대한수혈학회지 : 제 19 권제 3 호, 2008 국내임상검사실의 2007 년도 HIV 혈청검사현황 김현숙 1 ㆍ왕진숙 3 ㆍ기미경 3 ㆍ박정용 1 ㆍ김영란 1 ㆍ이용래 2 ㆍ김성순 3 연세대학교의과대학진단검사의학과 1, 신진메딕스연구개발부 2, 질병관리본부면역병리센터에이즈ㆍ종양바이러스팀 3 = Abstract = The Current Status of HIV Serologic Testing in Korean Clinical Laboratories during the Year 2007 Hyon-Suk Kim 1, Jin-Sook Wang 3, Mee-kyung Kee 3, Jungyong Park 1, Young Ran Kim 1, Yong Rae Lee 2, Sung Soon Kim 3 Department of Laboratory Medicine, Yonsei University College of Medicine, Division of R&D, ShinjinMedix Co., National Institute of Health, Division of AIDS, Center for Immunology and Pathology, Seoul, Korea Background: HIV serologic testing is essential for blood donor screening, and the test results should be accurate. It is important that clinical laboratories perform quality control, quality management and standardization for obtaining accurate laboratory results. The Korean National Institute of Health, the Division of AIDS and the Center for Immunology and Pathology have all performed annual external quality surveillance assessment (EQS, EQA) with using a 5 sera panel for all the Korean HIV testing laboratories that have collaborated with the Quality Assurance Committee of the Korean Society of Laboratory Medicine since 2005. The results of HIV testing in the clinical laboratories during the year 2007 were analyzed. Methods: The results for the clinical laboratories that participated in the HIV EQAS during 2007 were collected and analyzed. The HIV test results and questionnaire data were sent to the web site http://hivqa.nih.go.kr. Three hundred thirty two results from 303 institutions in 2007 were analyzed. Results: The most widely used HIV testing method was an automated chemiluminescent immunoassay, such as the Abbott AxSym and the Architect system or the Roche Elecsys. About 5% of erroneous results were reported among 332 results. The causes of error were mostly clerical errors and specimen errors. Conclusion: The current status for HIV testing in Korean clinical laboratories was that fully automated immunoassay analyzers were used along with manual POCT tests. (Korean J Blood Transfus 2008;19:207-215) Key words: Human immunodeficiency virus (HIV), Quality control (QC), External quality assurance system (EQAS) 접수일 :2008년 12월 23일, 승인일 :2008년 12월 25일책임저자 : 김현숙 120-752 서울시서대문구성산로 250번지연세대학교의과대학진단검사의학교실 TEL: 02) 2228-2443, FAX: 02) 364-1583, E-mail: kimhs54@yuhs.ac 이연구는질병관리본부에이즈및성병실험실진단사업 (No. 340-347-2430-216) 에서지원되었음. - 207 -
