54 배영경 김동석 이수정외 1 인 합이나융합등이일어난결과유전적으로불안정한상태 (chromosomal instability) 가된다고하였다. 그리고이때대부분의세포는사멸하지만 (M2기 ), telomerase 활성화가일어난세포는과도하게변형된염색체말단부가안정되면서불멸화된클

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1 대한병리학회지 : 제 35 권제 1 호 2001 The Korean Journal of Pathology. 2001; 35: 53-9 유방의전암성병변과암종에서조직내교잡법을이용한 Telomerase mrna의발현 배영경 김동석 이수정 1 권굉보 1 영남대학교의과대학병리학교실 1 일반외과학교실 Telomerase mrna Expression by In Situ Hybridization in Premalignant Lesions and Carcinomas of the Breast Young Kyung Bae, Dong Sug Kim, Soo Jung Lee 1 and Koing Bo Kwun 1 Departments of Pathology and 1 General Surgery, Yeungnam University College of Medicine Daegu, Korea 접수 : 2000 년 9 월 9 일게재승인 : 2000 년 12 월 29 일 책임저자 : 배영경우 대구시남구대명 5동 영남대학교의료원해부병리과전화 : Fax: ykbap@medical.yeungnam.ac.kr * 본연구는 2000년영남대학교교비자유공모과제연구비의지원으로이루어졌음. Background : Telomerase is a ribonucleoprotein, DNA polymerase that synthesizes telomere repeats onto chromosomal ends and maintains telomere length. Telomerase activity has been detected in a broad range of human malignant neoplasms, but not in normal somatic cells. So, activation of telomerase may represent an essential step in the malignant transformation of cells. However, the expression of telomerase in premalignant lesions remains relatively unexplored. This study was conducted to investigate the reactivation of telomerase in the carcinogenesis of human breast tissue. Methods : In situ hybridization for the telomerase RNA component (human telomerase mrna; htr) was used in a normal breast tissue (n=41), florid ductal hyperplasia (FDH) (n=10), atypical ductal hyperplasia (ADH) (n=3), ductal carcinoma in situ (DCIS) (n=44) and invasive carcinoma (n=33). htr expression in relation to p53 status and the pathologic parameters in breast cancer was also studied. Results: Expression of htr was demonstrated in 13 samples (31.7%) of normal breast tissues, 4 (40%) of FDH, 3 (100%) of ADH, 42 (95.5%) of DCIS, and 33 (100%) of invasive carcinoma. The rate of htr expression of ADH was significantly different from that of FDH (p<0.05), and there were no differences in htr