(강희완)-o.fm

식물병연구 Res. Plant Dis. 19(4) : 265 272 (2013) http://dx.doi.org/10.5423/rpd.2013.19.4.265 Research Article Open Access Research in Plant Disease The Korean Society of Plant Pathology 고추에서분리된 Ralstonia solanacearum 계통의생리, 생화학및유전적특성 이영기 1 강희완 2,3 * 1 국립농업과학원작물보호과, 2 국립한경대학교미래융합기술대학원, 3 국립한경대학교유전공학연구소 Physiological, Biochemical and Genetic Characteristics of Ralstonia solanacearum Strains Isolated from Pepper Plants in Korea Young Kee Lee 1 and Hee Wan Kang 2,3 * 1 Crop Protection Division, National Academy of Agricultural Science, Rural Development Administration, Suwon 441-707, Korea 2 Graduate School of Future Convergence Technology, Hankyong National University, Ansung 456-749, Korea 3 Institute of Genetic Engineering, Hankyong National University, Ansung 456-749, Korea (Received on October 30, 2013; Revised on November 12, 2013; Accepted on November 19, 2013) Totally sixty three bacteria were isolated from lower stems showing symptoms of bacterial wilt on pepper plants in 14 counties of 7 provinces, Korea. The isolates showed strong pathogenicity on red pepper (cv. Daewang) and tomato (cv. Seogwang) seedlings. All virulent bacteria were identified as Ralstonia solanacearum based on colony types, physiological and biochemical tests and polymerase chain reaction (PCR). All R. solanacearum isolates from peppers were race 1. The bacterial isolates consisted of biovar 3 (27%) and biovar 4 (73%). Based on polymorphic PCR bands generated by repetitive sequence (rep-pcr), the 63 R. solanacearum isolates were divided into 12 groups at 70% similarity level. These results will be used as basic materials for resistant breeding program and efficient control against bacterial wilt disease of pepper. Keywords : Biovar, Classification, Pepper, Ralstonia solanacearum, Rep-PCR 서론 Ralstonia solanacearum은토양, 식물잔재물, 기주식물체의근권등에서장기간생존하면서뿌리의상처를통해식물체내로침입하고물관을차단하여기주식물체에시들음증상을유발한다. 이세균은열대, 아열대, 온대지역에서광범위하게발생하고있는토양전염성병원세균으로고추, 토마토, 감자등의가지과작물을비롯한 50과 200종이상의식물에병을일으키는넓은기주범위를가지고있으며 (Hayward, 1991), 생리 생화학및유전적특성이다양하지만크게 5개 race(buddenhagen 등, 1962; He 등, 1983) 와 5개 biovar(hayward, 1991; He 등, 1983) 로나누어진다. *Corresponding author Phone) +82-31-670-5420, Fax) +82-31-676-2602 Email) kanghw2@hknu.ac.kr 고추는우리나라채소가운데무와배추다음을차지하고있는주요작물로전국적으로재배되고있다. R. solanacearum은고추에침입하여풋마름병을일으켜많은피해를주고있지만뚜렷한방제약제가없어피해면적이날로늘어나는추세에있다. 특히고추풋마름병은고추역병과증상이유사하여역병으로오인하는경우가많으므로정확한진단과방제대책이요구되고있다. Yun 등 (2004) 은토마토에서분리한 71개풋마름병균을 biovar 3과 biovar 4로동정한바있으며, Seo 등 (2007) 은토마토와고추에서분리한 R. solanacearum 균주를기주간의특이한생리적특성없이모두 biovar 4로동정하였다. Jeong 등 (2007) 은국내의다양한식물로부터분리한 478 개의 R. solanacearum 균주에서 biovar 1, 2, 3 및 4를보고하였는데, 고추풋마름병에관여하는것은 biovar 3과 4로모두 race 1에속한다고하였다. Lim 등 (2008) 은가지로부터분리된풋마름병균을 biovar 3과 4로분류하였다. 위의연구에서고추풋마름병균에대한세균학적연

