추출물분리淸血地黃湯 5첩분량 35g을 Round flask에넣고 15ml의 3차증류수를더하여관류냉각장치를부착한상태로 2시간동안가열추출하여얻은추출액을 Watmann여과지로여과한후감압증류장치 (Rotary evaporator, Buchi RE121, SWISS) 로감압농축하여농축액을얻었다. 농축액을동결건조기 Table 1. Prescription of (Chunghyuljihwang-tang) 韓藥名 學名 重量 (g) 生地黃 Rehmanniae Radix 12 升麻 Cimicifugae Rhizoma 8 赤芍藥 Paeoniae Radix Rubera 8 大薊 Cirsii Japonici Herba 6 鬱金 Curcumae Radix 4 側柏葉 Biotae Cacumen 4 牧丹皮 Moutan Cortex 4 當歸 Angelicae Gigantis Radix 4 黃芩 Scutellariae Radix 4 黃連 Coptidis Rhizoma 4 甘草 Glycyrrhizae Radix 3 Total 61 131
(132) 대한한의학회지제 32 권제 1 호 (211 년 1 월 ) (Freeze dryer, EYELA, Japan) 로건조하여, 34g( 수율 11.1%) 의건조분말을얻었다. 얻어진동결건조엑기스는냉동보관하면서.1g/ml 농도로증류수에희석하여사용하였다. Kobe, Japan) 을사용하여측정하였다. 3) 체중측정실험기간동안 2일에한번씩체중을측정하였다. 2. 방법 1) 용혈성빈혈유발및약재투여본실험에서는기존논문의방법을참고하여 9,14) Phenylhydrazine(Sigma-Aldrich사, MO, USA) 을 4 mg/kg 용량으로 3일간복강주사하는방법을활용하여흰쥐에용혈성빈혈을유발하였다. 흰쥐는한군에 5마리씩균등하게배치하였고, 정상군 (), PHZ 처치대조군 ( 이하대조군, ), PHZ 처치淸血地黃湯실험군 ( 이하淸血地黃湯군, ) 의 3군으로나누었다. 실험은총 1일동안이루어졌으며, 정상군은 1 일동안지속적으로증류수를경구투여하면서, 1, 2, 3일째날식염수복강주사를시행하였다. 대조군은 1일동안증류수를경구투여하면서, 1, 2, 3일째날 PHZ을복강주사하였다. 淸血地黃湯군은 1일간淸血地黃湯을.5 g/kg 용량으로경구투여하면서, 1, 2, 3일째날 PHZ를복강주사하였다. 2) 채혈및일반혈액검사 (CBC), 망상적혈구 (reticulocyte) 측정채혈은꼬리정맥과심장천자를통해이루어졌으며, 용혈성빈혈유발하기전날인 일, PHZ으로용혈성빈혈을 3일간유발한다음날인 4일과 7일이되는날꼬리정맥에서각각 1.5cc씩채혈하였다. 1일째되는날은동물을희생하고, 심장천자를통해 2cc씩채혈하였다. 혈액은 EDTA 처리되어있는 vacutainer에채취하여적혈구수 (red blood cell, RBC), 혈색소 (hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적 (mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량 (mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도 (mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC) 망상적혈구 (reticulocyte) 를 automated hematology analyzers; Sysmex XE-21(Sysmex Corporation, 4) 비장무게측정 1일째되는날, 동물을희생시킨후비장무게를측정하였다. 5) 통계처리통계처리는 SPSS 12.K for Windows를이용하여 Student s t-test로군간의평균을비교분석하였으며 p<.5에서유의성을인정하였다. 結果 1. 적혈구 (RBC, red blood cell) PHZ 투여에의하여유발된용혈성빈혈흰쥐의적혈구수에미치는淸血地黃湯의효과는 Table 2와같다. 4일에 PHZ을처치하지않은정상군의적혈구수는 7.14±.27 1 6 / μl였던데비하여, PHZ 처치한대조군은 3.25±.18 1 6 / μl, 淸血地黃湯군은 3.71±.36 1 6 / μl로, PHZ 처치를시행한군에서정상군에비하여통계적으로유의한 (P<.5) 차이로용혈성빈혈이유발되었음을알수있었고대조군에비해淸血地黃湯군에서유의하게적혈구수감소가억제되는효과를보였다. PHZ 4mg/kg을 3일간투여한후정상군에대한대조군의적혈구수감소비율은약 45.5% 였다. 7일의대조군과淸血地黃湯군의수치는각각 3.52±.48 1 6 / μl, 3.68±.24 1 6 / μl로서淸血地黃湯군에서적혈구수의회복이더욱양호한경향을보였으나통계적으로유의한차이는없었다. 1일의대조군과淸血地黃湯군의수치는각각 5.25±.63 1 6 / μl, 5.4±.31 1 6 / μl로서淸血地黃湯군에서적혈구수의회복이더욱양호한경향을보였으나통계적으로유의한차이는없었다 (Fig. 1). 132