expression rates among ADH, DCIS and invasive carcinomas. There was no correlation between htr expression and nuclear grade, tumor size, and p53 status in invasive carcinomas. Conclusion : These results suggest that telomerase activation may be an early event and an essential step in the carcinogenesis of human breast tissue, and that telomerase has no correlations with p53 status and prognostic parameters. Key Words : Telomerase, In Situ hybridization, Breast, p53 Telomerase는핵산- 단백질복합체 (RNA-protein complex) 로 telomeric DNA 3 끝부분에서 telomere를합성하는 telomere terminal transferase이다. 1 Telomerase 효소의 mrna 부위는 telomere를합성할때 telomeric 반복의특정부위에대한주형 (template) 으로작용한다. 2 Telomere는염기서열 (TTAGGG)n의반복으로이루어져있으며, 염색체끝부분에위치하여염색체에일어나는재조합이나융합, 그리고분해효소에의한소실로부터염색체를보호함으로써염색체말단부위를안정화시키는기능을한다. 그리고개체마다약간의차이는있으나사람의경우길이가대략 5-15 kb 정도이며, 3 끝부분에서의불완전한복제로인하여세포가분열할때마다 bp 씩소실된다. 3 Telomerase 활성은분화된체세포에서는나타나지않지만, 4 조혈세포의간세포, 5 배아세포, 6 그리고불멸성세포주 (immortal cell line) 와대부분의암종에서측정되어, 7 telomerase의활성화가세포의불멸성획득과악성종양의발생에중요한역할을할것으로생각되고있다. 1995년 Rhyu 8 는정상체세포에서는 telomerase가불활성상태이기때문에세포분열이일어날때마다 telomere 길이가점점짧아져어느수준에도달하면세포사 (M1기) 가일어나지만, p53 이나 Rb 같은세포주기조절유전자의소실이나돌연변이가일어나면세포는 M1기에접어들지않고지속적인분열이가능해져 telomere는점점소실되고그기능을상실하여염색체재조 53

2 54 배영경 김동석 이수정외 1 인 합이나융합등이일어난결과유전적으로불안정한상태 (chromosomal instability) 가된다고하였다. 그리고이때대부분의세포는사멸하지만 (M2기 ), telomerase 활성화가일어난세포는과도하게변형된염색체말단부가안정되면서불멸화된클론을생성하여지속적인증식이가능하게된다고하였다. 8 상피기원종양은대개일련의형태학적변화를거친전암병변이선행하며이로부터일정기간이경과하여암으로진행한다고알려져있다. 현재까지위의이형성상피병변과대장의선종, 9 자궁경부의이형성상피병변, 재생성간결절, 13 그리고유방의상피증식성병변 14 에서 telomerase 활성에대한연구가있어왔다. 본연구에서는유방의개화성관상피증식, 비정형관상피증식, 관상피내암종, 그리고침윤성암종을대상으로조직내교잡법 (in situ hybridization) 을이용하여 htr (human telomerase mrna) 발현을관찰함으로써, 유방암발생의어느단계에서 telomerase 효소의활성이나타나는지알아보고자하였다. 그리고조직학적으로같은병변이라하더라도순수관상피내암종과, 침윤성암종주변에동반된관상피내암종과같이동반병변유무에따른 htr 발현정도와, 종양세포의핵등급, 15,16 종양의크기, p53 단백발현유무등과같은병리조직학적인자들과 htr 발현과의관련성을알아보고자하였다. 재료와방법재료 1997년 1월부터 2000년 1월사이에영남대학교의과대학부속병원에서유방종괴로수술한환자가운데 58명의환자로부터얻은조직표본을대상으로하였다. 조직은병리진단을위해 10% 중성포르말린에 24시간이상고정후통상적으로제작한파라핀블록을이용하였다. 그리고이들환자로부터얻은정상조직 41예, 개화성관상피증식 10예, 비정형관상피증식 5 예, 관상피내암종 44예, 침윤성암종 33예에대하여연구를시행하였다. 