대한진단검사의학회지 : 제 25 권제 1 호 2005 Korean J Lab Med 2005; 25: 33-8 임상미생물학 Microscan 과 Vitek II 시스템을이용한 Vibrio vulnificus 의동정 양성진 신종희 조덕 기승정 신명근 서순팔 양동욱 전남대

대한진단검사의학회지 : 제 25 권제 1 호 2005 Korean J Lab Med 2005; 25: 33-8 임상미생물학 Microscan 과 Vitek II 시스템을이용한 Vibrio vulnificus 의동정 양성진 신종희 조덕 기승정 신명근 서순팔 양동욱 전남대학교의과대학진단검사의학교실 Identification of Vibrio vulnificus by the Microscan and the Vitek II Systems Sung Jin Yang, M.D., Jong Hee Shin, M.D., Deok Cho, M.D., Seung Jung Kee, M.D., Myung Geun Shin, M.D., Soon Pal Suh, M.D., and Dong Wook Ryang, M.D. Department of Laboratory Medicine, Chonnam National University Medical School, Gwangju, Korea Background : Vibrio vulnificus sepsis requires a rapid and accurate bacteriological diagnosis for optimal management of the patient because of its high mortality. We evaluated two automated bacteriological identification systems, Microscan (WalkAway 96, Dade Behring, West Sacramento, CA, USA) and Vitek II (biomerieux, Durham, NC, USA), for their ability to identify V. vulnificus strains isolated from clinical specimens. Methods : A total of 60 V. vulnificus strains isolated from clinical specimens in Chonnam University Hospital during 1993-2003 were tested. For the identification of the isolates by the Microscan, Neg Combo type 32 was used and four different panel inoculation methods were evaluated for accuracy. Identification by the Vitek II system was carried out using Vitek ID-GNB cards in accordance with the manufacturers, instruction using 0.45% saline media. Results : With the Microscan, the most accurate identification result was obtained after a modified inoculation method of the panel with a bacterial suspension prepared in 0.85% saline; the identification rate was 100%. The identification rate of Vitek II system was 96.7%; two strains of V. vulnificus were misidentified as V. harveyi and V. alginolyticus. Conclusions : These results indicate that both Microscan and Vitek II are adequate for the identification of clinical isolates of V. vulnificus, but for the identification by the Microscan a modified inoculation method should be used by suspending the organisms in 0.85% saline. (Korean J Lab Med 2005; 25: 33-8) Key Words : Vibrio vulnificus, Microscan, Vitek II 서 론 Vibrio vulnificus 는강하구나바닷물에살고있는호염성의그 람음성간균으로서 Hollis[1] 에의해처음동정보고된후 1979년 Farmer[2] 에의해처음으로명명되었다. V. vulnificus에의한인체감염은주로 2가지임상형태로발생하는데, 오염된어패류를접수 : 2004년 8월 3일접수번호 : KJLM1778 수정본접수 : 2004년 11월 23일교신저자 : 신종희우 501-757 광주광역시동구학동 8 전남대학교병원진단검사의학과전화 : 062-220-5342, Fax: 062-224-2518 E-mail: shinjh@chonnam.ac.kr 생식하였을때발생하는원발성패혈증과해수또는갯벌에상처가노출되었을때발생하는창상감염이다 [3]. 