양형주외 1 인 : 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 (133) RBC(X1^6/ul) 1 8 6 4 2 * Day Day4 Day7 Day1 Fig. 1. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on RBC in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. The level of RBC was higher in the treated group and statistical significance was recognized in day 4(P<.5, Duncan s multiple range test). 2. 혈색소 (Hb, Hemoglobin) 4일에 PHZ을처치하지않은정상군의혈색소는 14.14±.38g/ dl였던데비하여, PHZ 처치한대조군은 6.76±.13g/ dl, 淸血地黃湯군은 7.58±.58g/ dl로, PHZ 처치를시행한군에서정상군에비하여통계적으로유의한 (P<.5) 차이로용혈성빈혈이유발되었다. PHZ 4mg/kg을 3일간투여한후정상군에비한대조군의혈색소감소비율은약 47.8% 였다. 4일의대조군과淸血地黃湯군의혈색소는각각 6.76±.13g/ dl, 7.58±.58g/ dl로서대조군에비해淸血地黃湯군에서유의하게혈색소감소가억제 되는효과를보였다. 7일의대조군과淸血地黃湯군의혈색소는각각 9.34±.59g/ dl, 1.6±.31g/ dl로서淸血地黃湯군에서혈색소의회복효과가있었다. 1일의대조군과淸血地黃湯군의혈색소는각각 12.64±.96g/ dl, 13.44±.45g/ dl로서淸血地黃湯군에서유의한차이는없었으나혈색소의회복이더욱양호한경향을보였다 (Fig. 2). 3. 평균적혈구용적 (MCV, mean corpuscular volume) 평균적혈구용적은 PHZ 처치한대조군과, 淸血 2 Hemoglobin (g/dl) 15 1 5 * * Day Day4 Day7 Day1 Fig. 2. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Hemoglobin in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. The level of hemoglobin was higher in the treated group and statistical significance was recognized in day 4 and 7(P<.5, Duncan s multiple range test). 133
(134) 대한한의학회지제 32 권제 1 호 (211 년 1 월 ) 地黃湯군에서 PHZ 처치한후인 4일, 7일, 1일에정상군에비해유의하게증가한것을확인할수있었다. 7일에대조군과, 淸血地黃湯군의평균적혈구용적은각각 114.4±7.1fL, 11.76±5.72fL 로가장높은수치를보였으며, 1일에는각각 9.28±7.17fL, 86.14±4.97fL로 4일보다는크기가증가하였으나 7 일 (114.4±7.1fL, 11.76±5.72fL) 보다는평균적혈구용적이작아진양상을보였다. 각검사일에서淸血地黃湯투여는대조군에비하여 MCV의상승을억제하는경향은관찰되었으나두군간의유의한차이는인정되지않았다 (Fig. 3). 4. 평균적혈구혈색소량 (MCH, mean corpuscular hemoglobin) 평균적혈구혈색소량은 4일까지는뚜렷한변화는보이지않았으나 7일에는정상군 (19.78±.41pg) 에비해대조군 (27.66±2.4pg) 과淸血地黃湯군 (27.4± 1.48pg) 에서유의하게증가하는소견을보였으며, 1일에는 7일보다감소하였으나역시정상군 (19.8±.32pg) 에비해대조군 (25.12±2.13pg) 과淸血地黃湯군 (24.92±1.29) 에서유의한증가가보였다. 각검사일에서대조군과淸血地黃湯군간의유의한차이는보이지않았다 (Fig. 4). MCV (fl) 15 1 5 Day Day4 Day7 Day1 Fig. 3. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Mean Corpuscular Volume in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. In the level of MCV, there was no significant difference between and group in all the days of experiment(p<.5, Duncan s Multiple range Test). MCH (pg) 4 3 2 1 Day Day4 Day7 Day1 Fig. 4. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Mean Corpuscular Hemoglobin in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. In the level of MCH, there was no significant difference between and group in all the days of experiment(p<.5, Duncan s Multiple range Test). 134
양형주외 1 인 : 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 (135) 5. 평균적혈구혈색소농도 (MCHC, mean corpuscular hemoglobin concentration) 평균적혈구혈색소농도는 4일, 7일, 1일정상군에비해대조군과淸血地黃湯군에서수치가유의성있게감소되었다. 대조군과淸血地黃湯군에서 4일 (26.92±1.61%, 26.82±1.34%) 에서 7일 (24.5±.51%, 25.2±.88%) 까지는더욱감소되다가 1일 (28.6±.54%, 28.72±.33%) 에는 7일 (24.5±.51%, 25.2±.88%) 에비하여증가된경향을보였다. 각검사일에서대조군과淸血地黃湯군간의유의한차이는인정되지않았다 (Fig. 5). 6. 망상적혈구 (reticulocyte) 망상적혈구는정상군에비하여 PHZ 처치를한대조군과淸血地黃湯군에서 4일, 7일, 1일유의한증가를보였다. 4일에는정상군은 6.74±.4% 인것에비하여, 대조군에서는 14.56±2.84% 로증가하였고, 淸血地黃湯군에서도 15.92±4.58로증가하였다. 7일에는정상군은 7.64±1.18% 인데비하여대조군은 32.54±3.6%. 淸血地黃湯군에서는 31.56±.66% 로 4일에비해서더욱증가한양상을보였다. 1일에는정상군의수치는 1.8±.98% 인데비하여대조군은 33.±2.94%, 淸血地黃湯군은 25.36±5.25% 로정 상군에비해서대조군, 淸血地黃湯군의망상적혈구가많았으나, 대조군에비해淸血地黃湯군에서망상적혈구가유의하게감소한소견을보였다. 대조군에서는 1일에망상적혈구수가가장많이증가하였으며, 淸血地黃湯군에서는 7일에망상적혈구가가장높은수치를보였고그에비해 1일에는감소되는양상을보였다 (Fig. 6). 7. 체중정상군에서는흰쥐의체중은실험기간내내서서히증가하는양상을보였으며, 4일에 PHZ을처치한대조군 (286.2±18.97g) 과淸血地黃湯군 (286.±5.73g) 에서는정상군 (323.2±5.7) 에비해유의한차이로체중이감소하고, 이후부터는다시증가하는양상을보였다. 정상군에비해대조군과淸血地黃湯군의체중차이는실험기간대부분에서유의성있는차이는없었다. 대조군과淸血地黃湯사이에도뚜렷한체중차이는보이지않았다 (Fig. 7). 8. 비장의무게희생하는 1일째날비장을적출하여비장의무게를측정하였다. 정상군의비장무게는.9±.17g 였으며, 대조군의비장무게는 1.93±.37g으로약 2 MCHC (%) 4 3 2 1 Day Day4 Day7 Day1 Fig. 5. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. In the level of MCHC, there was no significant difference between and group in all the days of experiment(p<.5, Duncan s Multiple range Test). 135