대한수혈학회지 : 제 19 권제 3 호 서론 Human Immunodeficiency Virus (HIV) 검사는 1985년 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 법으로 HIV 항체검사를시작한이래, 여러가지 HIV 검사시약및장비들이개발되어다른검사들에비하여비교적빠르게변화되어왔다. 우리나라에서의 HIV 검사는의료기관 ( 병의원 ), 혈액원, 보건소, 상담소등에서 1차선별검사를실시하고양성결과는보건소를거쳐국립보건원에이즈면역결핍연구실에서확진검사를실시하던것을, 2006년부터는시ㆍ도보건환경연구원에서 anti-hiv 혈청검사의확진검사인웨스턴블롯검사를실시하여 HIV감염을최종판정하는단계로변화되었다. HIV 검사도다른검사들과마찬가지로정확한검사결과를얻기위해서는여러가지요인들을고려하여야한다. 여러요인중에서도효율적인정도관리와외부정도평가등이특히중요하다. 우리나라임상검사실에서의 HIV검사에관한외부정도관리는 1990년대초부터대한임상검사정도관리협회에서실시하고있다. 1,2) 하지만한개또는 2개의검체만을대상으로하고있으며여러면역혈청검사종목과함께실시하기때문에 HIV에대해서중점적으로정도관리하지는못하고있다. 질병관리본부면역병리센터에이즈ㆍ종양바이러스팀에서는우리나라에이즈검사에대해최종확인책임을가지고그동안임상진단뿐아니라연구에도노력을기울여왔다. 3-5) 2005년도부터는질병관리본부에서 HIV 검사외부정도평가프로그램 (External Quality Assurance System, EQAS) 을국가연구사업으로시작하였으며한번에 5 6개의패널검체들을보내어 HIV검사만을대 상으로하고있다. 공공기관은직접실시하고민간기관병의원에대한외부정도평가는대한진단검사의학회정도관리위원회와함께실시하고있다. 국내에서사용되고있는에이즈선별검사용 HIV 혈청검사현황을조사하고자, 2007년도질병관리본부와대한진단검사의학회정도관리위원회에서실시한 HIV EQA 패널 (panel) 검사에참여한기관들의결과를분석하였다. 재료및방법 1. 대한임상검사정도관리협회면역혈청분과에서실시하는에이즈검사 Anti-HIV 정도관리에참여하는기관들로서 HIV EQA 외부정도평가프로그램참여를수락하였거나대한진단검사의학회정도관리위원회에에이즈검사외부정도보증평가참여를신청한기관들을대상으로하였다. 각각 5개씩으로구성된서로다른세가지종류의외부숙련도평가용혈청패널검체를 1년에 2회보내어검사를실시하게하였고그결과를인터넷으로 HIV 실험실정도보증시스템 http:// hivqa.nih.go.kr 웹사이트에입력하도록하였으며 6) 입력시에간단한설문문항도함께답하도록하였는데그자료를분석하였다. 2. 외부정도평가패널의종류는 A, B, C의세가지였으며검체는각각서로다른 5개의패널로구성되었는데양성 2개와음성 3개를포함하도록구성하였다. 2007년도 1차결과를중심으로분석하였는데 1 차는전체 318기관에패널검체를발송하였으며 304기관에서결과를회신하였다. 이중두가지이상의방법이나항원검사를실시한다고응답한기관이 28개있었기때문에총 332개의검사결과치를얻었다. 그리고 1기관은설문에회신을하 - 208 -
국내임상검사실의 HIV 혈청검사현황 지않아설문결과는 303 기관을분석하였다. 결과 1. 에이즈 HIV 혈청검사를실시하는국내임상검사실의종류 상검사센터가 7% 를차지하였으며의원급도 3% 있었다 (Fig. 1). 2. HIV 혈청검사에사용되는검사방법민간기관에서통상검사에주로사용하는방법은자동화장비를이용하는 CLIA방법이가장많 HIV 혈청검사를실시하는민간기관은종합병원급이전체의 54% 이었고, 대학병원이 22.0%, 임 Fig. 1. Instituitions participated. Fig. 2. Routine method used for HIV test in clinical laboratory. Table 1. HIV testing method used by the type of laboratory University hospital General hospital Clinic Commercial lab Private blood center PublicHealth R&D and environment Other Total CLIA Ag+Ab 23 36 1 2 0 0 1 63 MEIA Ag+Ab 10 37 0 0 0 0 7 54 CLIA Ab 8 23 0 3 0 0 1 35 ELISA Ab 7 12 1 10 0 0 5 35 ELISA Ag+Ab 9 12 0 1 1 1 3 27 ECL Ag+Ab 4 8 0 0 0 0 0 12 MEIA Ab 3 5 0 1 0 0 0 9 ECL Ag 0 1 0 0 0 0 0 1 ECL Ab 0 1 0 0 0 0 0 1 FEIA Ab 0 1 0 0 0 0 0 1 PA 0 3 0 0 0 0 4 7 Rapid 2 21 8 5 0 0 21 57 Other 0 1 0 0 0 0 0 1 66 161 10 22 1 1 42 303-209 -