국내에서의감염은주로원발성패혈증의형태로서, 1979년전남지방에서처음보고되었으며 [4], 균동정에의한확진예는 1982년에보고되었다 [5]. V. vulnificus 패혈증은국내의 B형간염바이러스에의한만성간질환의높은유병률과어패류를생식하는습관과더불어여름철에발생하는토착병으로자리잡고있으며, 2000년개정된전염병예방법에따라제 3군법정전염병으로지정되었다. V. vulnificus 패혈증은병의진행속도가매우빠르고감수성있는항균제치료에도불구하고전신증상이나타난후평균 4.2 일이면사망률이 62-79% 에이르는치명적인질환이므로 [6, 7], 패혈증증상이나타나 33

34 양성진 신종희 조덕외 4 인 는병의초기에진단하여신속하게치료를하여야한다 [7]. 현재국내많은병원에서는그람음성간균의동정을위하여 Microscan WalkAway 96 (Dade Behring Inc., West Sacramento, CA, USA) 이나 Vitek II (biomerieux, Durham, NC, USA) 시스템을사용하고있는데, 이러한새로운자동화시스템을이용한 V. vulnificus 균의동정률을조사한보고는접하기어렵다 [8, 9]. 저자들은최근 10년간전남대학교병원환자임상검체에서분리되어확정동정후보관중인 V. vulnificus 균주를대상으로 Microscan과 Vitek II를이용한 V. vulnificus 균의동정을실시하여그성적을비교하여보았다. 대상및방법 1. 대상 1993년 5월부터 2003년 10월사이에전남대학교병원진단검사의학과에서 API 20E, API 20NE, ATB 32GN, Vitek GNI (bio- Merieux, Durham, NC, USA) 및통상적인생화학검사등을이용하여확정동정되어보관중인 V. vulnificus 균주중 60주를대상으로하였다. 60주중혈액에서분리된균주가 38주 (63.3%) 였으며, 피부병변주위에서분리된균이 22주 (37.7%) 였다. 2. Microscan을이용한검사 수성결과는 Microscan WalkAway 96에서 18-24시간배양후자동적으로출력되었다. 3. Vitek II를이용한검사 Vitek II에의한균동정은 Vitek 2 ID-GNB (biomerieux, Durham, NC, USA) 를이용하여지침서 [11] 대로균집락을 0.45% NaCl medium에푼후시행하였다. 즉, 혈액한천배지에 2회계대배양후균집락을 0.45% NaCl medium에부유한후 Vitek densicheck에서 0.5 McFarland에맞추고, Vitek filling stands 및 Vitek sealer plugs를이용하여 ID-GNB card에분주하였다. 대상균주모두 oxidase 검사를실시하였고, 그결과를 ID-GNB card에표기하였다. Card를 Reader/Incubator에넣고, 결과판독은 Vitek II의 Advanced Expert System (AES) software version VT2- R03.01을이용하였다. Vitek에의해 V. vulnificus가아닌다른균으로동정이잘못된경우에는 API 20E, 염기내성검사, colistin, ampicillin 감수성검사, thiosulfate-citrate-bile-salts (TCBS) 배지배양및 triple sugar iron (TSI) 배지배양등의추가검사를다시시행하였다 [6]. 한편, Vitek II를이용한항균제감수성검사는지침서대로균집락을 0.45% NaCl medium에푼후 Vitek AST-NO17 (biomerieux, Durham, NC, USA) 를이용하여시행하였다. V. vulnifi- cus 균주에대한 Vitek AST-NO17을이용한항균제감수성결과는디스크확산법과 Microscan의성적과비교하였다. 균부유액제조및희석법만을제외하고는 Microscan Neg Combo type 32 판넬 (Dade Behring, West Sacramento, CA, USA) 을이용하여제조사의지침 [10] 대로시행하였다. 균부유액은혈액한천배지에 2회계대배양한균집락에서다음 4가지방법으로제조하여판넬에접종하였다. 첫번째방법은 Microscan Neg Combo type 32를사용하는일반적인그람음성간균에서시행하는동일한방법으로서, 지침서에기술된대로증류수에균을풀어 0.5 McFarland 탁도로맞춘후이균부유액 100 L를 Pluronic D water 25 ml에희석하여패널에접종하였다. 두번째방법은증류수대신 0.85% 식염수에균을풀어 0.5 McFarland 탁도로맞춘후이균부유액 100 L를 Pluronic D water 25 ml에희석하여패널에접종하여검사하였다. 