(19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) C07K 16/00 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61K 39/42 (2006.01) (21) 출원번호 10-2006-7025895 (22) 출원일자 ( 국제 ) 2005 년 05 월 10 일 심사청구일자 2010 년 04 월 06 일 (85) 번역문제출일자 2006 년 12 월 08 일 (65) 공개번호 10-2007-0012543 (43) 공개일자 2007 년 01 월 25 일 (86) 국제출원번호 PCT/US2005/016260 (87) 국제공개번호 WO 2005/110474 국제공개일자 (30) 우선권주장 2005 년 11 월 24 일 60/569,882 2004 년 05 월 10 일미국 (US) 60/582,043 2004 년 06 월 21 일미국 (US) (56) 선행기술조사문헌 WO2004016750 A2* US6737056 B1 Hybridoma, Vol.15, pp.109-116(1996.) J. Allergy Clin. Immunol., Vol.108, pps95-s98(2001.) * 는심사관에의하여인용된문헌 (45) 공고일자 2013년08월21일 (11) 등록번호 10-1297146 (24) 등록일자 2013년08월09일 (73) 특허권자 마크로제닉스, 인크. 미국메릴랜드주 20850 록빌메디칼센터드라이브 9640 (72) 발명자 존슨, 레슬리, 에스. 미국 20874 메릴랜드주다르네스타운포플러힐로드 14411 후앙, 링 미국 20879 메릴랜드주가이터스버그스트라토스레인 7107 (74) 대리인 송봉식, 정삼영 전체청구항수 : 총 39 항심사관 : 김지연 (54) 발명의명칭인간화 FcγRIIB 특이적항체및그의사용방법 (57) 요약 본발명은항체가 FcγRIIA 에결합하는것보다더큰친화도로인간 FcγRIIB 에특이적으로결합하는인간화 Fc γriib 항체또는그의단편및변이체에관한것이다. 본발명은 Fc 수용체매개신호전달의균형상실에관련된임의의질병, 예를들어암, 자가면역질환및염증성질환의치료를위한본발명의인간화항체의용도를포함한다. 본발명은치료항체의이펙터기능을향상시키기위해본발명의인간화항체를투여함으로써치료항체의치료효과를향상시키는방법을제공한다. 본발명은또한본발명의인간화항체를투여함으로써백신조성물의효능을향상시키는방법을제공한다. 본발명은자가면역질병의치료방법및 FcγRIIB 를발현하는암세포의제거방법을포함한다. 대표도 - 도 1A - 1 -
특허청구의범위청구항 1 인간화항체또는그것의항원결합단편으로서, 상기항체또는상기단편은, (a) ATCC 기탁번호 PTA-5958의클론 1D5에의해얻어지는모노클로날항체의여섯개의 CDR을포함하여이루어지거나, (b) ATCC 기탁번호 PTA-5961의클론 2E1에의해얻어지는모노클로날항체의여섯개의 CDR을포함하여이루어지거나, (c) ATCC 기탁번호 PTA-5962의클론 2H9에의해얻어지는모노클로날항체의여섯개의 CDR을포함하여이루어지거나, (d) ATCC 기탁번호 PTA-5960의클론 2D11에의해얻어지는모노클로날항체의여섯개의 CDR을포함하여이루어지거나, 또는 (e) ATCC 기탁번호 PTA-5959의클론 1F2에의해얻어지는모노클로날항체의여섯개의 CDR을포함하여이루어지고, 또한상기항체또는단편은천연인간 FcγRIIA의세포외도메인에결합하는것보다더큰친화도로천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에특이적으로결합하며, 상기단편은 Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab') 2 단편및 scfv 단편으로이루어지는군으로부터선택되는어느하나인인간화항체또는그것의항원결합단편. 청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 삭제청구항 5 삭제청구항 6 삭제청구항 7 삭제청구항 8 제1항에있어서, 상기항체또는단편은 VL CDR2 위치 50에서아스파라긴을티로신으로치환하는아미노산변형을포함하는것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 9 제1항에있어서, 상기항체또는단편은 VL CDR2 위치 51에서발린을알라닌으로치환하는아미노산변형을포함하는것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 10-2 -
제1항에있어서, 상기항체또는단편은프레임워크영역에서아미노산변형을함유하지않는것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 11 삭제청구항 12 제1항에있어서, 상기항체는단쇄항체인것을특징으로하는인간화항체. 청구항 13 제1항에있어서, 상기항체또는단편은이종폴리펩티드에작동가능하게연결된것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 14 제1항에있어서, 상기항체또는단편은치료제에컨쥬게이팅된것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 15 제14항에있어서, 상기치료제가세포독소인것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 16 삭제청구항 17 삭제청구항 18 제1항의인간화항체또는그것의단편의중쇄나경쇄를코딩하는뉴클레오티드서열을포함하는단리된핵산. 청구항 19 제18항의핵산분자를포함하는벡터. 청구항 20 중쇄를코딩하는제1 핵산분자및경쇄를코딩하는제2 핵산분자를포함하며, 상기중쇄및경쇄는제1항의인간화항체또는그것의단편의중쇄및경쇄인벡터. 청구항 21 제19항에있어서, 발현벡터인것을특징으로하는벡터. 청구항 22 제19항의벡터를함유하는숙주세포. 청구항 23 이종프로모터에작동가능하게연결된제1 핵산및동일하거나상이한이종프로모터에작동가능하게연결된제 2 핵산을함유하며, 상기제1 핵산및제2 핵산은제1항의인간화항체또는그것의단편의중쇄및경쇄를각각코딩하는것인숙주세포. 청구항 24 암항원에의해특징지어지는암을앓고있는인간을제외한대상에있어서의암의치료방법으로서, - 3 -
상기방법은상기대상에게치료유효량의제1항, 제8항또는제9항중어느한항에따른인간화항체와상기암항원에특이적으로결합하며세포독성인제2 항체를투여하는단계를포함하는방법. 청구항 25 제24항에있어서, 상기암이유방암, 난소암, 전립선암, 자궁경부암또는췌장암인것을특징으로하는방법. 청구항 26 제24항에있어서, 세포독성인상기제2 항체는, 트라추주맙, 리툭시맙, IC14, 에드레콜로맙, 세툭시맙, 항-αV β3 인테그린인비탁신 (VITAXIN), 항-CD52 IgG1인캄파쓰 1H/LDP-03, 에프라투주맙또는항-CD20인제발린 (ZEVALIN) 인것을특징으로하는방법. 청구항 27 제24항에있어서, 상기암항원이 MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제, p15, 베타-카테닌, MUM-1, CDK4, HER-2/neu, 인간파필로마바이러스-E6, 인간파필로마바이러스-E7 또는 MUC-1 인것을특징으로하는방법. 청구항 28 제24항에있어서, 상기암항원이유방암종, 난소암종, 전립선암종, 자궁경부암종또는췌장암종항원인것을특징으로하는방법. 청구항 29 제24항에있어서, 하나이상의추가암치료법의수행을더포함하는것을특징으로하는방법. 청구항 30 제29항에있어서, 상기추가암치료법이화학요법, 면역요법, 방사선요법, 호르몬요법또는수술로이루어진군중에서선택되는것을특징으로하는방법. 청구항 31 삭제청구항 32 삭제청구항 33 인간을제외한대상에있어서의자가면역질환의치료방법으로서, 상기방법은상기대상에게치료유효량의제1항에따른인간화항체또는그것의단편을투여하는단계를포함하는방법. 청구항 34 제33항에있어서, 상기자가면역질환이류마티스성관절염, 건선관절염, 강직성척추염, 라이터증후군, 건선또는홍반성루푸스인것을특징으로하는방법. 청구항 35 제33항에있어서, 상기대상에게치료유효량의하나이상의항염증제를투여하는단계를더포함하는것을특징으로하는방법. 청구항 36 제33항에있어서, 상기대상에게치료유효량의하나이상의면역조절제를투여하는단계를더포함하는것을 - 4 -
특징으로하는방법. 청구항 37 제36항에있어서, 상기하나이상의면역조절제가유기소분자인것을특징으로하는방법. 청구항 38 제37항에있어서, 상기유기소분자가메토트렉세이트, 레플루노미드, 시클로포스파미드, 시클로스포린 A, FK506, 미코페놀레이트모페틸, 라파마이신, 미조리빈, 데옥시스페르구알린, 브레퀴나르, 말로니트롤라미드, 스테로이드또는코르티코스테로이드인것을특징으로하는방법. 청구항 39 제35항에있어서, 상기항염증제의하나이상은비-스테로이드성항염증약물인것을특징으로하는방법. 청구항 40 제39항에있어서, 상기비-스테로이드성항염증약물이아스피린, 이부프로펜, 디클로페낙, 나부메톤, 나프록센또는케토프로펜인것을특징으로하는방법. 청구항 41 인간을제외한대상에있어서의 IgE-매개알레르기질환의치료또는예방방법으로서, 상기방법은상기대상에게치료유효량의제1항에따른인간화항체또는그것의단편을투여하는단계를포함하는방법. 청구항 42 제41항에있어서, 상기 IgE-매개알레르기질환이천식, 알레르기성비염, 위장관알레르기, 호산구증가증, 결막염또는사구체신염인것을특징으로하는방법. 청구항 43 세포독성항체로치료되는인간을제외한대상에있어서항체매개세포독성효과를향상시키는방법으로서, 상기방법은상기대상에게제1항에따른인간화항체또는그것의단편을세포독성항체의세포독성효과를향상시키기에충분한양으로투여하는단계를포함하는방법. 청구항 44 인간을제외한대상에있어서자가면역질병의진단방법으로서, 상기방법은, (a) 상기대상으로부터의생물학적샘플을유효량의제1항에따른인간화항체또는그것의단편과접촉시키는단계 ; 및 (b) 검출가능한마커를사용하여상기항체또는그것의단편의결합을검출하는단계를포함하며, 상기검출가능한마커의배경또는기준수준을초과하는검출은상기대상이자가면역질병을앓고있음을나타내는방법. 청구항 45 제44항에있어서, 상기검출가능한마커가화학발광, 효소, 형광또는방사성표지인것을특징으로하는방법. 청구항 46 인간을제외한대상에있어서백신조성물에대한면역반응을향상시키는방법으로서, 상기방법은상기대상에게제1항에따른인간화항체또는그것의단편과백신조성물을투여하는단계를포함 - 5 -
하며, 상기인간화항체는상기대상에서상기백신조성물에대한면역반응을향상시키기에효과적인양으로투여되는방법. 청구항 47 암항원에의해특징지어지는암을앓고있는인간을제외한대상에있어서암의치료방법으로서, 상기방법은상기대상에게치료유효량의제1항에따른인간화항체또는그것의단편을투여하는단계를포함하며, 여기서투여되는항체또는그것의단편은 FcγRIIB를발현하는암세포의개체수를감소시키는방법. 청구항 48 암항원에의해특징지어지는암을앓고있는인간을제외한대상에있어서암의치료방법으로서, 상기방법은상기대상에게치료유효량의제1항에따른인간화항체또는그것의단편을투여하는단계를포함하며, 여기서투여된항체또는그것의단편은 FcγRIIB를발현하는암세포를제거하는방법. 청구항 49 제1항에있어서, 인간화항체또는단편은항체 VH1-18과 VH6의 VH 프레임워크영역의아미노산서열을갖는 VH 프레임워크영역을포함하는것을특징으로하는인간화항체또는단편. 청구항 50 제1항에있어서, 인간화항체또는단편은항체 VK-A26과 JK4의 VH 프레임워크영역의아미노산서열을갖는 VH 프레임워크영역을포함하는것을특징으로하는인간화항체또는단편. 명세서 [0001] 본원은각각그전부가본원에참고로포함된, 2004 년 2004 년 6 월 21 일출원된미국가출원 60/582,043 및 2004 년 5 월 10 일출원된미국가출원 60/569,882 를기초로한우선권을주장한다. [0002] [0003] 기술분야 1. 발명의분야본발명은항체가 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로인간 FcγRIIB에특이적으로결합하는인간화 Fc γriib 항체및그의단편및변이체에관한것이다. 본발명은또한 Fc 수용체매개신호전달의균형상실에관련된임의의질병, 예를들어암 ( 바람직하게는 B-세포악성종양, 특히 B-세포만성림프구성백혈병또는비호지킨림프종 ), 자가면역질환, 염증성질환또는 IgE-매개알레르기질환의치료를위한본발명의인간화항체의용도를포함한다. 또한, 본발명은다른암치료제와조합된인간화 FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편의용도를포함한다. 본발명은치료항체의이펙터기능을향상시키기위해본발명의인간화항체를투여함으로써치료항체의치료효과를향상시키는방법을제공한다. 본발명은또한본발명의인간화항체를백신조성물과함께투여함으로써백신조성물의효능을향상시키는방법을제공한다. [0004] [0005] [0006] 배경기술 2. 발명의배경 2.1 Fc 수용체및면역시스템에서이들의역할항체-항원복합체와면역계세포의상호작용은이펙터기능, 예를들어항체의존성세포독성, 비만세포탈과립, 및포식작용에서부터면역조절신호, 예를들어림프구증식및항체분비를조절하는것까지광범위한반응을일으킨다. 이들모든상호작용은항체또는면역복합체의 Fc 도메인의조혈세포상의특수화된세포표면수용체에대한결합을통해개시된다. 항체및면역복합체에의해촉발되는세포성반응의다양성은 Fc 수용체의구조적불균일성으로인한것이다. Fc 수용체는아마도세포내신호전달을매개하는구조적으로관련 - 6 -
