<BAD2C8B0C8AD20B9D9C0CCB7AFBDBA20B9E9BDC520C0DAB0A120B1E2C1D820B9D720BDC3C7E8B9E6B9FD20C0DBBCBA20C1F6C4A75FC3D6C1BEBEC82E687770>

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1 행정간행물등록번호생물의약품평가자료집 불활화바이러스백신의 자가기준및시험방법작성지침 식품의약품안전청 생물의약품본부

2 불활화바이러스백신의 자가기준및시험방법작성지침 식품의약품안전청 생물의약품본부바이러스백신팀 본자료는기허가받은제품의자가기준및시험방법작성뿐만아니라, 새로이허가를얻고자하는경우도포함되어있으므로설명내용을참고하시기바랍니다. 제출자료의범위, 제조방법및기준및시험방법은품목별로특수성( 제조국의공정서및관리규정의차이등) 을고려하여검토되므로, 본지침에언급되지않는자료의추가제출( 또는생략) 될수있음을감안하시기바랍니다.

3 1. 기준및시험방법심사의뢰서 < 예시> 1 2. 불활화바이러스백신의제조방법 불활화바이러스백신의기준및시험방법작성요령 불활화바이러스백신의자가기준및시험방법심사의뢰자료제출범위 < 기허가제품의경우> 불활화바이러스백신의자가기준및시험방법심사의뢰자료제출범위 < 신규허가제품의경우> 첨부자료 37

4 1. 불활화바이러스백신의기준및시험방법심사의뢰서 [ 예시] 생물의약품제조품목기준및시험방법심사의뢰서 2DBarcode 의뢰인 [ 제조소의명칭] 제조소의명칭 [ 업허가번호] 업허가번호 [ 제조의소재지] ( 우편번호 ) 제조소의소재지 [ 대표자] 대표자 상세내용 [ 제품명] [ 의약품분류] 의약품분류 [ 성상] [ 제형코드] 제형코드 [ 제조방법] 별첨 [ 효능 효과] 별첨 [ 용법 용량] 별첨 [ 투여경로] 투여경로 [ 사용상주의사항] 별첨 [ 용도구분] 용도구분 [ 포장단위] [ 저장방법] [ 사용( 유효) 기간] [ 기준및시험방법] 별첨 [ 분류번호] [ 처방코드] 처방코드 [ 비고] [ 제조원] 제조원 [ 공정구분] 공정구분 담당자 제조원을추가하시려면메뉴의 [ 입력]-[ 줄추가] 기능을사용하십시오. 성명 : 성명이메일 : 전화번호 : ( 지역번호 ) 전화번호팩스 : ( 지역번호 ) 전화번호 휴대폰 : 휴대폰번호 -1-

5 생물의약품수입품목기준및시험방법심사의뢰서 2DBarcode 의뢰인 [ 영업소의명칭] 영업소의명칭 [ 업허가번호] 업허가번호 [ 영업의소재지] ( 우편번호 ) 영업소의소재지 [ 대표자] 대표자 제조원 [ 제조원] 제조업소명제조국소재지 상세내용 제조원을추가하시려면메뉴의 [ 입력]-[ 줄추가] 기능을사용하십시오. [ 제품명] [ 의약품분류] 의약품분류 [ 성상] [ 제형코드] 제형코드 [ 제조방법] 별첨 [ 효능 효과] 별첨 [ 용법 용량] 별첨 [ 투여경로] 투여경로 [ 사용상주의사항] 별첨 [ 용도구분] 용도구분 [ 포장단위] [ 저장방법] [ 사용( 유효) 기간] [ 기준및시험방법] 별첨 [ 분류번호] [ 처방코드] 처방코드 [ 비고] 담당자 성명 : 성명이메일 : 전화번호 : ( 지역번호 ) 전화번호팩스 : ( 지역번호 ) 전화번호 휴대폰 : 휴대폰번호 본신청서를이용하시면식품의약품안전청본청및지방청에민원접수가가능합니다. 수수료 : 식품의약품안전청장이고시한금액 -2-

6 1. 제품명 : 주( 백신) 로표기 - 생물학적제제기준및시험방법( 이하 생기 ) 에수재된일반명칭( 각조) 을괄호와같이병기 2. 의약품분류 : 전문의약품 선택 3. 성상 : 완제의약품의성상기술 4. 제형코드 : 주사제 선택, 주사제가아닌경우적절한제형선택 5. 제조방법 : 별첨 으로표기 - 생물학적제제등허가및심사에관한규정( 이하 허가규정 ), 의약품등의기준및시험방법심 사의뢰서심사규정( 이하 기시심사규정 ) 에따라제품의특성에맞게작성 6. 효능 효과 : 허가받을또는받은사항을별첨으로작성 7. 용법 용량 : 허가받을또는받은사항을별첨으로작성 8. 투여경로 : 주사( 근육), 주사( 피하), 주사( 피내), 경구등적절한경로에 표시로선택 9. 사용상주의사항 : 허가받을또는받은사항을별첨으로작성 10. 용도구분 : 수출용, 군납용, 관납용, 내수용등선택 11. 포장단위 : 허가받을또는받은사항을기재 12. 저장방법 : 허가받을또는받은사항을기재 13. 사용( 유효) 기간 : 허가받을또는받은사항을기재 14. 기준및시험방법: 별첨으로표기 - 기시심사규정 에따라제품의특성에맞게작성 15. 분류번호 : 백신류(631) 선택 16. 처방코드 : 입력하지않음. 17. 비고 - 신약인경우는 신약, 허가변경인경우는변경받고자하는사항을간략하게기재 - 기허가제품의자사기준설정인경우는 자사기준및시험방법설정이라고기재 18. 제조원 : 국내제조인경우국내제조원을기술하고, 수입인경우제조업소명, 제조국, 소재지를 기술 19. 공정구분 : 소분포장, 자사제조등선택 원료약품및그분량 - 배합목적, 성분명, 규격, 분량순으로기재 - " 원료약품및그분량 상에주성분의규격을 별규 로표기하고 의약품등의기준및시험방법심사의뢰서심사규정( 이하 기시심사규정 ) 의별표 10 의기재형식에따라작성하고, 안정제, 보존제등은별표2에따라작성 허가변경인경우는허가증또는기준및시험방법적합통지서및변경대비표를첨부 -3-

7 [ 별첨규격] 원료의약품의규격예시 정의( 기원, 명칭, 성상) 는원료의대표성을나타낼수있도록작성한다. 시험항목및그기준은제품을개발한제조사의기준및시험방법을기반으로하되, WHO 와유럽약전(EP) 등공정서등을참고로작성한다. 이때제조사의제조공정( 또는시험성적서) 에표기되어있는시험법이포함되어야한다. 그러나기본적으로생기의기본틀을유지하여작성하여야한다. 작성시제조방법에언급된내용( 명칭) 과기준에언급된내용이일관성을유지하여야한다. 시험방법은기본적으로제조사의시험법을기반으로작성하는데그범위는명칭, 시험방법에대한원리( 또는 principle), 간략한시험방법, 판정값으로구분된다. - 공정서에언급된시험법인경우는근거공정서를명기 - 제조사의 SOP에언급되어있는시험방법을간략히서술 : 외래성바이러스부정시험, 염색체이상시험, 종양형성능부정시험등은검체의 용량, 동물종및투여량및투여방법, 시험기간등을명기 - 표준품을사용한경우는그명칭등, - 기기를사용한경우는기기의일반명칭등, - 시험법의끝에는시험결과판정기준또는결과값을명기 작성방법은다음과같이 A 형간염백신을그예로해당부분에설명을기재하였다. -4-

8 불활화 A형간염바이러스 Hepatitis A Virus (Inactivated) 생기의각조중해당하는제제의원료의약품중주성분의명칭으로 불활화 바이러스 라기 재한다. 1. 정의 1.1 기원 A형간염바이러스인 XXX주를사람이배체세포인 MRC-5 에서배양하여얻은바이러스이다 생기의각조중에해당하는제제의원료의약품명칭을바이러스주와배양세포( 세포의기원을표기) 를병기하여기재한다. 명칭이원료의약품은 불활화 A 형간염바이러스 라한다. 성상불활화된 A 형간염바이러스( 이하 바이러스 라함) 를함유한백색내지거의백색인액상이다. 최종원액제조이전의상태를나타내며, 기술한다. 원액단계에서정제및불활화한바이러부유액에대하여 2. 제조방법및시험기준 2.1 재료 바이러스주 마스터바이러스주백신제조에적당하다고인정되는 A형간염바이러스 주를사용하며, 이사용주에대해마 스터바이러스주를설정하고각각 -70 이하에보존한다. 바이러스는시드로트로부터 대이상계대한것을사용해서는안된다 제조용바이러스주 마스터바이러스주를추가 계대증식시켜제조용바이러스주로설정하고 -70 이하에 냉동보관한다. 원료의약품생산에사용되는바이러스주는 seed lot system 에의하여관리된다. 이때의명칭, 보관조건, 최대계대력을기술한다. 현재 A형간염백신의경우는 HM175 주, CR326F 주, GBM주등을이용하여제조한다 세포주 바이러스를세포배양에의해서생산되는경우아래와같이작성한다. 세포배양이아닌동물이나부화란등을직접이용하는각각의특성에맞게기술한다. 동물을이용하는경우동물종(strain명포함), 수령, 건강상태, 미생물감염등에대한확인방법등에대하여기술한다. 부화란을사용하는경우는 인플루엔자백신자사기준및시험방법작성지침 을참고한다 마스터세포은행바이러스배양에사용되는세포주인 MRC-5는백신제조에적합하다고인정된사람이배체세 포( 이하 세포 라함) 에서유래된것으로, 세포은행시스템(cell bank system) 으로관리되 -5-

