J Koren Soc Food Sci Nutr 한국식품영양과학회지 45(6), 805~811(2016) http://dx.doi.org/10.3746/jkfn.2016.45.6.805 알코올로유도된간손상동물모델에서굴추출물의간보호효과 Kenji Oski 1 Teruki Arkw 1 김범식 2 이민재 3 정창식 3 강남길 3 1 ( 주 ) 비젠화성 2 경일대학교식품과학부 3 ( 주 ) 뉴트리플랜 Heptoprotcetive Effects of Oyster (Crssostre gigs) Extrct in Rt Model of Alcohol-Induced Oxidtive Stress Kenji Oski 1, Teruki Arkw 1, Bumsik Kim 2, Minje Lee 3, Chngsik Jeong 3, nd Nmgil Kng 3 1 Okym Hed Office, Bizen Chemicl Co., Ltd. 2 School of Food Science, Kyungil University 3 Nutripln Co., Ltd. ABSTRACT This study ws conducted to investigte the protective effects of wter extrct from Crssostre gigs (CGW) ginst ethnol-induced heptic toxicity in rts. Seventy-two mle Wistr rts (6-week-old) were divided into six groups of 12 nimls ech: control group (1 ml sline/d), ethnol-treted group, positive control group (ethnol+hoveni dulcis Thun extrct), CGWL group (ethnol+low dosge of CGW), CGWM group (ethnol+medium dosge of CGW), nd CGWH group (ethnol+high dosge of CGW). All groups except the control group received ethnol (40% ethnol 5 g/kg) orlly. CGW dministrtion with ethnol resulted in prevention of ethnol-induced heptotoxicity y incresing levels of serum lnine minotrnsferse nd γ-glutmyltrnsferse. CGW supplementtion significntly reduced formtion of mlonldehyde nd inhiited reduction of heptic glutthione nd peroxidse levels, s compred with the ethnol-dministrtion group. Further, CGW suppressed expression of CYP2E1, which ws elevted y ethnol dministrtion. Consequently, our results indicte tht Crssostre gigs my exert heptoprotective effects ginst lcohol-induced heptocyte injury y intensifying the nti-oxidtive defense system. Key words: oyster, lcohol, oxidtive stress, lcoholic liver disese 서 음주는세계적으로일반적사회문화로적절한알코올의섭취는사회생활및스트레스해소에도움을줄수있지만과음은오심, 구토, 갈증, 두통및일상생활에장애를초래한다. 또한, 만성적인알코올의섭취는지방간, 간염증, 괴사, 진행성섬유증및간세포암종과같은알코올성간질환 (lcoholic liver disese, ALD) 의현상이발생할수있다 (1). ALD는복잡하고여러병원성대사기작을가지고있으며대표적인기작은간세포에서활성산소의형성과산화적스트레스이다 (2). 알코올은간에서 enzyme lcohol dehydrogense(adh) 에의해 cetldehyde로전환되고 ldehyde dehydrogense(aldh) 로산화되는두가지의과정을거친다 (3). Cytochrome(CYP450) 은알코올대사와관련된다른대 Received 26 Jnury 2016; Accepted 23 My 2016 Corresponding uthor: Nmgil Kng, Nutripln Co., Ltd., Pju, Gyeonggi 10935, Kore E-mil: sles@nutripln.co.kr, Phone: +82-70-7569-0071 론 사시스템이다. Cytochrome P450 2E1(CYP2E1) 은알코올이 cetldehyde로산화되는것과 cetldehyde가 cette로산화되는것을촉매하며이과정에서여러종의 rective oxygen species(ros) 가생성된다 (4,5). 