한국식물 인간 환경학회지 10(4); 112-118, 2007 백련 4 종류잎추출물의생리활성효과 박용서 1,3 고린스테인셜라 2 유용권 1 임명희 3 박윤점 4 김현주 4 정선요 5 허북구 6* 1 목포대학교응용생명과학부, 2 이스라엘히브리대학교약학과, 3 목포대학교지역특화작목산업화센터, 4 원광대학교원예 애완동식물학부, 5 경북대학교생명공학부, 6 ( 재 ) 나주시천연염색문화재단 In Vitro Assa on Phsiological Activities of Leaf Extracts in Four White Lotus Cultivars Yong Seo Park 1,3 Shela Gorinstein 2 Yong Kweon Yoo 1 Mung Hee Im 3 Yun Jum Park 4 Hun Ju Kim 4 Sun-Yo Jung 5 Buk Gu Heo 6* 1 Division of Biotechnolog and Resources, Mokpo National Univ., 2 Department of Medicinal Chemistr and Natural Products, School of Pharmac, Hebrew Universit of Jerusalem, Israel, 3 Institute of Regional Crop Research, Mokpo National Universit, 4 Division of Horticulture and Pet Animal-Plant Science, Wonkwang Univ., 5 School of Life Sciences and Biotechnolog, Kungpook National Univ., 6 Naju Foundation of Natural Deing Culture ( * Corresponding author) ABSTRACT This stud was conducted to gather the basic data on phsiological activities of leaf extracts from white lotus for the increase of public consumption. The leaves of four species of white lotus including cv. 'Garam', 'Choeue', 'Baekwageolleon', and 'Seungdal' were harvested, and their phsiological activities of extracts from the heated water and ethanol were examined. Total phenol contents were highest in the extracts of heated-water from the white lotus cv. 'Choeue' b 78.3 μg ml -1 and in ethanol extracts from cv. 'Baekwageolleon' b 146.8μg ml -1. DPPH radical scavenging activit was highest at 2,000ppm of the heated-water and ethanol extracts of white lotus cv. 'Seungdal' b 83.9% and 94.0%, respectivel. Total flavonoid contents in the ethanol extracts of cv. 'Seungdal'(63.6μg ml -1 ) and 'Choeue'(92.2 μg ml -1 ) were higher than those in the heated-water extracts of cv. 'Choeue' (28.8 μg ml -1 ). Nitrite scavenging activit of heated-water extracts of cv. 'Choeue' extracted was 69.2%, and ethanol extracts of 'Baekwageolleon' 80.7%. No significance in trosinase inhibition activit of the leaf extracts from four species of white lotus among those species and solvents were observed. Anti-microbial activit of the ethanol extracts was higher than that of the heated water, showing bigger inhibition diameter (8.3 to 11.2mm). Kewords : nitrite scavenging activit, trosinase inhibition activit, antioxidant activit, anti-microbial activit 이논문은농림부농림기술개발사업의연구비지원 ( 연의수확후저장 가공기술개발및기능성의임상적연구 ) 에의해수행되었습니다. Ⅰ. 