된리간드결합도메인을공유한다. [0007] [0008] [0009] [0010] [0011] [0012] [0013] [0014] [0015] Fc 수용체 ( 단백질의면역글로불린유전자수퍼패밀리의구성원 ) 는면역글로불린분자의 Fc 부분에결합할수있는표면당단백질이다. 패밀리의각구성원은 Fc 수용체의사슬상의인지도메인을통해하나이상의이소형의면역글로불린을인식한다. Fc 수용체는면역글로불린아형에대한특이성에의해정의된다. IgG에대한 Fc 수용체는 FcγR로, IgE에대한수용체는 FcεR로, IgA에대한수용체는 FcαR로불린다. 상이한보조세포는상이한이소형항체에대한 Fc 수용체를보유하고, 항체의이소형은보조세포가주어진반응에관여될지를결정한다 (Ravetch J.V. et al. 1991, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92; Gerber J.S. et al. 2001 Microbes and Infection, 3:131-139; Billadeau D.D. et al. 2002, The Journal of Clinical Investigation, 2(109): 161-1681; Ravetch J.V. et al. 2000, Science, 290: 84-89; Ravetch J.V. et al., 2001 Annu. Rev. Immunol. 19: 275-90; Ravetch J. V. 1994, Cell, 78(4): 553-60). 상이한 Fc 수용체, 이들의발현하는세포및이들의이소형특이성은표 1에요약된다 ( 문헌 [Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 4 th ed. 1999, Elsevier Science Ltd/Garland Publishing, New York] 으로부터채택함 ). Fcγ 수용체이패밀리의각구성원은면역글로불린-관련도메인의 C2-세트에관련된세포외도메인, 단일막에걸쳐진도메인및가변길이의세포질내도메인을갖는내재성막당단백질이다. 3개의공지의 FcγR, 즉 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32), 및 FcγRIII(CD16) 이존재한다. 3개의수용체는별개의유전자에의해코딩되지만 ; 3개의패밀리구성원사이의광범위한상동성은이들이아마도유전자복제에의해공통전구세포로부터발생함을제시한다. 본발명은 FcγRII(CD32) 에특히집중한다. FcγRII(CD32) FcγRII 단백질은단량체성 Ig에대한낮은친화도 (10 6 M -1 ) 때문에복합체형성된 IgG에만결합하는 40KDa 내재성막당단백질이다. 상기수용체는모든조혈세포, 예를들어단핵구, 대식세포, B세포, NK 세포, 호중구, 비만세포및혈소판상에나타난가장널리발현된 FcγR이다. FcγRII은그의면역글로불린결합사슬내에 2개의면역글로불린유사영역만을갖고, 따라서 FcγRI보다 IgG에대한훨씬더낮은친화도를갖는다. 3개의인간 FcγRII 유전자 (FcγRII-A, FcγRII-B, FcγRII-C) 이존재하고, 이들은모두응집체또는면역복합체로 IgG에결합한다. FcγRII-A (CD32A) 및 FcγRII-B (CD32B) 의세포질도메인내의뚜렷한차이는수용체연결에대해 2가지기능적으로불균일한반응을생성시킨다. 기본적인차이는 A 이소형은세포활성화, 예를들어포식작용및호흡터짐 (respiratory burst) 을일으키는세포내신호전달을개시하는반면, B 이소형은억제신호를개시하는, 예를들어 B-세포활성화를억제한다는점이다. FcγR을통한신호전달활성화및억제신호는모두연결후 FcγR을통해변환된다. 이들정반대되는기능은상이한수용체이소형사이의구조적인차이로인한것이다. 면역수용체티로신계활성화모티프 (ITAM) 또는면역수용체티로신계억제모티프 (ITIM) 로불리는수용체의세포질신호전달도메인내의 2개의별개의도메인이상이한반응을설명한다. 이들구조에대한상이한세포질효소의동원이 FcγR-매개세포성반응의결과를지시한다. ITAM-함유 FcγR 복합체는 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIIA을포함하는반면, ITIM-함유복합체는 FcγRIIB만을포함한다. 인간호중구는 FcγRIIA 유전자를발현한다. 면역복합체또는특이적항체가교결합을통한 FcγRIIA 군집형성이 ITAM 인산화를촉진하는수용체-결합된키나제와함께 ITAM을응집시키는역할을한다. ITAM 인산화는그의활성화가하류기질 ( 예를들어 PI 3 K) 의활성화를일으키는 Syk 키나제에대한결합 (docking) 부위로서역 할을한다. 세포성활성화는전염증매개체의방출을일으킨다. [0016] FcγRIIB 유전자는 B 림프구상에발현되고 ; 그의세포외도메인은 FcγRIIA에 96% 동일하고구분불가능한방식으로 IgG 복합체에결합한다. FcγRIIB의세포질도메인에 ITIM의존재는 FcγR의상기억제서브클래스를규정한다. 최근에상기억제의분자적기초가확립되었다. 활성화 FcγR과함께결합될때, FcγRIIB 내의 ITIM 은인산화되고, 이노시톨폴리포스페이트 5'-포스파타제의 SH2 도메인 (SHIP) 을끌어당기고, 이는 ITAM-함유 Fc γr-매개된티로신키나제활성화의결과로서방출된포스포이노시톨메신저를가수분해시키고, 결과적으로세 - 7 -
포내 Ca ++ 의유입을방지한다. 따라서, FcγRIIB 의가교결합은 FcγR 연결에대한활성화반응을감소시키고세 포성반응성을억제한다. 따라서 B 세포활성화, B 세포증식및항체분비가중단된다. [0017] 표 1 면역글로불린이소형의 Fc 영역에대한수용체 수용체 결합 FcγRI (CD64) IgG1 FcγRII-A (CD32) IgG1 FcγRII-B2 (CD32) IgG1 FcγRII-BI (CD32) IgG1 FcγRIII (CD16) IgG1 FcεR1 IgG1 FcαRI (CD89) IgG1, IgA2 10 8 M -1 2 X 10 6 M -1 2 X 10 6 M -1 2 X 10 6 M -1 5 X 10 5 M -1 10 10 M -1 10 7 M -1 세포종류 연결의효과 대식세포 호중구 호산구 수지상세포 흡수 자극 호흡터짐의활성화 치사의유도 대식세포 호중구 호산구 수지상세포 혈소판 랑게르한세포흡수 과립방출 대식세포호중구호산구흡수자극의억제 B세포비만세포흡수없음자극의억제 NK 세포호산구대식세포호중구비만세포 비만세포호산구호염기구 대식세포호중구호산구 치사의유도 과립의분비 흡수 치사의유도 [0018] [0019] [0020] [0021] [0022] [0023] [0024] 2.2 관련질병 2.2.1 암신생물또는종양은양성또는악성일수있는비정상적인비제어된세포성장으로부터생성된신생물덩어리이다. 양성종양은일반적으로국소화되어남는다. 악성종양은암을총칭한다. 용어 " 악성 " 은일반적으로종양이이웃신체구조에침범하여파괴하고먼부위로확산하여사망시킬수있는것을의미한다 ( 검토를위해문헌 [Robbins and Angell, 1976, Basic Pathology, 2d Ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, pp.68-122] 참조 ). 암은신체의많은부위에서발생하고그의기원에따라상이하게거동할수있다. 암성세포는그들이기원하는신체부분을파괴한다음신체의다른부분 ( 들 ) 로확산하여여기서새로성장하기시작하여보다많은파괴를일으킨다. 120만명을초과하는미국인에게서매년암이발병한다. 암은미국에서제2의주요사망요인이고, 현재추세로계속되면암은 2010년에는제1의사망원인이될것으로예상된다. 폐암및전립선암이미국남성에대한최고의암으로인한사인이다. 폐암및유방암은미국여성에대한최고의암으로인한사인이다. 미국남성의 2 명중 1명이생애에언젠가암으로진단될것이다. 미국여성의 3명중 1명이생애에언젠가암으로진단될것이다. 암치료법은아직도개발될필요가있다. 현재의치료방법, 예를들어수술, 화학요법및방사선처리는종종비효율적이거나심각한부작용을초래한다. 2.2.1.1 B-세포악성종양비제한적으로 B-세포림프종및백혈병을포함하는 B세포악성종양은미국에서유의한발생률을갖는신생물질병이다. 미국에서매년약 55,000건의새로운림프종이발생하고 (1998년데이타 ), 매년 25,000명이사망하는것으로추정된다. 이는미국인구의암발생의 4% 및모든암-관련사망의 4% 을나타낸다. 개정된림프모양신생물의유럽-미국 (European-American) 분류 (1994 REAL 분류, 1999년변경됨 ) 에서는림프종을그들의기원을기초로 B세포계림프종, T 세포계림프종, 또는호지킨림프종으로분류하였다. B세포계의림프종은미국에서진단된가장일반적인종류의비호지킨림프종 (NHL) 이다 (Williams, Hematology 6 th ed. (Beutler et al. Ed.), McGraw Hill 2001). - 8 -
[0025] [0026] [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] 만성림프구성백혈병 (CLL) 은혈액, 골수및림프양조직에서소형의성숙한것으로보이는림프구의축적을특징으로하는신생물질병이다. CLL은미국에서 100,000명당 2.7건의발생률을갖는다. 위험은특히남성에있어서연령에따라점진적으로증가한다. 이는모든암의 0.8% 의원인이되고, 모든백혈병의 30% 에책임있는가장일반적인성인백혈병이다. 거의모든경우 (>98%) 에, 질병에걸린세포는 B 림프구계에속한다. 비-백혈병변이형인소림프구성림프종은모든림프종의 5-10% 를구성하고, B-CLL 환자의관련림프절로부터구별할수없는조직학적, 형태학적및면역학적특징을갖는다 (Williams, 2001). 만성림프구성백혈병의자연경과는몇개상으로나누어진다. 초기상에서, 만성림프구성백혈병은길어진수명을갖는소형의성숙한, 기능적으로무능성의악성 B-세포의축적을특징으로하는무활동성질병이다. 결국, 악성 B-세포의배가시간은감소하고, 환자는점점증상을나타내게된다. 화학치료제를사용한치료가증상경감을제공할수있지만, 환자의총생존율은단지최소로연장된다. 만성림프구성백혈병의후기는심각한빈혈및 / 또는저혈소판증을특징으로한다. 이시점에, 중앙생존율은 2년미만이다 (Foon et al., 1990, Annals Int. Medicine 113:525). 매우느린세포증식속도때문에, 만성림프구성백혈병은화학치료제를사용한치료에내성이다. 최근에, 유전자발현연구에서림프증식성질환에서상향조절될수있는몇가지유전자를확인하였다. B-세포만성림프구성백혈병 (B-CLL) 의환자에서, 및비호지킨림프종환자의많은부분에서과발현되는것으로생각되는한분자는 CD32B이다 (Alizadeh et al., 2000, Nature 403:503-511; Rosenwald et al., 2001, J. Exp. Med. 184:1639-1647). 그러나, CD32B가 B-CLL 세포의낮은비율상에서낮은밀도로발현한것이보고되었으므로 (Damle et al., 2002, Blood 99:4087-4093) B-CLL에서 CD32B의역할은불명확하다. CD32B는 B세포신생물에서그의과발현이치료항체에대한적합한표적으로만드는 B세포계표면항원이다. 또한, CD32B는그의연결이음성신호를전달하는억제성수용체의범주에속한다. 따라서, CD32B에대해지정된항체는보체의존성세포독성 (CDC), 항체의존성세포성세포독성 (ADCC) 을포함하지만, 또한세포자멸신호를촉발하는메카니즘에의해종양세포를제거하는기능을할수있다. 따라서 CD32B와그의대응체 CD32A ( 활성화 Fcγ 수용체 ) 의높은상동성은하나를선택적으로인식하지만다른형태의분자는인식하지않는항체의생산을크게방해한다. 2.2.1.2 암치료법현재, 암치료법은환자에서신생물세포를근절하기위해수술, 화학요법, 호르몬요법및 / 또는방사선치료를포함할수있다 ( 예를들어 Stockdale, 1998, "Principles of Cancer Patient Management", in Scientific American: Medicine, vol. 3, Rubenstein and Federman, eds., Chapter 12, Section IV 참조 ). 암치료법은또한생물학적요법또는면역요법을포함할수있다. 이들연구는모두환자에대해심각한단점을지닌다. 예를들어, 수술은환자의건강때문에금기될수있거나환자에게받아들여지지않을수있다. 추가로, 수술은신생물조직을완전히제거하지않을수있다. 방사선요법은단지신생물조직이정상조직보다방사선에대해더큰감수성을나타낼때에효과적이고, 방사선요법은또한종종심각한부작용을유발할수있다. 호르몬요법은드물게단일제로서제공되고효과적일수있지만, 다른치료가대부분의암세포를제거한후암재발을예방하거나지연시키기위해종종사용된다. 생물학적요법 / 면역요법은횟수에서제한되고, 발진또는종창, 독감유사증상, 예를들어열, 오한및피로, 소화관문제또는알레르기반응과같은부작용을일으킬수있다. 화학요법에있어서, 암의치료를위해이용가능한다양한화학치료제가존재한다. 상당한대부분의암화학치료제는 DNA 복제및수반하는세포분열을방지하기위해데옥시리보뉴클레오티드트리포스페이트전구체의생합성을억제함으로써 DNA 합성을직접또는간접적으로억제함으로써작용한다 ( 예를들어 Gilman et al., Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Eighth Ed. (Pergamom Press, New York, 1990) 참조 ). 알킬화제, 예를들어니트로소우레아, 항대사체, 예를들어메토트렉세이트및히드록시우레아, 및다른물질, 예를들어에토포시드, 캄프토테신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노루비신등을포함하는이들약제는반드시세포주기특이적일필요는없지만 DNA 복제에대한그들의효과때문에 S상동안세포를치사시킨다. 다른약제, 구체적으로콜히친및빈카알칼로이드, 예를들어빈블라스틴및빈크리스틴은미세관회합을저해하여유사분열정지를일으킨다. 화학요법프로토콜은일반적으로치료효능을증가시키기위해화학치료제의배합물을투여하는것을포함한다. 다양한화학치료제의이용가능성에도불구하고, 화학요법은많은단점을갖는다 ( 예를들어 Stockdale, 1998, "Principles Of Cancer Patient Management" in Scientific American Medicine, vol. 3, Rubenstein and Federman, eds., ch. 12, sect. 10 참조 ). 거의모든화학치료제가유독성이고, 화학요법은심각하고종종위 - 9 -