정상조직 41예중 5예는상피증식성양성질환환자로부터얻은조직이었으며, 14예는관상피내암종, 그리고 22예는침윤성암종주변의정상조직이었다. 관상피내암종은 20예가순수관상피내암종이었고 24예는침윤성암종주변에동반된관상피내암종이었다. 환자 1명당 1-4 개의파라핀블록이연구에사용되었고, 정상조직의경우병변의주변에있는조직을이용하였다. 방법조직내교잡법 htr 발현을관찰하기위해 telomerase mrna에특이하게 반응하도록제작된 fluoresceinated oligonucleotide probe (telomerase RNA probe, BioGenex, U.S.A.) 를사용하였고, 모든과정은 Super Sensitive ISH Detection System (DA030SS, BioGenex, U.S.A.) 을이용하여반응산물을관찰하였다. RNase 오염을막기위해모든시약의제조에 DEPC (diethylpyrocarbonate) 를 0.01% 농도로첨가한증류수를사용하였고 RNase block을첨가하였으며, hybridization까지전과정은장갑을착용하고시행하였다. 먼저파라핀블록을 4 m 두께로박절한다음 0.01% 의 DEPC 수조에띄운뒤 positively charged glass slide (Probe On Plus, Fisher Scientific, U.S.A.) 에부착하여실온에서건조하였다. 그런다음 xylene에 10분, 5분씩 2회, 100% 에탄올에 2분씩 2회, 95%, 70%, 50% 에탄올에각각 1분씩적용시켜파라핀을완전히제거하였다. 그뒤각슬라이드당 300 L의 proteinase K를조직이충분히젖도록떨어뜨려실온에서 15분동안반응한다음 1 PBS 용액으로 5분간수세하였다. 그리고증류수, 50%, 70%, 100% 에탄올에각각 10초씩적용하여탈수하였다. 실온에서약 5분간건조한후 prehybridization solution을 1-2방울가하고덮개유리를씌운후습기있는상자에슬라이드를넣고 37 에서 60분동안반응시켰다. 이어서덮개유리를제거하고 100% 에탄올에서 3분씩 2회세척하였다. 실온에서약 5분간건조시킨다음 L의 probe를조직에가하고 95 oven에 10분동안넣어 mrna의 U자형고리나다른이차적구조를제거한뒤 37 에서 14시간동안교잡을시행하였다. 그다음 2 SSC (saline-sodium citrate) 용액에 5분간 2회, 1 SSC 용액에 5 분간차례로수세하였다. 그런다음 protein block, Link 1 (mouth anti-fluorescein antibody), Link 2 (biotinylated F(ab)2 fragments of anti-mouse immunoglobulins), Label (alkaline phosphatase-labeled streptavidin) 을차례대로각각 20분동안반응시킨후각단계가끝날때마다 1 PBS 용액으로 3분간 3회세척하였고, 마지막으로 BCIP/NBT substrate를가하여나타나는발색정도를광학현미경으로관찰하였다. 매실험마다 fluoresceinated poly(a) oligonucleotides를소식자로이용한양성대조염색과 probe 대신 hybridization solution만사용한음성대조염색을시행하였다. 세포의핵에발색되며주위배경보다확실히진하게염색된경우를양성으로판독하였다. 암종의경우 htr을발현하는세포수와발현강도에따라두군으로나누어비교하였다. 즉종양세포의 50% 이상에서병변에침윤된림프구의발현강도와같거나그이상의강한발현을보이는군과, 종양세포의 50% 미만에서강한발현을나타내거나대부분의종양세포가중등도의발현을나타내는군으로구분하였다. p53 단백에대한면역조직화학염색파라핀블록을 4 m 두께로박절한뒤 avidin-biotin complex 방법을이용하여면역조직화학염색을시행하였다. 절편을