266 이영기 강희완 구가일부수행되었으나다양한고추재배단지로부터많은균주를확보하여국내고추풋마름병균의생리, 생화학, 병원성및유전적특성을종합적으로조사할필요가있다. R. solanacearum 균주의유전적다양성조사를위하여 random amplified polymorphic DNA(RAPD), restriction fragment length polymorphism(rflp) 과 rep-pcr, amplified fragment length polymorphism(aflp) 방법등이이용된바있다 (Cook 등, 1989; Hong 등, 2012; Horita와 Tsuchiya, 2001; Jeong 등, 2007; Lemessa 등, 2010). 국내에발생하는고추풋마름병균의분류학적, 병원학적특성을주기적으로연구하는것은풋마름병균의확산을예측하고, 신속정확한진단과생태연구및방제를위해서도매우중요한자료로이용될수있다. 본연구에서는국내 7개도 14개시 군의다양한지역에서고추의이병부위로부터다양한 R. solanacearum 균주를분리하였으며, 생리 생화학적특성과유전적다양성에따른분류학적특성의결과를보고하고자한다. 재료및방법 풋마름병균분리. 전국 7개도 14개시 군의주요고추재배지에서시들음증상을나타내는고추식물체를각포장별로채집하여세균액분출여부 (ooze test) 에의해서병원균의감염이확인된줄기의이병부위를 0.5 cm 간격으로절단하여 70% ethanol로수초간소독한다음 1% 차아염소산나트륨 (NaOCl) 으로 2분간표면소독하고멸균수로 3회세척하였다. 표면살균된조직을 1 ml의멸균증류수가들어있는 effendorf tube에넣고소독된칼로작은조각으로절단하여 30분정도상온에방치한후현탁액을 TTC(Kelman, 1954) 와 SM-1 선택배지 (Granada와 Sequeira, 1983) 에희석, 도말하여 30 o C에서 48 72시간배양하였으며, 전형적인풋마름병균의형태를보이는콜로니를취하여 TTC 배지에서 2 3회순수분리하였다. 대조균주로는 R. solanacearum KACC10149, KACC10711, KACC10819, KACC10827을한국농업미생물자원센터 (Korean Agricultural Culture Collection, KACC) 로부터분양받아사용하였다 (Table 1). 특이 PCR primer에의한동정. R. solanacearum의 genomic DNA는 TTC 배지에서 1 2일간배양후멸균수에현탁하여농도를 5 10 8 cfu/ml로조절후 Chen과 Ronald(1999) 의방법으로분리하였으며동정은 Opina 등 (1997) 에의해보고된 R. solanacearum 특이 PCR primer set 759/760(5'-GTCGCCGTCAACTCACTTTCC-3', 5'- GTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCG-3') 을사용하였다. PCR 반응액은 10 mm Tris-HCl(pH 8.0), 50 mm KCl, 1.5 mm MgCl 2, 0.01% gelatin, 100 ng primer, 50 ng template DNA, 200 µm dntp 및 2.5 unit Taq polymerase(promega) 를넣고전체부피가 50 µl 되게하였다. Denaturation은 94 o C 에서 5분간반응후 cycle에서 94 o C 1분, annealing은 60 o C 에서 30초, 합성은 72 o C에서 1분으로총 30회반복하였으며, 최종 DNA 합성은 7분으로하였다. 증폭된 PCR 산물은 1.5% agarose gel에서전기영동후 ethidium bromide 용액에염색하여 UV lamp하에서밴드검출유무를확인하였다. 세균학적특성조사. 고추에서분리한 63개균주와 4개의대조균주는 Schaad 등 (2001) 의방법에따라배지상의생장특성, 그람반응, 호기적생장, 산화효소생성, urease 생성유무, 운동성유무, NaCl 내성, 과민성반응등의세균학적특성을조사하였다. 편모의관찰은 TTC와운동성조사배지에서 16시간배양시킨세균을멸균증류수에부드럽게현탁시켜 grid에옮긴후 0.1% uranyl acetate로염색하여투과전자현미경하에서관찰하였다. 생리형검정. 고추풋마름병원균의생리형 (biovar) 은 Hayward(1964) 의방법에따랐다. 기본배지 (NH 4 H 2 PO 4, 1.0 g; KCl, 0.2 g; MgSO 4 7H 2 O, 0.2 g; Bacto peptone, 1g; agar, 3 g; bromethymol blue, 8 mg; 증류수, 1 l; ph, 7.0 7.1) 에최종농도가 1% 로되도록각각의당을첨가후 24 well cell culture cluster(costar, USA) 의각 well에 2 ml씩분주하였다. 풋마름병원균은 10 8 cfu/ml(od 600nm =0.1) 로조절하여 10 µl씩접종하였으며, 30 o C로조절된배양기에유지하면서 3, 7, 14, 21, 28일간격으로반응정도를조사하였다. 병원성검정. 분리된균의병원성정도는파종후 4주된고추 (cv. 대왕 ) 와 3주된토마토 (cv. 서광 ) 유묘를이용하였으며, 풋마름병균의농도는멸균수에현탁하여 10 8 cfu/ ml로조절하였다. 