험한부작용, 예를들어심한오심, 골수억제, 면역억제등을일으킨다. 추가로, 화학치료제의배합물투여에서도, 많은종양세포가화학치료제에내성이거나내성을발현한다. 실제로, 치료프로토콜에사용된특정화학치료제에내성인세포는종종다른약물, 심지어특정한치료에사용된약물의작용메카니즘과상이한메카니즘에의해작용하는약제에대해서도내성인것으로입증되고, 상기현상은다면발현성약물또는다중약물내성으로불린다. 따라서, 약물내성때문에, 많은암이표준화학요법치료프로토콜에불응성인것으로입증된다. [0032] [0033] [0034] [0035] [0036] [0037] [0038] B-세포악성종양은일반적으로단일제화학요법, 조합화학요법및 / 또는방사선요법으로치료된다. 이들치료는심각한부작용을갖기는하지만사망률을감소시키고 / 시키거나생존율을개선시킬수있다. 상이한형태의치료에대한 B-세포악성종양의반응은혼합적이다. 예를들어, 비호지킨림프종의적절한임상단계가가능한경우, 영역방사선요법이만족스러운치료를제공할수있다. 그러나특정환자는반응하지못하고, 시간이지남에따라특히질병의가장공격적인변이형을갖는치료에내성을갖는질병재발이그후일어난다. 환자의약 1/2가질병으로죽는다 (Devesa et al., 1987, J. Nat'l Cancer Inst. 79:701). 불응성 B세포신생물의치료를위한연구용치료법은자가및동종골수또는줄기세포이식및유전자요법을포함한다. 최근에, B-세포특이적항원을표적으로하는모노클로날항체를사용하는면역요법이 B세포신생물의치료에도입되었다. 방사성핵종, 독소, 또는다른치료제를지정하기위해모노클로날항체를사용하는것은상기약제를종양부위로선택적으로전달하여, 정상조직에대한독성을제한할수있는가능성을제공한다. 특히표준암치료, 예를들어수술, 방사선요법, 화학요법및호르몬요법에불응하는것으로증명된암의치료를위해대체적인암치료가매우필요하다. 유망한대안은면역요법이고, 여기서암세포는암항원-특이적항체에의해특이적으로표적화된다. 면역반응의특이성을이용하는데대부분의노력이기울여졌고, 예를들어, 하이브리도마기술은종양선택적모노클로날항체의개발을가능하게하였고 (Green M.C. et al., 2000 Cancer Treat Rev., 26:269-286; Weiner LM, 1999 Semin Oncol. 26(suppl. 14):43-51 참조 ), 지난수년동안 FDA는암치료법을위한최초의 MAb를, 즉리툭신 ( 항-CD20) 을비호지킨림프종에대해, 캄파쓰 ( 항-CD52) 를 B- 세포만성림프구성백혈병 (B-CLL) 에대해, 헤르셉틴 [ 항-(c-erb-2/HER-2)] 을전이유방암에대해승인하였다 (Suzanne A. Eccles, 2001, Breast Cancer Res., 3:86-90). NHL 및 B-CLL은가장일반적인형태의 B세포신생물중의 2가지이다. 이들항체는임상효능을나타냈지만, 그들의사용에는부작용이없지않았다. 예를들어, 항체의존성세포성세포독성 ("ADCC") 을매개하는항체이펙터기능의효력이상기치료의장애물이다. 또한, 리툭산및캄파쓰에있어서, 적어도 1/2의환자가반응하지못하고, 반응자중일부는후속치료에불응성일수있다. 특히표준암치료및새로운면역요법, 예를들어리툭산에불응성인환자에대해암, 특히, B-세포악성종양에대한대체치료법이필요하다. 2.2.2 염증성질병및자가면역질병염증은체내백혈구및화학물질이외래물질, 예를들어세균및바이러스에의한감염으로부터신체를보호하는과정이다. 이는보통침범된영역의통증, 종창, 발열및발적을특징으로한다. 시토킨및프로스타글란딘으로공지된화학물질이이과정을제어하고, 질서있고자기-제한케스케이드로혈액또는침범된조직내로방출된다. 상기화학물질의방출은손상또는감염영역으로혈류를증가시키고발적및발열을일으킬수있다. 화학물질의일부는조직내로유체의누출을유발시켜, 종창을일으킨다. 이러한보호과정은신경을자극하고통증을유발할수있다. 이들변화는관련영역에서한정된기간동안발생할때신체에유익하게작용한다. 자가면역및 / 또는염증성질환에서, 면역시스템은퇴치할외래물질이없을때염증반응을촉발시키고, 신체의정상적인보호면역시스템은자신을잘못공격함으로써자신의조직을손상시킨다. 신체를상이한방식으로침범하는많은상이한자가면역질환이존재한다. 예를들어, 다발성경화증의개인에서뇌가침범되고, 크론병의개인에서창자가침범되고, 류마티스성관절염의개인에서각종관절의윤활막, 뼈및연골이침범된다. 자가면역질환이진행함에따라, 하나이상의종류의신체조직의파괴, 장기의비정상적성장, 또는장기기능의변화가일어날수있다. 자가면역질환은단지하나의장기또는조직종류에침범할수있거나, 다수장기및조직에침범할수있다. 자가면역질환에의해일반적으로침범되는장기및조직은적혈구, 혈관, 결합조직, 내분비선 ( 예를들어갑상선또는췌장 ), 근육, 관절및피부를포함한다. 자가면역질환의예는하시모토갑상선염, 악성빈혈, 애디슨병, 1형당뇨병, 류마티스성관절염, 전신성홍반성루푸스, 피부근육염, 쇼그렌 - 10 -
증후군, 다발성경화증, 자가면역내이질환, 염증성장질환, 관절염, 중증근무력증, 라이터증후군, 그레이 브스병, 자가면역간염, 가족성대장폴립증및궤양성대장염을포함하고, 이로제한되지않는다. [0039] [0040] [0041] [0042] [0043] [0044] [0045] 류마티스성관절염 (RA) 및유년기류마티스성관절염은염증성관절염의종류이다. 관절염은관절의염증을설명하는일반용어이다. 모두는아니지만몇몇종류의관절염은잘못지시된염증의결과이다. 류마티스성관절염외에, 염증과연관된다른종류의관절염은건선관절염, 라이터증후군, 강직성척추염관절염및통풍관절염을포함한다. 류마티스성관절염은신체의양쪽측면상의관절 ( 예를들어양손, 양손목또는양무릎 ) 에서발생하는만성관절염의종류이다. 이러한대칭성은류마티스성관절염을다른종류의관절염과구분하는것을돕는다. 관절에침범하는것에추가로, 류마티스성관절염은때때로피부, 눈, 폐, 심장, 혈액또는신경에침범할수있다. 류마티스성관절염은세계인구의약 1% 에영향을미치고잠재적으로신체장애성이다. 미국에서류마티스성관절염의발생율은약 290만명이다. 남성보다 2 내지 3배더많은여성이영향을받는다. 류마티스성관절염이발생하는전형적인연령은 25 내지 50세이다. 유년기류마티스성관절염은 71,000명의어린미국인 (18세이하 ) 에영향을미치고, 소년보다소녀에 6배더많이영향을미친다. 류마티스성관절염은신체의면역시스템이관절에서윤활액을분비하는윤활막을외래물질로잘못식별하는자가면역질환이다. 염증이일어나고, 관절내와둘레의연골및조직이손상받거나파괴된다. 중증의경우, 상기염증은다른관절조직및주변연골로확장하여, 여기서뼈및연골을침식하거나파괴하여관절변형을일으킬수있다. 신체는손상된조직을반흔조직으로교체하여, 관절내정상공간을좁아지게하고뼈를함께융합시킨다. 류마티스성관절염은경직, 종창, 피로, 빈혈, 체중손실, 열및종종무력화시키는통증을일으킨다. 류마티스성관절염의몇몇공통증상은 1시간또는그이상지속하는기상시관절경직 ; 특정한손가락또는손목관절에서종창 ; 관절둘레연조직에서종창 ; 및관절의양쪽측면에서종창을포함한다. 종창은통증과함께또는통증없이일어날수있고, 점진적으로악화하거나, 진행하기전에수년동안동일하게유지될수있다. 류마티스성관절염의진단은통증있는관절의특정한위치및대칭성, 아침에관절경직의존재, 피부아래혹 (bump) 및결절 ( 류마티스양결절 ) 의존재, 류마티스성관절염을제시하는 X-선시험의결과, 및 / 또는류마티스인자로불리는혈액시험의양성결과를포함하는인자의조합에기초한다. 모두는아니지만많은류마티스성관절염에걸린사람이혈액중에류마티스인자항체를갖는다. 류마티스인자는류마티스성관절염에걸리지않은사람에존재할수있다. 다른질병이또한류마티스인자를혈액중에생산시킬수있다. 이것이류마티스성관절염의진단을혈액내의류마티스인자의존재에만아니라몇가지인자의조합에기초하는이유이다. 전형적인질병과정은지속성이지만변동하는관절증상들중하나이고, 약 10년후, 90% 의환자가뼈및연골에구조적인손상을보일것이다. 작은비율이완전히낫는단기간병에걸릴것이고, 다른작은비율은많은관절변형을갖는중증질병에걸리고, 때때로질병의다른소견을가질것이다. 염증과정은관절에서뼈및연골의침식또는파괴를일으킨다. 류마티스성관절염에서, 지속적항원제시, T-세포자극, 시토킨분비, 윤활막세포활성화, 및관절파괴의자가면역주기가있다. 질병은개인과사회모두에큰영향을끼쳐, 심각한통증, 기능손상및장애를일으키고의료비용과손실된임금에수백만달러를지불시킨다 ( 예를들어, NIH 웹사이트와 NIAID 웹사이트참조 ). 현재이용가능한관절염치료법은소염또는면역억제의약품을사용하여관절의염증을감소시키는데집중한다. 임의의관절염의제1선치료제는보통항염증제, 예를들어아스피린, 이부프로펜및 Cox-2 억제제, 예를들어셀레콕시브및로페콕시브이다. " 제2선약물 " 은금, 메토트렉세이트및스테로이드를포함한다. 이들이관절염에대해잘확립된치료제이기는하지만, 매우적은환자가이들치료선단독으로경감된다. 류마티스성관절염의발병기전에대한이해의최근진보로메토트렉세이트를시토킨또는재조합가용성수용체에대한항체와조합하여사용하게되었다. 예를들어, 종양괴사인자 (TNF)-α에대한재조합가용성수용체및모노클로날항체가관절염치료에서메토트렉세이트와조합하여사용되고있다. 그러나, 메토트렉세이트및항 -TNF-α제, 예를들어 TNF-α에대한재조합가용성수용체의조합물로치료한환자의단지약 50% 가임상적으로유의한개선을보인다. 많은환자는치료에도불구하고불응성으로남는다. 류마티스성관절염환자에대해어려운치료문제가여전히남아있다. 최근의많은치료제는부작용발생율이높거나질병진행을완전히예방할수없다. 지금까지, 이상적인치료제가없고치료되지도않았다. 류마티스성관절염및다른자가면역질환을보다효과적으로치료하는신규한치료제가필요하다. 2.2.3 알레르기 - 11 -
[0046] [0047] [0048] [0049] [0050] [0051] [0052] [0053] 면역-매개알레르기 ( 과민 ) 반응은알레르기증상의발현을일으키는근원적인메카니즘에따라 4가지종류 (I- IV) 로분류된다. I형알레르기반응은비만세포및호염기구로부터히스타민과같은혈관작용물질의 IgE-매개방출을특징으로한다. 이들물질의방출과후속적인알레르기증상의소견은알레르겐-결합 IgE의비만세포및호염기구의표면상의그의수용체에대한가교결합에의해개시된다. I형알레르기반응에걸린개인에있어서, 2번째의알레르겐에대한노출이 IgE 생산에요구되는 3-세포상호작용에서기억 B 및 T 세포관여의결과로서알레르겐에특이적인고수준의 IgE 항체생산을일으킨다. 생산된고수준의 IgE 항체는알레르겐-결합된 IgE에의한비만세포및호염기구상의 IgE 수용체의가교결합을증가시키고, 이는다시이들세포의활성화및 I형알레르기질병의임상소견에책임있는약물학적매개자의방출을일으킨다. IgE에대한상이한친화도를갖는 2개의수용체가확인되고특성화되었다. 고친화도수용체 (FcεRI) 는비만세포및호염기구의표면상에발현된다. 저친화도수용체 (FcεRII/CD23) 은 B세포, T 세포, 대식세포, 호산구및랑게르한세포를포함하는많은세포종류에서발현된다. 고친화도 IgE 수용체는 3개의서브유닛 ( 알파, 베타및감마사슬 ) 로이루어진다. 몇몇연구는단지알파사슬만이 IgE의결합에관여되는반면, 베타및감마사슬 ( 트랜스멤브레인또는세포질단백질 ) 은신호전달사건에요구되는것을증명하였다. IgE가비만세포및호염기구상의 FcεRI에결합하기위해요구되는 IgE 구조의확인은 IgE-매개알레르기의치료또는예방을위한전략을고안하는데있어서가장중요하다. 예를들어, IgE 수용체-결합부위의해명은 IgE가수용체-보유세포에결합하는것을생체내차단하는펩티드또는소분자의확인을이끌수있다. 현재, IgE-매개알레르기반응은비만세포및호염기구로부터방출된혈관작용물질의효과에반작용함으로써알레르기반응과연관된증상을경감하기위해시도하는항히스타민제및코르티코스테로이드와같은약물로치료된다. 고용량의항히스타민제및코르티코스테로이드는유해한부작용 ( 예를들어중추신경계교란, 변비등 ) 을갖는다. 따라서, I형알레르기반응을치료하기위한다른방법이필요하다. I형알레르기질환의치료를위한하나의방안은혈청내에서가용성 ( 유리 ) IgE와반응하고, IgE가비만세포및호염기구상의그의수용체에결합하는것을차단시키고, 수용체-결합된 IgE에결합하지않는 ( 즉, 이들은아낙필락시스발생성이아니다 ) 모노클로날항체를생산하는것이다. 상기항체의하나인 Xolair이 FDA에의해승인되었다. IgE-매개알레르기반응에대한가장유망한치료법의하나는내인성 IgE 상의적절한비-아낙필락시스발생성에피토프에대한능동면역화이다. 스탄워쓰 (Stanworth) 등 ( 미국특허 5,601,821) 은이종캐리어단백질에결합된인간 IgE의 CεH4 도메인로부터유래된펩티드를알레르기백신으로서사용하는것을포함하는전략을설명하였다. 그러나, 상기펩티드는천연가용성 IgE와반응하는항체의생산을유도하는것으로나타나지않았다. 또한, 헬만 (Hellman) ( 미국특허 5,653,980) 은전장 CεH2-CεH3 도메인 ( 약 220 아미노산길이 ) 의외래캐리어단백질에대한융합에기초한항-IgE 백신조성물을제안하였다. 그러나, IgE 분자의 CεH2 및 Cε H3 도메인의일부부분에대한항체는비만세포및호염기구의표면상의 IgE 수용체에가교결합하고과민증의매개자의생산을일으키는것으로나타났으므로 ( 예를들어 Stadler et al., 1993, Int. Arch. Allergy and Immunology 102:121-126 참조 ), 헬만이제안한항-IgE 백신조성물에의해유도된항체는아마도과민증을일으킬것이다. 따라서, 과민성항체를유도하지않는 IgE-매개알레르기반응의치료제가필요하다. 과민증의유도에대한상당한관심으로동물에투여될때항-IgE 폴리클로날항체생산을유도할수있는미모토프 (mimotope) 로이루어지는 I형알레르기질환의치료에대한다른방안이개발되었다 ( 예를들어 Rudolf, et al., 1998, Journal of Immunology 160:3315-3321 참조 ). 크리체크 (Kricek) 등 ( 국제특허출원공개 WO 97/31948) 는 IgE 수용체결합의배위를모방할수있는펩티드미모토프를확인하기위해모노클로날항체 BSWI7을사용하여파지-디스플레이된펩티드라이브러리를스크리닝하였다. 이들미모토프는아마도유리천연 IgE와반응하지만수용체-결합된 IgE와반응하지않고 IgE가그의수용체에결합하는것을차단하는폴리클로날항체를유도하기위해사용될수있을것이다. 크리체크등은 IgE 분자의임의의부분에상동성이아니고따라서본발명에개시된펩티드와상이한펩티드미모토프를개시하였다. 당업계의조사에의해증명되는바와같이, 암, 자가면역질병, 염증성질환, 또는알레르기와같은질환을치료하거나예방하는현재방법의치료효능을향상시키는것이필요하다. 특히, 이펙터기능, 특히, 암의치료에서사용된치료항체의세포독성효과를향상시키는것이필요하다. 당업계의현재기술상태로는또한알레르기질환을치료하거나예방하는방법이존재하지않는다 ( 예를들어항체요법또는백신요법에의해 ). 3. 발명의개요 - 12 -