간세포는 ROS를생성시킬수있는잠재적인가능성을가지고있으며계속되는알코올의섭취때문에산화물들이생성될수있다 (6). 세포내에서 ROS의생성은다양한효소적, 비효소적항산화시스템과연관되어있다. 이들항산화시스템은 superoxide dismutse(sod), glutthione(gsh) 그리고 ctlse(cat) 를포함하고있다 (7). 또한, 알코올의섭취는지질대사에도영향을미쳐간세포에중성지방이축적되는지방간을유발하고세포내지질과산화를유발한다 (8). 따라서알코올섭취로인한알코올성간손상을억제할수있는식품에대한관심은계속증가하고있으며이에대한활발한연구가진행되고있다. 굴 (Crssostre gigs, CG) 은가장잘알려진어패류중하나이며 polyscchrides가풍부하다고알려져있다 (9). 굴에관하여진행된연구는인플루엔자바이러스복제억제, 면역활성그리고항균활성에관한연구가보고되었다 (10).
806 Kenji Oski Teruki Arkw 김범식 이민재 정창식 강남길 게다가굴에서추출된단백질은 humn epithelil cells에서산화적스트레스에대한보호효과와 rt 조직에서 glutthione과 glutthione S-trnsferse 활성수준을증가시킨다는연구가보고되었다 (11,12). 하지만굴의알코올로유도된간손상에대한보호효과에관한연구는거의보고되어있지않다. 따라서본연구는에탄올로유도된알코올성간손상동물모델에서굴열수추출물의간보호효과를평가하고항산화활성에대한효과를평가하기위해수행하였다. 재료및방법시료의추출및제조굴열수추출물 (CGW) 은원료인생굴을열수추출후여과하여감압농축하였다. 굴추출농축액은헬리코이드식순간멸균기로살균 (135 C, 15초 ) 하여분무건조한후추출물로사용하였으며, 헛개나무열매추출물 (HDTW) 은 ( 주 ) 다원상사 (Seoul, Kore) 에서분말형태로공급받아사용하였다. 본실험에사용한시약으로 reduced glutthione(gsh), glutthione peroxide(gpx), 5,5'-dithiois(2-nitroenzoic cid)(dtnb), 1-chloro-2,4-dinitroenzene(CDNB), eosin Y solution, hemtoxylin solution, nti-β-ctin ntiody는 Sigm-Aldrich Co.(St. Louis, MO, USA) 로부터구입하여사용하였으며, nti-cyp2e1 ntiody는 Acm (Cmridge, UK) 으로부터구입하여사용하였다. 그외사용된시약은 first grde 이상등급을사용하였다. 실험동물 4주령의 Wistr rt(mle) 을 ( 주 ) 중앙실험동물 (Seoul, Kore) 에서구입하여 2주동안동물사육실의환경하에서검역및순화시키면서일반건강상태를관찰한후, 이상이없는개체를선별하여실험에사용하였다. 본실험의환경은온도 22±3 C, 상대습도 50±20%, 환기횟수 10~15회 / 시간, 조명주기 12시간 (8:00~20:00), 조도 150~300 Lux의사육환경으로설정된동물사육실에서 AIN-76(Reserch Diet Co., New Brunswick, NJ, USA) 과음용수를급여하여사육하였으며, 순화및실험기간에격리사육을하였다. 순화기간중이상이발생한개체와정상적으로체중이증가하지않은개체를제외한후, 각군간평균체중및표준편차가균일하도록군분리를하였다. 군분리및시료처리 72마리의건강한 rt을총 6개의실험군으로분리하였다 : i) control군 (1 ml sline/d), ii) ethnol군 (40% ethnol 5 g/kg.w./d), iii) positive control군 (40% ethnol 5 g/ kg.w./d+500 mg Hoveni dulcis Thun fruit extrct per kg.w./d), iv) CGWL군 (40% ethnol 5 g/kg.w./d+ 50 mg Crssostre gigs extrct per kg.w./d), v) CGWM군 (40% ethnol 5 g/kg.w./d+200 mg Crssostre gigs extrct per kg.w./d), vi) CGWH군 (40% ethnol 5 g/kg.w./d+800 mg Crssostre gigs extrct per kg.w./d). 