서언 6) 연 (Nelumbo nucifera) 은아시아남부, 북호주가원산지인쌍떡잎식물로써수생식물중부엽식물에속하는다 Received on Oct.25, 2007. Accepted on Dec.16, 2007 E-mail : bukgu@naver.com 년생초본이다. 주로연못에서자라지만식용을목적으로논밭에서재배하거나화훼용으로수생식물원이나용기에재배되기도한다. 둥근방패모양의잎은지름이 50-80cm로물위에나오고, 꽃은 7-8월에피며, 과실은견과이다 (Lee 등, 2006). 연근이주성분은탄수화물로식이섬유소가풍부하여장내의활동을촉진시키고, 체내콜레스테롤수치를 112
백련 4 종류잎추출물의생리활성효과 저하시키는작용이있다 (Park 등, 2005a). 또식용, 해열, 강장, 지혈의약용효과가있어예로부터이용되어왔으며, 혈압강하효과, 지혈효과, 니코틴해독효과, 진정작용이있는것으로보고되어있다 (Park 등, 2005b). 잎은예로부터출혈성위궤양이나위염, 치질, 출혈, 설사, 야뇨증, 각종독성물질에대한중화작용을하는것으로알려져민간치료제로사용되어왔다 (Lee 등, 2006). 최근에는백련잎을중심으로연잎차가개발되어차로도많이이용되고있지만성분분석, 항산화효과, 전분의특성, 음료등의연구가이루어져있는연근과는달리생리활성연구는거의없는실정이다. 따라서본연구는백련잎의소비촉진및부가가치를향상시켜농가의수익증대에기여하고자백련 4종류잎의열수와에탄올추출물의생리활성효과를조사하였다. Ⅱ. 재료및방법 1. 시료 본연구에사용한연잎은 2007년 8월중순경에전남무안군청계면월선리백련시험포장에서재배중인 가람, 초의, 백화건련, 승달 백련의잎을채취한것이었다. 2. 추출방법 시료의추출은백련잎을채취한후 2시간이내에실시하였는데, 열수추출은증류수 3L에잘게조제한연잎 500g을넣은다음 100 에서 30분간추출하였다. 에탄올추출은잘게조제한시료 500g에 95% 에탄올을 3L를첨가하여상온에서 24시간동안추출하였다. 추출물은 60 에서 3시간동안환류냉각추출을 3회반복하여냉각한다음매회여과한여액을혼합하고회전진공농축기로농축하여시료로사용하였다. 3. 총페놀화합물함량 총페놀화합물함량은 Folin-Denis 방법 (Dewanto 등, 2002) 에따라분석하였다. 시료를 1μg ml -1 농도로조제한후, 이시료액 1mL에증류수 3mL를첨가하고, Folin-ciocalteau's phenol reagent 1mL를첨가한후 2 7 Shaking bath에서혼합하였다. 5분후 NaCO 3 포화용액 1mL를넣어혼합하여실온에서 1시간방치한후 640nm에서흡수분광광도계 (UV-1650PC, Shimadu) 로흡광도를측정하였다. 페놀화합물함량은표준물질 ferulic acid의농도를이용하여검량선을작성한다음정량하였다. 4. 전자공여능전자공여능측정은 DPPH(α,α-diphenl-β -picrl-hdral) 법을이용하여시료의라디칼 (radical) 소거효과를측정하는 Blois(1958) 의방법을약간변형하여측정하였다. 1 10-4 M DPPH 와농도별추출물을각각 100 μl씩취하여혼합하고, 30분간암상태에서방치한후 ELISA Reader(Bio-RAD, USA) 를이용하여 517nm에서잔존라디칼농도를측정하였다. 시료의환원력의크기는라디칼소거활성 (Scavenging activit) 으로표시하였고, RC 50 은 DPPH 농도가 1/2로감소하는데필요한시료의양 ( μg ) 으로나타내었으며항산화물질로잘알려진 BHT (butlated hdroxtoluene) 와비교하였다. 즉, DPPH 라디칼소거활성 (%) = ( 시료를첨가하지않은대조구의흡광도 -시료를첨가한반응구의흡광도 / 시료를첨가하지않은대조구의흡광도 100 으로하였다. 5. 총플라보노이드함량각시료 0.1g에 75% methanol을가하여실온에서하룻밤동안추출한다음이검액 1.0mL를시험관에취하고 10mL의 diethlen glcol 을가하여잘혼합하였다. 다시여기에 1N NaOH 0.1mL를잘혼합시켜 37 의 water bath에서 1시간동안반응시킨후 420nm에서흡광도를측정하였다. 공시험은시료용액대신 50% methanol 용액을동일하게처리하였으며, 표준곡선은 Naringin(Sigma co., USA) 을이용하여작성하고이로부터총플라보노이드함량을구하였다. 