[0054] [0055] [0056] [0057] [0058] [0059] [0060] 본발명은항체또는그의단편이 FcγRIIA, 특히인간 FcγRIIA, 보다특히천연인간 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB, 특히인간 FcγRIIB, 보다특히천연인간 FcγRIIB에특이적으로결합하는인간화 FcγRIIB 항체, 단리된항체또는그의단편을제공한다. 본원에서사용되는용어 " 천연 FcγRIIB 또는 FcγRIIA" 는세포에서내재적으로발현되고세포의표면상에존재하거나포유동물세포에서재조합적으로발현되어세포표면에존재하지만세균세포에서발현된 FcγRIIB 또는 FcγRIIA 또는변성된단리된 FcγRIIB 또는 FcγRIIA는아닌 FcγRIIB 또는 FcγRIIA를의미한다. 본발명은항체또는그의단편이 FcγRIIA, 특히인간 FcγRIIA, 보다특히천연인간 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB, 특히인간 FcγRIIB, 보다특히천연인간 FcγRIIB에특이적으로결합하는항체로부터유도된인간화항체및그의항원결합단편을포함한다. 가장바람직한실시태양에서, 본발명은인간화 2B6 또는 3H7 항체또는그의단편, 바람직하게는그의항원결합단편에관한것이다. 다른바람직한실시태양에서, 본발명은인간화 1D5, 2E1, 2H9, 2D11 또는 1F2 항체또는그의단편, 바람직하게는그의항원결합단편에관한것이다. 바람직하게는, 본발명의인간화항체는천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에결합한다. 본발명의인간화항-FcγRIIB 항체는 CDR1 ( 서열 1 또는서열 29) 및 / 또는 CDR2 ( 서열 2 또는서열 30) 및 / 또는 CDR3 ( 서열 3 또는서열 31) 의아미노산서열을포함하는중쇄가변영역및 / 또는 CDR1 ( 서열 8 또는서열 38) 및 / 또는 CDR2 ( 서열 9, 서열 10, 서열 11 또는서열 39) 및 / 또는 CDR3 ( 서열 12 또는서열 40) 의아미노산서열을포함하는경쇄가변영역을가질수있다. 다른바람직한실시태양에서, 본발명의항체는서열 18, 서열 20, 서열 22 또는서열 46의아미노산서열을포함하는경쇄가변영역및 / 또는서열 24 또는서열 37의아미노산서열을포함하는중쇄가변영역및 / 또는그의아미노산서열변이체를포함한다. 특히, 본발명은천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에면역특이적으로결합하는인간화항체를제공하고, 상기항체는 VH CDR1 및 VL CDR1; VH CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2 및 VLCDR1; VH CDR2 및 VL CDR2; VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR3 및 VH CDR1; VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR3 및 VL CDR3; VH1 CDR1, VH CDR2 및 VLCDR1; VH CDR1, VH CDR2 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR2, VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR1, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR1; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR3; VHCDR1, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VHCDR1, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR2 및 VL CDR3; VHCDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VLCDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; 또는본원에개시된 VH CDR 및 VL CDR의임의의조합물의임의의조합물로서 2B6 또는 3H7의 CDR 서열을포함한다 ( 또는별법으로이들로이루어진다 ). 한특정실시태양에서, 본발명은인간화 2B6 항체를제공하고, 여기서 VH 영역은인간생식세포주 VH 세그먼트 VH1-18 및 JH6으로부터의 FR 세그먼트, 및서열 24의아미노산서열을갖는 2B6 VH의 CDR 영역으로이루어진다. 다른특정실시태양에서, 인간화 2B6 항체는인간생식세포주 VL 세그먼트 VK-A26 및 JK4로부터의 FR 세그먼트, 및서열 18, 서열 20 또는서열 22의아미노산서열을갖는 2B6VL의 CDR 영역으로이루어지는 VL 영역을추가로포함한다. 한특정실시태양에서, 본발명은인간화 3H7 항체를제공하고, 여기서 VH 영역은인간생식세포주 VH 세그먼트로부터의 FR 세그먼트, 및서열 37의아미노산서열을갖는 3H7 VH의 CDR 영역으로이루어진다. 다른특정실시태양에서, 인간화 3H7 항체는인간생식세포주 VL 세그먼트의 FR 세그먼트, 및서열 46의아미노산서열을갖는 3H7VL의 CDR 영역으로이루어지는 VL 영역을추가로포함한다. 본발명은인간항체 ( 수용항체 ) 의중쇄및 / 또는경쇄가변영역의하나이상의 CDR의하나이상의영역이 Fc γriia보다큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는공여모노클로날항체, 예를들어각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된, FcγRIIB에결합하는모노클로날항체또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11, 및 1F2 에의해생산된모노클로날항체의하나이상의 CDR의유사한부분으로치환된, FcγRIIB에특이적인인간화항체분자를제공한다. 가장바람직한실시태양에서, 인간화항체는공여뮤린항체와동일한에피토프에특이적 - 13 -
으로결합할수있다. 당업자는본발명이항체의전체적인 CDR 이식을포함함을이해할것이다. 따라서, 공여및수용항체는동일한종의동물, 심지어동일한항체클래스또는서브클래스로부터유도될수있다. 그러나, 보다일반적으로는, 공여및수용항체는상이한종의동물로부터유도된다. 전형적으로, 공여항체는비-인간항체, 예를들어설치류 MAb이고, 수용항체는인간항체이다. [0061] [0062] [0063] 몇몇실시태양에서, 공여항체로부터의적어도하나의 CDR이인간항체에이식된다. 다른실시태양에서, 각각의중쇄및 / 또는경쇄가변영역의적어도 2, 바람직하게는 3개모두의 CDR이인간항체에이식된다. CDR은 Kabat CDR, 구조루프 CDR 또는이들의조합물을포함할수있다. 몇몇실시태양에서, 본발명은적어도하나의 CDR 이식된중쇄및적어도하나의 CDR 이식된경쇄를포함하는인간화 FcγRIIB 항체를포함한다. 바람직한실시태양에서, 인간화 FcγRIIB 특이적항체의 CDR 영역은 FcγRIIB에특이적인뮤린항체로부터유래한다. 몇몇실시태양에서, 본원에서설명되는인간화항체는수용항체, 즉공여모노클로날항체의결합특이성유지에필요한인간중쇄및 / 또는경쇄가변도메인프레임워크영역의아미노산결실, 삽입, 변형을포함하여이로제한되지않는변형체를포함한다. 몇몇실시태양에서, 본원에서설명되는인간화항체의프레임워크영역은반드시자연발생인간항체가변영역의프레임워크영역의정확한아미노산서열로이루어질필요는없지만, 인간화항체의특성을변경시키는, 예를들어뮤린 FcγRIIB 특이적항체와동일한표적에특이적인인간화항체영역의결합특성을개선시키는아미노산결실, 삽입, 변형을포함하여이로제한되지않는다양한변형체를포함한다. 가장바람직한실시태양에서, 비인간프레임워크잔기의대규모도입을방지하고인간에서인간화항체의최소면역원성을보장하기위해프레임워크영역에최소의변형이이루어진다. 몇몇실시태양에서, 프레임워크잔기는인간생식세포주 VH 세그먼트 VH1-18 및 JH6 및 / 또는인간생식세포주 VL 세그먼트 VK- A26 및 JK4로부터유래한다. 가장바람직한실시태양에서, 프레임워크영역에대한변형이존재하지않는다. 본발명의공여모노클로날항체는바람직하게는 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된, FcγRIIB에결합하는모노클로날항체또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11, 및 1F2에의해생산된모노클로날항체이다. 본발명의항체는전장중쇄및경쇄를갖는완전항체, FcγRIIB에특이적인그의임의의단편, 예를들어 Fab 단편, F(ab') 2 단편, 중쇄및경쇄이량체, 또는그의임의의최소단편, 예를들어 Fv, SCA ( 단쇄항체 ) 등을 포함한다. [0064] 본발명은본발명의항체또는그의단편의제조, 특히 FcγRIIB 특이적항체가 FcγRIIA에비해 FcγRIIB에대한향상된특이성을갖도록인간화항-FcγRIIB 특이적항체의제조를위한방법을포함한다. 본발명은폴리펩티드제조에유용한당업계에공지된임의의방법, 예를들어시험관내합성, 재조합 DNA 생산등을포함한다. 바람직하게는, 인간화항체는재조합 DNA 기술에의해제조된다. 본발명의인간화 FcγRIIB 특이적항체는재조합면역글로불린발현기술을사용하여제조할수있다. 본발명의재조합인간화항체의제조방법의예는 a) CDR 및공여항체결합특이성을보유하기위해필요한가변영역프레임워크의최소부분이비인간면역글로불린, 예를들어뮤린 FcγRIIB 특이적모노클로날항체, 예를들어각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된, FcγRIIB에결합하는모노클로날항체또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11, 및 1F2에의해생산된모노클로날항체로부터유래하고항체의나머지는인간면역글로불린으로부터유래하여인간화항체중쇄의발현을위한벡터를생성하는, 항체중쇄를코딩하는오페론을포함하는발현벡터를통상적인분자생물학방법으로제조하고 ; b) CDR 및공여항체결합특이성을보유하기위해필요한가변영역프레임워크의최소부분이비인간면역글로불린, 예를들어뮤린 FcγRIIB 모노클로날항체, 예를들어각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA- 4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된, FcγRIIB에결합하는모노클로날항체또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11, 및 1F2에의해생산된모노클로날항체로부터유래하고항체의나머지는인간면역글로불린으로부터유래하여인간화항체경쇄의발현을위한벡터를생성하는, 항체경쇄를코딩하는오페론을포함하는발현벡터를통상적인분자생물학방법으로제조하고 ; c) 인간화항-FcγRIIB 항체의발현을위한형질감염된숙주세포를생성시키기위해발현벡터를통상적인분자생물학방법으로숙주세포에전달하고 ; d) 인간화항-FcγRIIB 항체를제조하기위해통상적인세포배양기술에의해형질감염된세포를배양하는것을포함할수있다. 숙주세포는본발명의 2개의발현벡터, 즉중쇄유래폴리펩티드를코딩하는오페론을포함하는제1 벡터및경쇄유래폴리펩티드를코딩하는오페론을포함하는제2 벡터로동시형질감염될수있다. 2개의벡터는상이한선택가능마커를포함할수있지만, 중쇄및경쇄코딩서열을제외하고동일한것이바람직하다. 상기과정은중쇄및경쇄폴리펩티드의동등한발현을제공한다. 별법으로, 중쇄및경쇄폴리펩티드를모두코딩하는단일벡터를사용할수있다. - 14 -