3 유방암에서 Telomerase mrna 의발현 55 슬라이드에부착시킨뒤 60 배양기안에넣고 30분동안전처치한뒤 100% xylene에 5분씩 4회, 100% 에탄올에 5분씩 2회, 95% 에탄올에 5분, 그리고 75% 에탄올에 5분씩처리한뒤흐르는물에 5분동안세척하였다. 항원의노출이잘되게 121, 15 Lb에서 5분동안고압멸균한뒤실온에 20분동안두었다. 그뒤증류수를 5분동안도포한다음메탄올과 30% 과산화수소수혼합용액을 15분동안도포하고다시증류수에 5분동안둔뒤, Tris-buffered saline (TBS) 으로 5분씩 3회처리하고 blocking serum을 10분동안반응시켰다. 1차항체인 p53 단백 (DO-7, antihuman mouse monoclonal antibody, Novo Castra, U.S.A.) 을 100배희석하여도포한뒤 4 냉장고에하룻밤넣어두었다. 2차항체인 biotin이결합된연결항체 (primary rabbit/mouse antibody, LSAB kit, DAKO Company, U.S.A.) 를 30분동안반응시킨뒤 TBS로 5분씩 3회세척하였고, streptavidin-horseradish peroxidase (HRP) 용액을떨어뜨리고실온에서 30분방치한뒤다시 TBS에 5분씩 3회세척하였다. 발색제인 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC) 을 10분동안반응시킨뒤흐르는물에 5분동안씻고 Meyer's hematoxylin용액으로대조염색하였다. 세포의 5% 이상에서핵에적색으로뚜렷하게염색되는경우를양성으로하였다. 통계처리통계학적유의성검증은 SPSS 8.0을이용하여 Fisher's exact test로하였고, 유의수준은 p값 0.05 미만으로설정하였다. 결과조직학적유형에따른 htr 발현 (Fig. 1) Normal (n=41) FDH (n=10) ADH (n=3) DCIS (n=44) Invasive carcinoma (n=33) 4.5% Fig. 1. htr expression rates according to histologic types (FDH: florid ductal hyperplasia, ADH: atypical ductal hyperplasia, DCIS: ductal carcinoma in situ). 침윤성암종에동반된 5예중 2예 (40%) 에서 htr 발현이관찰되었으며, 관상피내암종과동반된개화성관상피증식 1예는음성이었다. 따라서개화성관상피증식의경우동반된조직학적유형과 htr 발현과의관련성은없었다 (p>0.05). 비정형관상피증식 20.8% 68.3% 60.0% 100.0% 29.5% 65.9% 79.2% 31.7% 40.0% Telomerase- Telomerase+, focal and/or moderate Telomerase+, diffuse, strong 비정형관상피증식 5예중 2예는절편을제작하는과정에서병변이소실되어연구에이용할수없었다. 나머지 3예는침윤성암종환자들에서얻은조직으로모든예 (100%) 에서 htr 발현이관찰되었다. 정상조직 htr 발현은정상과증식된상피세포의일부, 그리고종양세포및조직에침윤된염증세포에서관찰되었다. 간질세포나혈관내피세포는음성이었고, 림프구는항상강한발현을나타내어 hybridization 상태의내부기준 (internal control) 으로삼았다. 정상조직 41예중 13예 (31.7%) 에서 htr 발현이관찰되었다. 상피증식성양성질환환자에게서얻은 5예는모두 htr 음성인반면, 관상피내암종과침윤성암종주변의정상조직은 36 예중 13예 (36.1%) 에서 htr 발현이관찰되었다. 이는각각 4 예 (28.6%) 와 9예 (40.9%) 로침윤성암종으로진행할수록주변정상조직에 htr이발현되는빈도가증가하는경향이있었으나통계학적의의는없었다. 개화성관상피증식개화성관상피증식 10예중 4예 (40%) 에서 htr 발현이관찰되었다. 상피증식성양성질환에동반된 4예중 2예 (50%) 와 관상피내암종관상피내암종의경우 44예중 42예 (95.5%) 에서 htr이발현되었는데 (Fig. 2), 그중 29예 (65.9%) 에서강하게, 나머지 13예 (29.5%) 에서중등도로발현되었다. 순수관상피내암종환자들에게서얻은 20예의조직에서는 18예 (90%) 가양성으로, 이중 10 예 (50%) 가강하게, 그리고 8예 (40%) 가중등도로발현되었다. 침윤성암종을동반한관상피내암종의경우 24예 (100%) 모두에서 htr 발현이나타났는데 19예 (79.2%) 에서강하게, 5예 (20.8%) 에서중등도로발현되어, 동일한관상피내암종이라하더라도침윤성암종과같이있는경우 htr 발현이더많은세포에서강하게나타나는경향이있었으나통계학적의의는없었다 (p=0.07). 관상피내암종 44예의핵등급 17 은 1, 2, 3등급이각각 3예 (6.8%), 8예 (18.2%), 33예 (75%) 로, 각등급의 3예 (100%), 8예 (100%), 31예 (93.9%) 에서 htr 발현이관찰되었다. 그러나발현강도를보면 1등급은 3예모두 (100%) 에서, 2등급은 6예 (75%) 에서, 그리고 3등급은 20예 (60.6%) 에서강하게발현되었