대한수혈학회지 : 제 19 권제 3 호 았다 (Fig. 2, Table 1). 3. HIV 혈청검사에사용되는검사장비및시약의분포 현재국내민간기관에서에이즈검사에가장많이사용되고있는장비는 AxSym과 Architect 등애보트사장비들이었다 (Table 2). 다음은 Elecsys 등 Roche사장비이었고, 다음으로는 Bayer사 Table 2. Reagents and analyzers used for HIV testing in clinical laboratory in 2007 in Korea Method Reagents No. Immunoassay (252) Architect 72 AxSym 62 IMx 4 Centaur 28 BioMerieoux VIDAS 3 BioRad 6 Johnson & Johnson Ortho Eci 3 Roche Elecsys 36 ADALTIS 3 Gen Biol GeneScreen 2 Green Cross Genedia 5 Dong-A Aidsdia 12 ShinjinMedix 7 Dade-Behring 5 LG 4 PA (9) Fujirebio 9 Rapid (70) Abbott Dinascreen 5 BCS 1 Biofocus 6 HBI 2 Humasis 3 Green Cross 4 SD 46 LG 2 Youngdong Pharmaceuticals 1 Ag assay (1) Roche E-module 1 Total 332 의 Centaur 장비가사용되고있었다. 4. 정답률및오답결과의분석 2007년도 1차 EQAS 결과화학발광법 / 효소면역법등 immunoassay 법을입력한총 252기관중정답결과는 239기관이었다. 이중패널종류를확인하지않고결과만입력하였으나정답으로처리된기관이 45기관포함되었다. 따라서, 정답여부만으로결과를검토하였을때정답율은 94.8% 로나타났다. 그리고, PA법을입력한기관들은 4 기관이패널종류를입력하지않았으나정답으로간주한다면모두정답을입력하였다. Rapid 법을실시하는 70기관중에서는 12기관이패널종류를입력하지않았으나결과만을기준으로해서검토하면오답은 1기관으로서 98.6% 의정답율이었다. 그리고이때검사결과가오답을보인기관들을정리하면 Table 3과같았다. 5. HIV 검사건수별기관수 Fig. 3에표시된것처럼연 3,400건정도에서 25,000건정도를검사한다고대답한기관들이많았으며연 35,000건이상많이검사하는기관도 16기관있었다. 6. 양성결과의재검양상양성결과는자체내에서재검하는경우가 98% 이었는데재채혈해서검사를할수있는경우도있지만외래환자들의경우에는어렵기때문에동일혈청으로다시재검하는율이 67% 로가장높았고다른장비나시약을이용하는경우도있었다 (Fig. 4). 7. 사용장비의유지보수빈도 HIV 검사장비의유지보수는연 3회받는다고대답한기관이대답을입력한 109기관중 51기관 - 210 -
국내임상검사실의 HIV 혈청검사현황 Table 3. List of the patterns of erroneous results Method Institution Panel Error ELISA Ab h1 B 3 False positive h2 C 5 False positive* MEIA Ag+Ab H01 C 3 False negative H02 C 3 False negative H03 C 1 False negative H04 C 3 False negative H05 C 1 Indeterminate H06 B 5 False negative H07 C 5 False positive H08 C 1 False negative H09 C 1 False negative CLIAAg+Ab h001 B 2 False (weak) positive CLIA Ab h002 B 2 False positive Rapid test h003 B 3 False positive *clerical input error; misidentification of the specimen. Fifteen error results were noted among total 332 test results analyzed. 으로가장많았고연 2회유지보수관리를받고있는곳이 18기관이었다. 그렇지만, 문제가생기면받는다고대답한곳도 21곳으로많았다 (Fig. 5). 고찰수혈로인한감염질환의전파는가장경계하고조심해야할수혈부작용이다. 감염질환의전파를막기위해헌혈자선별검사를일찍부터매독과 B 형간염에대해시작하였고, 원인이제대로밝혀지지않은수혈후간염을막기위해서헌혈자의간효소치 ALT (SGPT) 검사를실시해왔다. 