중쇄및경쇄의코딩서열은 cdna 또는게놈 DNA 또는둘모두를포함할수있다. 본발명의재조합항체의발현에사용되는숙주세포는세균세포, 예를들어에셔리치아콜리 (Escherichia coli), 또는바람직하게는진핵세포일수있다. 바람직하게는, 포유동물세포, 예를들어차이니즈햄스터난소세포또는 HEK-293을사용할수있다. 발현벡터의선택은숙주세포에따라선택되고, 선택된숙주세포에서요구되는발현및조절특성을갖도록선택할수있다. 본발명의벡터의제조, 본발명의숙주세포의제조를위한세포의형질감염, 본발명의항체의제조를위한세포의배양을위한일반적인방법은모두통상적인분자생물학방법이다. 유사하게, 본발명의재조합항체는생성된후에횡유동여과, 황산암모늄침전, 친화도컬럼크로마토그래피, 겔전기영동등을포함하여당업계의표준방법에의해정제할수있다. [0065] [0066] 몇몇실시태양에서, 그전부가본원에참고로포함된미국특허 5,916,771에개시된것과같이모노클로날항체를제조하기위한세포융합방법이본발명의방법에사용될수있다. 간단히설명하면, 상기방법에따르면, 요구되는중쇄 ( 또는중쇄의단편 ) 을코딩하는 DNA가제1 포유동물숙주세포내로도입되고, 요구되는경쇄 ( 또는경쇄의단편 ) 를코딩하는 DNA가제2 포유동물숙주세포내로도입된다. 제1 형질전환된숙주세포및제2 형질전환된숙주세포는이어서세포융합에의해조합되어제3 세포를형성한다. 제1 및제2 세포의융합전에, 형질전환된세포는특이적으로요구되는특성, 예를들어높은수준의발현을위해선택될수있다. 융합후에, 생성되는하이브리드세포는요구되는중쇄를코딩하는 DNA와요구되는경쇄를코딩하는 DNA를모두포함하여발현함으로써다량체성항체를생성시킨다. 본발명은인간또는인간화모노클로날항체와같은다른항체또는그의단편과함께또는그에부착된본발명의인간화항체의사용을포함한다. 상기다른항체는본발명의항체가작용하는질병에특징적인다른마커 ( 에피토프 ) 와반응할수있거나예를들어질병세포에대한인간면역계의분자또는세포를동원하도록선택된상이한특이성을가질수있다. 본발명의항체 ( 또는그의일부 ) 는별개로투여되는조성물로서또는두물질이통상적인화학적또는분자생물학적방법에의해연결된단일조성물로서상기항체 ( 또는그의일부 ) 와함께투여될수있다. 추가로, 본발명의항체의진단및치료적가치는검출가능한시그날 ( 시험관내또는생체내에서 ) 을생성시키는표지또는치료특성을갖는표지로인간화항체를표지함으로써증가시킬수있다. 몇몇표지, 예를들어방사성핵종은검출가능한시그날을생성시킬수있고, 치료특성을갖는다. 방사성핵 종표지의예는 125 I, 131 I, 14 C를포함한다. 다른검출가능한표지의예는형광현미경에대한형광발색단, 예를들어플루오레신, 피코빌리프로테인또는테트라에틸로다민 ; 형광, 흡광, 가시적인색상또는응집에의한검출을위해형광또는착색생성물을생성시키거나전자현미경에의한검출을위해전자밀집생성물을생성시키는효소 ; 또는직접또는간접전자현미경가시화를위한페리틴, 퍼옥시다제또는금비드와같은전자밀집분자를포함한다. 치료특성을갖는표지는암치료용약물, 예를들어메토트렉세이트등을포함한다. [0067] [0068] [0069] 또한, 본발명의방법은본발명의인간화항체를코딩하는폴리뉴클레오티드를포함한다. 한실시태양에서, 본발명은항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는항체또는그의단편의중쇄또는경쇄를코딩하는단리된핵산서열을제공한다. 또한, 본발명은상기핵산을포함하는핵산에관한것이다. 본발명은중쇄를코딩하는제1 핵산분자및경쇄를코딩하는제2 핵산분자를포함하는벡터를추가로제공하고, 여기서상기중쇄또는경쇄는항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는항체또는그의단편에서유래한것이다. 한특정실시태양에서, 상기벡터는발현벡터이다. 본발명은추가로본발명의항체를코딩하는벡터또는폴리뉴클레오티드를포함하는숙주세포를제공한다. 바람직하게는, 본발명은각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592, 또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의기탁된하이브리도마클론에의해생산된항체의중쇄및경쇄또는그의일부, 예를들어 CDR 및그의인간화형태를코딩하는폴리뉴클레오티드를포함한다. 본발명은생물학적샘플에서 FcγRIIB의존재를특이적으로검출하기위한 ( 즉, FcγRIIA는검출하지않고 Fc γriib를검출 ) 본발명의인간화항체의용도를포함한다. 활성화및억제 Fc 수용체, 예를들어 FcγRIIA 및 FcγRIIB는이들수용체의균형잡힌기능및적절한세포성면역반응에중요하다. 본발명은 Fc 수용체신호전달경로에서상기균형및조절된제어의손실에관련된임의의질병의치료를위한본발명의인간화항체의용도를포함한다. 따라서, 본발명의인간화 FcγRIIB 항체는면역반응을조절하는데, 예를들어자가면역또는염증성질병, 또는알레르기반응과연관된면역반응을억제하는데용도를갖는다. 본발명의인간화 FcγRIIB 항체는또한예를들어치료항체-매개세포독성을향상시키도록특정이펙터기능을변경시키기위해사용될수있다. - 15 -
[0070] [0071] [0072] [0073] [0074] [0075] [0076] 본발명의인간화항체는예를들어한실시태양에서단일제요법으로서암의예방또는치료를위해유용하다. 본발명의한실시태양에서, 본발명의인간화항체는 B-세포악성종양, 특히비호지킨림프종또는만성림프구성백혈병의예방또는치료에유용하다. 특정실시태양에서, 대상체의암은하나이상의표준또는실험적치료법, 특히리툭산치료에불응성이다. 본발명의방법은 B-세포질병, 예를들어 B-세포만성림프구성백혈병 (B-CLL), 비호지킨림프종, 미만성 (diffuse) 큰 B세포림프종, 미만성큰 B세포림프종의영역을갖는여포성림프종, 소림프구성림프종, 외투세포림프종및미만성소분할세포림프종의치료, 관리, 예방또는개선에사용될수있다. 다른실시태양에서, 본발명은치료제또는약물에컨쥬게이팅된 FcγRIIB-특이적항체의용도를제공한다. 항 -FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편에컨쥬게이팅될수있는치료제의예는시토킨, 독소, 방사성원소및항대사체를포함하고이로제한되지않는다. 한실시태양에서, 본발명은 B-세포악성종양에대한표준또는실험적치료방법 ( 예를들어화학요법, 방사선면역요법, 또는방사선요법 ) 과조합으로인간화 FcγRIIB-특이적항체의용도를제공한다. 상기조합치료법은표준또는실험적치료의효능을향상시킬수있다. B-세포악성종양의예방, 치료, 관리또는개선을위해 Fc γriib-특이적항체또는그의항원결합단편과조합으로특히유용한치료제의예는리툭산, 인터페론-알파및항암제를포함하고이로제한되지않는다. FcγRIIB-특이적항체또는그의항원결합단편과조합되어사용될수있는화학치료제는알킬화제, 항대사체, 천연생성물및호르몬을포함하고이로제한되지않는다. 본발명의조합치료법은치료또는예방효과를달성하기위해 B-세포악성종양의대상체에게항-FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편의보다적은투여량및 / 또는항-FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편의덜빈번한투여를가능하게한다. 다른실시태양에서, 인간화 FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편의사용은 B-세포악성종양으로진단된대상체의생존율을연장시킨다. 바람직한실시태양에서, 본발명의인간화항체는흑색종의치료및 / 또는예방에사용된다. 다른실시태양에서, 인간화항체는암의예방또는치료를위해, 특히종양세포치사를향상시키고 / 시키거나치료항체의항체의존성세포독성세포 ("ADCC") 활성, 보체의존성세포독성 ("CDC") 활성, 또는포식작용을향상시키도록세포독성활성을갖는암항원-특이적치료항체의세포독성활성을강화시키는데유용하다. 본발명은암항원을특징으로하는암환자에서암을치료하는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는치료유효량의제1 인간화항체또는그의단편, 및상기암항원에특이적으로결합하고세포독성인제2 항체를투여하는것을포함한다. 본발명은또한암항원을특징으로하는암환자에서암을치료하는방법을제공하고, 상기방법은항체또는그의단편이 FcγRIIA, 바람직하게는천연인간 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB, 특히천연인간 FcγRIIB에특이적으로결합하고, 그의불변도메인이항체가단량체성일때하나이상의 Fc 활성화수용체, 예를들어 FcγRIIIA에대해증가된친화도를추가로갖는치료유효량의인간화항체또는그의단편, 및상기암항원에특이적으로결합하고세포독성인항체를상기환자에게투여하는것을포함한다. 한특정실시태양에서, 상기 Fc 활성화수용체는 FcγRIIIA이다. 일부실시태양에서, 본발명은증가된친화도로 FcRn에결합하는변이체 Fc 영역을포함하여반감기가증가된, 예를들어반감기가 15일초과, 바람직하게는 20일초과, 25일초과, 30일초과, 35일초과, 40일초과, 45일초과, 2개월초과, 3개월초과. 4개월초과또는 5개월초과인항체를포함한다. 특정작용메카니즘에매이기를의도하지않지만, 신생 Fc 수용체 (FcRn) 는 IgG 항체의혈청반감기조절에서중요한역할을수행한다. 마우스에서 IgG 항체의 FcRn에대한 ph 의존성결합친화도와그의혈청반감기사이의상호관계는확립되었다. 포유동물, 바람직하게는인간에서본발명의항체또는그의단편의증가된반감기는포유동물에서상기항체또는항체단편의보다높은혈청역가를생성시키고, 따라서상기항체또는항체단편의투여빈도를감소시키고 / 시키거나투여될상기항체또는항체단편의농도를감소시킨다. 예를들어, 생체내반감기가증가된항체또는그의단편은 Fc 도메인과 FcRn 수용체사이의상호작용에관여하는것으로확인된아미노산잔기를변형시킴으로써 ( 예를들어, 치환하거나, 결실시키거나부가함으로써 ) 생성할수있다. 예를들어, 본발명은 FcRn에대한친화도를향상시키는적어도하나이상의변형, 예를들어하나이상의아미노산잔기 251-256, 285-290, 308-314, 385-389 및 428-436의변형또는위치 250 및 428에서의변형을갖는변이체 Fc 영역을포함하는항체를포함한다 ( 예를들어그전부가본원에참고로포함되는 Hinton et al., 2004, J Biol. Chem. 279 (8): PCT 공개 WO 97/34631; 및 WO 02/060919 참조 ). - 16 -
[0077] [0078] [0079] [0080] [0081] [0082] [0083] [0084] [0085] 다른실시태양에서, 본발명은세포독성항체를사용하여치료하는대상체에서항체매개된세포독성효과를향상시키는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게본발명의인간화항체또는그의단편을상기세포독성항체의세포독성효과를향상시키기에충분한양으로투여하는것을포함한다. 또다른실시태양에서, 본발명은세포독성항체를사용하여치료하는대상체에서항체-매개세포독성효과를향상시키는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게단량체성일때 Fc 활성화수용체에대한향상된친화도를추가로갖는본발명의인간화항체또는그의단편을상기세포독성항체의세포독성효과를향상시키기에충분한양으로투여하는것을포함한다. 또다른실시태양에서, 본발명은하나이상의추가의암치료법의투여를추가로포함하는방법을제공한다. 본발명은항체의치료활성을강화시키기위해세포치사를통해그의치료효과를매개하는임의의치료항체와조합으로본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. 한특정실시태양에서, 본발명의인간화항체는항체-매개이펙터기능을향상시킴으로써항체의치료활성을강화시킨다. 본발명의또다른실시태양에서, 본발명의인간화항체는표적화된종양세포의포식작용및옵소닌작용 (opsonization) 을향상시킴으로써세포독성항체의치료활성을강화시킨다. 본발명의또다른실시태양에서, 본발명의인간화항체는표적화된종양세포의파괴에서항체-의존성세포-매개세포독성 ("ADCC") 을향상시킴으로써항체의치료활성을강화시킨다. 특정실시태양에서, 본발명의항체는 ADCC를향상시키기위해 Fc 융합단백질과조합되어사용된다. 특정작용메카니즘에매이기를의도하지않지만, 치료항체와조합된본발명의인간화항체의조합물은부분적으로는억제성 FcγRIIB 수용체를발현하는대식세포를제거하는 FcγRIIB 특이적인간화항체의세포독성능력때문에향상된치료효과를갖는다. 따라서, 치료항체의투여량당잔류하는활성화 FcγR 수용체발현세포의보다높은농도가존재한다. 일부실시태양에서, 본발명은항체의치료활성을강화시키기위해세포치사를통해그의치료효과를매개하지않는치료항체와조합으로본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. 특정실시태양에서, 본발명은효현제활성을갖는치료적세포자멸유도항체, 예를들어항-Fas 항체와조합으로본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. 치료적세포자멸유도항체는세포자멸경로의조절에대해당업계에공지된임의의사멸수용체, 예를들어 TNFR 수용체패밀리구성원또는 TRAIL 패밀리구성원에특이적일수있다. 본발명은대식세포매개된종양세포진행및전이를차단하기위해본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. 본발명의항체는대식세포침윤이일어나는고형종양의치료에특히유용하다. 본발명의길항항체는종양부위에국재화되는대식세포의개체군을감소시키거나제거함으로써종양세포전이를제어하는, 예를들어감소시키거나제거하기위해특히유용하다. 본발명은 FcγRIIB를발현하는대식세포이외의면역이펙터세포, 예를들어수지상세포를효과적으로고갈시키거나제거하는인간화항체를추가로포함한다. 본발명의항체를사용하는면역이펙터세포의효과적인고갈또는제거는이펙터세포의집단형성의 50%, 60%, 70%, 80%, 바람직하게는 90%, 가장바람직하게는 99% 감소일수있다. 몇몇실시태양에서, 본발명은종양세포자체상에서발현하지않고대신종양기질을포함하는주변의반응성및종양지지, 비-악성세포상에서발현하는종양항원에면역특이적으로결합하는치료항체와조합으로본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. 바람직한실시태양에서, 본발명의인간화항체는섬유모세포상의종양항원, 예를들어섬유모세포활성화단백질 (FAP) 에면역특이적으로결합하는항체와조합되어사용된다. 본발명은그를필요로하는환자에서자가면역질환을치료하는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게치료유효량의본발명의하나이상의인간화항체를투여하는것을포함한다. 본발명은또한그를필요로하는환자에서자가면역질환을치료하는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게치료유효량의하나이상의항염증제, 및 / 또는하나이상의면역조절제를투여하는것을추가로포함한다. 본발명은또한그를필요로하는환자에서염증성질환을치료하는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게치료유효량의본발명의하나이상의인간화항체를투여하는것을포함한다. 본발명은또한그를필요로하는환자에서염증성질환을치료하는방법을제공하고, 상기방법은상기환자에게치료유효량의하나이상의항염증제, 및 / 또는하나이상의면역조절제를투여하는것을추가로포함한다. 본발명은대상체에서백신조성물에대한면역반응을향상시키는방법을제공하고, 상기방법은상기대상체에게항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는인간화항체또는그의항원결합단편, 및백신조성물을상기항체또는그의단편이상기대상체에서상기백신 - 17 -