4 56 배영경 김동석 이수정외 1 인 A B Fig. 2. Human telomomerase mrna expression in ductal carcinoma in situ. Most tumor cells show diffuse and strong expression. Fig. 3. Human telomomerase mrna expression in invasive ductal carcinoma. Tumor cells show focal (A) and diffuse (B) expression. 으나핵등급에따른 htr 발현의유의한차이는없었다. 침윤성암종침윤성암종 33예의조직학적소견은침윤성관암종 30예, 침윤성미세유두상암종 2예, 그리고점액성암종 1예로, 33예 (100%) 모두에서 htr 발현이관찰되었으며 (Fig. 3), 19예 (79.2%) 에서강하게, 그리고 5예 (20.8%) 에서중등도로발현되어관상피내암종에비해좀더높은발현강도를나타내었다. 침윤성관암종에서핵등급 18 에따른 htr 발현을비교해보면 1등급은한예도없어결과를얻을수없었고, 2등급은 7예가운데 6예 (85.7%) 에서, 그리고 3등급은 23예가운데 16예 (69.6%) 에서강한발현이관찰되었으나, 핵등급에따른 htr 발현정도의유의한차이는없었다. 종양의크기에따른 htr 발현을보면, 종양의크기가 2 cm 이하인예는 12예, 2 cm 보다크고 5 cm 이하인예가 15예, 그리고 5 cm 보다큰예가 5예로, 각각 9예 (75%), 10예 (66.7%) 및 3예 (60%) 에서강한발현이나타나종양의크기에따른 htr 발현정도의유의한차이는없었다. 동일환자에서관상피내암종과침윤성암종부위가함께연구대상에포함된예는모두 24예로이중 23예 (95.8%) 가두부위에서동일한발현정도를나타내었는데, 18예는강하게, 그리고 5 예는중등도로발현되었다. 나머지한예는관상피내암종부위에서침윤성암종에비해강한발현이나타났다. 침윤성암종에서 p53 단백과 htr 발현과의관계침윤성암종 33예중 32예에서 p53 단백에대한면역조직화학염색을시행하였으며, 이중 13예 (40.6%) 가양성이었다. p53 단백결과에따른 htr 발현을비교해보면, p53 단백음성인군의 14예 (73.7%) 와양성인군의 8예 (61.5%) 에서강한발현을나타냈으나두군사이에유의한차이는없었다. 고찰최근까지조직내의 telomerase 활성을측정하는방법으로주로 polymerase chain reaction-based telomeric repeat amplification protocol (TRAP assay) 이이용되어왔다. 9-13,17-19 그러나 TRAP assay는신선한조직이나동결조직의전체를사용하므로세포수준에서의 telomerase 활성을알수없는단점이있다. 본연구에서는 TRAP assay의이러한단점을보완하기위하여조직내교잡법을이용하여 htr 발현정도를관찰함으로써 telomerase 활성을간접적으로알고자하였다. 이에따라정상조직의 31.7%, 개화성관상피증식의 40%, 비정형관상피증식의 100%, 관상피내암종의 95.5%, 그리고침윤성암종의 100% 에서 htr 발현이관찰되었다. 본연구에서유방암종의경우 htr 발현율이 TRAP assay에의한 telomerase 활성양성률 73%-95.2% 7,17-20 보다높았으며, 정상조직에서암종으로갈수록 htr을발현하는세포수가증가하였고발현강도도높았다. Kolquist 등 21 은 htr 발현이 telomerse 활성의대리표지자가된다고하였지만, htr 발현정도와 TRAP assay로측정한활성사이의정확한관련성은아직밝혀져있지않다. 그러나 TRAP assay를통한 telomerase 활성양성률이 htr 발현율 14,21 에비해낮은이유가운데하나로, TRAP assay를시행할