6. 아질산염소거효과아질산염소거효과는 Gra 등 (1975) 의방법을준하여측정하였다. 즉, 1mM NaNO 2 20μl에시료의추출액 40μl와 0.1N HCl (ph 1.2) 을 140 μl사용하여부피를 200μl로맞추었다. 이반응액을 37 항온수조에서 1시간반응시킨후 2% acetic acid 1000 μl, Griess 시약 (30% acetic acid로조제한 1% sulfanilic acid와 1% naphthlamine을 1:1 비율로혼합한것, 사용직전에조제 ) 80 μl를가하여잘혼합시켜빛을차단한상온에서 15분간반응시킨후 520nm에서흡광도를측정하여아래와같이아질산염소거능을구하였는데그식은 113
박용서 고린스테인셜라 유용권 임명희 박윤점 김현주 정선요 허북구 아질산염소거율 (%)=1-(1시간반응후의 1mM NaNO 2 의흡광도 -공시험구의흡광도 ) / 1mM NaNO 2 의흡광도 100N(%) 으로하였다. 7. Trosinase의활성저해 Trosinase의활성저해분석에의한미백활성효과는멜라닌합성의 keenme인 trosinase의작용결과생성되는 DOPA (Dihdroxiphenlalanine) 의생성물의흡광도를흡수분광광도계 (UV/VIS spectrometer, Jasco, Japan) 를이용하여측정하였다. 기질로서시험관에 0.1M potasium phosphate buffer (ph 6.8) 0.4mL, 0.03% trosine solution 0.4mL, 시료용액 0.1mL의혼합액에효소액 0.05mL(100units) 를첨가하여 37 에서 10분간반응시킨후신속하게 ice에서 5분간방치하여반응을중단시킨다. 이반응액을 475nm에서흡수분광광도계를이용하여흡광도를측정한후 trosinase 효소활성저해율을구하였다. 효소활성저해율은시험시료가포함되지않은반응액을대조군으로하였는데, 그식은 trosinase 저해활성 (%)= [( 시험시료 ) 가들어있지않은반응액의반응후흡광도-시험시료가들어있는반응액의반응후흡광도 ) / 시험시료가들어있지않은반응액의반응후흡광도 ] 100으로하였다. 8. 항균활성측정시료추출물을여과지 (Whatman No.2) 로여과한후항균활성을측정하였다. 균주는그람양성세균인 Bacillus subtilis(kctc 1022), Bacilus cereus(kctc 1012), Listeria monoctogenes(kctc 3569) Streptococcus mutans(kctc 5125) 4종과그람음성세균인 Pseudomonas aeruginosa(kctc 1636), Escherichia coli(kctc 2441), Salmonella enteritidis(kctc 1240) 3종을사용하였으며, 균의배양은공시균주의활성화를위하여 nutrient broth(nb) 에 1 백금이씩접종한후 35 에서 24시간배양하였다. 항균활성은균액을 4 5mm 두께가되도록분주한 nutrient agar(na) 평판배지에 0.1mLl씩주입하여균일하게도말하고, 멸균 paper disk( 8mm, Too Roshi Kaisha) 에추출액을 1,000ppm액이되도록만든용액을 50μl /disk를흡수시킨다음 35 에서 24시간동안배양한후 paper disk 주위의 clear one의전체직경 (mm) - paper disk( 8mm) 을측정하였다. 9. 통계처리각각의조사분석은 3반복이상으로하였으며, 통계처리는 SAS 프로그램중에서분산분석 (ANOVA) 을실시하여 Duncan's multiple test로시료간의유의성을검정하였다. Ⅲ. 결과및고찰 1. 총페놀함량백련 4종류잎의총페놀함량을조사한결과열수추출물은 초의 에서 78.3 μg ml -1 로, 에탄올추출물은 백화건련 에서 146.8μg ml -1 로가장많게나타나백련의종류나용매에따른차이를보였다 (Table 1). 페놀성물질은다양한구조와분자량을가지며, 이것들의 phenolic hdroxl이단백질처럼거대분자와결합을하여항산화, 항균, 항암등의생리기능을가지는것 (Dural 과 Shett, 2001; Park, 2005) 으로알려진만큼함량이많을수록기능성물질로유용하게활용할수가있다. 그러므로총페놀함량의수율측면에서는에탄올을용매로하여 백화건련 이나 가람 을대상으로추출하는것이바람직할것으로생각되지만, 백련잎을차로이용할때는물이용매로사용되므로 초의 를이용하는것이좋을것으로판단된다. Table 1. Total phenol contents of leaf extracts from four white lotus cultivars. Extraction solvent Total phenol compound contents ( μg ml -1 ) Heated water 44.9 b 78.3 a 32.2 c 48.9 b Ethanol 133.9 b 97.9 d 146.8 a 106.7 c 2. 전자공여능 백련 4 종류의잎추출물에대하여 DPPH 라디칼소 거활성을측정한결과 승달 의열수추출물과 백화건련 의에탄올추출물에서높은전자공여능을보였다 114