9 며, 연속계대배양된세포는 -70 이하에동결보존하여야한다. 세포주는세포은행으로부터 백신제조까지 계대이상계대하여사용하여서는안된다 제조용세포은행 마스터세포은행을추가 계대증식시켜제조용세포은행으로설정하고 -70 이하에동 결보관한다. 원료의약품생산에사용되는세포주의명칭, 보관조건및최대계대력을기술한다. 그리고관리시스템이 cell bank system 으로관리되어야한다. 만약, 초대배양세포인경우에는사용된동물종이 SPF 임이언급되어야한다. 현재 A형간염백신의경우는사람이배체세포인 MRC-5를이용하여제조한다 세포배양액 세포배양액은 mm L- 글루타민, % 소태아혈청, % 의네오마이신이함유된 배지를사용한다. 바이러스배양에사용된세포의배양액조성에대하여설명한다. 배양액에는항생제( β-lactam 계열의항생제이외) 첨가여부, 사용된이종혈청( 사람유래의혈청의사용은제한되어있다.). ph indicator인 phenol red 등에관하여함량을기술한다. 만약, 마스터세포은행, 제조용세포은행, 생산시사용하는세포배양액이다른경우각각을나눠서기술한다 소태아혈청세포배양에이용된소태아혈청은소해면상뇌증(BSE) 와소백혈병(Bovine Leukosis) 에걸리지않은소로부터유래한것이어야하며, 바이러스, 세균, 진균및마이코플라스마등이확인되어서는안된다. 소태아혈청은원료공급사로부터 소해면상뇌증(BSE) 와소백혈병(Bovine Leukosis) 에대한오염되 지않은소로부터수집되었으며, 바이러스, 무균및마이코플라스마등오염부정을입증 하는원료공급사의자료를제출하고, 그기준을기술한다. 바이러스의종류는제품에따라 다를수있다 트립신용액 세포및바이러스배양에사용된트립신은세균, 진균, 마이코플라스마및돼지유래바이러스, 특히 bovine 혹은 porcine pavovirus 가확인되어서는안된다. 세포계대배양에사용되는트립신의오염부정에대한원료공급사의자료를제출하고해당사항을기술한다. 2.2 바이러스주대한시험바이러스시드로트에대한시험을마스터바이러스주와제조용바이러스주로나눠각각기준및시험방법을기술한다. 유럽약전의경우결핵균에대한시험수행도요청하고있다 마스터바이러스주제조를위한세포배양액에대한시험 마스터바이러스주제조를위해사용되는세포배양액에대한세포및세포배양액에대하여기준및시험방법을설정한다 배양관찰시험 마스터바이러스주제조에사용되는세포현탁액의 5% 또는 1000 ml 이상을대조배양으로 -6-

10 한다. 세포를 37±1 에서 14 일이상배양하면서관찰할때세포병변을보이지않아야한다. 관찰종료후, 외래성바이러스부정시험을위해세포상등액을취하고세포를가지고혈구흡 착바이러스부정시험을한다 혈구흡착바이러스부정시험 관찰이종료된세포를기니픽적혈구와실온에서 30 분, 그리고 4±1 에서 45분간배양하고 육안과현미경으로관찰할때혈구흡착바이러스가없어야한다 확인시험 동종효소분석법으로시험하여사람 2배체세포유래의 MRC-5 을확인한다 외래성바이러스부정시험 관찰이종료된대조세포상등액 10 ml를각각베로세포와 MRC-5 세포에접종하고 37 에서 14 일이상배양한다. 이때접종 1 주일후배지를교환해준다. 배양종료후, 현미경으 로관찰할때세포병변이없어야하고, 기니픽적혈구와 4 에서 30분간배양할때혈구흡착 바이러스가없어야한다 마이코플라스마부정시험 대한약전의마이코플라스마부정시험법에따르며, 이에적합하여야한다 마스터바이러스주에대한시험 확인시험 항HAV 혈청과 36 ~ 38 에서 3시간반응시킨후 항의 ELISA 로확인한다. 마스터시드로트와제조용시드로트에서바이러스에대한확인시험을수행하여야한다. 험에대한시험법을기술한다. 확인시 무균시험 대한약전의무균시험법에따르며, 이에적합하여야한다 마이코플라스마부정시험 대한약전의마이코플라스마부정시험법에따르며, 이에적합하여야한다 외래성바이러스부정시험 동물접종시험 제조사의동물접종시험법으로시험한다 성숙마우스접종시험 체중 15 ~ 20 g의마우스 20 마리이상에마리당시료 0.5 ml 를복강내에, 0.03 ml를뇌내에각각주사하고 21 일간관찰한다. 이때동물의 80% 이상이살아남아야 한다 영아마우스접종시험 생후 24시간이내의영아마우스 20 마리이상에마리당 0.1 ml를복강내에 0.01 ml을뇌내에각각주사하고 14일간관찰할때동물의 80% 이상이살아남아야한 다. 또한 14일후에살아남은동물의표피와내장을제거한조직을유제로하여맹검 시험할때어느동물에서도외래성인자에의한감염을보여서는안된다 기니픽접종시험 체중 350 ~ 450 g의기니픽 5 마리이상에마리당 5.0 ml을복강내에 0.1 ml을 뇌내에각각주사하고 42 일간관찰한다. 이기간동안어느동물에서도외래성인자에 의한감염을보여서는안되며, 동물의 80% 이상이살아남아야한다. -7-

11 가토접종시험 체중 1.5 ~ 2.5 kg의가토 10 마리이상에마리당 1.0 ml를여러부위에나누어피 내에 9.0 ml를피하에각각주사하고 21 일간관찰한다. 이기간동안어느동물에서 도외래성인자에의한감염을보여서는안되며, 동물의 80% 이상이살아남아야한 다 세포배양접종시험 제조사의세포배양접종시험법으로시험한다. 검체 50 ml이상을아프리카녹색원숭이신 장유래세포와사람 2 배체세포등에접종하여 14 일이상관찰한다. 이때외래성인자 에의한이상을보여서는안된다. 배양종료후, 현미경으로관찰할때세포병변이없어 야하고, 기니픽적혈구와 4 에서 30 분간배양할때혈구흡착바이러스가없어야한다. 다만, 검체와배양액의비율은 1:1~1:3으로하며접종면적은검체 1mL당 3cm 2 이 상으로한다 계란접종시험 제조사의계란접종시험법으로시험한다. 10 ~ 11일령의부화란 30 개이상에 1개당시 료 0.5 ml를요막강내에주사하고 3일후관찰하고 6 ~ 7일령의부화란 30개이상에 1 개당시료 0.5 ml를난황낭내에주사하고 2일후관찰할때어느부화란도외래성인 자에의한변화를보여서는안된다. 외래성바이러스부정시험에사용되는동물접종시험( 성숙마우스접종시험, 영아마우스접종시험, 기니픽접종시험, 토끼접종시험, 계란접종시험( 요막강접종시험, 난황낭접종시험) 등), 세포배양접종시험( 사람이배체세포접종시험, 원숭이신장세포접종시험등) 등이이용된다. 동물의종류, 세포배양의종류등은특성에따라달라질수있다. 이때동물이사용될경우에는동물종, 체중, 개체수, 검체의용량, 투여방법, 관찰기간, 판정기준을기술한다. 그리고세포배양을이용한경우에는세포의종류, 검체의용량, 투여방법, 관찰기간, 판정기준을기술한다. 세포배양접종시험의경우바이러스의종류에따라서필요하면바이러스의중화하여실험할수있으며, 그런경우중화방법을명시한다 감염력시험시드로트검체를계단희석한후 MRC-5 할때10 7 TCID 50 /ml 이상이어야한다. 세포에접종하여배양한후바이러스함량을측정 마스터시드로트와제조용시드로트에서바이러스의감염력시험을수행하여야한다. Infectivity 에대한시험법을기술한다 바이러스부정시험바이러스에특이적인 DNA 단편측면의프라이머를사용하여 DNA polymerase로증폭시킨다. 증폭된서열을바이러스에특이적인 probe로하이브리드화하여확인할때 바이러스가검출되지않아야한다. 마스터시드로트또는제조용시드로트에서특정바이러스에대하여부정시험을수행한다. 특정 바이러스에대한종류는세포의기원, 계대방법, 특성에따라달라진다. 부정시험법에대한 시험 법을기술한다 제조용바이러스주제조를위한세포배양액에대한시험 -8-

12 제조용시드로트제조를위해사용되는세포배양액에대한세포및세포배양액에대하여기준및시험방법을설정한다 배양관찰시험 ( ) 혈구흡착바이러스부정시험 ( ) 확인시험 ( ) 외래성바이러스부정시험 ( ) 마이코플라스마부정시험 ( ) 제조용바이러스주에대한시험 확인시험 ( ) 무균시험 ( ) 마이코플라스마부정시험 ( ) 결핵균부정시험 검체를 2 개이상의 Loewenstein-Jensen 한천경사배지와 2 개이상의변형된 Dubos 배지에각각접종하여 37 에서 42 일간배양하였을때, 결핵균의발육이인정되지않아야 한다. 또는 CR326주검체의경우 Dubos배지에대한시험대신기니픽 10 마리에검체 0.5 ml을복강주사하고 42일간관찰하여결핵균의발육유무를판별하는동물시험을한 다. 결핵균인 Mycobacterium tuberoculosis의부정시험에관한시험방법을기술한다 외래성바이러스부정시험 ( ) 바이러스감염력시험 ( ) 2.3 세포주에대한시험 세포주에대한시험을마스터세포은행과제조용세포은행으로나뉘어각각기준및시험방법을기술한다 마스터세포은행에대한시험사람 2 배체세포유래의 MRC-5(ATCC N ) 를 계대배양한것을마스터세포은행으로한다 확인시험 동종효소분석법으로시험하여사람 2배체세포유래의 MRC-5 을확인한다. -9-