조성물에대한면역반응을향상시키기위해효과적인양으로투여되도록투여하는것을포함한다. 본발명의인간화항체는백신조성물의항원 ( 들 ) 에대한체액성및 / 또는세포매개반응을향상시키기위해사용될수있다. 본발명의항체는당업계에공지된임의의백신과조합되어사용될수있다. 본발명은특정항원 ( 들 ) 에대한향상된면역반응이질병또는질환의치료또는예방에효과적인특정질환을예방하거나치료하기위해본발명의인간화항체를사용하는것을포함한다. [0086] [0087] [0088] [0089] [0090] [0091] [0092] [0093] [0094] 본발명은또한감염제에대한면역요법을향상시키는방법을제공하고, 여기서본발명의인간화항체는감염된세포의옵소닌작용및포식작용을향상시키기위해병원체, 예를들어 HIV, HCV 또는 HSV로이미감염된환자에게투여된다. 또다른실시태양에서, 본발명은본발명의인간화항체를사용한패혈증또는패혈쇼크의치료방법을포함한다. 패혈증에서 FcγRIIB의역할은문헌 [Clatworthy et al., 2004, J Exp Med 199:717-723] 에기재된바있다. 본발명은손상된세포자멸매개된신호전달을갖는질병, 예를들어암, 자가면역질병을치료하는방법을제공한다. 특정실시태양에서, 본발명은 Fas-매개세포자멸이결핍된질병을치료하는방법을포함하고, 상기방법은본발명의인간화항체를항-Fas 항체와조합으로투여하는것을포함한다. 본발명은환자에게치료유효량의본발명의인간화효현항체를투여하는것을포함하는, 그를필요로하는환자에서 IgE-매개알레르기질환을치료하거나예방하기위한방법을추가로제공한다. 본발명은또한환자에게본발명의인간화항체를 IgE-매개알레르기질환의치료또는예방을위해사용되는다른치료항체또는백신조성물과조합으로투여하는것을포함하는, 그를필요로하는환자에서 IgE-매개알레르기질환을치료하거나예방하기위한방법을제공한다. 다른실시태양에서, 본발명은대상체에서자가면역질병의진단방법을제공하고, 상기방법은 (i) 상기대상체로부터생물학적샘플을유효량의본발명의인간화항체와접촉시키고 ; (ii) 상기인간화항체또는그의단편의결합을검출하는것을포함하고, 여기서배경또는표준수준을초과하는상기검출가능한마커의검출은상기대상체가자가면역질병에걸렸음을나타낸다. 본발명은 (i) 항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는치료유효량의인간화항체또는그의단편 ; 및 (ii) 제약상허용되는담체를포함하는제약조성물을추가로제공한다. 본발명은 (i) 항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는치료유효량의인간화항체또는그의단편 ; (ii) 암항원에특이적으로결합하는세포독성항체 ; 및 (iii) 제약상허용되는담체를포함하는제약조성물을추가로제공한다. 본발명의특정실시태양에서, B-세포악성종양, 또는그의하나이상의증상을예방하거나, 치료하거나, 관리하거나개선시키기위해효과적인양으로인간화 FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편, 및제약상허용되는담체를포함하는제약조성물이본발명의방법에따라사용하기위해제공된다. 본발명은또한본발명의방법에따라사용하기위한인간화 FcγRIIB 항체또는그의항원결합단편, FcγRIIB 길항제이외의예방제또는치료제, 및제약상허용되는담체를포함하는제약조성물을제공한다. 3.1 정의본원에서사용되는용어 "FcγRIIB에특이적으로결합하는 " 및유사한용어는 FcγRIIB 또는그의단편에특이적으로결합하고다른 Fc 수용체, 특히 FcγRIIA에특이적으로결합하지않는항체또는그의단편 ( 또는임의의다른 FcγRIIB 결합분자 ) 를나타낸다. 또한, FcγRIIB에특이적으로결합하는항체는항체의가변도메인또는불변도메인을통해결합할수있음이당업계의숙련인에게이해된다. FcγRIIB에특이적으로결합하는항체가그의가변도메인을통해결합하는경우, 이는응집되지않는, 즉단량체성임이당업계의숙련인에게이해된다. FcγRIIB에특이적으로결합하는항체는예를들어면역분석, BIAcore, 또는당업계에공지된다른분석에의해결정할때다른펩티드또는폴리펩티드에더낮은친화도로결합할수있다. 바람직하게는, Fcγ RIIB 또는그의단편에특이적으로결합하는항체또는단편은다른항원과교차반응하지않는다. FcγRIIB에특이적으로결합하는항체또는단편은예를들어면역분석, BIAcore, 또는당업계에공지된다른기술에의해확인할수있다. FcγRIIB에특이적으로결합하는항체또는그의단편은실험적기술, 예를들어웨스턴블롯, 방사성면역분석 (RIA) 몇효소-결합면역흡착분석 (ELISA) 을사용하여결정할때임의의교차반응성항원에대한것보다더큰친화도로 FcγRIIB에결합한다. 항체특이성에관한논의는예를들어문헌 [Paul ed.. 1989. Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336] 을참조한다. 본원에서사용되는용어 " 천연 FcγRIIB" 는세포표면상에내재적으로발현되고제시되는 FcγRIIB를 - 18 -
나타낸다. 몇몇실시태양에서, " 천연 FcγRIIB" 는포유동물세포에서재조합적으로발현되는단백질을포함한 다. 바람직하게, 천연 FcγRIIB 는세균세포, 즉, 이. 콜라이 (E. coli) 에서발현되지않는다. 가장바람직하 게, 천연 FcγRIIB 는변성되지않고, 즉, 그의생물학적활성배열로존재한다. [0095] [0096] 본원에서사용되는용어 " 천연 FcγRIIA" 는세포표면상에내재적으로발현되고제시되는 FcγRIIA를나타낸다. 몇몇실시태양에서, " 천연 FcγRIIA" 는포유동물세포에서재조합적으로발현되는단백질을포함한다. 바람직하게, 천연 FcγRIIA는세균세포, 즉, 이. 콜라이에서발현되지않는다. 가장바람직하게, 천연 FcγRIIA는변성되지않고, 즉, 그의생물학적활성배열로존재한다. 본원에서사용되는용어 " 항체 ( 들 )" 은모노클로날항체, 다중특이적항체, 인간항체, 인간화항체, 합성항체, 키메릭항체, 카멜라이즈드항체, 단쇄 Fv (scfv), 단쇄항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdfv), 내부체, 및항-개별특이형 ( 항-Id) 항체 ( 예를들어, 항-Id 및본발명의항체에대한항-항-Id 항체 ), 및상기한임의의것의에피토프-결합단편을나타낸다. 특히, 항체는면역글로불린분자및면역글로불린분자의면역학적활성단편, 즉, 항원결합부위를함유하는분자를포함한다. 면역글로불린분자는임의의종류 ( 예를들어 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스 ( 예를들어 IgG 1, IgG 2, IgG 3, IgG 4, IgA 1 및 IgA 2 ) 또는 서브클래스의것일수있다. [0097] [0098] [0099] [0100] 본원에서사용되는용어 "B-세포악성종양 ( 들 )" 은임의의 B-세포림프증식성질환을나타낸다. B-세포악성종양은 B-세포기원의종양을포함한다. B-세포악성종양은림프종, 만성림프구성백혈병, 급성림프모세포성백혈병, 다발골수종, 호지킨및비호지킨병, 미만성큰 B세포림프종, 미만성큰 B세포림프종의영역을갖는여포성림프종, 소림프구성림프종, 외투세포림프종, 및미만성소분할세포림프종을포함하고이로제한되지않는다. 본원에서사용되는용어 " 유도체 " 는아미노산잔기치환, 결실또는부가의도입에의해변경된아미노산서열을포함하는항체를나타낸다. 본원에서사용되는용어 " 유도체 " 는또한항체에대한임의의종류의분자의공유부착에의해변형된항체를나타낸다. 비제한적인예를들어항체는예를들어글리코실화, 아세틸화, PEG 화, 인산화, 아미드화, 공지의보호 / 차단기에의한유도체화, 단백질분해절단, 세포리간드또는다른단백질에대한연결등에의해변형될수있다. 유도체항체는당업계의숙련인에게공지된기술, 비제한적인예를들어특이적화학적절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의대사적합성등을이용하는화학적변형에의해생산할수있다. 또한, 유도체항체는그가유래된항체와유사하거나동일한기능을갖는다. FcγRIIB와관련하여본원에서사용되는용어 " 유도체 " 는아미노산잔기치환, 결실또는부가의도입 ( 즉, 돌연변이 ) 에의해변경된, FcγRIIB 폴리펩티드의아미노산서열, FcγRIIB 폴리펩티드의단편, FcγRIIB 폴리펩티드에면역특이적으로결합하는항체, 또는 FcγRIIB 폴리펩티드에면역특이적으로결합하는항체단편을포함하는폴리펩티드를나타낸다. 몇몇실시태양에서, 항체유도체또는그의단편은하나이상의 CDR에서아미노산잔기치환, 결실또는부가를포함한다. 항체유도체는비-유도체항체에비해실질적으로동일한결합, 더우수한결합, 또는더불량한결합을가질수있다. 특정실시태양에서, CDR의 1, 2, 3, 4, 또는 5개아미노산잔기가치환되거나, 결실되거나부가된다 ( 즉, 돌연변이된다 ). FcγRIIB와관련하여본원에서사용되는용어 " 유도체 " 는또한폴리펩티드에임의의종류의분자의공유부착에의해변형된, FcγRIIB 폴리펩티드, Fcγ RIIB 폴리펩티드의단편, FcγRIIB 폴리펩티드에면역특이적으로결합하는항체, 또는 FcγRIIB 폴리펩티드에면역특이적으로결합하는항체단편을나타낸다. 비제한적인예를들어항체또는항체단편은예를들어글리코실화, 아세틸화, PEG화, 인산화, 아미드화, 공지의보호 / 차단기에의한유도체화, 단백질분해절단, 세포리간드또는다른단백질에대한연결등에의해변형될수있다. 유도체항체또는항체단편은당업계의숙련인에게공지된기술, 비제한적인예를들어특이적화학적절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의대사적합성등을이용하는화학적변형에의해변형될수있다. 또한, 항체의유도체또는항체단편은하나이상의비-고전적아미노산을함유할수있다. 한실시태양에서, 항체유도체는모항체와유사하거나동일한기능을갖는다. 다른실시태양에서, 항체또는항체단편의유도체는변경되지않은항체에비해변경된활성을갖는다. 예를들어, 유도체항체또는그의단편은그의에피토프에보다단단하게결합하거나단백질분해에대해보다내성일수있다. 본원에서사용되는용어 " 질환 " 및 " 질병 " 은대상체의병을나타내도록상호교환가능하게사용된다. 특히, 용어 " 자가면역질병 " 은자신의세포, 조직및 / 또는장기에대한대상체의면역학적반응에의해유발된세포, 조직및 / 또는장기손상을특징으로하는대상체의병을나타내도록용어 " 자가면역질환 " 과상호교환가능하게사용된다. 용어 " 염증성질병 " 은염증, 바람직하게는만성염증을특징으로하는대상체의병을나타내도록용어 - 19 -