각각의현탁액을묻힌가위로 1주당 2장의잎끝을절단하고동시에멸균된칼로뿌리에상처를낸후 50ml씩관주하였다. 병원성의정도는 1주간격으로 4주동안조사하였으며, 발병정도는 Winstead와 Kelman(1952) 의방법에따라시들음정도를조사하였는데 1 = 무병징, 2 = 1개의잎이시들음, 3 = 2 3개의잎이시들음, 4 = 4개이상의잎이시들음, 5 = 식물체고사로전체를 5단계로하였다. REP, ERIC, BOX-PCR 분석. Rep-PCR(REP, ERIC, Box primer) 은 Louws 등 (1994) 의방법에따라 PCR을수행하였다. PCR 반응액은 10 mm Tris-HCl(pH 9.0), 50 mm KCl, 1.5 mm MgCl 2, 0.1% Triton X-100, 20 pmol primer, 50 ng template DNA, 200 µm dntps 및 0.25 U Taq

고추에서분리된 Ralstonia solanacearum 계통의생리, 생화학및유전적특성 267 polymerase(promega) 를넣고전체부피가 50 µl 되게하였다. 반응조건으로초기 DNA 변성은 94 o C에서 4분간반응시켰고, 이어지는 DNA 변성은 94 o C에서 1분, annealing 은 ERIC은 50 o C, REP은 44 o C, BOX는 53 o C에서각각 1분씩하였다. Extension은모두 65 o C에서 8분으로 34회반복하였으며, 최종 extension은모두 65 o C에서 15분간반응시켰다. 균주간유전적유연관계는 Pyltool프로그램을이용하여전기영동의다형성밴드의유무에의해만들어진데이터값을입력한후 UPGMA 옵션을주어분석하였다. 결과및고찰 세균학적특성. 전국 7개도 14개시 군의주요고추 재배지에서풋마름병징을보였던고추식물체로부터총 109개의세균을분리하였으며, 지역및포장의특성을고려하여최종적으로 63개의풋마름병균을선별하였다. 선별된균주들의동정을위하여 R. solanacearum을특이적으로검출할수있는 primer set(759/760) 를이용하여 PCR 을수행한결과, 대조균주를포함한모든세균들은 281 bp 의특이밴드를형성하여풋마름병균으로동정되었다 (Table 1). 고추에서분리된풋마름병균들은질산염으로부터공기생성과운동성반응을제외한모든세균학적반응은대조균주들과동일하였다. 모든균주들은 TTC 배지에서전형적인 R. solanacearum의특성인선분홍색이면서우윳빛을띤유동성의콜로니를형성하였다. 풋마름병균들은호기적생장, YDC 배지에서점액성콜로니형성, urease Table 1. Ralstonia solanacearum strains used in this study Strains Origin Locality Rs-PCR Province County specificity a Biovar Pepper isolates KPRS1, KPRS41 Red pepper Chungnam Seosan + 3 KPRS2, KPRS42 Red pepper Chungbuk Cheongwon + 3 KPRS3 Red pepper Chungbuk Chungju + 4 KPRS4, KPRS5, KPRS6, KPRS7, KPRS8 Red pepper Jeju Bukjeju + 4 KPRS11, KPRS12, KPRS13, KPRS14, KPRS23, Red pepper Chungnam Cheongyang + 4 KPRS74 KPRS15, KPRS18, KPRS19, KPRS20, KPRS46, Red pepper Jeonbuk Imsil + 4 KPRS47, KPRS48, KPRS50, KPRS51, KPRS52, KPRS53, KPRS54, KPRS58, KPRS59, KPRS60 KPRS17, KPRS56 Red pepper Jeonbuk Imsil + 3 KPRS21, KPRS22, KPRS26, KPRS27, KPRS28 Red pepper Jeonnam Haenam + 4 KPRS29, KPRS30, KPRS70, KPRS71, KPRS72 Red pepper Chungnam Gongju + 4 KPRS43, KPRS44 Sweet pepper Gyeonggi Hwaseong + 3 KPRS62, KPRS63, KPRS64 Red pepper Jeonnam Naju + 4 KPRS73 Red pepper Chungnam Gongju + 3 KPRS75 Red pepper Chungnam Cheongyang + 3 KPRS76 Red pepper Chungnam Taean + 3 KPRS78, KPRS79, KPRS80, KPRS81, KPRS98 Red pepper Chungbuk Goesan + 3 KPRS82 Red pepper Chungbuk Eumseong + 3 KPRS83, KPRS84, KPRS85, KPRS86 Red pepper Gyeongbuk Cheongsong + 4 KPRS96, KPRS97 Red pepper Chungbuk Goesan + 4 Reference strains KACC10149 b Tomato + 1 KACC10711 Red pepper + 3 KACC10819 Potato + 2 KACC10827 Potato + 1 a PCR specific detection of R. solanacearum using primer set (759/760). b Korean Agricultural Culture Collection.