세번째는 Micorscan 지침서에서비브리오균종을동정하기위해권장하는방법으로서희석하지않은 Pluronic D water를패널에접종한다음, 0.85% 식염수로 0.5 McFarland 탁도로맞춘균액 50 L를각각의동정 well에첨가하는방법이었다. 마지막네번째는 0.85% 식염수에균을풀어 0.5 Mc- Farland 탁도로맞춘후이균부유액 100 L를 0.85% 식염수 25 ml에희석하여패널에접종하였다. 4가지방법으로제조된균부유액은 Microscan Neg Combo type 32 판넬에각각접종한후, Microscan WalkAway 96 (Dade Behring Inc., West Sacramento, CA, USA) 에배양하였다. 각균주의동정및항균제감 4. 디스크확산법에의한항균제감수성검사 V. vulnificus에대한디스크확산법검사는 NCCLS 제시안에포함되어있지않으나, Famer 등 [6] 이제시한동정을위한항균제감수성양태를위한방법으로서, 그람음성간균에대한디스크확산법항균제감수성검사에해당하는 NCCLS 제시안에따라실시하였다 [12]. 본검사에사용된항균제디스크는 amikacin (30 g), ampicillin (10 g), cefotaxime (30 g), ceftazidime (30 g), ciprofloxacin (5 g), imipenem (10 g), piperacillin-tazobactam (110 g), gentamicin (10 g), cephalotin (30 g), cefoxitin (30 g), 그리고 colistin (10 g) 으로서, 모두 Sensi- DiscTM (Becton Dickinson, MD, USA) 제품을이용하였다. 결과 1. Microscan에의한동정성적균부유액제조및희석법을 4가지로달리하여 Microscan Neg Combo type 32 판넬을이용하여 V. vulnificus 균주를동정해본결과는 Table 1과같다. 4가지방법중 V. vulnificus 균주의동정

자동화동정시스템을이용한 V. vulnificus 동정 35 Table 1. Identification rates of V. vulnificus by Microscan according to the different methods of inoculum preparation No. Initial inoculum preparation with*: Methods Panel rehydration with: No. tested Results No. (%) correctly identified 1 Distilled water 25 ml of Pluronic D water 20 0 (0%) containing 100 L of initial inoculum 2 0.85% saline 25 ml of Pluronic D water 11 2 (18.2%) containing 100 L of initial inoculum 3 0.85% saline 25 ml of uninoculated Pluronic 51 36 (70.6%) D water and, then addition of 50 L of initial inoculum to each of panel wells 4 0.85% saline 25 ml of 0.85% saline 60 60 (100%) containing 100 L of initial inoculum *The bacterial suspension in 3 ml distilled water or 0.85% saline was adjusted to the turbidity of a 0.5 McFarland standard. Table 3. Identification results of 60 strains of V. vulnificus by the Vitek 2 ID GNB system Results Confidence level T index No. (%) of isolates V. vulnificus Excellent identification >0.75 23 (38.3) Very good identification 0.5-0.75 13 (21.7) Good identification 0.25-0.5 20 (33.3) Acceptable identification 0-0.25 2 (3.3) V. harveyi Acceptable identification 0-0.25 1 (1.7) V. alginolyticus Low discrimination Choices 2-3 1 (1.7) 에있어가장높은동정률을나타낸방법은패널에접종하는균액제조및희석에있어 0.85% 식염수를이용한방법으로서동정률 100% (60/60) 이었다. Microsacn에서통상적그람음성간균에사용하는방법인증류수와 Pluronic D water를이용한균부유액제조법에의해서는 V. vulnificus 균은한주도동정되지않았고 (0%, 0/20), 0.85% 식염수와 Pluronic D water를이용한방법을시행한경우동정률은 18.2% (2/11) 이었다. 