백련 4 종류잎추출물의생리활성효과 (Table 2). 용매에따른 DPPH 라디칼소거활성은에탄올추출물에서확연하게높게나타나 500ppm 이상의농도에서는연의종류에관계없이 83.5% 이상을나타냈다. 반면에열수추출물은 승달 추출물 2,000ppm에서만 83.3% 이상을나타냈으며, 그외는 57.4% 미만을나타내었다. 따라서이용시는에탄올추출물의경우 DPPH 라디칼소거활성인높게나타난 백화건련 이좋지만열수를이용하는차의경우는열수추출물에서 DPPH 라디칼소거활성이높게나타난 승달 이좋을것으로생각된다. 한편, 최근산화적스트레스에의해기인한많은종류의질병이발생되고있으며 (Yagi, 1987), 이와관련하여우수한항산화활성을갖는물질에대한탐색연 구가활발히진행되고있다. 현재널리사용되고있는항산화제는 BHA(butlated hdrox hdrox anisole) 와 TBHQ(2-tert-butl hdroquinone) 같은합성품인데, 이들을 50mg/kg/da 이상의고용량으로장기간복용시지질대사의불균형과암을유발시킬수있기때문에이들의사용을제한하고있는실정이다 (Brane, 1975). 그러므로이러한합성산화제를대체시킬수가있는우수한천연항산화제의개발이시급하게요구되고있다는점에서열수추출시다른종류에비해상대적으로 DPPH 라디칼소거능이높게나타난 승달 잎추출물을차로음용하면항산화효과를기대할수있을것으로생각되며, 에탄올추출물은천연항산화제로서자원가치가있을것으로생각된다. Table 2. DPPH radical scavenging activit in the leaf extracts from four white lotus cultivars. Heated water Concentration(ppm) DPPH radical scavenging activit, % of control 31.25 5.3 c 18.9 b 2.8 c 39.0 a 62.5 8.6 c 27.3 b 5.6 c 45.6 a 125 12.3 c 34.8 b 7.1 c 49.4 a 250 15.0 c 42.9 b 9.5 d 66.6 a 500 14.9 c 43.1 b 9.9 d 68.6 a 1,000 20.7 c 45.7 b 19.3 c 70.2 a 2,000 27.9 cd 57.4 b 19.8 d 83.3 a 4,553.0a 1,383.0 c 2,632.0 b 129.3 d Ethanol 31.25 33.0 b 18.0 d 42.2 a 28.7 c 62.5 51.2 ab 30.3 c 66.4 a 46.2 b 125 64.9 bc 51.4 c 88.2 a 70.7 b 250 82.2 b 72.5 c 90.1 a 88.1 a 500 84.6 b 83.5 b 90.3 a 90.0 a 1,000 85.5 b 87.5 ab 90.6 a 92.0 a 2,000 86.4 b 88.4 ab 90.8 a 94.0 a RC 50 RC 50 sample amounts( μg /ml) which those DPPH concentration to reduce b half. 60.4 b 120.0 a 41.32 c 76.2 b 3. 총플라보노이드함량 백련의종류잎추출물의총플라보노이드함량을분석한결과 초의 에서가장많게나타나열수추출물에서는 28.8 μg ml -1, 에탄올추출물에서는 92.2 μg ml -1 를나타냈다 (Table 3). 플라보노이드류는담황색또는노란색을띠는색소화합물로서식물중에는대부분당과결합된배당체형태로존재하며, 하루한사람섭취량이 23-1,000mg 정도이고특이한부작용이없는것으로알려져있다 (Miake 등, 1998). 현재까지플라보노 이드는약 4,000종이상이알려져있는데, 항산화작용, 순환기계질화의예방, 항염증, 항알레르기, 항균, 항바이러스, 지질저하작용, 면역증강작용, 모세혈관강화작용등에효과가있는것으로알려져있다 (Cha와 Cho, 2001; Kawaguchi 등, 1997). 그러므로플라보노이드의함량측면에서는열수추출물이나에탄올추출물에서함량이높게나타난 초의 의이용성이좋은것으로나타났다. 115