268 이영기 강희완 Table 2. Biochemical and physiological characteristics of Ralstonia solanacearum strains isolated from peppers Colonies on TTC Test Strains from Peppers (n = 63) a Fluidal, > 5 mm Reference strains (n = 4) Fluidal, > 5 mm Gram reaction b Grows aerobically + + Colonies yellow or orange on YDC Colonies mucoid on YDC at 30 o C + + Fluorescent pigment on KB Diffusible non-fluorescent pigments on KB Urease + + Oxidase + + Growth on D1M agar Motility V + Growth at 37 o C + + Growth at 41 o C NaCl tolerance < 2.0% < 2.0% Nitrite from nitrate + + Gas from nitrate + V Tobacco HR + + a No. of bacteria tested. b, negative; +, positive; V, variable. 생성, oxidase 반응, 37 o C 생장, 질산염으로부터아질산염으로의환원반응및담배에대한과민성반응은양성이었으나그람반응, KB 배지에서형광및비형광색소생성, D1M agar 배지상의생장, 41 o C 생장반응은음성이었으며, 2.0% 이상의 NaCl 농도에서생장하는균주는없었다. 대조용으로사용된 3균주 (KACC149, KACC10819, KACC10827) 를제외한모든풋마름병균들은질산염으로부터공기를생성하였다. 특이하게도고추에서분리한 63개균주들가운데 11개균주 (KPRS63, 64, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 79, 80, 84) 는운동성이없었으나대조균주들과나머지고추분리균은모두운동성이있었다 (Table 2). 전자현미경을이용하여 R. solanacearum 균주들의편모를관찰한결과, 운동성을보였던모든균주는편모가관찰되었으나운동성을보이지않았던 11개균주들은모두편모가없는것으로조사되었다 (Fig. 1). 이러한세균학적특성으로보아국내고추에서발생되고있는풋마름병균들은제한된지역에서일부의균주가생리 생화학적, 생태적또는유전적다양성을가진계통으로분화되고있음을추정할수있다. 풋마름병균의운동성은편 Fig. 1. Transmission electron micrograph of Ralstonia solanacearum isolates with (A) and without (B) one polar flagellum. Table 3. Biovars of Ralstonia solanacearum strains isolated from peppers Test Biovar 1 (n = 2) a Biovar 2 (n = 1) Biovar 3 (n = 18) Biovar 4 (n = 46) Utilization of: Dextrose + b + + + Mannitol + + Sorbitol + + Dulcitol + + Trehalose + + + Oxidation of: Lactose + + Maltose + + D(+)-cellobiose + + Nitrite from nitrate + + + + Gas from nitrate + + a No. of bacteria tested. b +, positive;, negative. 모 (flagella) 의 swimming motility와 type IV pili( 섬모 ) 의 twitching motility로구분되며전자는액체에서의운동성을, 후자는고체에서의운동성에관여한다 (Feng, 2013). 일반적으로풋마름병균은단극모의편모를구성하며변이체는병원성이감소하는것으로보고되었다 (Tans-Kersten 등, 2001). 토마토풋마름병균의경우편모는감염초기기주체에정착침입에관여하지만도관에정착증식하면병원성에차이가없는것으로보고되었다 (Tans-Kersten 등, 2001). 생리형분포. 4개대조균들과고추에서분리된 63개풋마름병균등의생리형 (biovar) 을조사한결과, 대조균주들은 biovar 1(KACC10149, KACC10827), 2(KACC10819), 3(KACC10711) 으로조사되었으며, 고추에서분리한풋마름병균들은 biovar 3과 4의 2가지형태로구분이되었다.