1984 년에는후천성면역결핍증 (acquired immunodeficiency syndrome, AIDS, 에이즈 ) 이밝혀졌고, 3) 이어 1989년에는 C형간염의원인이밝혀지면서곧이어특이항체검사들도개발되어헌혈자선별 검사로도입되었다. 그러나, 아직완치방법이없고예방주사가개발되지않았을뿐아니라감염경로가수혈외에성접촉이라는특이점때문에수혈을받을때뿐아니라일반인들도특히에이즈감염에대해가장예민한것이사실이다. 따라서, 에이즈선별검사는다른검사에비해서매우높은민감도와특이도가요구되고있다. 에이즈검사는원인바이러스인 human immunodeficiency virus (HIV) 1, 2에대한항체를검출하는것이고효소면역법으로처음개발되어널리사용되어왔다. 사용하는항원이개량됨에따라초기바이러스배양액에서항원을얻었던 1세대검사시약부터재조합항원을사용한 2세대시약, 합성펩티드항원을사용한 3세대시약과 1999년부터는 HIV 1, 2 항체외에 p24 항원검사가가능하게됨에따라항체와함께항원까지검 - 211 -
대한수혈학회지 : 제 19 권제 3 호 Fig. 4. Characteristics of the repeated tests. Fig. 5. Frequency of maintenance of the analyzer. Fig. 3. Number of institutions by HIV test volume. 사할수있는 4세대시약까지정확도와특이도는계속개선되었다. 또, 검사실의자동화추세에따라화학발광면역법 (chemiluminescent immunoassay, CLIA) 이나 electro chemiluminescent immunoassay (ECLA) 등변형된면역검사법 (modified immunoassay) 들이개발되었는데더높은민감도와특이도를가지고있으며효소면역법검사를빠르게대체해가고있다. 간편한신속검사법으로환자옆에서즉시검사할수있는 point-of-care testing (POCT) 검사 도또다른임상검사실의경향으로자리잡고있다. 우리나라에서도에이즈는법정전염병으로서국내에서유병률은높지않으나감염전파의위험성이매우크고감염이최근증가하고있기때문에국가에서관리하고있으며 4) 확진검사는질병관리본부를통해국가에서지원하고있다. 또, 등록된환자에대해서는진료및치료비를지원하고있다. 질병관리본부에이즈ㆍ종양바이러스팀에서는국내일부보건환경연구원을지정하여각검사실에서일차 anti-hiv 검사에서양성반응을보인검체를이송의뢰받아서확인검사로 Western blot 검사를실시하게하고있다. 또등록된환자의 HIV RNA viral load 검사와 CD4 T 세포수검사를의뢰하면에이즈ㆍ종양바이러스팀에서국가비용부담으로실시해주고있다. 에이즈관련감염내과전문의가있는큰병원에서실시한 - 212 -
국내임상검사실의 HIV 혈청검사현황 등록된환자의 HIV RNA viral load 검사와 CD4 T 세포수검사는국가에서환자에게매월비용을후불로돌려주고있다. 에이즈ㆍ종양바이러스팀에서는이러한국가정책에따른지원외에공공기관의에이즈검사에대한정도관리및외부정도평가를지원하고있으며, 분리된에이즈바이러스의특성분석등우리나라에이즈관련연구의중심이되고있다. 4) 에이즈ㆍ종양바이러스팀에서는국가연구사업을통하여민간기관들에대해서도에이즈검사의현황을파악하고질관리의표준화를기하기위하여연구과제를계획하여대한진단검사의학회에의뢰하여외부정도평가와설문조사를실시하고있다. 국내신규 HIV 감염자전파방지와조기발견을위해서는일차로실시하는 HIV 혈청검사가무엇보다도중요하기때문에국내에서실시되고있는 HIV 혈청검사현황에대한확인과점검이이연구의주안점이다. 현재 1차 HIV 검사기관에서는검사결과양성이면시ㆍ도보건환경연구원과질병관리본부에이즈ㆍ종양바이러스팀에확인검사를의뢰하게되는데이중민간기관이약 30% 에이른다. 따라서, 에이즈검사의정확도보증을위해서는민간병의원의 HIV 혈청검사에대한외부정도평가도필수적이다. 최근에는급성 HIV 감염및초기감염자수가증가하고있어 ( 신규감염자의 0.5%) 시약이나검사방법에따라서는큰문제가될수도있다. 대상기관은일차적으로대한진단검사의학회정도관리위원회에참가신청을한기관들을대상으로하였는데자발적으로참가희망하는신청기관수가너무적어서, 다시대한임상검사정도관리협회에등록된회원기관들을대상으로민간기관중에서 HIV검사를실시하는지여부를확인 하고연락을취하여참여하도록하였다. HIV검사의외부정도평가용혈청 panel을일괄제조하여 1년에두번보냈는데, 1차는 2007년 7월 10일에 318기관에송부하였고, 2차는 1차에서취합한결과를바탕으로실제 HIV검사외부정도평가사업참가가가능한역시 318기관에 12월 10일에냉장택배로우송하였다. 2005년도부터처음민간기관에외부정도평가물질을보내면서 panel로대량의혈청제조시발생하였던문제들, 즉, 에이즈양성혈청을구하기가어렵다는근본적문제때문에혈청의양이너무적고제조된패널혈청도혈청내일부침전물이생기는등검체의문제가있어제대로분석하지못하였다. 