각각의군에실험물질또는에탄올을 6주간투여하여진행하였다. 투여농도의설정은선행실험으로서실험물질의안전성을동일실험동물에평가한후 (dt not shown), 안전범위내에서본실험의투여농도를설정하였다. 모든실험동물은혈청과조직을수집하기위해 ethyl ether로마취하여희생하였으며, 동물의사육은천연자원연구센터동물실험윤리위원회의승인을받아진행하였다 ( 승인번호 JINR2015-18). 체중및조직무게분석모든실험동물은체중을측정하였고해부후수집된간, 비장, 신장조직의무게를측정하였으며희생전마지막몸무게대비로무게를환산하였다. 혈청내 AST, ALT, γ-gt 분석혈액샘플은실온에 30분간방치한후 4 C, 3,000 rpm에 10분동안원심분리하여혈청만분리하였다. 상층액에서분리된혈청은실험전까지 -70 C에보관하였다. Alnine trnsferse(ast) 와 lnine minotrnsferse(alt) 의분석은 Auto-serum nlyzer(fuji, Tokyo, Jpn) 를이용하여분석하였으며, gmm glutmyltrnsferse(γ-gt) 의분석은 colorimetric ssy kit(biovision, Sn Frncisco, CA, USA) 을이용하여분석하였다. 간조직의항산화활성분석항산화활성분석을위하여간조직을 50 mm potssium phosphte uffer(ph 7.0) 를이용하여균질화하였다. Glutthione reduced form(gsh) 은 Akeroom과 Sies(13) 의방법을이용하여측정하였다. SOD 활성은 McCord 와 Fridovich(14) 의방법에따라측정하였다. GPx 활성은 Pgli와 Vlentine(15) 의방법에따라측정하였다. 또한, 지질과산화의측정은 Drper와 Hdley(16) 의방법에따라 thiorituric cid sustnce formtion의생성을이용하여측정하였다. Western lot 간조직을액체질소를이용하여균질화한후 lysis uffer(intron Biotechnology Co., Seongnm, Kore) 를이용하여단백질을 lysis 하였다. CYP2E1의발현을측정하기위하여같은양의단백질샘플 (10 μg) 을취하여 8~12% SDS-polycrylmide gel에전기영동하고 nitrocellulose memrnes(bio-rd Lortories Inc., Berkeley, CA, USA) 에 trnsfer 하였다. 1차 ntiody는 CYP 2E1(1: 2,000) 을사용하였으며단백질량의비교를위해 β-ctin (1:1,000) 을같이사용하였다. 단백질발현정도를측정하
알코올로유도된간손상동물모델에서굴추출물의간보호효과 807 기위해 ImgeQunt TM softwre(amershm Bioscienes/GE Helthcre, Pisctwy, NJ, USA) 를이용하여 immunorective nd를관찰하였다. 간조직조직학적분석간조직의왼쪽측면로브를분리하고개별적으로잘라낸후 10% formlin에 24시간동안고정하여 prffin에 emedding 후 3~4 μm의두께로절단한다음 hemtoxylin nd eosin(h&e) 염색을진행하였다. 조직병리학적인섹션 profile들은 light microscope(eclipse 80i, Nikon, Tokyo, Jpn) 를이용하여관찰하였다. 세포내 20% 이상의지질침투를보이는간세포의수측정은 utomted imge nlyzer(isolution FL ver9.1, IMT I-solution Inc., Queec, Cnd) 를이용하여측정하였으며지방변성비율 (%/mm 2 of heptic prenchym) 과간세포평균직경 (μm/heptocyte) 은 utomted imge nlyzer를이용하여각각측정하였다 (17,18). 통계처리각군간의평균차이에대한유의성검정은 one-wy ANOVA(nlysis of vrince) 를실시하고군간의차이는 Duncn's multiple rnge test에의해 P<0.05 수준에서사 후검정을하였으며, 그결과를 men±sd로표시하였다. 결과및고찰각군간의체중및조직무게변화비교각군간의최종몸무게및조직무게비교에대한데이터는 Fig. 1에나타내었다. 해부전마지막날몸무게는군별로유의적차이를보이지않았다. 간조직무게의경우 control 군보다모든군에서유의적으로증가하는결과를나타내었고, 신장조직의무게는 control군보다 ethnol군, CGWM 군, CGWH군에서유의적으로감소함을나타내었으며, 비장조직은 control군에비해 CGWM군, CGWH군에서유의적으로감소함을나타내었다. 