균액을넣지않은 Pluronic D water를패널에접종한후, 0.85% 식염수로탁도를맞춘균액 50 L를각각의동정 well에첨가해서검사한경우는전체균주의 70.6% (36/51) 만이 V. vulnificus로동정되었다. 그러나, 0.85% 식염수만을이용하여균부유액을제조하고희석한후 Microscan 판넬에접종한경우 60주모두가 V. vulnificus로정확하게동정되었다. 이때 V. vulnificus로동정된 60주의 bionumber 및 probability는 Table 2와같다. 60주는 Microscan에의해 bionumber는 13가지의형으로구분되어졌고그중 40010015, 40010017 및 40014017 이대부분 (73.3%) 이었다. Probability 는 95% 이상이 38주 (63.3%) 였으며 74% 이상은 57주 (95%) 이었다. Microscan 시스템에서 V. vulnificus 균주의동정시간은대부분의균 Table 2. Identification results of 60 strains of V. vulnificus by the Microscan Neg Combo type 32 using the modified inoculation method using 0.85% saline Bionumber Probability (%) No. (%) of Isolates 40010015 76.8 16 (26.7) 40010017 99.4 14 (23.3) 40014017 97.8 14 (23.3) 40014217 98.9 5 (8.3) 40014013 96.6 2 (3.4) 40010217 77.4 2 (3.4) 40014213 97.8 1 (1.7) 40014015 96.2 1 (1.7) 40010215 95.4 1 (1.7) 40014011 74.2 1 (1.7) 40014005 61.3 1 (1.7) 40014207 58.2 1 (1.7) 40016015 55.2 1 (1.7) 주에서 19-22 시간이내이었으며 24 시간을넘긴경우는없었다. 2. Vitek II 에의한동정성적 Vitek II 에의해서는총 60 주중 58 주 (96.7%) 가 V. vulnificus 로동정되었고, 56주 (96.5%) 가 T index 0.25 이상으로잘동정되었다 (Table 3). Vitek II에의해서 2주가잘못동정되었는데, 1주는 V. harveyi로나머지 1주는 V. alginolyticus로동정되었다. 이 2주는 Microscan에서는모두 V. vulnificus로동정되었다. Vitek II에의해서 V. harveyi로동정되었던균주는 API 20E에서도같은V. harveyi로동정되었다. Vitek에의해 V. alginolyticus 로동정된다른한주는 API 20E 에서는 V. cholera 로동정이되 었고, sucrose 발효양성소견과 TSI agar에서 A/A양상을보이면서 TCBS agar에서노란집락을보였다. 그러나두주모두염기내성검사에서 1% 식염수에서만배양되는성적, 운동성양성, colistin 내성및 ampicillin 감수성등의특징으로 V. vulnificus로확정동정되었다 (Table 4). Vitek II에의한 V. vulnificus 균주의동정시간은 6-8시간으로서대부분의균주가 8시간이내에동정되었고, 10시간이내에는모두동정이가능하였다. 3. 항균제감수성성적비교 대상이된 60주의 V. vulnificus는디스크확산법에의한항균제감수성결과, colistin을제외한대부분의시험항균제에감수성을보였다. 동일균주를대상으로 Vitek AST-NO17을이용하여항균제감수성검사를시행한결과, cefoxitin (8.3% 감수성 ), cephalotin (28.3% 감수성 ) 을제외하고는대부분의항균제에감수성을보였다 (Table 5). Microscan을이용하여균부유액제조및희석법을 4가지로달리하여항균제감수성검사를시도한결과는다음과같았다. 증류수를이용한첫번째와두번째의두가지방법에서는 Microscan walkaway 96에의해자동출력된결과지에

36 양성진 신종희 조덕외 4 인 Table 4. Additional Tests for two strains of V. vulnificus misidentified by the Vitek 2 ID GNB Test % Positive for V. vulnificus* 항균제감수성반응없음 (Non-Reactive) 으로표기되어결과를얻을수없었다. V. vulnificus에대한동정률이 70.6% 이었던세번째방법을사용하여항균제감수성검사를시행한결과는동정이되었던 36주모두모든항생제에내성을보였다. 