현재는패널혈청이많이개선되었기에이번에지난해결과를분석하여보았다. 현재국내에서 HIV검사를실시하는민간기관은 300여기관으로파악되었다. 1차에서 318기관에우송하여 304기관에서이중검사법을포함하여 332개결과가회신되었고, 2차는역시 318기관에보내었는데 315기관에서 338개결과가회신되었다. 또, 민간기관에서주로사용하는장비와시약이공공기관과는상당히많이달랐다. 공공기관보건소등에서는아직도 microplate를이용한효소면역법 (ELISA) 이가장많이사용된다고하는데, 민간기관에서는미국애보트사제품이제일많이사용되고있어서전체 EIA법의 50.6% 를차지하였다. 애보트사제품중에서도 Architect가가장널리사용되고있었으며, 같은애보트사제품의장비인 AxSym이다음으로사용되고있었고, IMx는 1차와 2차에서 4 6기관이사용하고있었다. 다음으로는 Roche사의시약점유율이높았는데 Elecsys장비가제일많고다음으로새로운 modular system인 E-170과 CobasCore 장비도사용 - 213 -
대한수혈학회지 : 제 19 권제 3 호 되고있었다. 다음으로는 Bayer 사의 Centaur 장비가 20여기관에서사용되고있었다. 그리고다음으로국산시약녹십자제품이 Genedia I/II와 Genedia Ag+Ab가사용되고있었다. 따라서, 공공기관과민간기관은현재는기관의특성에따라사용장비나정도관리시스템도다르고다양하였으며검사인력구성원의비율도상당히달라, 이번연구와같은통일된전반적인정도평가시스템이도움이될수있을것으로생각되었다. 7,8) 그리고, 다른보고자들과마찬가지로 9) 오류를보인대부분의원인은입력실수등사무적착오가제일많았고이번의경우작년보다는많이개선되었지만검체의양이적어서자동화된검사실장비에서제대로측정되지않거나혈청내아주작은침전물이생기는등검체문제가아직도남아있었다. 이런부분외에검사를실시하고결과를보고하였는데결과가잘못된경우는약 5% 정도로나타났다. 대개는결과판정이문제였는데수기법인 rapid 법에서는판독시간을정확하게지켜지침대로해야하는데그러지못하였고, MEIA 법의 AxSym장비사용기관중일부가너무강한양성인경우 Invalid 결과가의미없는 0에가까운수치즉, 0.05 등으로프린트되는데이 Invalid를보지않고그냥단순음성으로판정한경우들이었다. 이결과는 0에가까운수치가프린트되는장비도문제가있는것으로생각되어, 장비공급처에환기하여사용상주의점으로명시하도록하였다. 그리고결과지에찍힌 Invalid라는표시를무시하고위음성으로단순판정한이들기관검사담당자에게는일일이전화를걸어확인해주었다. 이중에서 MEIA법의 AxSym이일부위음성결과들을보여심각한문제로생각되어확인하면서다시한번 Immunoassay 장비에관한정도관리의 필요성과중요성을실감할수있었다. 10-12) 평소에이즈양성결과를별로볼수없는병원급에서는이때 Invalid에유의하여확인하지않고 0에가까운수치만보고음성으로단순보고한다는사실을알게되어, 해당장비회사와오답기관에전화를걸어확인하여준것이었다. 그외에는패널검체의제조상의문제때문에미세한과립들이문제가되거나 rapid test에서판독시간을엄수하지않은경우였다. Rapid test 중어떤시약은판독시간이경과하고두었다가보면모두양성으로나타난다는것이문제였다. 앞으로워크숍등을통해각기관에따른개별적인 feed back을계획하고있으며, 13,14) 적절한물질로실시하는외부정도평가가검사의질향상에도움이되는사례로판단되었다. 원래정도평가는사무적오류도포함하는것으로써, 9) 검사결과자체는모두정답이라도패널종류가잘못입력되면오답기관으로처리하는것이원칙이지만, 2007년도 EQA 공문에서패널표기가불분명한점이지적되었고또외부정도평가자체가어떤평가목적이아니고현황파악과함께교육및환류목적이므로해당되는각임상검사실에일일이전화를걸어오류를말해주고시정할수있도록하였다. 요약 배경 : 헌혈자선별검사에있어서필수적인 HIV 혈청검사는특히정확한검사결과가요구된다. 정확한검사결과를얻기위해서는검사실정도관리와질관리, 표준화가매우중요하다. 본연구는질병관리본부에이즈ㆍ종양바이러스팀과대한진단검사의학회정도관리위원회에서민간기관을대상으로 5개의혈청패널을보내어실시한 2007년도외부정도평가 (external quality surveil- - 214 -