박용서 고린스테인셜라 유용권 임명희 박윤점 김현주 정선요 허북구 Table 3. Total flavonoid contents in the leaf extracts from four white lotus cultivars. Total flavonoid contents ( μg ml -1 ) Heated water 0.4 b 28.8 a 0.6 b 0.9 b Ethanol 90.3 a 92.2 a 83.5 b 63.7 c 4. 아질산염소거작용백련 4종류잎추출물의아질산염소거효과를분석한결과 200ppm일때열수로추출한것은 초의 69.2% 를제외하고는 36.7% 이하였으나에탄올로추출한것은모두 67.8% 이상을나타냈으며, 특히 백화건련 은 80.7% 를나타내었다 (Table 4). 비파추출물의용매별아질산염소거를조사한결과핵산, 클로로포름및물추출물에비해메탄올추출물에서효과가높게나타났다는 Bae 등 (2002) 의연구결과를감안할때본연구결과에서에탄올추출물에서아질산염효과가높게나타난것은용매에따른차이인것으로판단되었다. 한편, 식품의가공및저장중에널리이용되고있는아질산염이단백질식품, 의약품및잔류농약등에함유되어 2급및 3급아민과반응하여생성된 nitrosamine이독성물질로서일정농도이상섭취하게되면혈액중의헤모글로빈이산화되어메트헤모글로빈을형성하여각종질병을일으키는것으로알려지면서이에대한생성억제방법이모색되고있다 (Normington 등, 1986). 그러므로본연구결과잎의열수추출물 2,000ppm에서 69.2% 의아질산염소거효과가높게나타난 초의 등을차로가공하여음용하면아질산염소거효과에도움이될것으로생각된다. Table 4. Nitrite scavenging activit in the leaf extracts from four white lotus cultivars. Heated water Concentration (ppm) Nitrite-scavenging effect (%) 500 12.0 b 29.7 a 9.5 b 1.4 c 1,000 22.4 b 42.4 a 13.6 c 3.5 d 2,000 36.7 b 69.2 a 24.4 c 13.5 d 500 48.4 c 55.6 bc 75.3 a 65.7 b Ethanol 1,000 67.5 b 70.0 b 76.8 a 66.2 b 2,000 74.7 b 74.4 b 80.7 a 67.8 c 5. Trosinase의활성저해멜라닌색소의주된생성과정의생합성경로는 trosine을출발물질로하여 trosinase의효소작용에의해서생성되는 dopaquinone 등의유도체를경유하여아미노산및단백질과의중합반응으로생성된다 (Lerner 와 Fitpatrick, 1950; Pawelek와 Korner, 1982). 그러므로멜라닌생성의효소인 trosinase 효소자체 를억제하면미백효과를기대할수있다. 그런점에서백련 4종류추출물이멜라닌색소의중요한단계를촉매하는효소인 trosinase 활성의저해효과를조사한결과백련종류나추출용매및농도에관계없이 2% 미만을나타냈다 (Table 5). 따라서백련 4종류잎추출물에서 trosinase 활성의저해효과를기대하기는어려울것으로생각된다. Table 5. Trosinase inhibition activit in the leaf extracts from four white lotus cultivars. Heated water Concentration (ppm) Mushroom trosinase inhibition activit (% of control) 1,000 1.14 a 1.17 a 1.02 a 1.10 a 2,000 1.24 a 1.20 a 1.04 a 1.09 a 1,000 1.21 a 1.26 a 1.14 a 1.11 a Ethanol 2,000 1.31 a 1.39 a 1.21 a 1.33 a 116
백련 4 종류잎추출물의생리활성효과 6. 항균활성백련 4종류잎추출물의항균활성은균의종류에따른차이는있었지만전반적으로에탄올추출물과 가람 및 초의 에서다소높게나타났다 (Table 6). 추출물의용매별항균활성반응은그람양성균과음성균모두열수추출물에서는저해환의직경이 9.7mm 이하를나타낸반면에에탄올추출물에서는 10.0mm 이상을나타낸것도 9개나있었다. 백련의종류별항균활성반응은그람양성균의경우 백화건련 과 승달 은균의종류에관계없이저해환의직경이모두 9.8mm이하를나타내었으나 가람 은에탄올추출물처리구의 Listeria monoctogenes, Streptococcus mutans, Bacilus cereus, Salmonella enteritidis, Escherichia coli 균에서 10.0-10.4mm의저해환을나타내었다. 