고추에서분리된 Ralstonia solanacearum 계통의생리, 생화학및유전적특성 269 Biovar 3은 17개균주 (27%) 였으나 biovar 4는 46개균주 (73%) 로 biovar 4가우점계통이었다 (Table 3). Biovar 3으로확인된 17개균주 (KPRS1, 2, 17, 41, 42, 43, 44, 56, 73, 75, 76, 78, 79, 80, 81, 82, 98) 들은경기 ( 화성 ), 충남 ( 공주, 서산, 청양, 태안 ), 충북 ( 괴산, 음성, 청원 ), 전북 ( 임실 ) 의다양한지역에서채집된풋마름병균으로지역간특이적인분포는관찰되지않았으나대체로중부지역에서발생되는것으로조사되었다. 나머지 46개의모든풋마름병균들은질산염으로부터공기를생성하는전형적인 biovar 4의 I형으로확인되었다. 기존의보고에서국내고추와토마토에서분리된풋마름병균은 biovar 4와 race 1 계통들이분포하고있음을제시한바있다 (Seo 등, 2007). 그러나 Jeong 등 (2007) 에의하면국내고추풋마름병균은모두 race 1이고 biovar 3과 4의 2계통이분포하는데 biovar 4가우점계통으로다양한지역에분포하는것으로보고 하였다. 본연구에서도기존의보고와유사한결과가확인되었지만특이하게도 biovar 3 계통의지역별분포비율이높아지고있어발생지역이확산되고있는것으로추정되었다. 미국남동부의다양한기주에서분리된풋마름 Table 4. Pathogenicity of Ralstonia solanacearum strains on red pepper and tomato Disease severity a Red pepper Tomato 1 3 b 2 2 0 0 3 0 0 4 28 13 5 36 52 a Disease severity was investigated from 14 to 21 days after inoculation using the following scale: 1 = no symptoms; 2 = one leaf wilted; 3 = two to three leaves wilted; 4 = four or more leaves wilted; 5 = whole plant wilted (dead plant). b No. of bacterial strains. 병중고추풋마름병균주는모두 race 1의 biovar 3에속한다고하였다 (Hong 등, 2012). 그러나이디오피아의고추풋마름병균은모두 biovar 1에속하는것으로보고되었으며 (Lemessa 등, 2010), 일본에서고추풋마름병균의경우는 race 1의 biovar N2, biovar 3, biovar 4로보고되었다 (Horita와 Tsuchiya, 2001). 이러한보고들로보아고추풋마름병균은세계적으로다양한 biovar가존재하면서지역적발생특성이있는것으로추정되며, 금후우리나라에서도새로운 biovar의발생과더불어 biovar 3의발생비율이증가될것으로추정된다. 병원성조사. 고추에서분리한 63개와대조로사용한 4개풋마름병균을대상으로고추와토마토에서병원성을검정한결과, 고추에서는 3개의대조균주 (KACC10149, 10819, 10827), 토마토에서는 2개의대조균주 (KACC10149, 10819) 를제외한모든균주가발병정도 4와 5로강한병원성을나타냈으며, 고추보다는토마토에서강한병원성을나타내는균주가많은경향이었다 (Table 4, Fig. 2). 이러한결과로보아국내고추에서발생되는풋마름병균들은세균학적특성이나생리형에관계없이강한병원성을가진계통들로기온이높은계절에는노지와비닐하우스의고추및토마토재배에있어서생산제한요인으로크게작용할것으로생각된다. 편모를소유한고추풋마름병균주와무편모균주와의병원성은인공접종에있어서는뚜렷한차이를보이지않았으나, 향후자연상태의조건을부여하여정밀실험에의한운동성추적과병원성과의관계를구명할필요가있다. 유전적다양성. 국내고추에서분리한풋마름병균들과대조균주를포함한총 67개균주의유전적다양성은 rep- PCR(REP, ERIC, BOX primer) 을이용하여분석하였다. 풋마름병균들은 3가지 PCR중 BOX-PCR에서가장높은다형성밴드를나타냈다 (Fig. 3). PCR 밴드의다양성은 Fig. 2. Disease severity of R. solanacearum isolate KPRS15 on pepper (A) and tomato (B) host plants. Disease severity was observed on pepper cv. Daewang and tomato cv. sukwang four and three weeks after inoculation.