굴추출물의혈청인자수준에서의간손상개선효과본연구진은에탄올로유도된간손상동물모델에대해 CGW의간손상회복효과를측정하기위해혈청인자들을테스트한결과를나타내었다 (Fig. 2). Fig. 2는혈청내에서각군간의 ALT, AST, γ-gt의수준을표시하였다. ALT의경우 control군 (32.77±7.34 U/L) 과비교하였을때 ethnol군에서유의적으로증가하였으며, CGWL 군 (39.69±12.32 U/L) 에서만 ethnol군보다유의적으로감소함을나타내었 A B C D Fig. 1. Effects of extrcts from the Crssostre gigs on finl ody weight, liver weight, kidney weight, nd spleen weight in the serum of rt. (A) Finl ody weight. (B) Liver weight. (C) Kidney weight. (D) Spleen weight. Dt express the men±sd. Different letters (,) ove the rs re sttisticlly different y Duncn's multiple rnge test (P<0.05). Control, 1 ml sline-dministered group; Ethnol, 40% ethnol-dministered group; Positive control, 40% ethnol plus 500 mg/kg.w. of HDTW-dministered group; CGWL, 40% ethnol plus 80 mg/kg.w. of CGW-dministered group; CGWM, 40% ethnol plus 200 mg/kg.w. of CGW-dministered group; CGWH, 40% ethnol plus 800 mg/kg.w. of CGW-dministered group.
808 Kenji Oski Teruki Arkw 김범식 이민재 정창식 강남길 A B d c c c C Fig. 2. Effects of extrcts from the Crssostre gigs on heptic mrkers in the serum of rt. (A) Alnine trnsferse nlysis. (B) Alnine minotrnsferse nlysis. (C) Gmm glutmyltrnsferse. Dt express the men±sd. Different letters (-d) ove the rs re sttisticlly different y Duncn's multiple rnge test (P<0.05). Groups re the sme s Fig. 1. 다. 또한, 혈청내 AST의수준의경우모든군간의유의적차이를나타내지않았다. 혈청 AST 및 ALT 수치가간손상에대한생화학적지표로사용됐다. 혈청 AST와 ALT의수준은간손상의생화학적인자로사용됐다. 이는독성물질에의한간손상이진행됨에따라간세포내에서 ALT, AST 가혈류로유출되기때문이다 (19). 본실험에서는 ALT의수준은 CGWL군과 CGWM군에서 ALT의수치가유의적으로회복됨을나타내었지만, positive control군과 CGWH군에서는유의적인회복을보지않음을나타내었다. γ-gt는만성알코올섭취또는간담질환에대해잘알려진대표적생화학적인자이다 (20). γ-gt의수준의경우 control군 (2.52±0.74 mu/ml) 보다 ethnol군 (6.42±1.81 mu/ml) 에서유의적으로증가함을나타내었으며 CGWL군 (3.06± 1.29 mu/ml) 에서만그수준이유의적으로감소함을나타내었다. 이는 CGWL 농도의처리가혈액지표인 ALT 및 γ -GT의수준을감소시켜간손상을유의적으로감소시켜주는효과가있음을확인할수있었다. γ-gt 수준의경우 CGWL군에서고농도군보다더나은효과를보이는것은 50 mg/g.w. 농도에서간보호에대한최대활성을보이고그후활성이더는증가하지않는것으로생각된다. 선행실험으로서 1,000 mg/kg.w. 까지안전성평가를수행하였을때본실험의설정농도들에서동일실험동물에대한안전성을확인하였으며 (dt not shown), 저농도시료군보다고농도시료군에서의활성수준의정체및감소현상은시료자체의간독성에의한반감효과는아닌것으로생각한다. 고농도실험군에서의해당현상에대해추가적인연구가필요할것으로생각한다. 굴추출물의조직병리학적형태에서의간손상개선효과에탄올로유도된지방간의조직검사를한결과를 Tle 1과 Fig. 3에나타내었다. 지방변성부위비율은 control군 (2.85±0.95%/mm 2 ) 에비해 ethnol군 (75.98±5.71%/mm 2 ) 에서현저하게증가함을나타내었다. 