(136) 대한한의학회지제 32 권제 1 호 (211 년 1 월 ) Reticulocyte (%) 4 3 2 1 * Day Day4 Day7 Day1 Fig. 6. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Reticulocyte in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. The reticulocyte count was lower than that of the control group and statistical significance was noticed on day 1(P<.5, Duncan s multiple range test). Body Weight (g) 4 3 2 1 Day Day2 Day4 Day6 Day8 Day1 Fig. 7. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Body Weight in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. In body weight, there was no significant difference between and group in all the days of experiment(p<.5, Duncan s Multiple range Test). 배이상증가하였다. 淸血地黃湯군의비장무게는 1.68±.15g으로대조군에비하여비장무게증가가완화된경향을보였으나통계적으로유의한차이는보이지않았다 (Fig. 8). 考察용혈성빈혈은적혈구가말초혈액내에서정상적인수명보다빨리파괴되어순환혈액에서제거되므로써일어나는빈혈이다. 용혈성빈혈은조기파괴의원인, 파괴장소, 증상발현시기에따라서분류할 수있다. 즉적혈구자체이상으로적혈구막, 효소또는혈색소이상에의한것과, 적혈구외요인으로자가항체, 물리적요인또는혈장에의한것으로나눌수있으며, 혈관내와혈관외용혈로나눌수도있고, 선천또는유전과후천용혈로나눌수도있다. 용혈성빈혈은원인도매우다양하며상황에따라수혈또는부신피질호르몬, 비장적출등의방법을활용하여접근하지만, 일반적으로치료가쉽지않은질환이다 2). 용혈성빈혈실험모델로는 PHZ을활용하는방법이일반적으로사용되고있는데, PHZ은 benzene, 136
양형주외 1 인 : 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 (137) 2.5 Spleen Weight (g) 2. 1.5 1..5. Fig. 8. Effect of (Chunghyuljihwang-tang) on Spleen Weight in PHZ-induced Hemolytic Anemic Rats. in the group. Three groups were treated with/without (5mg/kg, p.o.) for 1 days. Weight of spleen was measured slightly lower in SCG group than group. nitrogen, H 2O 2, superoxide anion, phenyl radical 등을생성하여적혈구막의지질과산화, 글루타치온과 ATP의고갈, 이온불균형, 적혈구변형능을손상시키는기전을통하여용혈성빈혈을유발시키는작용을한다 6,15). 본연구에서는각종출혈증상에통용되는淸血地黃湯의용혈성빈혈에대한효과를알아보기위해, PHZ으로쥐에용혈성빈혈을유발하고, 적혈구수 (red blood cell, RBC), 혈색소 (hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적 (mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량 (mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도 (mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC), 망상적혈구 (reticulocyte), 체중, 비장의무게를관찰하였다. 빈혈은적혈구량 (red cell mass) 의감소로정의 16) 하므로빈혈의접근에있어서적혈구수 (RBC count) 의변화를살펴볼필요가있다. 淸血地黃湯이적혈구수에미치는영향을살펴본결과, PHZ을 3일간유발한다음날인 4일에淸血地黃湯군에서대조군에비해적혈구수의감소가유의하게적었던것으로나타났다. 이는淸血地黃湯을투여하지않은대조군에비하여淸血地黃湯투여군에서 PHZ에의한용혈유발이억제되었을가능성을시사하는결과이다. 또한용혈성빈혈에서회복되는단계인 7일과 1일의수치도淸血地黃湯군에서대조군에비해증가된경향 을보였으며, 이를통해淸血地黃湯군에서빈혈의회복이더양호했음을추정해볼수있다. 