13 세포주를확인하기위하여사용되는표현형, 유전형적인특징을이용한시험법에관하여기술한다. 일반적으로세포주확인시험은 DNA finger printing, biochemical test (isoenzyme analysis 으로 malate dehydrogenase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, lactate dehydrogenase 등을이용 ), immunological test (histocomparability), cytogenetic analysis (karyotype idnetification 등) 등이있다. 주로마스터세포은행단계에서시행하고, 부가적으로제조용세포은행에서시험을수행하기도한다 무균시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다 마이코플라스마부정시험대한약전마이코플라스마부정시험법에따르며이에적합하여야한다 결핵균부정시험대한약전결핵균부정시험법에따르며이에적합하여야한다 외래성바이러스부정시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다 레트로바이러스및내인성바이러스부정시험 역전사효소활성부정시험제조사의역전사효소활성부정시험법으로시험한다 ( ). 레트로바이러스에대하여 ---- 음성이어야한다. 레트로바이러스에의한오염을부정하는시험법에대하여기술한다. PBRT (PCR-based reverse transcriptase) 시험법등역전사효소활성측정법과 indicator cell을이용한 infectivity test가이용될수있다. 만약전통적인 PCR 을사용한경우에는민감도에차이가없음을나타내야한다 전자현미경확인시험전자현미경으로시험한다 ( 에대하여---- 음성이어야한다. ). 레트로바이러스 세포주에대하여외래성바이러스가존재하지않음을입증하는전자현미경확인시험법을기술한다. 이는세포내에레트로바이러스의 particle을검사하기위해실시한다. 세포의초박막절편, 음성염색(negative staining) 으로확인한다 바이러스부정시험제조사의 바이러스부정시험으로시험한다 ( ) 세포주의특성에따라서 바이러스가없음을증명하는시험법을기술한다 핵형분석시험제조사의핵형분석시험법으로시험한다 ( 로트의 염색체표본을작성하여염색체의이상이나타나지않아야한다. ) 같은 제조용세포가계대배양을통하여유전적인변이가일어나지않았음을확인하는시험법을기술한다. 시험방법으로는배수성시험, 형태학적구조( 염색체의기형및절단여부등) 등이있다 종양형성능부정시험제조사의종양형성능부정시험법으로시험한다 ( ). -10-

14 관찰기간이완료된대조배양세포에 ---- 종양발생이없어야한다. 종양형성능 ( 종양유발성, tumorigenicity) 에관한시험은마스터또는제조용세포은행단계에서는반드시수행되어야한다. 그리고, End-of-production-passage-level-cells(EOPC) 단계에서도이를확인하여야한다. Tumorigenicity test 에사용되는시험법( 주로 T-cell이결핍된 newborn nude(nu/nu) mice 를이용에대하여기술한다 ) 제조용세포은행에대한시험마스터세포은행을무혈청성장배지에서 3 대계대배양한것을제조용세포주은행으로한다. 마스터세포은행에설정된시험항목중제조사및제품의특성을고려하여제조용세포은행에대한시험으로설정한다 확인시험 동종효소분석법으로시험하여마스터세포은행의사람 2배체세포유래의 MRC-5와같아야한다. 무균시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다. 마이코플라스마부정시험대한약전마이코플라스마부정시험법에따르며이에적합하여야한다. 결핵균부정시험대한약전결핵균부정시험법에따르며이에적합하여야한다. 외래성바이러스부정시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다 생산종료세포에대한시험마스터세포은행으로부터계대이상으로계대배양하여확인시험, 무균시험, 마이코플라스마부정시험, 결핵균부정시험, 외래성바이러스부정시험, 종양형성능부정시험을수행한다. 생산종료세포(End of production) 에대해서마스터세포은행또는제조용세포은행으로부터 계대이상배양한후시험을수행하고기준을설정한다 확인시험 동종효소분석법으로시험하여마스터세포은행의사람 2배체세포유래의 MRC-5와같아야한다 무균시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다 마이코플라스마부정시험대한약전마이코플라스마부정시험법에따르며이에적합하여야한다 결핵균부정시험대한약전결핵균부정시험법에따르며이에적합하여야한다 외래성바이러스부정시험대한약전무균시험법에따르며이에적합하여야한다 레트로바이러스및내인성바이러스부정시험 -11-

15 역전사효소활성부정시험제조사의역전사효소활성부정시험법으로시험한다 ( ). 레트로바이러스에대하여 ---- 음성이어야한다 종양형성능부정시험제조사의종양형성능부정시험법으로시험한다 ( ). 관찰기간이완료된대조배양세포에 ---- 종양발생이없어야한다. 2.4 원액 세포배양세포를세포증식용배양액에서증식시킨것을세포배양으로한다. 다만, 제조자세포은행 (MWCB) 으로부터 35 대이상계대한것을사용해서는안된다. 세포배양에대해서는 항의시험을하여야한다. 대조세포배양에사용되는검체량과배양기간을명기한다. 대조세포배양시험은제조공정과동일하나다만바이러스를배양하지않고외래성바이러스의유무를확인하기위함이다. 시험은 haemadsorbing viruses, 기타오염인자등에대한시험이포함된다 바이러스부유액 세포배양에바이러스를접종하여 31 ~ 33 에서 4주정도증식시킨다음그추출액을모은 것을바이러스부유액으로하고, 분주하여 -70 에동결보존한다. 바이러스부유액에대해서는 항의시험을하여야한다 정제 바이러스부유액을누클레아제(Nuclease) 처리, 포획칼럼크로마토그라피(Capture Column Chromatography), PEG 침전, 클로로포름처리, 음이온크로마토그라피, Size Exclusion Chromatography 를 거쳐 정제한다. 이 때 바이러스정제액의 항원/ 단백함량비는 0.44 ~ 1.26 으로하여바이러스정제액으로하고, 바이러스정제액에대해서는 항의시험을하여 야한다 불활화 바이러스정제액을포름알데히드로불활화시킨후여과제균한것을원액으로하고, 원액에대 해서는 항의시험을실시하여야한다. ph를 6.8 ~ 7.2로조정하고 2 ~ 8 에보존한 다. 원액에대한개체별세포배양, 바이러스부유액, 정제, 불활화등의제조방법을서술하고, 각단계 의이름을정의한다. 2.5 원액에대한시험 세포배양에대한시험 배양관찰 항에따라시험한다. 다만관찰기간은 21 일이상으로한다. 관찰기간이완료된대 조세포배양에대해서는 항및 항의시험을하여야한다. -12-

16 세포주의대조세포(control cell) 배양관찰에관한시험방법을기술한다. 일반적으로백신생산시사용되는배양액 500 ml 또는전체세포배양액의 5% 해당량을취하여바이러스를감염시키지않은상태로세포배양을실시한다. 만약제조공정이 chick embryo를이용한경우에는 control cell 대신에 control egg(2% 또는부화란 20 개) 을사용한다 혈구흡착바이러스부정시험관찰기간이완료된 1/4 ~ 1/3의대조세포배양에행크스용액으로기니픽적혈구용액을 0.2% 로조절하여첨가한다. 0 ~ 4 에서 45분간배양하고다시 20 ~ 25 에서 30분간더배양할때흡착을일으키지않아야한다. 21일간의배양관찰이종료후, haemadsorbing viruses 시험을위하여혈구흡착시험을실시하고 기술한다 외래성바이러스부정시험 항에따라시험한다. 다만, 세포변성시험시검체와배양액의비율은 1 : 3을넘지않도록한다. 마이코플라스마부정시험대한약전마이코플라스마부정시험법에따르며이에적합하여야한다. 확인시험 항에따른다. 배양세포를이용한세포주가백신제조에사용되는세포임을확인하는시험법에대하여기술한다 무균시험대한약전무균시험법에따라시험할때이에적합하여야한다 바이러스부유액의시험 마이코플라스마부정시험대한약전마이코플라스마부정시험법에따라시험할때이에적합하여야한다 무균시험대한약전무균시험법에따라시험할때이에적합하여야한다 외래성인자부정시험검체 50mL이상을사람 2 배체세포에접종하여 14 일이상관찰한다. 이때외래성인자에의한이상을보여서는안된다. 다만, 접종면적은검체 1mL당 3cm 2 이상으로한다. 이때필요하면검체를 A형간염바이러스면역혈청으로처리하여바이러스를중화한후시험한다 바이러스확인시험검체를항HAV 혈청과 36 ~ 38 에서 3시간반응시킨후 ELISA 로확인한다 항원가측정시험정제항-HAV IgG와 A형간염바이러스표준품을이용하여 A형간염항체와결합하는항원가를측정하는 ELISA로시험할때항원가는 35 EL.U/mL 이상이어야한다 결핵균부정시험 항에따라시험한다 바이러스정제액에대한시험바이러스정제액은 ~ 항에대해시험한다. -13-