반면 positive control, CGWL, CGWM, CGWH 군에서지방변성의정도가각 Tle 1. Effects of extrcts from the Crssostre gigs on histomorphometricl nlysis in the liver tissue of rt Groups Control Ethnol Positive CGWL CGWM CGWH Percentges of regions (%/mm 2 of heptic prenchym) 2.85±0.95 e 75.98±5.71 58.87±2.57 9.63±2.57 d 29.84±12.00 c 29.63±11.11 c Numers of ftty chnged heptocytes (cells/1,000 heptocytes) 29.25±10.51 e 740.13±71.10 591.00±22.68 95.75±24.83 d 303.25±126.13 c 281.00±107.61 c Dt express the men±sd. Different letters (-e) within column re sttisticlly different y Duncn's multiple rnge test (P<0.05). Groups re the sme s Fig. 1. Men heptocyte dimeters (μm/heptocyte) 16.32±0.89 d 27.36±1.69 19.93±1.20 18.52±0.88 c 19.34±1.44 c 19.11±1.41 c
알코올로 유도된 간 손상 동물모델에서 굴 추출물의 간 보호 효과 809 A B C D E F Fig. 3. The representtive histopthologicl profiles of the liver tissue. (A) Control group, (B) Ethnol group, (C) Positive control group, (D) CGWL group, (E) CGWM group, (F) CGWH group. Groups re the sme s Fig. 1. 각 ethnol군보다 유의적으로 감소함을 나타내었다(P<0.05). positive control군과 실험물질 처리군들 중 CGWL군에서 지방 변성 간세포 수의 경우 control군(29.25±10.51 cells/ CGWM군과 CGWH군에 비해 높은 알코올성 지방병증에 대 1,000 heptocytes)에 비해 ethnol군(740.13±71.10 cells 한 간 보호 효과를 보였다. CGWL군에서 보다 고농도군인 /1,000 heptocytes)에서 유의적으로 증가함을 나타내었지 CGWM군과 CGWH군보다 더 좋은 활성을 보이는 이유는 만 positive control, CGWL, CGWM, CGWH 군에서 각각 50 mg/kg.w.에서 최대 활성을 나타내고 더 높은 농도에서 ethnol군보다 유의적으로 감소함을 나타내었다(P<0.05). 는 활성의 수렴 상태를 나타내는 것으로 판단된다. 또한, 간세포 평균 직경의 크기에서도 ethnol군보다 positive control, CGWL, CGWM, CGWH 군에서 유의적으로 굴 추출물의 간 조직 내 항산화 효과 및 MDA 수준 개선 효과 감소함을 나타내었다(P<0.05). 알코올의 섭취는 지방 산화 간 조직 내에서 SOD, GPx, GSH의 활성과 MDA 수준에 를 저해하고 간 내에 지방형성을 촉진한 것으로 알려져 있으 대한 결과는 Tle 2에 나타내었다. SOD의 활성은 ethnol 며(21,22), 이는 알코올성 지방간으로 이어질 수 있다(23). 군(174.48±12.02 U/mg protein)에서 control군(220.35± 간 조직병리학적 형태를 조사한 결과를 종합해 본 결과 9.95 U/mg protein)보다 유의적으로 감소하였다(P<0.05).