동정률이 100% 이었던 0.85% 식염수만을이용하여균부유액을제조하고희석한후 Microscan Neg Combo type 32 판넬에접종하여항균제감수성을시행한네번째경우는, colistin에내성을보이는점은디스크확산법과일치하였으나 ciprofloxacin (95.0%) 과 piperacillin/ tazobactam (98.3%) 을제외한대부분항균제에서내성으로판정되는균주가많아디스크확산법과일치율이매우낮았다 (Table 5). 고 국내서남해안을중심으로여름철에호발하는 V. vulnificus 패혈증은높은치명률을보일뿐만아니라생식을즐겨하는식생활의변화및어느곳에서나생식을즐길수있는생활환경의변화와함께매년발생이보고되는사회적으로중요한감염질환이다. 본연구에서는임상검체에서분리된 V. vulnificus 균주를동정하는데있어 Microscan과 Vitek II 등의자동화된균동정시스템을평가하여보았다. 그결과, Microscan을사용하여 V. vulnificus를동정할경우에는 0.85% 식염수를이용한균부유액제조및희석법이권장되었다. 또임상검체에서분리된 V. vulnificus를대상으로한 Microscan과 Vitek II의동정률은각각 100% 및 96.7% 로서, 두시스템모두 V. vulnificus를비교적정확하게동정하여임 찰 Isolate 1 2 Identification results by Vitek 2 ID-GNB V. harveyi V. alginolyticus Microscan Neg V. vulnificus V. vulnificus Combo type 32 API 20E V. harveyi V. cholera Glucose 100% - + Sucrose 15 - + Triple sugar iron reaction K/A K/A A/A Motility 99% + + Color on TCBS Green 90% Green Yellow Growth in nutrient broth 0 % Nacl 0% No Growth No Growth 1 % Nacl 99% Growth Growth 6 % Nacl 65% No Growth No Growth 8 % Nacl 0% No Growth No Growth Zone of inhibition Small (98%) Small Small around colistin Zone of inhibition Large (99%) Large Large around ampicillin * Data from reference[6]. Table 5. Antimicrobial susceptibilities of 60 strains of V. vulnificus determined with the Microscan Neg Combo type 32 panel, the Vitek AST-NO17 and disk diffusion methods Antimicrobials % susceptible tested by Disk diffusion Vitek Microscan Amikacin 100 98 20 Ampicillin 100 100 80 Cefotaxime 100 100 45 Ceftazidime 100 100 75 Ciprofloxacin 100 100 95 Imipenem 100 100 48 Piperacillin-tazobactam 100 100 98 Gentamicin 100 97 60 Cephalotin 97 28 NT Cefoxitin 90 8 NT Colistin 0 NT* 0 * Not tested. 상적으로유용함을보여주었다. 각제조사의지침서를기준으로 11주를대상으로한예비실험결과 Vitek II는동정이잘되었으나 Microscan의경우일부균종 이동정이되지않아, 호염성인 V. vulnificus 균주의특성으로인 한결과로판단하여, Microscan 의경우는제조사의원법과변법을 포함하여항균제감수성검사의정확도를높이고자사용한방법등 균부유액제조및희석법을 4 가지방법으로달리하여다양하게시 도해보았고, 0.45% 식염수를균액으로사용하는 Vitek II의경우는제조사의지침서대로만시행하였다. 먼저, Microscan 지침서에기술된대로그람음성간균에적용되는원방법을사용하여보았다. 즉, 멸균증류수를이용하여균부유액을만든후 Pluronic water로희석한후패널에접종하였는데, 그결과검사한 20주중한주도 V. vulnificus로동정이되지않았다. 또, 균액을제조시멸균증류수대신 0.85% 식염수를사용한경우도동정률이 18.2% 로서 V. vulnificus 동정에는부적절한방법이었다. Microscan 지침서에서비브리오균종을동정하기위해권장하는방법으로서희석하지않은 Pluronic D water를접종한패널에 0.85% 식염수로 0.5 McFarland 탁도로맞춘균액 50 L를각각의동정 well에첨가하는방법을사용한경우에는동정률이 70.6% 이었다. O'Hara 등 [13] 은 Microscan Neg ID2 및 Rapid Neg ID3 판넬을이용하여 10주의 V. vulnificus 균주를동정한결과각각 50% 및 60% 의동정률을보였다고하였다. O'Hara 등 [12] 은본연구의세번째방법과유사한방법을사용하였기에본연구의실험결과인 70% 와비슷한결과를얻은것으로판단된다. 본연구에서는최종적으로 0.85% 식염수에균을풀어 0.5 McFarland 탁도로맞춘후이균부유액 100 L를 0.85% 식염수 25 ml에희석하여패널에접종하여보았는데, 이경우의동정률은 100% 이었다. 이러한성적으로미루어 Microscan을사용하여 V. vulnificus 균주의동정할경우 0.85% 식염수만을사용하여균액을제조하고희석하는방법이최적의조건이었다. 이후