270 이영기 강희완 Fig. 3. BOX-PCR fingerprint patterns of Ralstonia solanacearum pepper isolates and reference strains. The numbers on respective lanes are in accordance with those of KPRS. M, size markers (100 bp plus DNA ladder); CK1, KACC10819; CK2, KACC10827; CK3, KACC10711; CK8, KACC10149. Fig. 4. Genetic relationships of Ralstonia solanacearum pepper isolates and reference strains based on rep-pcr polymorphic bands amplified by BOX, ERIC and REP primer. 균주간의유전적다양성정도가높은것을암시한다. 3가지 primer를종합하여분석후 70% 의유사도를기준으로보았을때국내고추에서분리된풋마름병균들은크게 12 group으로구분되었다 (Fig. 4). Rep-PCR 분석을통하여각그룹간의 biovar type과분리지역의상관관계를분석한결과, biovar type별로는특별히구분할수있는관계를확인할수없었으며, 그룹간분리지역별로일부구분되었지만상관관계가있다고하기에는미미한정도였다. 특히대조균주인 KACC10149는미국의토마토에서분리된 biovar 1로서 biovar 4인국내고추분리균 KPRS4 와같은유전적유연관계를가진것으로나타났으며, KPRS71 은다른고추분리균들과원연적유연관계를보였다. Rep- PCR에서국내에분포하는풋마름병균의유전적다양성의결과는풋마름병균의분포지역이넓고유전적으로분화속도가빠르기때문일것으로추정되었다. 이러한결과로미루어보아국내고추에서분리된 63개의균주역시지역별로많은분화가되었음을예측할수있었다. Seo 등 (2007) 은 21개고추풋마름병균의 BOX-PCR 결과, 토마토풋마름병균에비하여높은 DNA 다형성이검출되었다고하여본연구결과와유사한경향을보였다. 중국, 일본, 미국, 이디오피아등에서는고추분리균에한정하지않고다양한기주로부터분리된 R. solanacearum 균주의유전적다양성을조사하였으며, rep-pcr(lemessa 등, 2010), egl과 hrpb 유전자를이용한 phylotype-specific PCR(Hong 등, 2012; Xu 등, 2009), AFLP(Horita와 Tsuchiya, 2001) 의핵산지문법이사용되어 race별 biovar별균주간특이성을조사한바있다. Jeong 등 (2007) 은 AFLP와 16S rrna, endonuclease, hrpb와 muts로 biovar 간의유전적다양성을조사하였으며, 국내에서분리된풋마름병균이국외분리균과명백히구별되는유전적특성을보인다고하였다. 결론적으로본연구에서는다양한지역의고추포장으로부터분리된 63개풋마름병균의특성을조사하였는데

고추에서분리된 Ralstonia solanacearum 계통의생리, 생화학및유전적특성 271 세균학적특성에일부의차이가있었으며, 생리형은 biovar 3과 4에속하였으며, rep-pcr에의한유전적다양성은분리지역, biovar type에따라구분되지않았지만균주간의고유한 DNA 다형성을보여국내고추풋마름병균은다양한유전형이분포하고있는것으로사료되었다. 요 약 전국 7개도 14개시 군의주요고추재배지에서시들음증상을나타내는식물체의땅가줄기에서분리 선별된 63개풋마름병균들의특성을조사하였다. 고추에서분리된풋마름병균들은고추 (cv. 대왕 ) 와토마토 (cv. 서광 ) 에강한병원성을나타냈다. 모든병원균들은배양적, 생리 생화학적특성및특이 PCR 검출에의하여 Ralstonia solanacearum으로동정되었다. 고추에서분리된 63개풋마름병균들은 race 1 계통으로 2가지 biovar로구분되었는데, biovar 3은 17개균주로 27% 였고 biovar 4는 46개의균주로 73% 였으며, biovar 4의생리형이우점계통이었다. Rep-PCR에의한국내고추풋마름병균들의유전적다양성을확인한결과, 70% 의유사성을기준으로 12개의 group으로구분되었다. 이러한결과들은국내고추풋마름병에대한방제와저항성품종육성에중요한기초자료를제공할것이다. Acknowledgement This works supported by Agenda project (Code #PJ00735808) of Rural Development Administration, Suwon, Republic of Korea. References Buddenhagen, I., Sequeira, L. and Kelman, A. 1962. Designation of races in Pseudomonas solanacearum. Phytopathology 52: 726. Chen, D. H. and Ronald, P. C. 1999. A rapid DNA minipreparation method suitable for AFLP and other PCR applications. Plant Mol. Biol. Rep. 17: 53 57. Cook, D., Barlow, E. and Sequeira, L. 1989. Genetic diversity of Pseudomonas solanacearum: Detection of restriction fragment polymorphisms with DNA probes that specify virulence and hypersensitive response. Mol. Plant Microbe Interact. 2: 113 121. Fegan, M. 2013. The virulence factors of the bacterial wilt pathogen Ralstonia solanacearum. J. Plant Pathol. Microb. 