810 Kenji Oski Teruki Arkw 김범식 이민재 정창식 강남길 Tle 2. Effects of extrcts from the Crssostre gigs on heptic ntioxidnt ctivities nd MDA levels SOD (U/mg protein) GPx (U/mg protein) GSH (μmol/mg protein) MDA (μmol/mg protein) Control Ethnol Positive CGWL CGWM CGWH 220.35±9.95 174.48±12.02 c 205.23±16.99 203.42±9.23 201.23±8.86 207.76±4.78 43.25±3.69 33.09±3.11 c 39.00±3.13 41.05±2.21 40.23±4.91 38.73±3.33 9.65±2.10 4.89±1.78 c 6.75±1.05 7.80±1.79 7.42±1.29 7.02±1.37 22.61±1.45 c 41.26±4.83 31.25±3.11 23.71±2.81 c 29.28±3.23 25.21±2.34 Dt express the men±sd. Different letters (-c) within column re sttisticlly different y Duncn's multiple rnge test (P<0.05). Groups re the sme s Fig. 1. 하지만 positive control군과 CGW군에서활성의감소가유의적으로억제되었다 (positive control 205.23±16.99 U/ mg protein, CGWL 203.42±9.23 U/mg protein, CGWM 201.23±8.86 U/mg protein, CGWH 207.76±4.78 U/mg protein). GPx 항산화활성또한 SOD 활성과유사하게 ethnol군과비교하여 positive control군및 CGW군에서유의적 (P<0.05) 으로활성이증가하였다. GSH 활성은 ethnol 군 (4.89±1.78 μmole/mg protein) 에서 control군보다유의적 (P<0.05) 으로감소하였으나 CGW군 (CGWL 7.80±1.79 μmole/mg protein, CGWM 7.42±1.29 μmole/mg protein, CGWH 7.02±1.37 μmole/mg protein) 에서유의적 (P<0.05) 으로회복되었다. MDA는지질과산화의최종산물이다. MDA의수준은 control군 (22.61±1.45 μmole/mg) 에비해 ethnol군 (41.26±4.83 μmole/mg) 에서유의적으로증가하였다 (P<0.05). 에탄올투여때문에증가한 MDA의수준은 positive control군과 CGW군에서유의적으로감소하였다 (P<0.05). 간세포내 GSH는 uiquitous intrcellulr peptide로서항산화작용, 세포증식조절, ROS와라디칼에의한산화적손상에대한세포방어작용등의다양한기능을한다 (24). 에탄올투여에따라 GSH의수준은유의적 (P<0.05) 으로감소하였으나 CGW를투여함에따라감소된 GSH가유의적 (P<0.05) 으로회복되었다. 또한, SOD 와 GPx의수준도 ethnol군보다유의적 (P<0.05) 으로증가하였다. 따라서 CGW의처리는에탄올투여에대해항산화효소활성의감소를방지하여항산화방어시스템을회복시킴을확인할수있었다. 굴추출물의간조직내 CYP2E1 의발현에대한효과굴추출물의투여에따른간조직내 CYP2E1 단백질의발현효과를알아보기위해 western lot을이용하였다. CYP2E1은에탄올이아세트알데하이드로산화시킴과동시에많은종류의산화물들이활성간독성대사물로전환되는것을활성화한다 (25). 또한, CYP2E1은산화과정동안 O 2 와 H 2O 2 를생산한다 (26). 각군간의간조직내 CYP2E1의발현정도는 Fig. 4에나타내었다. 에탄올의투여에따라 CYP2E1의발현은 control군보다유의적으로 2.5배증가하였다 (P<0.05). 그러나 CGW군은 ethnol군보다발현량이유의적으로감소하였다 (P<0.05). CYP2E1 β-ctin Control Ethnol Positive CGWL CGWM CGWH 54 kd 43 kd Fig. 4. Effects of extrcts from the Crssostre gigs on expression of CYP2E1 in liver tissue. Dt express the men±sd. Different letters (-c) ove the rs re sttisticlly different y Duncn's multiple rnge test (P<0.05). Groups re the sme s Fig. 1. 요 본연구는에탄올로유도한알코올성지방간동물모델에서굴열수추출물의알코올성간손상개선효과를평가하기위해수행되었다. 6주령의 SD rt(mle) 을총 6개군으로분리하였으며, 양성대조군으로헛개나무열매추출물 (500 mg/kg.w.) 을처리하였다. 6주동안하루간격으로 CGW 를 50, 200, 800 mg/kg.w. 농도로경구투여하였으며, control군을제외한나머지군은 40% ethnol 5 g/kg.w. 를 6주간투여하였다. 43일째실험동물을희생시켜혈액분석및간조직의항산화효과분석을통해에탄올로유도한동물모델에서굴열수추출물의알코올성간손상회복효과를확인한결과, 에탄올에의해증가한 ALT와 γ-gt 의수준이 CGW를투여함으로써유의적으로감소하였으며, 항산화효소활성이증가한것을확인할수있었다. 에탄올에의해손상된간조직의손상정도를평가하기위해수행한조직병리학적검사에서는에탄올의투여로증가한지방변성비율및간세포수와같은인자들이굴열수추출물의투여로유의적으로회복된것을확인하였다. 또한, 에탄올에의해증 약