5 유방암에서 Telomerase mrna 의발현 57 때검체채취가부적절하여생기는위음성을꼽을수있다. Hoos 등 22 은 25예의유방암종에서각증례당같은수의종양세포를채취하여 TRAP assay로측정한결과, 정도의차이는있으나모든예에서 telomerase 활성이관찰되었다고하였다. Carey 등 23 도침윤성유방암종을대상으로 TRAP assay를이용하여 telomerase 활성을측정한결과 22% 에서음성이었으며, 음성인군들을미세절단술로순수종양세포만을분리하여 TRAP assay로다시측정하니 telomerase 활성이음성인예는 5% 에불과하다고하였다. Heine 등 24 은 TRAP assay를이용한일부연구 7,25,26 에서연구대상암종의 5-50% 에서 telomerase 활성이음성으로나타난것은 telomerase 활성또는 upregulation이암세포의특징인불멸성의필수요건이라는이론에적합하지않은결과라고하였다. 그러나 Heine 등 24 이위암조직을대상으로연구를시행한결과 TRAP assay에서는 13예중 8예에서양성인반면, 조직내교잡법에서는 13예모두에서강한발현을나타내어이제까지 TRAP assay를이용한연구들에서일부암종들이 telomerase 음성으로나타난것은 TRAP assay의방법론적인문제에의한것으로서, htr에대한조직내교잡법은암세포를증명하는유용한방법이라고하였다. 한편 telomerase는열과 RNase에아주민감한효소로조직보관이부적절하였을때위음성이나올수있다. 종괴전체조직을검체로사용할경우이것은매우이질적인세포들로구성되어있으므로연구대상이되는세포들만을채취해야한다는현실적인어려움이있다. Heine 등 24 은 htr 발현을 telomerase 활성존재와동일하게생각하여 telomerase 활성이전사단계에서조절될가능성을전혀고려하지않았다. 그러나 Carey 등 23 이 TRAP assay 의검체로인한오차를최소화한결과음성률이현격히감소하였다는사실을보면, TRAP assay를이용한연구에서는연구대상이되는병변의적절한채취와실험군마다측정할세포들이동량으로포함되도록세심하게주의를기울여야만신뢰성있는결과를얻을수있을것으로판단된다. 그리고 telomerase 효소의전사와활성사이를조절하는기전의유무를밝히는것이 htr 발현과 telomerse 활성사이의정확한관련을아는데필수적이라고생각한다. 본연구에서는정상조직의경우양성질환으로부터얻은조직에서는모두 htr 발현이관찰되지않았으나암종환자의종양주변에서채취한정상조직의 36.1% 에서약하거나중등도의 htr 발현이관찰되었다. TRAP assay를이용한연구에서도종양주변정상조직에서 telomerase 활성이나타났는데, 그빈도는조직과종양의종류에따라 % 로다양하다. 7,18,26 유방의경우는 0-10% 로 7,17,18 본연구결과에비해낮았다. 이와같이종양주변정상조직에서 htr 발현이나타난것은종양세포등에서분비한성장인자로자극을받은증식기의반응성세포에서나타나는현상일수도있고, 아니면형태학적으로는아직정상모습을하고있지만종양발생과정중악성의잠재성을획득한불멸화된세포에서나타나는발현일가능성도있다. 27 따 라서이러한세포들을대상으로분자생물학적방법을이용해유전자변화를관찰한다면도움이될것으로생각한다. Kolquist 등 21 은조직내교잡법에의한 htr 발현이증식기의정상상피세포뿐만아니라종양조직내에침윤된활성화된림프구에서도강하게나타나는것은 telomerase 활성이세포의불멸화를의미한다기보다세포증식의표지자일가능성을시사하는것이라고하였다. 그러나대장상피세포에서의발현이미미하고재생능력이왕성한간세포에서는 htr 발현이관찰되지않은점등은 telomerase의복잡한생리적기능을추측케한다고하였다. 본연구에서흥미로운점은개화성관상피증식과비정형관상피증식사이의현저한발현율차이인데, 비정형관상피증식의경우증례수가적다는제한점이있지만모든예에서 htr 발현이관찰되어암종과차이가없었다. 개화성관상피증식은일반인과비교해서 배높게유방암종이발생한다고알려져있지만, 28 htr 발현율을볼때악성종양의속성을아직완전히갖지않을것으로생각한다. 비정형관상피증식이란양성관상피증식과관상피내암종의소견을동시에가지고있으나관상피내암종의소견을완전히만족하지못하는증식성병변으로, 관상피내암종의진단기준은저자들마다약간의차이가있다. 본연구에서는 Tavassoli와 Norris 29 가제시한관상피내암종의진단기준을따랐다. 비정형관상피증식은일반인에게서보다 4-5배높게침윤성유방암종을발생시키고장기간추적시약 10% 에서침윤성유방암종이발생하는잘알려진전암단계병변이다. 29 그러나비정형관상피증식은병변의크기가작고대개다른질환을검색할때우연히발견되는특성이있으므로 TRAP assay를통한연구는불가능하다. 실제로본연구에포함된비정형관상피증식병변의크기도아주작아, 선정된증례중 2예가절편을만드는과정에서병변부위가소실되었다. 