국내임상검사실의 HIV 혈청검사현황 lance assessment, EQA) 결과를분석하여국내임상검사실에서의 HIV 혈청검사현황을파악하고자하였다. 방법 : 2007년도질병관리본부 HIV EQA에참여한민간기관을대상으로하였다. 5개의패널로구성된외부정도평가용검체들의 HIV 혈청검사결과와설문결과를인터넷웹 http://hivqa.nih. go.kr에입력하도록하여그결과를분석하였다. 303기관에서이중으로검사한결과까지 332개의 anti-hiv 검사결과가입력되어분석하였다. 결과 : 민간기관에서는애보트 AxSym과 Architect 등의자동화된 CLIA방법이가장널리사용되고있었다. 실제 332개의 HIV 혈청검사결과약 5% 의기관에서오답결과를보고하였는데, 그원인은주로사무적착오였거나검체상의문제, 또는장비의특징을잘이해하지못한때문이었다. 결론 : 실제민간기관에서실시하는 HIV 혈청검사현황을파악할수있었다. 민간기관은자동화장비를이용하는 CLIA 법이가장많이사용되고있으며, 더불어간편신속검사법인 POCT test 도상당히많이사용되고있었다. 참고문헌 1. Cha YJ. Clinical laboratory and quality assurance 30 years in Korea - Immunoserology Subcommittee-. J Lab Med Qual Assur 2006; 28(Suppl 2):S309-22 2. Cha YJ, Kwon SY, Kim TY, Kim JR, Kim HS, Park MH, et al. Annual report on external quality assessment in immunoserology in Korea (2005). J Lab Med Qual Assur 2006; 28:41-61 3. Detrick B, Baseler MW. Human immunodeficiency virus. In: Detrick B, Hamilton RG, Folds JD. Manual of molecular and clinical laboratory immunology. 7th ed. Washington DC: American Society for Microbiology Press, 2006:831-61 4. Kim SS, Suh SD, Kim OJ, Lee MW, Lee JS, Kim HS, et al. External quality assessment in anti-hiv enzyme immunoassay in Korea. J Lab Med Qual Assur 2000;22:293-301 5.Kim HS. HIV serologic testing and quality control. J Lab Med Qual Assur 2002;24(Suppl 2):S315-23 6. Korean National Institute of Health, HIV- EQA. http://hivqa.nih.go.kr [Online] (last visited on 12 December 2008) 7. Cembrowski GS, Carey RN. Adding value to proficiency testing programs. Clin Chem 2000;46:7-8 8. Westgard JO. Planning statistical quality control procedures. In: Rose NR, Hamilton RG, Detrick B. Manual of clinical laboratory immunology. 6th ed. Washington DC: ASM Press, 2002:1239-50 9. Jenny RW, Jackson-Tarentino KY. Causes of unsatisfactory performance in proficiency testing. Clin Chem 2000;46:89-99 10. Miller WG. Quality control. In: McPherson RA, Pincus MR. Henry s clinical diagnosis and management by laboratory methods. 21st ed. Philadelphia: Saunders Elsevier, 2007:99-121 11. Howanitz PJ, Howanitz JH. Quality assurance. In: Rose NR, Hamilton RG, Detrick B. Manual of clinical laboratory immunology. 6th ed. Washington DC: ASM Press, 2002: 1227-38 12. Bock JL. The new era of automated immunoassay. Am J Clin Pathol 2000:113:628-46 13. Kim HS. Future directions in external quality assessment of immunoassay subcommittee. J Lab Med Qual Assur 2001;23(Suppl):275-6 14. Feldkamp CS, Carey JL. Standardization of immunoassay methodologies. In: Rose NR, Hamilton RG, Detrick B. Manual of clinical laboratory immunology. 6th ed. Washington DC: ASM Press, 2002:1215-26 - 215 -