17 항원가측정시험 정제항 HAV IgG와정제불활화 A형간염바이러스표준품및대조표준백신을이용하여 A형 간염항체와 결합하는 항원가를 측정하는 ELISA법으로 시험할 때 항원가가 450 EL.U/0.1mL 이상이어야한다. 단백질함량시험 소혈청알부민을표준품으로하여마이크로 BCA 법으로 (Pierce사의마이크로 BCA단백질 검사용킷트이용) 시험할때, 단백질함량은 1 ml 중 60 ug 이하이어야한다. 잔류소혈청단백함량시험 세포배양에소혈청일부민을사용한경우에시험법및검출한도를설정한다. WHO 규정에의하면동물혈청알부민은 1회접종용량당 50 ng 이하로감소되어야한다. 혈청단백질농도는무혈청배지로세포배양을세척하는방법이나바이러액을정제함에의해서이기준수준아래로낮춰야한다. 한편, 정제의일관성에대하여기술해야한다. 각로트는잔류마커물질에대해서제거정도를모니터해야한다. 혈청알부민과같은물질이잔류마커물질로사용될수있으나, 다른성분이적절한경우잔류마커물질로사용할수있다 잔류소혈청알부민함량시험 소혈청에대한토끼항혈청과표준품( 소혈청알부민) 을이용하여 ELISA법으로시험할때 소혈청알부민의함량은바이러스항원가 720 EL.U. 당 4 ng 이하이어야한다 잔류소혈청면역글로블린함량시험 소혈청에대한염소항면역글로블린과표준품( 소면역글로블린) 을이용하여 ELISA법으 로시험할때소면역글로블린의함량은바이러스항원가 720 EL.U. 당 3 ng 이하이어 야한다 MRC-5 세포유래 DNA 함량시험 페놀추출법으로단백질및기타이물질을제거한다음표지된상보적 DNA 단일서열을이용 한 DNA-DNA slot blot법에따라시험하였을때 DNA함량은 720 EL.U. 당 100 pg 이하 이어야한다. WHO 규정에의하면세포배양을통해생산된백신의경우숙주유래 DNA의상한기준은 1회접종용량당 100 pg 이하로설정하여야한다. (IPV의경우 10 ng/1 회접종용량) 이시험은제조공정이이수준에적합한밸리데이션이수행된경우생략가능 High Performance Size Exclusion Chromatography(HPSEC) 순도시험 A형간염바이러스표준품을 46.8 ~ 2.93 ug/ml의농도로 0.12 mol/l NaCl 인산염완충 액으로 2 배연속희석한다. 표준액및검액으로다음조건에서고속액체크로마토그래프법에 따라시험한다. 칼 럼 : TSK-GEL G4000PW(7.8 mm id x 30cm) 가드칼럼 : TSK-GEL GuardcolumnPW(7.8 mm id x 4cm) 이동상: 0.12 mol/l NaCl 인산염완충액(6 mm, ph7.2) 유 속 : 0.32 ml/min 검출파장 : 214 mm 주입량 :320uL 표준액의농도별피이크면적으로검량선을작성하고유지시간약 22분에서나타나는 A형 간염항원피이크의면적으로부터검액중의 A 형간염바이러스함량을구한다. -14-

18 항원/ 단백비 로부터산출한항원함량(ug/mL) 및 로부터산출한 A형간염바이러스함량 (ug/ml) 으로부터다음과같이계산하였을때항원단백비는 / 0.44 ~ 1.26 이어야한다. 항원/ 단백비 = 항원함량 (ug/ml)/a 형간염바이러스함량(ug/mL) 항원의함량(ug/mL) 은 에서구한항원의함량(units/mL) 1000 으로구하며, unit 이라는단위는 ELISA 분석시표준곡선으로부터계산되는항원의양을나타내는단위이다 Polyacryamide Gel Electrophoresis (PAGE) 확인시험 분자량대조표준품과검체에대하여각각약 8.89, 15.4 ug/ml의농도로희석한후 60uL 씩 Acrylamide Gel을이용하여전기영동법에따라시험할때분자량 29 KD 부근에서 4 개의주밴드가확인되어야한다 잔류항생제함량시험 표준품( 황산네오마이신) 을이용하여 Gel diffusion법으로시험할때잔류항생제함량이 ml당 5.0 ug 이하이어야한다 무균시험 대한약전무균시험법에따라시험할때이에적합하여야한다 바이러스주의항원가측정 항에따른다 원액에대한시험 불활화시험 불활화과정 10 일째, 14일째에인체투여량 750분에해당하는양이상의검체를취하여잔류 포름알데히드를황산수소나트륨을가해중화시킨다음배양액으로 1/4로희석하여 MRC-5 세포배양에접종한다. ( 배양액은저해인자가없는소태아혈청을함유하는 배지를 사용한다.) MRC-5 세포배양액을음성대조로하고, 감염성있는 A형간염바이러스를접종한 것을양성대조로하여비교시험한다. 34 ~ 36 에서 35일간 1차계대배양한다음 36일 째에트립신처리를하고 1/2을 5 Leighton튜브에넣어 43 일째/46일째에형광현미경으로 관찰한다. 나머지 1/2의검체는다시 2개의 MRC-5세포배양에서 1차와동일한조건하에서 2차계대배양한다음 71일째에 1개의세포배양에서세포를추출하여 5 Leighton튜브에 접종하여 78 일째/81 일째에형광현미경으로관찰한다. 나머지 1개의세포배양액은트립신처 리하고원심분리하여농축시킨다음녹이고얼리는과정을반복하여세포를붕괴시킨다. 이 렇게얻은세포용해물을다시 MRC-5세포배양에서 21일배양하고녹이고얼리는과정을 반복하여얻은세포용해물을가지고 ELISA법으로시험할때잔존하는 A형간염바이러스 가확인되지않아야한다 항원가측정시험 항에따른다 무균시험 대한약전무균시험법에따라시험할때이에적합하여야한다 엔도톡신시험 대한약전엔도톡신시험법에따라시험할때함량은 1mL중 10 IU 미만이어야한다 포름알데히드함량시험 생기의포름알데히드정량법에따라시험할때함량은 1mL중 290~520ug 이어야한다. -15-

19 2. 불활화바이러스백신의제조방법 불활화바이러스백신의제조방법은제조방법요약, 바이러스주, 세포주, 원액, 최종원액, 완제의약품, 제조지, 제조공정흐름도로구분된다. 작성은제조사의제조방법을기본으로하여과학적으로타당하게작성한다. 제조공정에사용되는명칭은 WHO 등에서사용되는것을기본으로사용한다( 만약관련자료가없는경우는다른것과혼동을주지않고대표성을나타낼수있는명칭을사용하여야한다.) [ 예시] 주(A 형간염백신) 의제조방법 < 제조방법 > A 형간염백신인 주(A 형간염백신) 은백신제조에적합하다고인정한 주와사람이배체세포인 세포에서배양하여무균적으로얻은생물학적제제로 A 형간염예방에사용된다. 이때배양된 A형간염바이러스를정제한후불활화하여원액을제조하고, 여기에항원성이유지되도록안정제인 을첨가하여최종원액을제조한후, 이를충진하였을때약간백탁의액상제제이다. 상단에는제품명칭을기재한다. 그리고제품의특징및제조방법에대하여요약하여기재한다. 이때 주라는제품명을기재하고, 제품생산에사용된바이러스주, 세포주, 안정제, 항생제등에관한사항을기재한다. 1. 바이러스주(Virus seed lot) 백신생산에는바이러스인 주를사용하며, 이때제조되는바이러스주는시드로트시스템(seed lot system) 을이용하여제조및관리된다. 이때제조용시드로트(working seed lot) 는마스터바이러스주(master seed virus) 로부터 계대이내에서사용하고, 제조용시드로트(working seed virus) 로부터생산까지는 계대이내를사용한다. 바이러스주에 seed lot system 의관리에대하여서술하고, 계대력을설정한다. 1.1 마스터시드바이러스의제조 마스터시드바이러스(master seed virus) 제조에사용되는바이러스인 는사람이배체세포인 와배양액인 을이용하여배양하였다. 이때의배양은 -- 시간( 배양온도는 -- ) 동안배양한다. 계 대수는 이내에사용한다. 마스터시드로트제조의배양조건을기재하고, 필요시배양에사용되는항생제의명칭과농도를기재한다. 그리고계대수를설정한다. 동물유래의초대배양세포를이용하여 seed lot을만든경우에는동물종이 SPF 임이언급되어있어야한다. 1.2 제조용시드바이러스의제조 -16-

20 제조용시드바이러스는마스터시드바이러스로부터 계대이내에사용한다. 이러스를이용하여백신제조는 계대이내에사용한다. 그리고제조용시드바 제조용시드로트의배양조건이마스터시드로트의배양조건이다른경우에는이를기술하고, 대수를기술한다. 계 1.3 바이러스주의수확각시드바이러스주를배양한후 을처리하여바이러스배양액을수확하고무균적으로샘플 을취하여바이러스시드로트에대한 시험, 부정시험, 확인시험, 무균시험, 마이코플라스마부정시험등을거쳐백신제조에적합하다고인정한후에계대를실시한다. 바이러스주를마스터시드로트에서제조용시드로트를만드는과정을소개하고, 바이러스주의수확에사용되는방법을서술하고, 바이러스주에서확인하여야하는오염물질부정이확인의과정을거쳐백신제조에적합함을인정한후계대를실시함을기술한다. 1.4 분주, 밀봉과표시 모아진바이러스부유액을무균적으로멸균된바이알에넣어밀봉한다. 각바이알에로트번호, 명 칭, 제조일, 계대수등을기재한다. 필요시바이러스주의밀봉과표시사항에대하여기재할수있다. 1.5 보관위의각바이알은 -70±5 의초저온냉동고에나누어져보관되며각관리대장(batch process sheet), 로트번호등세부사항을기록하여함께보관한다. 바이러스주의보관조건을기재한다. 마스터와제조용시드로트별로보관조건이다른경우에는각각기재한다. 일반적으로보관하고자하는바이알수량이많은경우에는동결건조하여 -20 에보관하기도한다. 2. 종세포(Cell bank) 백신생산에는세포주인 를사용하며, 이때제조되는종세포는세포은행시스템(cell bank system) 을이용하여제조및관리된다. 이때제조용세포은행(working cell bank) 은마스터세포은행 (master cell bank) 으로부터 계대이내에서사용하고, 제조용세포은행(working cell bank) 으로부터생산까지는 계대이내를사용한다. 종세포주 cell bank system 의관리에대하여서술하고, 계대력을기술한다. 2.1 마스터세포은행(master cell bank) 바이러스배양에사용되는종세포는사람이배체세포인 를 로부터얻어져백신제조에적합하다고인정된세포를사용한다. 이때사용된배양액은 을이용하여배양하였다. 이때의배양은 -- 시간( 배양온도는 -- ) 동안배양한다. 계대수는 이내에사용한다. -17-