알코올로유도된간손상동물모델에서굴추출물의간보호효과 811 가한 CYP2E1의발현이굴열수추출물의투여로유의적으로감소하였다. 이러한연구결과들로보았을때본실험에서굴추출물의다당류및폴리페놀의항산화작용으로알코올로유도된간손상을억제할수있음을예상할수도있지만, 이후추가적인연구로다른활성성분의규명과관련활성기작을탐구하고자한다. 본연구진은이와같은결과를바탕으로굴열수추출물이알코올성지방간동물모델에서항산화방어시스템의강화를통해간손상을회복시킴을확인할수있었고, 이러한연구성과들로굴추출물이알코올성간손상개선에있어효과적인대안으로서더욱더많은분야에서연구되기를바라는바이다. 감사의글 본연구는 ( 주 ) 비젠화성의지원으로수행된연구결과입니다. REFERENCES 1. Altmirno J, Btller R. 2011. Alcoholic liver disese: pthogenesis nd new trgets for therpy. Nt Rev Gstroenterol Heptol 8: 491-501. 2. Ngt K, Suzuki H, Skguchi S. 2007. Common pthogenic mechnism in development progression of liver injury cused y non-lcoholic or lcoholic stetoheptitis. J Toxicol Sci 32: 453-568. 3. Ceni E, Mello T, Glli A. 2004. Pthogenesis of lcoholic liver disese: role of oxidtive metolism. World J Gstroenterol 20: 17756-17772. 4. Wu YS, Slmel KS, Lieer CS. 1998. Microsoml cetldehyde oxidtion is negligile in the presence of ethnol. Alcohol Clin Exp Res 22: 1165-1169. 5. Cederum AI. 2006. CYP2E1-iochemicl nd toxicologicl spects nd role in lcohol-induced liver injury. Mt Sini J Med 73: 657-672. 6. Jones DP. 2006. Redefining oxidtive stress. Antioxid Redox Signl 8: 1865-1879. 7. Lieer CS. 1994. Alcohol nd the liver. Gstroenterology 106: 1085-1105. 8. H HL, Shin HJ, Feitelson MA, Yu DY. 2010. Oxidtive stress nd ntioxidnts in heptic pthogenesis. World J Gstroenterol 16: 6035-6043. 9. Ymur K, Tkhshi KG, Suzuki T. 2008. Identifiction nd tissue expression nlysis of C-type lectin nd glectin in the Pcific oyster, Crssostre gigs. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol 149: 168-175. 10. Shi X, M H, Tong C, Qu M, Jin Q, Li W. 2015. Heptoprotective effect of polyscchride from Crssostre gigs on cute nd chronic models of liver injury. Int J Biol Mcromol 78: 142-148. 11. Gté L, Pul J, B GN, Tew KD, Tpiero H. 1999. Oxidtive stress induced in pthologies: the role of ntioxidnts. Biomed Phrmcother 53: 169-180. 