4: 168. doi:10.4172/2157-7471.1000168. Granada, G. A. and Sequeira, L. 1983. New selective medium for Pseudomonas solanacearum. Plant Dis. 67: 1084 1088. Hayward, A. C. 1964. Characteristics of Pseudomonas solanacearum. J. Appl. Bacteriol. 27: 265 277. Hayward, A. C. 1991. Biology and epidemiology of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum. Annu. Rev. Phytopathol. 29: 6587. He, L. Y., Sequeira, L. and Kelman, A. 1983. Characteristics of strains of Pseudomonas solanacearum from China. Plant Dis. 67: 1357 1361. Hong, J. C., Norman, D. J., Reed, D. L., Momol, M. T. and Jones, J. B. 2012. Diversity among Ralstonia solanacearum strains isolated from the southeastern United States. Phytopathology 102: 924 936. Horita, M. and Tsuchiya, K. 2001. Genetic diversity of Japanese strains of Ralstonia solanacearum. Phytopathology 91: 399 407. Jeong, Y., Kim, J., Kang, Y., Lee, S. and Hwang, I. 2007. Genetic diversity and distribution of Korean isolates of Ralstonia solanacearum. Plant Dis. 91: 1277 1287. Kelman, A. 1954. The relationship of pathogenicity in Pseudomonas solanacearum to colony appearance on a tetrazolium medium. Phytopathology 44: 693 695. Lemessa, F., Zeller, W. and Negeri, D. 2010. Genetic diversity among strains of Ralstonia solanacearum from Ethiopia assessed by repetitive sequence-based polymerase chain reaction (rep-pcr). EJAST 1: 17 26. Lim, Y. S., Lee, M. J., Cheung, J. D., Rew, Y. H. and Kim, B. S. 2008. Occurrence and biovar classification of bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum in eggplant (Solanum melongena). Res. Plant Dis. 14: 10 14. (In Korean) Louws, F. J., Fulbright, D. W., Stephens, C. T. and de Bruijn, F. J. 1994. Specific genomic fingerprints of phytopathogenic Xanthomonas and Pseudomonas pathovars and strains generated with repetitive sequences and PCR. Appl. Environ. Microbiol. 60: 2286 2295. Opina, N., Tavner, F., Hollway, G., Wang, J. F., Li, T. H., Maghirang, R., Fegan, M., Hayward, A. C., Krishnapillai, V., Hong, W. F., Holloway, B. W. and Timmis, J. N. 1997. A novel method for development of species and strain-specific DNA probes and PCR primers for identifying Burkholderia solanacearum (formerly Pseudomonas solanacearum). Asia- Pac. J. Mol. Biol. Biotechnol. 5: 19 30. Schaad, N. W., Jones, J. B. and Chun, W. 2001. Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria. American Phytopathological Society Press, St. Paul, MN. Seo, S. T., Park, J. H., Han, K. S., Chung, S. R. and Lee, S. D. 2007. Genetic diversity of Ralstonia solanacearum strains isolated from pepper and tomato plants in Korea. Res. Plant Dis. 13: 2429. (In Korean) Tans-Kersten, J., Huang, H. and Allen, C. 2001. Ralstonia solanacearum needs motility for invasive virulence on tomato.

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