" 염증성질환 " 과상호교환가능하게사용된다. 자가면역질환은염증과연관될수있거나연관되지않을수있 다. 더욱이, 염증은자가면역질환에의해유발될수있거나유발되지않을수있다. 따라서, 특정질환은자 가면역및염증성질환모두로서특성화될수있다. [0101] [0102] [0103] [0104] [0105] 본원에서사용되는용어 " 암 " 은비정상적인비제어된세포성장으로부터생성된신생물또는종양을나타낸다. 본원에서사용되는암은명백하게백혈병및림프종을포함한다. 용어 " 암 " 은말초위치로전이할가능성을갖고비-암세포와상이한표현형형질, 예를들어, 3차원기질, 예를들어반고형한천배지에서콜로니형성또는 3차원기저막또는세포외매트릭스제제에서관모양그물또는망형매트릭스형성을나타내는세포를포함하는질병을나타낸다. 비-암세포는반고형한천배지에서콜로니를형성하지않고 3차원기저막또는세포외매트릭스제제에서독특한구형구조를형성한다. 암세포는다양한메카니즘을통하기는하지만발달동안특징적인기능적능력세트를획득한다. 상기능력은세포자멸의회피, 성장신호에서자기-충족, 항-성장신호에대한무감응, 조직침범 / 전이, 무한한설명적잠재성, 및지속적인혈관신생을포함한다. 용어 " 암세포 " 는전암성및악성암세포를포함하는것을의미한다. 몇몇실시태양에서, 암은국재화되어남아있는양성종양을나타낸다. 다른실시태양에서, 암은이웃신체구조에침범하고파괴시키고먼부위로확산하는악성종양을나타낸다. 또다른실시태양에서, 암은특이적암항원과관련된다. 본원에서사용되는용어 " 면역조절제 " 및그의변이형, 비제한적인예를들어면역조절제들은숙주의면역시스템을조절하는물질을나타낸다. 특정실시태양에서, 면역조절제는면역억제제이다. 다른특정실시태양에서, 면역조절제는면역자극제이다. 면역조절제는소분자, 펩티드, 폴리펩티드, 융합단백질, 항체, 무기분자, 모방제, 및유기분자를포함하고이로제한되지않는다. 본원에서사용되는용어 " 에피토프 " 는항체가특이적으로결합하는항원분자상의영역을의미한다. 본원에서사용되는용어 " 단편 " 은다른폴리펩티드의아미노산서열의적어도 5개의인접하는아미노산잔기, 적어도 10개의인접하는아미노산잔기, 적어도 15개의인접하는아미노산잔기, 적어도 20개의인접하는아미노산잔기, 적어도 25개의인접하는아미노산잔기, 적어도 40개의인접하는아미노산잔기, 적어도 50개의인접하는아미노산잔기, 적어도 60개의인접하는아미노잔기, 적어도 70개의인접하는아미노산잔기, 적어도 80개의인접하는아미노산잔기, 적어도 90개의인접하는아미노산잔기, 적어도 100개의인접하는아미노산잔기, 적어도 125개의인접하는아미노산잔기, 적어도 150개의인접하는아미노산잔기, 적어도 175개의인접하는아미노산잔기, 적어도 200개의인접하는아미노산잔기또는적어도 250개의인접하는아미노산잔기의아미노산서열을포함하는펩티드또는폴리펩티드를나타낸다. 특정실시태양에서, 폴리펩티드의단편은폴리펩티드의적어도하나의기능을보유한다. 바람직하게는, 항체단편은에피토프결합단편이다. 본원에서사용되는용어 " 인간화항체 " 는인간프레임워크영역및비인간 ( 보통마우스또는래트 ) 면역글로불린으로부터하나이상의 CDR을포함하는면역글로불린을나타낸다. CDR을제공하는비인간면역글로불린은 " 공여자 (donor)" 로불리고, 프레임워크를제공하는인간면역글로불린은 " 수용자 (acceptor)" 로불린다. 불변영역은존재할필요는없지만, 존재하는경우인간면역글로불린불변영역에실질적으로동일해야하고, 즉적어도약 85-90%, 바람직하게는약 95% 또는그이상동일해야한다. 따라서, 아마도 CDR을제외하고인간화면역글로불린의모든부분은자연인간면역글로불린서열의대응하는부분에실질적으로동일하다. " 인간화항체 " 는인간화경쇄및인간화중쇄면역글로불린을포함하는항체이다. 예를들어, 키메릭항체의전체가변영역은비인간이기때문에예를들어인간화항체는전형적인키메릭항체를포함하지않을것이다. 생성된인간화항체는 CDR을제공하는공여항체와동일한항원에결합하는것으로예상되기때문에, 공여항체는 " 인간화 " 과정에의해 " 인간화된 " 것으로말해진다. 대체로, 인간화항체는수용자의초가변영역잔기가목적하는특이성, 친화도, 및용적을갖는비인간종 ( 공여항체 ), 예를들어마우스, 래트, 토끼또는비인간영장류로부터의초가변영역잔기로교체된인간면역글로불린 ( 수용항체 ) 이다. 몇몇경우, 인간면역글로불린의프레임워크영역 (FR) 잔기는대응하는비인간잔기에의해교체된다. 또한, 인간화항체는수용항체또는공여항체에서발견되지않는잔기를포함할수있다. 이들변형은항체능력을더욱정련시키기위해이루어진다. 일반적으로, 인간화항체는적어도하나, 전형적으로 2개의실질적으로모든가변도메인을포함할것이고, 여기서모든또는실질적으로모든초가변영역은비인간면역글로불린의것에대응하고모든또는실질적으로모든 FR은인간면역글로불린서열의것이다. 임의로인간화항체는또한전형적으로아미노산잔기치환, 결실또는부가의도입 ( 즉, 돌연변이 ) 에의해변경된 FcγRIIB 폴리펩티드에면역특이적으로결합하는인간면역글로불린의적어도일부의면역글로불린불변영역 (Fc) 을포함할것이다. 몇몇실시태양에서, 인간화항체는유도체이다. 상기인간화항체는하나이상의비인간 CDR에서아미노산잔기치환, 결실또는부가를포함한다. 인간화항체유도체는비-유도체인간화항체에비해실질적으로동일한결합, 더우수한결합, 또는더불량한 - 20 -
결합을가질수있다. 특정실시태양에서, CDR의 1, 2, 3, 4, 또는 5개아미노산잔기가치환되거나, 결실되거나부가된다 ( 즉, 돌연변이된다 ). 인간화항체의상세한내용은유럽특허 EP 239,400, EP 592,106 및 EP 519,596; 국제특허출원공개 WO 91/09967 및 WO 93/17105; 미국특허 5,225,539, 5,530,101, 5,565,332, 5,585,089, 5,766,886 및 6,407,213; 및문헌 [Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7 (6):805-814; Roguska et al., 1994, Proc Natl Acad Sci USA 91:969-973; Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25; Caldas et al., 2000, Protein Eng. 13:353-60; Morea et al., 2000, Methods 20:267-79; Baca et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84; Roguska et al., 1996, Protein Eng. 9:895-904; Couto et al., 1995, Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s; Couto et al., 1995, Cancer Res. 55:1717-22; Sandhu, 1994, Gene 150:409-10; Pedersen et al., 1994, J. Mol. Biol. 235:959-73; Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-329; 및 Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596] 을참고한다. [0106] [0107] [0108] [0109] [0110] [0111] 본원에서사용되는용어 " 초가변영역 " 은항원결합을책임지는항체의아미노산잔기를나타낸다. 초가변영역은 " 상보성결정영역 " 또는 "CDR" 로부터의아미노산잔기 ( 즉, 경쇄가변도메인에서잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3) 및중쇄가변도메인에서 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) 및 / 또는 " 초가변루프 " 로부터의잔기 ( 즉, 경쇄가변도메인에서잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 및중쇄가변도메인에서 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917) 를포함한다. Eph099B-208.261 및 Eph099B-233.152에대한 CDR 잔기를표 1에나열한다. " 프레임워크영역 " 또는 "FR" 잔기는본원에정의된바와같은초가변영역잔기이외의가변도메인잔기이다. 본원에서사용되는용어 " 단쇄 Fv" 또는 "scfv" 는항체의 VH 및 VL 도메인을포함하는항체단편을나타내고, 여기서상기도메인은단일폴리펩티드사슬내에존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 scfv가항원결합을위해목적하는구조를형성할수있도록하는 VH 및 VL 도메인사이의폴리펩티드링커를추가로포함한다. sfv의검토를위해문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)] 을참조한다. 특정실시태양에서, scfv는이중특이적 scfv 및인간화 scfv를포함한다. 본원에서사용되는용어 " 핵산 " 및 " 뉴클레오티드서열 " 은 DNA 분자 ( 예를들어 cdna 또는게놈 DNA), RNA 분자 ( 예를들어 mrna), DNA 및 RNA 분자의조합물또는하이브리드 DNA/RNA 분자, 및 DNA 또는 RNA 분자의유사체를포함한다. 상기유사체는예를들어이노신또는트리틸화염기를포함하고이로제한되지않는뉴클레오티드유사체를사용하여생성될수있다. 상기유사체는또한분자에유익한속성, 예를들어, 뉴클레아제내성또는세포막을가로지르는증가된능력을부여하는변형된주쇄를포함하는 DNA 또는 RNA 분자를포함할수있다. 핵산또는뉴클레오티드서열은단일가닥, 이중가닥일수있고, 단일가닥및이중가닥부분을모두함유할수있고, 삼중가닥부분을함유할수있지만, 바람직하게는이중가닥 DNA이다. 본원에서사용되는용어 " 대상체 " 및 " 환자 " 는상호교환가능하게사용된다. 본원에서사용되는대상체는바람직하게는포유동물, 예를들어비-영장류 ( 예를들어소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트등 ) 및영장류 ( 예를들어원숭이및인간 ), 가장바람직하게는인간이다. 본원에서사용되는용어 " 치료하다 ", " 치료하는 " 및 " 치료 " 는 Fc 수용체신호전달경로에서조절손실에관련된질병또는질환의증상근절, 감소또는개선, 또는다른치료법, 예를들어치료항체, 백신치료법또는예방의치료효능을향상시키는것을나타낸다. 몇몇실시태양에서, 치료는하나이상의치료제투여로부터기인하는일차, 국소또는전이성암조직의근절, 제거, 변형, 또는제어를나타낸다. 특정실시태양에서, 상기용어는질병에걸린대상체에게하나이상의치료제투여로부터기인하는암확산을최소화시키거나지연시키는것을나타낸다. 다른실시태양에서, 상기용어는질병유발세포의제거를나타낸다. 본원에서사용되는어구 " 부작용 " 은예방제또는치료제의원치않는유해작용을포함한다. 유해작용은항상원치않지만, 원치않는작용이반드시유해한것은아니다. 예방제또는치료제로부터유해작용은해롭거나불편하거나위험할수있다. 화학요법으로부터부작용은위장관독성, 예를들어비제한적으로조기및만기설사및위고창, 오심, 구토, 식욕부진, 백혈구감소, 빈혈, 호중구감소, 무기력, 복부경련, 열, 통증, 체중감소, 탈수, 탈모, 호흡곤란, 불면증, 현기증, 점막염, 구강건조증및신부전과변비, 신경및근육효과, 일시적또는영구적신장및방광손상, 독감유사증상, 유체정체, 및일시적또는영구적불임을포함하고이로 - 21 -
제한되지않는다. 방사선요법으로부터부작용은피로, 입안건조및식욕상실을포함하고이로제한되지않는다. 생물학적요법 / 면역요법으로부터부작용은투여부위에서발진또는종창, 독감유사증상, 예를들어열, 오한및피로, 소화관장애및알레르기반응을포함하고이로제한되지않는다. 호르몬요법으로부터부작용은오심, 생식문제, 우울증, 식욕상실, 눈문제, 두통, 및체중변동을포함하고이로제한되지않는다. 환자가대개경험하는추가의바람직하지않은작용은많고당업계에공지되어있다 ( 예를들어그전부가본원에참고로포함된 Physicians' Desk Reference (56 th ed., 2002) 참조 ). [0112] [0113] [0114] [0115] [0116] [0117] [0118] 본원에서사용되는 " 치료유효량 " 은 FcγRIIB와연관된질병또는질환및 Fc 수용체신호전달경로에서조절손실에관련된임의의질병을치료하거나관리하기위해, 또는다른치료법, 예를들어치료항체, 백신치료법또는예방등의치료효능을향상시키기위해충분한치료제의양을나타낸다. 치료유효량은질병의발현을지연시키거나최소화시키기위해, 예를들어암확산을지연시키거나최소화시키기위해충분한치료제의양을나타낼수있다. 치료유효량은또한질병의치료또는관리에서치료상잇점을제공하는치료제의양을나타낼수있다. 또한, 본발명의치료제에관한치료유효량은단독으로또는다른치료법과조합으로질병의치료또는관리에서치료상잇점을제공하는, 예를들어질병을치료하거나관리하기위해충분한치료항체의치료효능을향상시키기위해충분한치료제의양을의미한다. 본발명의 FcγRIIB 항체의양과연관되어사용될때, 상기용어는전체치료법을개선시키거나, 원치않는작용을감소시키거나피하거나, 또는다른치료제의치료효능또는그와의상승작용을향상시키는양을포함할수있다. 본원에서사용되는용어 " 예방제 ( 들 )" 은질환예방, 또는질환의재발또는확산예방에사용될수있는임의의물질 ( 들 ) 을나타낸다. 예방유효량은과증식질환에소인이있는환자, 예를들어암에유전적소인이있거나이전에발암원에노출되었던환자를포함하고이로제한되지않는환자에서과증식질병, 특히암의재발또는확산, 또는그의발생을예방하기위해충분한예방제의양을나타낼수있다. 예방유효량은또한질병의예방에서예방이익을제공하는예방제의양을나타낼수있다. 또한, 본발명의예방제에관련하여예방유효량은질병의예방에서예방이익을제공하는, 예방제의단독의또는다른물질과조합된양을의미한다. 본발명의 FcγRIIB 항체의양과연관되어사용될때, 상기용어는전체예방을개선시키거나, 다른예방제, 비제한적인예를들어치료항체의예방효능또는그와의상승작용을향상시키는양을포함할수있다. 특정실시태양에서, 용어 " 예방제 " 는효현적 FcγRIIB-특이적항체를나타낸다. 다른실시태양에서, 용어 " 예방제 " 는길항적 FcγRIIB-특이적항체를나타낸다. 다른특정실시태양에서, 용어 " 예방제 " 는암화학치료제, 방사선요법, 호르몬요법, 생물학적요법 ( 예를들어면역요법 ), 및 / 또는본발명의 FcγRIIB 항체를나타낸다. 다른실시태양에서, 하나초과의예방제가조합으로투여될수있다. 본원에서사용되는용어 " 관리하다 ", " 관리하는 " 및 " 관리 " 는대상체가예방제또는치료제의투여로부터얻는유익한효과를나타내고, 이는질병을치유하지않는다. 특정실시태양에서, 대상체는질병의진행또는악화를방지하도록질병을 " 관리하기 " 위해하나이상의예방제또는치료제로투여된다. 본원에서사용되는용어 " 예방하다 ", " 예방하는 " 및 " 예방 " 은예방제또는치료제의투여로부터기인하는대상체의질환의발생및 / 또는재발또는하나이상의증상의발현의방지를나타낸다. 본원에서사용되는용어 " 조합으로 " 는하나초과의예방및 / 또는치료제의사용을나타낸다. 용어 " 조합으로 " 의사용은예방및 / 또는치료제가질환, 예를들어과증식질환, 특히암에걸린대상체에투여되는순서를한정하지않는다. 제1 예방제또는치료제는질환에걸렸거나걸려있거나걸리기쉬운대상체에게제2 예방제또는치료제의투여에앞서 ( 예를들어 1분, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24 시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주전 ), 그와동시에또는그후에 ( 예를들어 1분, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주후 ) 투여될수있다. 예방제또는치료제는대상체에게본발명의물질이달리투여되는경우보다증가된잇점을제공하기위해다른물질과함께작용할수있도록하는순서로및시간간격내에투여된다. 임의의추가의예방제또는치료제는다른추가의예방제또는치료제와함께임의의순서로투여될수있다. 4. 도면의간단한설명도 1A 및 B: A. 아미노산정렬. 마우스 2B6 VH, 인간화 2B6 VH1-18 및인간 JH6의아미노산서열의정렬을도 1A에제시한다. B. 아미노산정렬. 이도면은뮤린 2B6VL, 인간 2B6VL-1, 인간 2B6VL-2; 인간 2B6VL-3, 및인간 Jκ4의아미노산서열의정렬을보여준다. - 22 -