빈혈은적혈구량의감소로정의하지만실제임상에서는편의상헤모글로빈농도의감소로진단하는것이일반적이며, 남자성인의경우헤모글로빈농도가 13g/ dl, 여자성인의경우 12g/ dl이하인경우빈혈로진단한다 16). 따라서헤모글로빈농도는빈혈을평가하는데중요한수치라고볼수있다. 淸血地黃湯이헤모글로빈 (hemoglobin) 에미치는영향을살펴본결과, 적혈구수의변화에서나타난결과와유사하게 4일에淸血地黃湯군에서대조군에비하여헤모글로빈감소가유의하게적었던것으로나타났다. 이또한대조군보다淸血地黃湯군에서淸血地黃湯에의해용혈유발이억제되었을가능성을보여준다. 적혈구수에서나타난결과와유사하게, 헤모글로빈농도에서는 7일에서淸血地黃湯군이대조군보다유의하게수치가높은것으로나타나는데, 이는淸血地黃湯군에서빈혈의회복이조금더양호함을나타내는결과로볼수있을것으로사료된다. 평균적혈구용적 (MCV) 은적혈구의크기와관련된수치로서이수치에따라빈혈을소적혈구성, 정적혈구성, 대적혈구성으로구분하여볼수있다. 정상군의 MCV는실험기간내내거의비슷한수치를유지했으며, PHZ을처치한대조군과淸血地黃湯군에서는두군간의유의한차이는보이지않았다. 137
(138) 대한한의학회지제 32 권제 1 호 (211 년 1 월 ) PHZ 처치에의해날짜별로 MCV 수치가조금씩다른양상을보였는데, PHZ을유발한 4일에는 MCV 가약간증가하였으며, 7일에는거의 2배에가깝게뚜렷하게증가하였고, 1일에도정상에비하여증가되었으나, 7일보다는감소하였다. PHZ이막구조를변형시켜적혈구의모양을구상에가깝도록변형시킨다는기존논문을참고하여볼때 15), 적혈구의모양변화로인하여 MCV가증가했을가능성이있다. 또한일반적혈구보다크기가큰망상적혈구가증가했다는점에서, 망상적혈구가 MCV 수치에영향을미쳤을가능성도있을것으로보인다. 평균적혈구혈색소량 (MCH) 은실험기간내내정상군에서는수치의변화가거의없었으며, 4일에도정상군과대조군淸血地黃湯군에서뚜렷한변화를확인할수없었다. 7일과 1일에는정상군에비해대조군과淸血地黃湯군에서 MCH가증가한양상을보였으며, 이는빈혈을회복하는과정에서적혈구한개당헤모글로빈양이증가하여발생한결과로생각된다. MCH에서대조군과淸血地黃湯군의유의성있는차이는보이지않았다. 평균적혈구혈색소농도 (MCHC) 는정상군에서는실험기간내내거의변화가없었으며, PHZ 처치를시행한후대조군과淸血地黃湯군에서정상군에비하여수치가유의하게감소되는결과를보였다. 적혈구한개당헤모글로빈양을의미하는 MCH가증가하였음에도, 망상적혈구나구형으로변한적혈구로인하여적혈구용적이증가하여혈색소가차지하는비율은오히려감소된것으로보인다. MCHC 에서도대조군과淸血地黃湯군의차이는보이지않았다. 이상의결과로미루어볼때, 빈혈의회복양상은회복초기에대적혈구형태로적혈구수의증가보다는혈색소양이증가하고후기에이르면적혈구크기가정상화되면서적혈구수가증가되어혈색소양이정상적으로회복되는경과를나타냄을알수있다. 망상적혈구 (reticulocyte) 는빈혈에의한저산소증으로증가하는 erythropoietin이골수내의적혈구전구세포를자극하여생산되는신생적혈구로서, 빈혈 이없는정상인의경우는 1~2% 를차지하며, 빈혈에반응하여골수에서적혈구를생산하는능력을나타내는중요한지표이다 4). PHZ 처치를한후인 4일, 대조군과淸血地黃湯군에서망상적혈구는 PHZ 투여전에비해약 3배이상증가하였고, 7일에는현저히증가하여 3% 이상을차지하고있음을볼수있다. 또한대조군에서는 7일및 1일에서망상적혈구가 3% 이상계속증가하였으나, 淸血地黃湯군에서는 7일에비해 1일에서유의성있게감소하였다. 이러한결과는淸血地黃湯군에서망상적혈구가 7 일 ~1일사이에대조군보다먼저다량생성되고, 적혈구수의회복이더욱조기에일어났음을시사하는것이다. 체중의변화는 PHZ 유발다음날인 4일, 대조군과淸血地黃湯군이정상군에비해서유의하게체중이감소했다는점외에는의미있는차이를보이지않았다. 비장은적혈구가파괴되는장소 17) 로서각종빈혈과관련이많은장기이다. 용혈성빈혈은용혈이일어나는장소에따라혈관내용혈과혈관외용혈로나눌수있는데 18) 혈관내용혈은순환하는혈청내에서파괴되는과정이며, 적혈구막의손상으로인해발생한다. 혈관외용혈은간과비장에서적혈구가대식세포에탐식되는과정이다 1). PHZ에의하여손상된적혈구는대부분비장에서파괴된다고보고되어있으며따라서 PHZ 유발용혈성빈혈에서비장은중요한역할을한다 6). 1일에시행한비장무게측정결과정상군에비하여대조군과淸血地黃湯군에서비장무게가유의성있게증가한것은 PHZ에의해서손상된적혈구가비장에서파괴되었기때문으로보인다. 유의성은없었으나대조군에비해淸血地黃湯군에서비장무게가감소하는경향을보인것은淸血地黃湯군에서적혈구파괴가더적게일어났을가능성을시사하는것으로생각된다. 이상의연구를통하여淸血地黃湯이용혈성빈혈을억제하는효과가있음을확인할수있었다. 또한빈혈의회복에있어서도淸血地黃湯을투여하지않 138