자동화동정시스템을이용한 V. vulnificus 동정 37 호염성을나타내는다른 Vibrio균종에대해서도이방법을적용할수있는지에대한추후연구가필요하리라생각된다. 본성적에서 60주의 V. vulnificus는 Microscan에의해 13가지의다양한 bionumber로구분할수있었다. 윤등 [14] 은 103주의 V. vulnificus 균주가 Vitek GNI+ card에의해 24종류의 bionumber로구분되었고, 신등 [15] 도 V. vulnificus 50주가 ATB 32GN에의해 25가지의매우다양한생화학양상을보였다고보고하였다. Ryang 등 [16] 은 V. vulnificus 23주를대상으로 pulsed field gel electrophoresis (PFGE) 를분석한결과, V. vulnificus 균주가유전학적으로매우다양하다고하였다. 따라서국내에서분리된 V. vulnificus는매우다양한유전형과생화학형을보이는것으로판단되었다. Vitek II 시스템의경우 V. vulnificus 균주의동정률은 96.7% 로서이전모델인 Vitek I 시스템에서 Vitek GNI+ card를사용하여 103균주를동정한윤등 [14] 이발표한결과인 96.1% 와비슷하였다. 다만이전결과에서는 0.85% 식염수균액을사용하였으나, 이번 Vitek II 시스템에서는회사에서제공하는 0.45% 의식염수를이용한균액을사용한점이차이가있었다. 본연구에서 Vitek II에의한 V. vulnificus 균주의동정시간은 6-8시간으로서대부분의균주가 8시간이내에동정되었고, 19-22시간이소요되는 Microscan 보다신속한동정이가능하였다. 본연구에서 Vitek II에의해 2주의 V. vulnificus 균주가각각 V. harveyi와 V. alginolyticus로잘못동정되었다. V. vulnificus 는 arginine dihydrolase (ADH) 음성이며 lysine decarboxylase (LDC) 양성인비브리오로서 V. alginolyticus, V. parahaemolyticus, V. carchariae 및 V. harveyi와함께비브리오제 6군에속한다 [6]. V. alginolyticus는 8% 식염배지에서자라는점이특징인데, TCBS에서노란색의집락을형성하며 Voges-Proskauer 반응이양성인점, 그리고 colistin 감수성과 ampicillin 내성등으로서제 6군에속하는다른비브리오와감별된다. 본연구에서 Vitek II에의해 V. alginolyticus로잘못동정된균주는 TCBS agar에서노란집락을보이는특징이있었는데, 식염내성검사에서 1% 식염수에서만배양되는양상과 colistin에내성을보이면서 ampiciliin에감수성을보여 V. vulnificus로확정동정하였다. 또 Vitek II에서 V. harveyi로잘못동정된균주는 API 20E에서도같은 V. harveyi로동정되었고일반적인 V. vulnificus 동정양상과다른점은 glucose 발효음성이었다. V. harveyi는 ampicillin 내성및운동성음성을보이는특징이있는데, 이균주는 ampicillin에감수성을보이고운동성양성소견을보여 V. vulnificus로확정동정하였다. 또, Vitek II에의해 V. harveyi와 V. alginolyticus 로잘못동정된 2주의 V. vulnificus 균주는 Microscan에의해모두 V. vulnificus로정확하게동정되었다. 최근 Colodner 등 [17] 은 biotype 3형의 V. vulnificus 균주를대상으로시행한연구에서 Vitek I의 GNI+ 카드에의한동정률은 17.6%, Vitek II의 ID-GNB 카드에의한동정률은 98% 이었으며, Microscan Neg Combo type 20에의한동정률은 0% 이었 다고보고하였다. V. vulnificus biotype 3형은 indole, mannitol 및 ornithine decarboxylase가모두양성인소견으로 biotype 2형과구분되며, biotype 1형과는달리 ONPG (o-nitrophenyl- -Dgalactopyranoside) 시험음성소견을특징으로하는특정 V. vulnificus 유형으로서대개의경우이스라엘에서만국한되어보고가되어있다 [6, 18]. 