12. Gté L, Schultz M, Wlsh E, Dhlluin S, Nguyen B G, Tpiero H, Tew KD. 1998. Impct of dietry supplement of Crssostre gigs extrct (JCOE) on glutthione levels nd glutthione S-trnsferse ctivity in rt tissues. In Vivo 12: 299-303. 13. Akeroom TP, Sies H. 1981. Assy of glutthione, glutthione disulfide, nd glutthione mixed disulfides in iologicl smples. Methods Enzymol 77: 373-382. 14. McCord JM, Fridovich I. 1969. Superoxide dismutse. An enzymic function for erythrocuprein (hemocuprein). J Biol Chem 244: 6049-6055. 15. Pgli DE, Vlentine WN. 1967. Studies on the quntittive nd qulittive chrcteriztion of erythrocyte glutthione peroxidse. J L Clin Med 70: 158-169. 16. Drper HH, Hdley M. 1990. Mlondildehyde determintion s index of lipid peroxidtion. Methods Enzymol 186: 421-431. 17. Jung YM, Lee SH, Lee DS, You MJ, Chung IK, Cheon WH, Kwon YS, Lee YJ, Ku SK. 2011. Fermented grlic protects dietic, oese mice when fed high-ft diet y ntioxidnt effects. Nutr Res 31: 387-396. 18. Hn JY, Lee S, Yng JH, Kim S, Sim J, Kim MG, Jeong TC, Ku SK, Cho IJ, Ki SH. 2015. Koren Red Ginseng ttenutes ethnol-induced stetosis nd oxidtive stress vi AMPK/Sirt1 ctivtion. J Ginseng Res 39: 105-115. 19. Biley SM, Cunninghm CC. 2002. Contriution of mitochondri to oxidtive stress ssocited with lcoholic liver disese. Free Rdicl Biol Med 32: 11-16. 20. Whitfield JB. 2001. Gmm glutmyl trnsferse. Crit Rev Clin L Sci 38: 263-355. 21. Donohue TM Jr. 2007. Alcohol-induced stetosis in liver cells. World J Gstroenterol 13: 4974-4978. 22. You M, Cr DW. 2004. Moleculr mechnisms of lcoholic ftty liver: role of sterol regultory element-inding proteins. Alcohol 34: 39-43. 23. Chen YH, Yng CM, Chng SP, Hu ML. 2009. C/EBP et nd C/EBP delt expression is elevted in the erly phse of ethnol-induced heptostetosis in mice. Act Phrmcol Sin 30: 1138-1143. 24. Hn D, Hnw N, Seri B, Kplowitz N. 2006. Mechnisms of liver injury. Ⅲ. Role of glutthione redox sttus in liver injury. Am J Physiol Gstrointest Liver Physiol 291: G1-G7. 25. Lieer CS. 1997. Cytochrome P-4502E1: its physiologicl nd pthologicl role. Physiol Rev 77: 512-544. 26. Gorsky LD, Koop DR, Coon MJ. 1984. On the stoichiometry of the oxidse nd monooxygense rections ctlyzed y liver microsoml cytochrome P-450. Products of oxygen reduction. J Biol Chem 259: 6812-6817.