초의 의에탄올추출물에서도 Bacilus subtilis, Streptococcus mutans, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli 균에서 10.1-11.2mm의저해환직경을나타내었다. 이와같이 가람 과 초의 의에탄올추출물에서항균효과가다소높게나타난것은플라보노이드함량이높을수록항균효과가높다는 Kawaguchi 등 (1997) 의보고를감안해볼때 Table 3에서와같이 가람 과 초의 의에탄올추출물에서플라보노이드함량이높게나타난데서기인된것으로해석된다. Table 6. Anti-microbial activit against the gram positive and negative bacteria in 1,000ppm leaf extracts from four white lotus cultivars. Inhibition diameter(mm) Bacterial Bacteria cv. cv. 'Garam' cv. 'Choeue' 'Baekwageoll eon' cv. 'Seungdal' Gram positive Heated water Bacillus subtilis 9.5 a 8.6 b 8.8 b 8.6 b bacterial Bacilus cereus 9.6 a 8.7 b 8.5 b 8.7 b Streptococcus mutans 9.5 a 9.6 a 8.5 b 9.3 a Listeria monoctogenes 9.8 a 8.4 b 8.3 b 8.7 b Ethanol Bacillus subtilis 9.2 ab 10.0 a 9.2 ab 8.6 b Bacilus cereus 10.6 a 9.8 a 8.7 b 8.4 b Streptococcus mutans 10.4 a 10.4 a 8.8 b 9.7 ab Listeria monoctogenes 10.3 a 9.3 ab 8.8 b 9.2 ab Gram negative Heated water Salmonella enteritidis 9.3 a 9.5 a 8.7 b 8.6 b bacteria Pseudomonas aeruginosa 9.0 a 8.8 b 8.5 b 9.1 a Escherichia coli 9.9 a 9.1 ab 8.5 b 9.7 a Ethanol Salmonella enteritidis 10.1 a 10.2 a 8.7 b 8.6 b Pseudomonas aeruginosa 9.9 b 11.2 a 8.8 b 9.3 b Escherichia coli 10.1 a 10.1 a 9.0 b 9.8 a Not detected. Ⅳ. 적요백련잎의소비확대를위한기초자료확보측면에서 2007년 8월에 가람, 초의, 백화건련, 승달 백련의잎을수확하여열수와에탄올추출물의생리활성효과를조사하였다. 총페놀함량은열수추출물의경우 초의 백련에서 78.3 μg ml -1 로가장많았고, 에탄올추출물은 백화건련 에서 146.8 μg ml -1 로가장많았다. 전자공여능은추출물의농도가 2,000ppm일때 승달 의열수추출물및에탄올추출물에서각각 83.3% 와 94.0% 로가장높았다. 총플라보노이드함량은에탄올추출물에서높게나타나 63.6μg ml -1 ( 승달 )-92.2 μg ml -1 ( 초의 ) 를나타낸반면에열수추출물은 28.8μg ml -1 ( 초의 ) 이하를나타내었다. 아질산염소거는추출물의농도가 2,000ppm일때열수추출물은 초의 에서 69.2% 로가장높게나타났으며, 에탄올추출물에서는 백화건련 에서 80.7% 로가장높게나타났다. Trosinase 활성저해효과는백련의종류및용매에관계없이거의나타나지않았다. 항균활성은에탄올추출물에서다소높게나타났는데, 저해환의직경은전반적으로 8.3-11.2mm 를나타냈다 117
박용서 고린스테인셜라 유용권 임명희 박윤점 김현주 정선요 허북구 Ⅴ. 인용문헌 1. Bae, Y.I., Y.C. Chung, and K.H. Shim. (2002) Antimicrobial and antioxidant of various solvent extract from different parts of loquat (Eriobotra japonica Lindl). Kor. J. Food Preserv. 9: 97-101. 2. Blois, M.S. (1958) Antioxidant determination b the use of a stable free radical. Nature 26: 1199-1200. 3. Brane, A.L. (1975) Toxicolog and biochemistr of butlated hdrox anosole and butlated hdrox toluene. J. Amer. Oil. Chem. Soc. 52: 59-63. 