21 마스터세포은행의유래, 배양조건에대하여서술하고, 계대력을설정한다. 바이러스배양에계태아를사용한경우는부화란이 SPF 임을기술하여야한다. 2.2 제조용세포은행 (working cell bank) 제조용세포은앵은마스터세포은행로부터 계대이내의세포를사용하고, 백신제조시에는제조 용세포은행으로부터 계대이내의세포주을사용한다. 제조용세포은행의배양조건이마스터세포은행과배양조건이다른경우에는이를기술하고, 수를기술한다. 계대 2.3 종세포의수확각세포를배양한후트립신을처리하여세포를수확하고, 무균적으로샘플을취하여종세포에대한확인시험, 시험, 부정시험, 무균시험등을거쳐백신제조에적합하다고인정한후에계대를실시한다. 마스터또는제조용세포은행의제조과정을기술하고, 종세포의수확에사용되는방법을서술하고, 세포에서확인하여야하는오염인자부정을확인하여백신제조에적합함이인정된후계대를실시함을기술한다. 2.4 분주및밀봉과표시 모아진종세포를무균적으로멸균된바이알에넣어밀봉한다. 각바이알에로트번호, 명칭, 제조 일, 계대수등을기재한다. 필요시종세포의밀봉과표시사항에대하여기재할수있다. 2.5 보관위의각바이알을 -70±5 의초저온냉동고에나누어져보관하며, 보관에관한세부사항을기록한다. 종세포의보관조건을기재한다. 세포은행별로보관조건이다른경우에는각각기재한다. 3. 배양액 3.1 세포배양액세포배양액은세포증식에적합한배양액인 을사용한다. 이배양액에는혈청으로 을사용하고, 페놀렛을 --- 농도로첨가하고, 항생제는 를 --- 농도로첨가한다. 3.2 세포증식에필요한배양액의조성에대하여기술한다. 항생제는최소한의농도로사용하여야하며, 페니실린등의사용은제한되어있고, 사람유래의혈청은사용이제한되어있다. 만약이를사용시는이에대한사유를기술하여야한다. 바이러스배양액 바이러스배양액은바이러스증식에적합한배양액인 을사용한다. 이배양액에는항생제로 를 -18-

22 --- 농도로첨가한다. 바이러스증식에필요한배양액의조성에대하여기술한다. 바이러스배양시는세포배양과달리이종혈청을사용하지않으므로, 이종혈청의사용시는그사유에대하여기술한다. 4. 원액동결보존한제조용세포가들어있는바이알 1개또는 2개를혼합하여계대배양한배양세포를개체 별배양세포라한다. 배양된세포에제조용바이러스를 M.O.I. 로접종하여 --- 에서 ---시간 배양한다. 이때에 roller bottle 등 용기로바이러스를배양한다. 배양이끝난개체별바이러스부 유액을물리적, 화학적, 생물학적등의정제처리를하고, 바이러스를불활하하여이를원액으로한다. 원액의제조방법에대하여기술한다. 이때는배양세포및바이러스부유액에대한명칭을사용하 여제조방법작성을명료하게한다. 배양세포에접종하는바이러스의농도를 M.O.I(multiplicity of infection) 로표기한다. 4.1 세포배양제조용세포가보관되어있는초저온냉동고에서세포를꺼내어신속히해동하여세포배양에적합한 용기에배양액 를첨가하여, --- 에서 --- 시간배양한다. 다만제조용세포은행으로부터 대이상계대한것을사용해서는안된다. 이때대조세포(control cell) 배양실험에사용되도록 ml 을취하여배양관찰, 외래성바이러스부정시험, 혈구흡착부정시험등을실험하여바이러스배양에적합함을확인한다. 원액제조에필요한제조용세포의제조에필요한배양조건을기술하고, 이때에대조세포에대한 실험방법에대하여기술한다. 계태아를이용한백신제조의경우에는 control egg에대하여기술 한다. 4.2 바이러스부유액의제조및수확배양세포에바이러스를 M.O.I. 로접종하여 --- 에서 --- 시간배양한다. 배양이종료된바이러스부유액을얻기위하여원심분리하여상등액을수확한다. 제조용바이러스를제조용세포에접종조건및배양조건을기재하고, 는방법에대하여기술한다. 바이러스부유액을수확하 4.3 바이러스부유액의정제바이러스부유액을누클레아제(Nuclease) 처리, 포획칼럼크로마토그라피(Capture Column Chromatography), PEG 침전, 클로로포름처리, 음이온크로마토그라피, Size Exclusion Chromatography 를거쳐정제하여이를바이러스정제액이라명명한다. 바이러스부유액에대한정제과정에대하여단계적으로기술한다. 4.4 바이러스정제액의불활화 바이러스정제액을을포름알데히드로 --- 에서 ---시간불활화시킨후여과제균한것을원액 -19-

23 으로하고,pH를 6.8 ~ 7.2 로조정한다. 이때의바이러스항원가는 ---ng/ ml 이상이어야한다. 바이러스정제액에대한불활화과정에대하여기술한다. 사용하는불활화제에대하여기술한다. 불활화과정에대한상세기술을하고 4.5 보관얻어진원액을 에서보관한다. 최종원액조제전까지의원액의보관조건을명기한다. 일반적으로 -70 이하의초저온냉동고에보 관하는것이일반적이다. 5. 최종원액동결보관시켰던불활화 A형간염바이러스항원을해동시켜한외여과를통해포름알데히드잔여물을제거한후, 여기에안정제로 를 --- 농도로첨가하고, 적당량의희석액인 로희석한것을최종원액이라하고, 사용전까지보관온도 가유지되도록한다. 이때최종원액의바이러스함량은---ug/ ml 이상이어야한다. 최종원액의제조대하여서술하고, 여기에첨가되는안정제와희석액의명칭을기재하고, 보관온도에대하여기재한다. 항생제의첨가는제한하고있으므로첨가시에는명칭과최종농도를기술하여야한다. 6. 완제의약품냉장상태에서최종원액을바이알에무균충진한다. 완제의약품의제조방법에대하여기술한다. 만약, 최종원액을수입한경우( 이동) 는최종원액제조사, 수입( 이동) 시의보관조건, 완제의약품제조지를명기한다. 7. 제조지 7.1 원액및최종원액제조지 ABC Inc , USA 7.2 완제의약품제조지 ( 주) 식약청, 서울시은평구녹번동 5번지 원액, 최종원액및완제의약품제조사명칭및주소를기재한다. 만약제조단계별로제조지가다른경우는각각기재한다. 8. 제조공정흐름도 제조사의바이러스주, 세포주, 원액, 최종원액, 완제의약품까지의제조공정도를 QC-test ( 가능한 in-process control 이포함되도록) 가포함되도록흐름도로작성한다. 그리고충진또는동결건조과정도포함하여야한다. 이경우는하나의흐름도로작성이어려운경우는바이러스주, 세포주, 원액- 완제의약품공정으로나뉘어기술하여도된다. -20-

24 3. 불활화바이러스백신의기준및시험방법작성요령 시험항목및그기준은제품을개발한제조사의기준및시험방법을기반으로하되, WHO 와유럽약전(EP) 등공정서등을참고로작성한다. 이때제조사의제조공정( 또는시험성적서) 에표기되어있는시험법이포함되어야한다. 그러나기본적으로생기의기본틀을유지하여작성하여야한다. 작성시제조방법에언급된내용( 명칭) 과기준에언급된내용이일관성을유지하여야한다. 시험방법은기본적으로제조사의시험법을기반으로작성하는데그범위는명칭, 시험방법에대한원리( 또는 principle), 간략한시험방법, 판정값으로구분된다. - 공정서에언급된시험법인경우는근거공정서를명기 - 제조사의 SOP에언급되어있는시험방법을간략히서술 - 표준품을사용한경우는그명칭등, - 시험법의끝에는시험결과판정기준또는결과값을명기 작성방법은다음과같이 A 형간염백신을그예로해당부분에설명을기재하였다. -21-

25 [ 예시] 주(A 형간염백신) Hepatitis A Vaccine (Inactivated) 1. 정의 1.1 명칭이제제는 주(A 형간염백신) 이라한다. 1.2 제제이제제는불활화한 A 형간염바이러스항원을함유하는약간백탁의액상제제이다. 제제의특성을제조방법과성상에대하여서술한다. 2. 제조방법및시험기준 2.1 최종원액원액을수산화알루미늄겔에흡착시킨후보존제로서 및안정제로서 를가하고 완충액으로 ph 6.8 ~ 7.2이면서바이러스항원가가 720EL.U/mL 이상되도록한다. 최종원액의제조과정을간략하게서술한다. 이때보존제, 흡착제및안정제(sucrose, gelatin 등) 를사용한경우는해당사항을기재한다. 일본의경우는최종원액단계에서의항생제사용을제한하고있다 최종원액에대한시험 무균시험대한약전의무균시험법에따르며, 이에적합하여야한다 포름알데히드함량시험생물학적제제기준및시험방법( 이하 생기 라한다) 의포름알데히드함정량법에따르며, 0.01 w/v% 이하이어야한다 페녹시에탄올함량시험 항에따라시험하고, 이에적합하여야한다 역가시험 항에따라시험하고, 이에적합하여야한다 ph 측정시험대한약전의 ph 측정법에따르며, 6.8 ~ 7.5 이어야한다 확인시험알루미늄을제거한검체를항-HAV 혈청으로중화시킨후인산염완충액으로단계희석하여검액으로한다. 따로표준품을단계희석한후, 검액 표준액 공시험액( 희석액) 을각각 ELISA 로항원가를측정한다 폴리소르베이트 80 함량시험 6 개의용혈튜브(haemolysis tube) 에검체와표준액( 폴리소르베이트80) 을 6 단계( 표준액기 준 0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5) 로 1 ml을만들고전분표준액 1 ml씩넣은후실온에서