[0119] [0120] [0121] [0122] 도 2. hu2b6hc/ch2b6lc mab 및 ch2b6 mab의 FcγRIIB에대한결합. 이량체성가용성 FcγRIIB-Fc에대한결합을 ELISA로측정하였다. hu2b6hc/ch2b6lc 모노클로날항체는 ch2b6 모노클로날항체에대한유사한친화도로수용체에결합하였다. 도 3. hu2b6lc/ch2b6hc mab, ch2b6lc/hu2b6hc 및 ch2b6 mab의 FcγRIIB에대한결합. 이량체성가용성 Fcγ RIIB-Fc에대한결합을 ELISA로측정하였다. hu2b6hc/ch2b6lc mab 및 ch2b6hc/hu2b6lc mab는 ch2b6 mab에대한유사한친화도로수용체에결합하였다. 도 4. hu2b6 변이체의 FcγRIIB에대한결합. Hu2B6N50Y; Hu2B6N50Y,V51A; Ch2B6, 및 Hu2B6의이량체성가용성 FcγRIIB-Fc에대한결합을 ELISA로측정하였다. 모든 mab는유사한친화도로수용체에결합하였다. 도 5. hu2b6 변이체의 FcγRIIA에대한결합. Hu2B6N50Y; Hu2B6N50Y,V51A; Ch2B6, 및 Hu2B6의이량체성가용성 FcγRIIA-Fc에대한결합을 ELISA로측정하였다. 인간화 2B6 mab는선택적으로 CD32B에결합한다. 모든진한데이타점은서로의위에놓이고, 단지하나의진한사각형으로표시된다. [0123] [0124] [0125] 발명의상세한설명 5. 바람직한실시태양의설명 5.1 FcγRIIB-특이적항체본발명은항체또는그의단편이 FcγRIIA, 바람직하게는인간 FcγRIIA, 보다바람직하게는천연인간 Fcγ RIIA에결합하는것보다더큰친화도로 FcγRIIB, 바람직하게는인간 FcγRIIB, 보다바람직하게는천연인간 FcγRIIB에특이적으로결합하는인간화항체 ( 바람직하게는인간화모노클로날항체 ) 또는그의단편을포함한다. 바람직하게는, 본발명의인간화항체는천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에결합한다. 특정실시태양에서, 인간화항체또는그의단편은상기항체또는그의단편이 FcγRIIA에결합하는것보다 2배, 4배, 6배, 10배, 20배, 50배, 100배, 1000배, 10 4 배, 10 5 배, 10 6 배, 10 7 배또는 10 8 배더큰친화도로 FcγRIIB에결합한다. 한특정실시태양에서, 본발명의인간화항체는각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된마우스모노클로날항체로부터유래한다. 다른실시태양에서, 본발명의인간화항체는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960, 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11, 및 1F2에의해생산된마우스모노클로날항체로부터유도된다. 항체 2B6 및 3H7을생산하는하이브리도마는특허절차상미생물기탁에대한국제적승인에대한부다페스트조약의규정하에 2002년 8월 13일에아메리칸타입컬쳐콜렉션 ( 미국 20110-2209 버지니아주마나사쓰유니버시티불러바드 10801) 에기탁되었고, 각각기탁번호 PTA-4591 (2B6 생성하이브리도마 ) 및 PTA-4592 (3H7 생성하이브리도마 ) 를부여받았고, 이는그전부가본원에참고로포함된다. 1D5, 2E1, 2H9, 2D11 및 1F2를생산하는하이브리도마는부다페스트조약의규정하에 2004년 5월 7일에아메리칸타입컬쳐콜렉션에기탁되었고, 각각기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960 및 PTA-5959를부여받았고, 이는그전부가본원에참고로포함된다. [0126] [0127] [0128] 또다른실시태양에서, 본발명은당업계에공지되고본원에개시된표준방법을사용하여 FcγRIIA에대한친화도없이 FcγRIIB에배타적으로결합하는인간화 FcγRIIB 항체를포함한다. 한특정실시태양에서, 본발명은인간화 2B6 또는 3H7의 CDR을포함하는인간화항체를포함한다. 특히, 항체는서열 24의아미노산서열을갖는중쇄가변도메인및서열 18, 서열 20 또는서열 22의아미노산서열을갖는경쇄가변도메인을갖는다. 특정실시태양에서, 본발명은서열 37의아미노산서열을갖는중쇄가변도메인및서열 46의아미노산서열을갖는경쇄가변도메인을갖는인간화항체를포함한다. 또다른바람직한실시태양에서, 본발명의인간화항체는추가로 Fc 활성화수용체, 예를들어 FcγRIIIA, FcγRIIIB 등에결합하지않는다. 한실시태양에서, 본발명에따른 FcγRIIB-특이적항체는문헌 [Pulford et al., 1986 (Immunology, 57: 71-76)] 에개시된 KB61로지정된모노클로날항체, 또는문헌 [Weinrich et al., 1996, (Hybridoma, 15(2):109-6)] 에개시된 MAbII8D2로지정된모노클로날항체로부터유도된것이아니다. 특정실시태양에서, 본발명의 FcγRIIB-특이적항체는동일한에피토프에결합하지않고 / 않거나모노클로날항체 KB61 또는 II8D2와결합에경쟁하지않는다. 바람직하게는, 본발명의인간화 FcγRIIB-특이적항체는 FcγRIIb2 이소형의위치 135-141에대응하는아미노산서열 SDPNFSI에결합하지않는다. 본발명의인간화항체의불변도메인은항체의제안된기능에대해, 특히요구될수있는이펙터기능에대해선택될수있다. 일부실시태양에서, 본발명의인간화항체의불변도메인은인간 IgA, IgE, IgG 또는 IgM 도메인이다. 특정실시태양에서, 본발명의인간화항체가치료용으로의도되고항체이펙터기능이필요할때, - 23 -
인간 IgG 불변도메인, 특히 IgG1 및 IgG3 이소형의불변도메인이사용된다. 대체실시태양에서, 본발명의인간화항체가치료목적을위한것이고항체이펙터기능이요구되지않을때 IgG2 및 IgG4 이소형이사용된다. 다른실시태양에서, 본발명은그전부가본원에참고로포함된미국특허출원공개 2005/0037000 및 2005/0064514 ( 스타벤하겐 (Stavenhagen) 등 ); 각각 2003년 1월 9일, 2003년 3월 19일및 2003년 10월 23일출원된미국특허가출원 60/439,498; 60/456,041; 및 60/514,549; 및미국특허 5,624,821 및 5,648,260 및유럽특허 EP 0 307 434에기재된것과같은 Fc 영역내의하나이상의아미노산변형을포함하는인간화항체를포함한다. [0129] [0130] [0131] [0132] [0133] 바람직하게는, 본발명의인간화항체는천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에결합한다. 본발명의인간화항-FcγRIIB 항체는 CDR1 ( 서열 1 또는서열 29) 및 / 또는 CDR2 ( 서열 2 또는서열 30) 및 / 또는 CDR3 ( 서열 3 또는서열 31) 의아미노산서열을포함하는중쇄가변영역및 / 또는 CDR1 ( 서열 8 또는서열 38) 및 / 또는 CDR2 ( 서열 9, 서열 10, 서열 11 또는서열 39) 및 / 또는 CDR3 ( 서열 12 또는서열 40) 의아미노산서열을포함하는경쇄가변영역을가질수있다. 한특정실시태양에서, 본발명은인간화 2B6 항체를제공하고, 여기서 VH 영역은인간생식세포주 VH 세그먼트 VH1-18 (Matsuda et al., 1998, J. Exp. Med. 188: 2151062) 및 JH6 (Ravetch et al., 1981, Cell 27(3 Pt. 2): 583-91) 로부터의 FR 세그먼트, 및서열 1, 서열 2 또는서열 3의아미노산서열을갖는 2B6 VH의하나이상의 CDR 영역으로이루어진다. 한실시태양에서, 2B6 VH는서열 24의아미노산서열을갖는다. 다른특정실시태양에서, 인간화 2B6 항체는인간생식세포주 VL 세그먼트 VK-A26 (Lautner-Rieske et al., 1992, Eur. J. Immunol. 22:1023-1029) 및 JK4 (Hieter et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:1516-22) 로부터의 FR 세그먼트, 및서열 8, 서열 9, 서열 10, 서열 11 및서열 12의아미노산서열을갖는 2B6VL의하나이상의 CDR 영역으로이루어지는 VL 영역을추가로포함한다. 한실시태양에서, 2B6 VL은서열 18, 서열 20 또는서열 22의아미노산서열을갖는다. 다른특정실시태양에서, 본발명은인간화 3H7 항체를제공하고, 여기서 VH 영역은인간생식세포주 VH 세그먼트로부터의 FR 세그먼트및서열 37의아미노산서열을갖는 3H7 VH의 CDR 영역으로이루어진다. 다른특정실시태양에서, 인간화 3H7 항체는인간생식세포주 VL 세그먼트의 FR 세그먼트및서열 46의아미노산서열을갖는 3H7VL의 CDR 영역으로이루어지는 VL 영역을추가로포함한다. 특히, 본발명은천연인간 FcγRIIB의세포외도메인에면역특이적으로결합하는인간화항체를제공하고, 상기항체는 VH CDR1 및 VL CDR1; VH CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2 및 VLCDR1; VH CDR2 및 VL CDR2; VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR3 및 VH CDR1; VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR3 및 VL CDR3; VH1 CDR1, VH CDR2 및 VLCDR1; VH CDR1, VH CDR2 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR2, VH CDR2 및 VL CDR3; VH CDR1, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR1; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1 및 VL CDR3; VHCDR1, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VHCDR1, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VL CDR2 및 VL CDR3; VHCDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR2; VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR2, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; VH CDR1, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; VH CDR2, VH CDR3, VLCDR1, VL CDR2 및 VL CDR3; 또는본원에개시된 VH CDR 및 VL CDR의임의의조합물의임의의조합물로서 2B6 또는 3H7의 CDR 서열을포함한다 ( 또는별법으로이들로이루어진다 ). 본발명은인간항체 ( 수용항체 ) 의중쇄및 / 또는경쇄가변영역의하나이상의 CDR의하나이상의영역이 Fc γriia보다더큰친화도로 FcγRIIB에특이적으로결합하는공여모노클로날항체, 예를들어각각 ATCC 기탁번호 PTA-4591 및 PTA-4592의클론 2B6 또는 3H7에의해생산된모노클로날항체또는각각 ATCC 기탁번호 PTA-5958, PTA-5961, PTA-5962, PTA-5960 및 PTA-5959의클론 1D5, 2E1, 2H9, 2D11 및 1F2에의해생산된모노클로날항체의하나이상의 CDR의유사부분에의해치환된, FcγRIIB에특이적인인간화항체분자를제공한다. 다른실시태양에서, 인간화항체는 2B6, 3H7, 1D5, 2E1, 2H9, 2D11 또는 1F2와동일한에피토프에결합한다. 가장바람직한실시태양에서, 인간화항체는공여자뮤린항체와동일한에피토프에특이적으로결합한다. 당업계의숙련인은본발명이항체의전체적인 CDR 이식을포함함을이해할것이다. 따라서, 공여및수용항체는동일한종의동물, 심지어동일한항체클래스또는서브클래스로부터유도될수있다. 그러나, 보다일반적으로는, 공여및수용항체는상이한종의동물로부터유도된다. 전형적으로, 공여항체는비-인간 - 24 -