따라서본연구와같이조직내교잡법을이용하거나미세절단술을이용하여야만분자생물학적연구가가능하다. 본연구에서발현강도의차이는있지만양성률만비교한다면암종과차이가없는것으로나타나, telomerase 활성화가암발생에선행한다는 Rhyu 8 의이론에부합한다고보았으나, 연구대상이된증례수가적으므로앞으로많은증례에대한연구가뒷받침되어야할것으로생각한다. 전암병변으로널리인정되고있는자궁경부의이형성상피병변과상피내암종, 침윤성암종을대상으로한연구에서도정도의차이는있지만 telomerase 활성의양성률이세병변에서큰차이가없는것으로나타나, telomerase 활성화는전암병변에서일어날것으로주장하고있다 본연구에서관상피내암종과침윤성암종은각각 95.5% 와 100% 에서 htr 발현이관찰되어, 대부분의암종이 telomerase 활성을나타낼것이라는 Rhyu 8 의이론에비교적부합하는결과를보였다. 그러나본연구에서 2예의관상피내암종이 htr 음성으로나타난것처럼드물게는형태학적으로명백한악성종양이지만 telomerase 활성

6 58 배영경 김동석 이수정외 1 인 이음성인경우도있을것으로생각한다. 이러한경우 telomerase 활성을조절하는기전의존재나 telomere 길이를안정화시키는다른기전의존재를고려해볼수있으나, 25 본연구결과만으로는확실히알수없다. Yashima 등 14 은암종에서 htr 발현에상당한이질성이있음을관찰하였다고하였으나, 본연구에서는관상피내암종과침윤성암종부위에서 htr은이질성이거의없이미만성으로강하게발현되었다. 폐암종과유방암종을대상으로 htr 발현을관찰한연구를보면침윤성암종에인접한상피내암종부위에서국소적으로 htr 발현이증가하여 htr의 up-regulation은침윤성암종의발생을예견할수있는표지자가될것이라고하였다. 14,30 그러나본연구에서는주위와확실히대비되는국소적인 htr 발현의증가는관찰할수없었다. 관상피내암종의경우침윤성암종주변에동반된관상피내암종이침윤성암종을동반하지않은순수관상피내암종에비해 htr이더많은세포에서강하게발현되는경향을보였지만, 통계학적으로는의미없는차이여서본연구결과로는 telomerase 활성과침윤과의관련성을증명할수없었다. htr 발현은종양세포의핵등급과종양의크기등과같은조직학적예후인자들과의유의한관련이없었는데, Bednarek 등 18 도유방암종에서 TRAP assay로측정한 telomerase 활성은림프절전이상태, 에스트로겐및프로게스테론수용체상태, 종양의크기, S-phase fraction, ploidy, 병기등과는관련이없다고하였다. Roos 등 20 은 p53 단백양성인군에서음성인군보다 telomerase 활성이의의있게높았다고하였으나, 본연구에서는 p53 단백상태와 htr 발현강도와는관련이없는것으로나타났다. p53 단백상태와 htr 발현이관련이없다는연구결과에대한가능성으로는, M1기를탈출하기위한세포주기통제불능 (cell cycle deregulation) 상태는 p53 유전자변이에만의존하는것이아니라 Rb 유전자, cyclin dependent kinase, cyclin, cyclin dependent kinase inhibitor 등과같은세포주기조절인자들이상호작용하여 telomerase 활성을유도하기때문인것으로보았다. 19 그러나 htr 발현과세포주기조절인자및조직학적예후인자들과의관련성에대해서는 telomerase 효소의전사와활성에이르는기전이명확하게밝혀진후체계적인연구가필요할것으로생각한다. 결론적으로유방에서 htr은종양주변정상조직및개화성관상피증식의일부세포에서발현되었으며, 비정형관상피증식의경우관상피내암종및침윤성암종과마찬가지로대부분의세포가 htr 발현을나타내어, telomerase 활성화및불멸성획득이전암병변인비정형관상피증식에서일어나는것이라판단된다. 이에따라 htr 발현은암으로진행하는데필수적인요소임을알수있었다. 그리고암종에서 htr 발현은 p53 단백발현및종양세포의핵등급과종양의크기와같은병리조직학적예후인자들과관련이없었다. 참고문헌 1. Morin GB. The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein that synthesizes TTAGGG repeats. Cell 1989; 59: Feng J, Funk WD, Wang SS, et al. The RNA component of human telomerase. Science 1995; 269: Harley CB, Futcher AB, Greider CW. Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts. Nature 1990; 345: Yasumoto S, Kunimura C, Kikuchi K, et al. Telomerase activity in normal human epithelial cells. Oncogene 1996; 13: Hiyama K, Hirai Y, Kyoizumi S, et al. Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cells. J Immunol 1995; 155: Wright WE, Piatyszek MA, Rainey WE, Byrd W, Shay JW. Telomerase activity in human germline and embryonic tissues and cells. Dev Genet 1996; 18: Kim NW, Piatyszek MA, Prowse KR, et al. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer. Science 1994; 266: Rhyu MS. Telomeres, telomerase and immortality. J Natl Cancer Inst 1995; 87: Tahara H, Kuniyasu H, Yokozaki H, et al. Telomerase activity in preneoplastic and neoplastic gastric and colorectal lesions. Clin Cancer Res 1995; 1: Pao CC, Tseng CJ, Lin CY, et al. Differential expression of telomerase activity in human cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia lesions. J Clin Oncol 1997; 15: Shroyer KR, Thompson LC, Enomoto T, Eskens JL, Shroyer AL, McGregor JA. Telomerase expression in normal epithelium, reactive atypia, squamous dysplasia, and squamous cell carcinoma of the uterine cervix. Am J Clin Pathol 1998; 109: Kim HS, Lee YJ, Kim MS, Ko HM, Juhng SW. Assay of proliferative activity, clonality and immortality of precancerous lesions of the uterine cervix. Korean J Pathol 1999; 33: Hytiroglou P, Kotoula V, Thung SN, Tsokos M, Fiel MI, Papadimitrious CS. Telomerase activity in precancerous hepatic nodules. Cancer 1998; 82: Yashima K, Milchgrub S, Gollahon LS, et al. Telomerase enzyme activity and RNA expression during the multistage pathogenesis of breast carcinoma. Clin Cancer Res 1998; 4: Silverstein MJ, Poller DN, Waisman JR, et al. Prognostic classification of breast ductal carcinoma-in-situ. Lancet 1995; 345: Dalton LW, Page DL, Dupont WD. Histologic grading of breast carcinoma: a reproducibility study. Cancer 1994; 73: Hiyama E, Gollahon L, Kataoka T, et al. Telomerase activity in

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