26 분간방치한다음요오드용액을 1.0 ml씩넣어흔들고 15분간방치한다음분광광도계로측정하였을때폴리소르베이트 80의함량은 0.5 ml당 750 ug 이하이어야한다. 제조단계에서폴리소르베이트 80 을사용한경우시험법에대하여기술한다. 완제의약품에남아있는생산에사용된유기용매와불활화제는승인된방법으로함량을시험해야하며그함량의상한이설정되어야한다. 2.2 완제의약품 공정서의시험법이아닌제조사의시험법인경우자세히서술한다. 항원에 adjuvant 가흡착되어있는경우, 흡착도시험에대한기준과시험방법이설정되어야한다. 완제의약품이동결건조제제인경우, 함습도시험이수행되어야하며, 그상한이설정되어야한다 ph 측정시험대한약전의 ph 측정법에따르며, 6.8 ~ 7.5 이어야한다 무균시험생기의일반시험법중무균시험법에따르며, 이에적합하여야한다. 2,2.3 엔도톡신시험대한약전의엔도톡신시험법( 비색법) 에따르며, 1회접종량당 2 IU 이하이어야한다 이상독성부정시험생기의이상독성부정시험법에따르며, 이에적합하여야한다 알루미늄함량시험생기의알루미늄정량법에따르며, 함량은 1 ml 중, 0.62 mg 이하이어야한다. 알루미늄염이사용되는경우접종용량당 1.25 mg 를초과할수없다 포름알데히드함량시험생기의포름알데히드함정량법에따르며, 0.01 w/v% 이하이어야한다 페녹시에탄올함량시험 HPLC용 C18컬럼을사용하여물과아세토니트릴을 50 : 50 (v : v) 의비율로섞은용매로상온에서유속 1 ml/min 주입량 10 ul로하여 UV분광광도계 270 nm에서측정할때함량은 1 ml중 4 ~ 6 mg 이어야한다 동정시험 A 형간염항체와반응시켰을때특이적인반응을나타내야한다. 이경우 2.2.9항의역가시험으로대체할수있다. 면역학적반응에의한시험이완제의약품에서수행한다. 역가시험이동정시험을대체할수있다 역가시험검체 4 ml을 4,000 rpm에서 10분동안원심분리한후침전액에 0.11%-EDTA 0.1%-트윈 20(Tween20) 0.1%- 젤라틴(pH 8.5) 등을함유하는 0.4 mol/l-인산일수소나트륨완충액을취해따로보관한다. 침전액에대해상기추출조작을 3 차까지반복하며 3 차의추출시간은하룻밤으로한다. 1, 2, 3 차추출하여얻은상등액을혼합하여 Ca 및 Mg를함유하지않은 PBS 5 ml(0.1% 트윈 20, 0.1% 젤라틴함유) 로희석한다. 이때표준품도이와동일하게조 작한다. 상기와같이 A형간염항원을추출후 ELISA법등으로 A형간염항체와결합하는항 -23-

27 원가를측정하여표준품과비교할때검체의비교역가는 임상시험에유효성을증명한근거에의하여역가기준을설정한다. 85 ~ 130% 이내이어야한다. 3. 기타생기의제제규칙제제규칙 3.1 표시사항 사용전충분히흔들것이란문자 7. 용기및포장의표시항에규정된사항과다음사항을기재하여야한다. -24-

28 4. 불활화바이러스백신의자가기준및시험방법심사의뢰자료제출범위 < 기허가제품의경우> 의약품등기준및시험방법심사의뢰서심사규정( 식약청고시제 호( ) 중제 18 조( 생물학적제제의제출자료의요건) 에따라제출하여야한다. 기허가받은제품의자사기준및시험방법인경우는일부자료제출을생략할수있다. 제출자료의범위및여부 번호제출자료재출여부비고 1 기원또는발견의경위및외국에서의사용현황 생략 2 제조방법및특성 제출 3 구조결정및물리화학적성질 일부제출 4 표준품의설정근거, 규격및관리에대한자료 제출 5 시험방법및시험결과에관한자료 일부제출 6 외국의허가현황 생략 7 기타 WHO guideline 및공정서수재내용등의자료 생략 가. 제조방법및특성 1) 제조용바이러스주및종세포의유래및특성 - 제조에사용되는바이러스주및종세포의유래및특성에관한자료( 만약, 외부기관에서분양받은경우는분양사실을입증하는자료 ) -Virusseedlot 에대한제조과정및관리에관한자료( 최대계대력설정에대한근거자료포함) -Cellbank 에대한제조과정및관리에관한자료( 최대계대력설정에대한근거자료포함) - 동물유래초대배양세포배양에사용되는동물의기준및관리에관한자료 - 동물을이용하여바이러스를증식시키는백신의경우, 사용되는동물의기준및관리에관한자료 바이러스백신제조에동물을사용하는경우에는 제조용동물의사육및관리등에관한기준, 식품의약품안전청고시제 호( ) 에적합해야한다. 2) 제조용바이러스주및종세포의배양, 보존방법, 및그관리방법 - 각단계에서의바이러스주및종세포의배양조건 - 세포배양액의조성에관한자료로생물유래원료( 혈청, 트립신등) 의안전성관련자료 - 바이러스주및종세포의무균시험및위해인자( 마이코플라스마, 결핵균, 외래성바이러스등) 부정시험 에관한자료 3) 목적산물의생산, 분리및정제 -25-

29 - - - 제조공정에대한흐름도을포함하는제조방법에관한자료허가받은후의제조공정변경에따른타당성검증에관한자료기타아래의해당자료 제조방법은각제조단계별( 재료, 원액, 최종원액, 완제의약품) 로상세하게설명되어야한다. 특히바이러스주및종세포의생산, 제조및관리에관한사항, 백신생산에적합한계태아임을입증하는근거자료, 세포및바이러스배양액에사용되는원료물질에관한자료( 항생제사용여부, 소혈청및트립신의유래에관한자료등), 바이러스주및종세포의외래성오염인자부정시험에관한자료( 외래성바이러스, 마이코플라스마, 종양유발인자, 결핵균등), 원액단계에서의잔류물질 ( 배양에사용된소혈청알부민, 잔류세포등) 관리에관한자료, 정제에관한자료불순물검증 ( ), 불활화에관한자료( 불활화검증) 등제조공정에대한과정을설명하고이에대한관련자료를제출한다. 나. 구조결정및물리화학적성질 - 주요구성성분및그특성 - 부성분( 안정제, 흡착제) 및그특성 - 용제( 주사용수) 의규격에관한자료 - 물리 화학적성질( 제제특성에맞게제출) - 면역학적성질( 제제특성에맞게제출) - 생물학적성질( 제제특성에맞게제출) 다. 표준품의설정근거, 규격및관리에대한자료 - 역가및동정( 또는확인시험) 에사용된표준품( 항혈청및표준항원) - 제조사의이화학적시험에사용된표준물질에관한자료 규격에관한자료 라. 시험방법및시험결과에관한자료 - 제조공정에사용되는제조사의시험법 SOP( 주요시험법에대한 validation 자료첨부) - 제조사의원액( 원말), 최종원액및완제품에대한검증된시험법(validated methods) 으로 3로트이 상,1로트당1 회이상자가시험성적서단 (,3 로트이상판매된제제의경우는제외) -26-

30 5. 불활화바이러스백신의자가기준및시험방법심사의뢰자료제출범위 < 신규허가제품의경우> 의약품등기준및시험방법심사의뢰서심사규정( 식약청고시제 호( ) 중제 18 조( 생물학적제제의제출자료의요건) 에따라제출하여야한다. 불활화바이러스백신의심사시제출되는자료중재료( 바이러스주, 세포주, 배양액) 에관한자료와오염부정에관한자료가가장우선적으로검토된다. 특히 WHO 에서는세포주의주요한잠재적위해요소로 viruses. transmissible agents, cellular DNA, growth-promoting proteins 등에의한오염을강조하고있다. 제출자료의범위 번호제출자료비고 1 기원또는발견의경위및외국에서의사용현황 2 제조방법및특성 3 구조결정및물리화학적성질 4 표준품의설정근거, 규격및관리에대한자료 5 시험방법및시험결과에관한자료 6 외국의허가현황 7 기타 WHO guideline 및공정서수재내용등의자료 1. 기원또는발견의경위및외국에서의사용현황 : 관련질환의현황및개발경위 에관하여기재한다. 외국에서의개발중또는승인된동종의세균제제, 바이러스 제제및혈액제제가있는경우에는그사용현황, 과의비교등에대하여기재한다. - 해당제제의기원또는발견경위에대한자료 - 해당제품의개발경위( 제조사의제품개발의역사등) - 국내에이미허가된제품및외국제품과의특성을비교한자료 부작용의발생현황및각국제품 제제의기원또는발견경위에대한자료등을첨부한다. 만약자료가일반적인내용인경우와본안내서의첨부자료와동일한자료인경우는 1-2장정도로요약한것으로관련자료의추가제출을생략할수있다. 국내에이미허가된제품및외국제품과제품의특성을비교한자료를첨부한다. 완제의약품인경우외국에서의사용현황은제조국을포함하는외국의사용현황및최근 5 년간의생산량을첨부한다. -27-