양형주외 1 인 : 淸血地黃湯이 Phenylhydrazine 으로유발한용혈성빈혈흰쥐에미치는영향 (139) 은대조군에비하여적혈구수와헤모글로빈수치를증가시켰으며, 망상적혈구수치도대조군에비하여더욱일찍회복되었다. 빈혈회복효과에있어서는淸血地黃湯이용혈성빈혈유발을억제하여기본적으로높은수치에서회복이이루어지기시작했기때문에더욱양호하게회복되는경향이보였을가능성을배제할수없으므로淸血地黃湯의빈혈회복효과, 즉조혈효과에있어서는추가적인검토가필요할것으로보인다. 이번연구는 PHZ을투여하여용혈성빈혈을유발하는실험이었지만, 중간중간혈액학적검사를위한채혈 ( 출혈 ) 이불가피하여출혈에의한미미한빈혈이실험에영향을끼쳤을가능성도있다. 출혈을빈혈모델로활용하기도한다는점 19) 을감안하면향후채혈의효과를최소화할수있는 ocular puncture방법 2) 등을활용하는것도더욱정확한결과를얻는데도움이될것으로보인다. 추후淸血地黃湯의빈혈회복효과와실험구상의보완을위한추가적인연구가필요할것으로사료된다. 結論淸血地黃湯의용혈성빈혈에대한효과를알아보기위해, PHZ으로쥐에용혈성빈혈을유발하고, 적혈구수 (red blood cell, RBC), 혈색소 (hemoglobin, Hb), 평균적혈구용적 (mean corpuscular volume, MCV), 평균적혈구혈색소량 (mean corpuscular hemoglobin, MCH), 평균적혈구혈색소농도 (mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC), 망상적혈구 (reticulocyte) 를측정하여다음과같은결과를얻었다. 1. 淸血地黃湯은 PHZ에의한적혈구수와혈색소수치의감소를유의성있게억제하여, 용혈성빈혈억제효과를보였다. 2. 淸血地黃湯은 PHZ 처치후적혈구수와혈색소수치를대조군에비해유의하게회복시키는것으로나타났다. 3. 淸血地黃湯은 MCV, MCH, MCHC에서대조군과거의동일한소견을보였다. 4. 淸血地黃湯에서망상적혈구가대조군에비해더빠른시기에정상화되는것으로나타났다. 5. 체중에서는대조군과거의동일한소견을나타냈다. 6. 비장무게는淸血地黃湯군에서대조군보다감소하는경향이있었다. 이상에서淸血地黃湯은용혈성빈혈을억제하는효과가있는것으로나타났으며, 또한망상적혈구가대조군에비해더조기에정상화되면서빈혈회복효과도대조군에비해양호한경향을보였다. 향후淸血地黃湯의빈혈회복효과와실험구상의보완을위한추가적인연구가필요할것으로사료된다. 參考文獻 1. Bruner AB, Joffe E, Duggan AK, Casella JF, Brandt J. Randomized study of cognitive effects of iron supplementation in non-anemic iron deficient adolescent girls. Lancet. 1996;348: 992-6. 2. Choi CW. Diagnosis and treatment of anemia. An out-patient approach. J Korean Acad Fam Med. 23;24:33-11. 3. Dhaliwal G, Cornett PA, Tierney LM. Hemolytic anemia. Am Fam Physician. 24;69(11):1599-66. 4. Hah JO. Hemolytic anemia in pediatrics. Korean J Pediatr. 27;5(6):511-8. 5. 전국간계내과학교수공저. 간계내과학. 서울 : 동양의학연구원출판부. 21;169, 551. 6. Shelter MD, Hill HA. Reactions of hemoglobin with phenyhydrazine: A review of selected aspects. Environ Health Perspect. 1985 Dec;64: 265-81. 7. Giffin HZ, Allen EV. The control and complete remission of polycythemia vera following the prolonged administration of phenylhydrazin hydrochlorid. Am J Med. 1933;185:1-13. 8. Barer A, Paul WD, Baldrige CW. Studies on the 139
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