4. Cha, J.Y. and Y.S. Cho. (2001) Biofunctional activities of citrus flavonoids. J. Kor. Soc. Agric. Chem. Biotechnol. 44:122-128. 5. Dewanto, V., X. Wu, K.K. Adom, and R.H. Liu. (2002) Thermal processing enhances the nutritional value of tomatoes b increasing total antioxidative activit. J. Agric. Food Chem. 50: 3010-1015. 6. Dural, B. and K. Shett. (2001) The stimulation of phenolics and antioxidant activit in pea elicited b geneticall transformed anise root extract. J. Food Biochem. 25: 361-377. 7. Gra, J. and J.L.R. Dugan. (1975) Inhibition of N-Nitrosamin formation in model food sstem. J. Food Sci. 40: 981-985. 8. Kawaguchi, K., T. Miuno, K. Aida, and K. Uchino. (1997) Hesperidin as an inhibitor of lipases from porcine pancreas and pseudomonas. Biosci. Biotechnol. Biochem. 61: 102-104. 9. Lee, K.S., M.G. Kim, and K.Y. Lee. (2006) Antioxidative activit of ethanol extract from lotus (Nelumbo nucifera) leaf. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 35: 182-186. 10. Lerner, A.B. and T.B. Fitpatrick. (1950) Biochemistr of melanin formation. Phsiol. Rev. 30: 91-96. 11. Miake, Y., K. Yamamoto, N. Tsujihara, and T. Osawa. (1998) Protective effect of lemon flavonoids on oxidative stress in diabetic rats. Lipids 33: 689-695. 12. Normington, K.W., I. Baker, M. Molina, J.S. Wishnok, S.R. Tannenbaum, S. Puju. (1986) Characteriation of a nitrite scavenger 3-hdrox-2-pranone, from chinese wild plum juice. J. Agric Food Chem. 34: 215-221. 13. Park, C.S. (2005) Component and qualit characteristics of powdered green tea cultivated in Hwagae area. Kor. J. Food Preserv. 12: 36-42. 14. Park, I.B., J.W. Park, J.M. Kim, S.T. Jung, and S.G. Kang. (2005a) Qualit of sobean paste (Doenjang) prepared with lotus root powder. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 34: 519-523. 15. Park, S.H., T.S. Ham, and J.H. Han. (2005b) Nutritional contents of beverage from lotus root and evaluation of its phsiological function in aorta relation. Kor. J. Oriental Phsiolog & Patholog 19:490-494. 16. Pawelek, J.M. and A.M. Korner. (1982) The biosnthesis of mammalian melanin. Amer. Sci. 70: 136-141. 17. Yagi, K. (1987) Lipid peroxides and human disease. Chem. Ph. Lipids 45: 337-341. 118