31 2. 제조방법및특성가. 세균제제의제조방법 불활화바이러스백신은세균제제가아니므로생략한다. 나. 바이러스제제의제조방법 (1) 제조용바이러스주의유래및특성 ( 가) 바이러스주의기원과역사, 바이러스주의유래, 수집방법및계대력에관한 정보를기재한다. - 바이러스주의유래, 수집방법및계대력에관한자료 바이러스는제품생산의일관성유지를위하여 seed lot system 으로관리되어야한다. 백신제조에사용되는바이러스주의기원에대한자료로바이러스를분리시의환자약력등의자료, 분리방법및동정등에관한자료, 계대력에관한자료를제출한다. ( 나) 바이러스주의특성. 예로형태학적특성, 생화학적특성, 증식특성, 유전학적 특성, 면역학적표현형및목적산물의생산능등제조용바이러스주의성질 을기재한다. 특히약독화된경우에는약독화과정에관한자료및야생형 바이러스와약독화바이러스주를비교분석한자료를제출한다. 바이러스주의구조적인특징, 형태학적특성, 증식등바이러스의특성을설명하는데필요한자료를 제출한다. 바이러스주가유전적인변형(tissue tropism) 을한경우에는그과정에관한자료와야생 형과의비교분석자료( 유전적인차이, 증식특성의차이, 면역학적차이등) 를제출하여이를입증하 여야한다. (2) 제조용바이러스주의배양, 보존방법및그관리방법 ( 가) 마스터바이러스주의조제, 보존방법및그관리방법 - 마스터바이러스주(Master seed virus) 에대한제조과정및관리에관한자료 처음바이러스주를수집한이후의 master seed 에대한제조과정( 배지조성, 배양조건, 계대에관 한정보등) 및관리에관한자료를제출하여야한다. 이과정에사용되는시험법이포함되어야 한다. ( 나) 제조용바이러스주의조제, 보존방법및그관리방법 -28-

32 - 제조용시드로트를만드는제조과정및관리에관한자료 마스터시드로트를이용하여제조용시드로트를만드는제조과정및관리에관한자료를제출한다. 이과정에는사용되는시험법이포함되어야한다. Seed virus 제조과정에는항생제를사용할수있는데 beta-lactam 계열의항생제( 특히 penicillin) 는사용이제한되어있으며, 특히유럽약전의경우는제조공정중에 streptomycin 의사용도금지하고있다. 항생제를사용한경우는명칭과농도가표기된자료를첨부하여야한다. ( 다) 최대계대력한도설정을포함한제조용바이러스주에대한제조조건설정근 거를기재한다. - 제조용시드로트를만드는제조조건설정근거에관한자료( 계대력근거자료) 제조용바이러스주의최대계대력설정에관한자료, 제조조건을확립한근거자료등을제출한다. 제조에사용되는동안바이러스가유전적, 표현형적인 stability 를보여야한다. ( 라) 각단계에서바이러스주의배양조건을기재한다 - 각바이러스주의배양조건에관한자료 -SPF 동물에관한자료동물유래초대배양세포제조인경우 ( ) 바이러스배양시의배양조건등에관한자료를제출한다. 만약계태아초대배양세포인경우는사용되는부화란이 SPF 인것을사용하여야함으로이를입증하는자료를첨부하여야한다. ( 마) ( 가), ( 나) 및생산단계의바이러스에대하여세균, 마이코플라스마및진균 의오염을부정한다 -Virusseedlot및바이러스부유액에서의무균시험, 마이코플라스마및결핵균부정시험에관한자료 Virus seed lot 과생산단계( 바이러스부유액, 여과전바이러스부유액) 에서의무균시험및마이코플라스마부정시험, 결핵균부정시험에관한자료를제출한다. (3) 종세포의유래및특성 ( 가) 세포의기원과역사, 세포의유래, 수집방법및계대력에관한정보를기재한 다. 유럽약전의경우는 cell substrate를 4 단계로구분하여나뉘고있다. 맨처음세포를분리한 cell seed 단계, 백신생산에사용되는마스터세포은행, 제조용세포은행, 백신생산에허용된최대계대력의세포및그이후계대력의세포로나뉜다. 여기서는 cell seed에관한정보로백신제조에사용되는세포의기원에관한자료, 수집방법에관한자료( 환자의약력, 분리방법, 분양에관한자료등), 계대력에관한자료( 수집전과후의계대력에관한자료등) 가제출되어야한다. -29-

33 ( 나) 세포의특성. 예로세포형태학적특성, 증식특성, 세포유전학적성질, 면역학적표현형, 바이러스유전체(genome) 의존재, 종양성및목적산물의생산능등을기재한다. 사용되는세포의특성에관한자료를제출한다. 세포의확인에대한시험(isoenzymes, histocomparability, cytogenic markers, nucleic acid fingerprinting 등), 형태학적특징( 광학또는전자현미경을이용한시험), 이배체세포인경우는 karyotype에관한자료와최대계대력 (maximum population doubling level) 에관한정보를제출하여야한다. 그리고, 세포가계대배양을하면서일관되게백신생산에적합한 genetic stability 를나타내어야한다. 사람이배체세포인 MRC-5, WI-38, 원숭이이배체세포인 FRhL-2 은유전적인변이가적고, cell characterization 에관한자료가충분하므로추가로시험할필요가없다. 또한, 종양형성능이없다고알려져있다. 만약유전적인변이를유발한경우는제외된다. 2001년에미국은 continuous cell line의일종인 Vero 세포의마스터세포은행과이를이용한 End-of-productionpassage-level-cells (EOPC) 에서 immunosuppressed newborn Wistar rat를이용한 tumorigenicity 시험의필요성을제안하기도하였다. Vero cell은 WHO에서 1998년계대력 134 번째를마스터세포은행인 WHO Vero bank 10-87" 로지정하고, 제조사에분양을하여제조공정에사용하였다. 이때 WHO에서는최대계대력을 150 계대로인정하여, 계대력 134~150 계 대에서는 sterility, adventitious agents, tumorigenicity, reverse transcriptase, identity" 가 WHO 가정한생물학적제제제조용세포주로타당하다고인정하였다. 그러나 2002년영국에서개최된 WHO 의 Expert Committee on Biological Standardization" 에서는 WHO Vero bank 을마스터세포은행에서 cell seed" 로변경하였다. 이는제조사가 Vero cell을분양받아제조공정에사용시에는다른세포주와같이 master 또는 working cell bank에서 adventitious agents에대한시험으로 revers transcriptase(rt) 시험등을포함하는추가적인시험을수행하여야함을의미한다. 즉 cell substrate 에대한검증의필요성을언급한것이다. 그리고, 150 계대이상의계대에서제품을생산할경우에는 tumorigenicity 를추가로확인하라고권고하였다. (4) 종세포의조제, 배양, 보존방법및관리방법 ( 가) 마스터세포은행(Master cell bank) 의조제, 보존방법및그관리방법 종세포가 diploid cell lines 이거나 continuous cell lines인경우는 cell-bank system으로관리되어야하며, 만약동물초대배양세포인경우는제외된다. 종세포를수집한이후의 master cell bank 에대한제조과정( 배지조성, 배양조건, 계대에관한정보등) 및관리에관한자료를제출하여야한다. 이과정에사용되는시험법이포함되어야한다. 이보관조건에서세포의생존여부를확인하여야한다. ( 나) 제조용세포은행(Working cell bank) 의조제, 보존방법및그관리방법 마스터세포은행으로부터제조된제조용세포은향의조제, 보존방법및관리방법에관한자료를제출하여야한다. 이과정에사용되는시험법이포함되어야한다. 일반적으로제조용세포는마스터세포를 1-2 개를혼합하여제조하여사용한다. -30-

34 ( 다) 최대계대력한도설정을포함한제조용세포에대한제조조건설정근거를기재한다. 제조용세포주의제품생산에적합한최대계대력에대한한도를설정한자료를제출하여야한다. 이경우는각제조단계별로설정이되어있어야한다. 이때에는세포의 identity, purity, extraneous agents, tumorigenicity에대한시험결과가최대계대력을초과하거나이에상응하는계대력까지의자료가포함되어야한다. ( 라) 각단계에서세포의배양조건및배지조성에대하여기재한다. 생물유래또는생물학적원료성분을사용한경우에는시험성적서등안전성관련자료를제출한다. 제조단계별로사용된세포의배양조건( 배양온도, 시간등), 배지조성( 배지명칭, 혈청의종류및농도, 항생제첨가여부및농도등) 에관한자료를제출한다. 세포주의계대배양에사용된트립신과배지에포함된혈청은특정병원체가없음을입증하는원료공급사의성적서등관련자료를제출하여야한다. 트립신에는무균시험, 마이코플라스마부정시험, pestiviruses와 parvovirus 등이없어야한다. 소혈청인경우에는무균시험, 마이코플라스마부정시험, bovine diarrhoea virus, BSE 등이부재하여야한다. 이외에사용하고자하는배양액에아미노산이첨가된경우는 BSE 오염부재를보여주어야한다. ( 마) ( 가), ( 나) 및생산단계의세포에대하여세균, 마이코플라즈마및진균의오 염을부정한다. 제조단계별로사용된세포에대하여무균시험, 마이코플라스마부정시험, 결핵균부정시험이설정 되어있어야한다. ( 바) ( 가), ( 나) 및생산단계의세포에대하여그세포유래동물종의바이러스및 외래성바이러스가없는것을확인한다. 다만제거할수있는방법등의근거자료가있는경우에는제외한다. 초대배양세포와같이동물에서배양세포를제조하는경우는그동물종에있을수있는바이러스가없음을확인한다. 또한사람에병원성을나타낼가능성이있는바이러스가존재하는세포는사용하지아니한다. 제조단계별로내인성또는외인성바이러스의존재가부정되어야한다. 이러한바이러스의제거는현실적으로어려움으로오염의부정시험을제조단계별로사용된세포에대하여외래성오염인자부정시험, 무균시험, 마이코플라스마부정시험, 결핵균부정시험등이설정되어오염되지않았음을 입증하여야한다. 초대배양세포에사용되는동물은 SPF 인동물을사용하여야한다. -31-

35 ( 사) ( 가), ( 나) 및생산단계에서레트로바이러스등의내인성병원체의존재유무를감염성시험법, 역전사효소활성측정법및전자현미경관찰법등의적절한방법으로기재하며적당히유발처리를한세포에대해서도같은시험을한다. 종세포에레트로바이러스등의오염유무를역전사효소활성측정법등을이용하여존재를부정하여야한다. (5) 목적산물의생산, 분리및정제 ( 가) 제조공정을제조방법흐름도로설명한다. - 제조공정에관한자료( 흐름도포함) : 제조공정중의 QC ( 가능한 in-process control 포함) 에사용된시험법을병기 목적산물생산에대한제조공정을제조방법흐름도를포함하면서상세히서술한자료를제출하여야한다. 첨부자료의흐름도에는사용된바이러스주와세포주의계대력이포함되어야하며, 제조단계별제조공정이설명되어있고, 각공정마다수행하는 QC ( 가능한 in-process control이포함되도록) 에사용되는시험법을병기한다. ( 나) 제조공정중목적물의생산, 분리및정제에관한방법을기재하고검증자료 를제출한다. - 개체별배양세포의생산에관한자료 - 개체별바이러스부유액의생산에관한자료 - 원액의농축및정제에관한자료 제조방법은각제조단계별( 세포배양, 바이러스부유액, 바이러스정제액, 원액) 로상세하게설명되어 야한다. 원액의정제및농축과정( 배양세포의제거방법, 여과처리, 초고속원심분리등) 에대한자 료를제출한다. ( 다) - 제조과정에서원료로병원성미생물을사용하여제조할경우무독화과정을 기재한다. 불활화바이러스백신은불활화바이러스를사용하므로불활화공정및검증자료 A. A형간염바이러스불활화검증자료정제된원액 pools 안의바이러스는밸리데이션된방법으로불활화되어야한다. 불활화에대한 kinetics 가적합하게모니터되어야하며, 일관성있게효과적으로불활화됨을제조업자는기술하여제출하여야한다. 만약바이러스응집체(aggregates) 가존재한다면불활화이전에 제거되어야한고그방법이명시되어야있어야한다. (IPV는연속 5 로트에대해서불활화의 -32-

36 consistency 증명한다.) - 응집체를제거하기위하여화학적또는물리적단계를사용할수있다. - 불활화공정의일관성(consistency) 를높이는수단으로여과전바이러스상층액을여과 (filtration) 나응집침전(clarificication) 이명확하게확립되어있어야한다. 몇가지종류의 필터를가지고적합한결과는보고서로만들어져야한다. 최종여과는 0.2um 필터를사용 해야한다. - 여과전바이러스상층액을여과한다면, 24 시간이내에불활화를시작하는것이좋다. 이는 여과단계의목적이불활화공정의효과를감소시킬수있는입자성물질과다른간섭물 질을제거하기위함이고, 여과후여과물을정치시키면응집체가생성되는경향이있기때 문에이시간한계를지키도록해야한다.(IPV의경우 72 이산이내에수행.24 시간권고) - 포름알데히드를백신생산에있어불활화제로사용할수있다. 이경우포름알데히드함량 시험을설정해야한다. 포름알데히드처리와함께다른불활화방법의조합으로사용할수 있다. B. 외래성바이러스제거검증자료 B.1 적절한바이러스의선택 B.2 작은규모제조시스템 B.3 단계별(step-wise) 바이러스제거의분석 B.4 물리적제거(physical removal) 대불활화의결정 B.5 불활화의동력학(kinetics) B.6 연합효과(combined effects) 의평가 B.7 컬럼의재생(regeneration) B.8 특별한주의 불활화바이러스백신은불활화과정이포함되어있다. 이공정은 A형간염바이러스의불활화가주목적이지만, ( 나) 항의정제과정과함께불활화공정이외래성바이러스에대한제거에도역할을한다. 따라서, 위두가지자료에대한자료를제출한다. ( 라) 제조과정에서특수기술을이용하였을경우이에관련된자료를제출한다. - 특수기술사용에관한자료 세포배양및원액제조공정에특수한기술을사용한경우에는기술에관한설명자료, 사용경위, 장점등에관한자료를제출하여야하며, 사용된기술이제조방법에서술되어야한다. 다. 혈액제제의제조방법 불활화바이러스백신은혈액제제가아니므로생략한다. -33-

37 3. 구조결정및물리 화학적성질 제품의특성에맞는구조결정, 물리화학적인성질에관한자료를제출한다. 가. 구조및조성 (1) - 각제제에따른주요구성성분및그특성 제제내의주성분인바이러스구성성분및그특징에관한자료 주요구성성분인바이러스주의특성에대하여위에서언급한자료를간략하게기술한자료를첨부한다. 특히, 유전자재조합기술을이용한경우에는의약품의기준및시험방법심사의뢰서심사규정제24조l 항호의가 4. 구조조성에대한자료를제출한다. (2) 그외의부수적구성성분( 안정제, 흡착제등) 및그특성 - 주성분을제외한부수적인구성성분에관한자료 - 제품에사용된안정제( 또는희석액), 흡착제, 항생제등에관한자료 원료의약품분량으로제출한자료에언급되어있는사항이제조사의근거자료로입증되어야하며, 각구성성분이제제에서의특성및그역할에대하여서술한자료를제출한다. (3) 첨부용제의성분및그특성 - 동결건조제제에사용되는첨부용제애관한자료 불활화바이러스제제는주로동결건조제제가아니나, 성적서를제출한다. 동결건조인경우용제에대한성분및시험 나. 물리 화학적성질( 제제특성에따라적용한다.) 제품의특성에맞게물리, 화학적성질에대하여기술한해당자료를제출한다. 특히, 유전자재조합기술을이용한경우에는의약품의기준및시험방법심사의뢰서심사규정제24조l항4 호의나. 물리화학적성질에대한자료를제출한다. 다. 면역화학적성질 : 제제의특성에따라적당한면역화학적방법으로검토한다. 제품의면역학적특성에관한해당자료를제출한다. 불활화바이러스백신에의한면역학적특징을관련자료를제출한다. 특히, 유전자재조합기술을이용한경우에는의약품의기준및시험방법심사의뢰서심사규정제24조l항4 호의다. 면역화학적성질에대한자료를제출한다. 라. 생물학적성질 : 생물학적활성, 함량및순도( 비활성등) 등 -34-

38 제품의특성에맞게생물학적성질에관한자료를제출한다. 특히, 유전자재조합기술을이용한경우에는의약품의기준및시험방법심사의뢰서심사규정제24조l항4 호의라. 생물학적성질에대한자료를제출한다. 4. 표준품의설정근거, 규격및관리에대한자료 : 표준품의역가( 단위) 설정근거및 규격, 관리등에관한자료를첨부한다. - 바이러스함량및확인시험에사용된표준품에관한자료 - 제조사의이화학적시험에사용된표준물질에관한자료 불활화바이러스백신의역가시험등사용되는표준항원및표준항체에대한자료를제출한다. 제조사의시험법으로사용되는이화학적시험의경우표준물질을사용하는경우이표준물질에관한자료도제출한다. 5. 가. 시험방법및시험결과에관한자료 제조공정전단계에걸쳐일반적인시험방법자료및주요시험방법에대한밸 리데이션자료 - 제조공정에사용되는제조사의시험법 SOP - 주요시험법( 동정시험, 역가시험, 새로운시험법등) 의 validation 자료 바이러스주로부터완제품까지제조공정흐름도에언급된시험법의 SOP 를제출하여야하며, 필요시 in-process control에사용하는시험법에관한 SOP 를제출하여야한다. 만약최종원액수입후국내제조인경우에는완제의약품제조사의 SOP 도첨부하여야한다. 이때에주요시험법에대한 validation 자료를첨부하여야한다. 만약, 기존의시험법과다른방법으로수행한시험법도검증자료를제출하여야한다. 다만시험법이유럽약전등공정서에등재된시험법을사용한경우는제조사에적합한시험임을입증하는적합성시험을수행한자료를첨부할수있다. 나. 제조사의원액( 원말또는원획분), 최종원액및완제품에대한검증된시험법 - (validated methods) 으로 3 로트이상, 1로트당 1회이상자가시험성적서 제조사의자가시험성적서 제조사의자가시험성적서는원액에서완제의약품까지 3 로트이상, 1로트당 1회이상자가시험성적서를제출하여야한다. 이성적서에는바이러스주및세포주에관한시험성적이포함되어야한다. 다. 의뢰인의완제의약품에대하여국내에서수행된 3회이상자가시험성적서 -35-

39 - 의뢰인의완제의약품에대한자가시험성적서 완제의약품수입인경우의뢰인이국내에서수행한 3회이상의자가시험성적서를제출하여야한다. 이때의뢰인이설정하고자하는기준및시험방법에해당하는시험법에따라수행되어야한다. 6. 외국의허가현황 - 외국허가현황에관한자료 관련제제의외국허가현황에대한자료를첨부하여야한다. 7. 기타 WHO Guideline 및공정서수재내용등의자료 - 기준검토에필요한참고자료 기타기준및시험방법검토에도움이되는최근논문등을첨부한다. 5년이내의자료인경우와제품개발과관련한 -36-

40 첨부자료 1. 생물학적제제기준및시험방법-A 형간염백신 (2006) 일본뇌염백신 (2005) 신증후출혈열백신 (2005) 개량불활화폴리오백신 (2006) 2. 일본생물학적제제기준- 불활화바이러스백신( 번역본), EP, 2005 : 2005:1107 Hepatitis A vaccine(inactivated, Adsorbed) 2005:0214 Poliomyelitis vaccine(inactivated) Tests for extraneous agents in viral vaccines for human use Cell substrates for the production of vaccine for human use 4. WHO Technical Report Series, No. 878, 1998 : Annex 1, Requirements for the use animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals. 5. WHO Technical Report Series, No. 927, 2005 : Annex 4, Requirements for the use animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals (addendum 2003). 6. Guidance for Industry(Draft Guidance), US FDA : Characterization and qualification of cell substrates and other biological starting materials used in the production of viral vaccines for the prevention and treatment of infectious disease, US FDA, 2001 : Letter to sponsor using Vero cells as a cell substrate for investigational vaccine 8. USP, 2007 : General chapter <1050> Viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin. -37-