본실험에사용된 60주의균주는 indole 99% 양성, mannitol 95% 양성, 그리고 ornithine decarboxylase 68% 양성으로 biotype 2형의균주는거의없고, ONPG test가 99% 양성으로서대부분 biotype 1형으로생각되었으며, biotype 3형의균주는거의없다고생각되었다 [6]. Colodner 등 [17] 은 Microscan 에의한 biotype 3형의균동정에있어희석하지않은 Pluronic D water를패널에접종한다음, 0.85% 식염수로 0.5 McFarland 탁도로맞춘균액 50 L를각각의동정 well에첨가하는방법, 즉본실험의세번째방법을사용하였는데, V. vulnificus의동정률은 0% 이었다. 본실험에서는동일접종방법에의한 Miccroscan의동정률이 70.6% 로서크게차이를보였는데, 이러한차이는두연구간에대상V. vulnificus 균주의 biotype의차이로생각된다. 대상이된 60주의 V. vulnificus를디스크확산법에의한항균제감수성결과, colistin 을제외한대부분의시험항균제에감수성을보여이전의결과 [14] 와일치하였다. 동일균주를대상으로 Vitek AST-NO17을이용하여항균제감수성검사를시행한결과, cefoxitin (8.3% 감수성 ), cephalotin (28.3% 감수성 ) 을제외하고는대부분의항균제에일치된감수성을보였다. 반면, 본성적에서 Microscan Neg Combo type 32에의한 V. vulnificus의항균제감수성검사성적은디스크확산법과일치율이매우낮았다. 이는액체배지희석법을응용한 Microscan 시스템에서 0.85% 식염수균액을사용한결과항균제감수성 well서의균성장이촉진되어내성처럼보여지는것으로생각되어진다. 본연구에서제시한첫번째및두번째방법대로항균제감수성검사를시행한경우 V. vulnificus의경우에는대부분의 well에서일반적인 16-24시간의배양시간내에서반응이일어나지않았다. 세번째방법의경우에는대부분항균제에서내성으로보고되었다. 가장동정률이좋은네번째방법또한항균제감수성성적은디스크확산법과일치도가낮기때문에 Microscan에의한항균제감수성결과는보고하면안될것으로판단된다. 현재 V. vulnificus에대한 National Committee for Clinical Laboratory Standards 항균제검사의지침은아직없는상태이지만, Microscan 제조회사에서는특히비브리오균주의경우에는디스크확산법등의추가검사를권고하고있다. 요약배경 : Vibrio vulnificus 패혈증은사망률이높은감염질환으로정확하고빠른진단이중요하다. 최근많은병원에서는균동

38 양성진 신종희 조덕외 4 인 정을위하여 Microscan WalkAway 96 (Dade Behring, West Sacramento, CA, USA) 및 Vitek II (biom rieux, Durham, NC, USA) 시스템을사용하고있는데, 저자들은이들자동화동정시스템을이용하여 V. vulificus를동정하여보았다. 방법 : 1993년부터 2003년사이에전남대학교병원진단검사의학과에서확정동정되어보관중이던 V. vulnificus 60주를대상으로하였다. Microscan에의한균동정은 Neg Combo type 32 를사용하였는데, 균부유액을제조하여판넬에접종하는방법을 4가지방법으로시행한후, 균동정률을비교하였다. Vitek II에의한균동정은 Vitek ID-GNB card를이용하여지침서대로균집락을 0.45% 식염수에푼후시행하였다. 결과 : Microscan을위해사용한 4가지균액접종방법중 0.85 % 식염수만을사용하여균부유액을만들고패널에접종한방법이동정률 100% 로서가장정확하였다. Vitek II에의한동정결과 58주 (96.7%) 가 V. vulnificus로동정되었고나머지 2주 (3.4%) 는 V. harveyi 및 V. alginolyticus로동정되어추가검사를요하였다. 결론 : Microscan과 Vitek II는임상검체에서분리된 V. vulnificus를비교적정확하게동정하였으며, Microscan을사용할경우 0.85% 식염수균액희석접종법사용이권장되었다. 참고문헌 1. Hollis DG, Weaver RE, Baker CN, Thornsberry C. Halophilic Vibrio species isolated from blood cultures. J Clin Microbiol 1976; 3: 425-31. 2. Farmer JJ 3rd. Vibrio ( Beneckea ) vulnificus, the bacterium associated with sepsis, septicaemia, and the sea. Lancet 1979; 2: 903. 3. Blake PA, Merson MH, Weaver RE, Hollis DG, Heublein PC. Disease caused by a marine vibrio. Clinical characteristics and epidemiology. N Engl J Med 1979; 300: 1-5. 4. 국연근, 전인기, 김영표. Case for Diagnosis 3예. 대한피부과학회제 32 차춘계학술대회초록집 1980: 16. 5. 구정순, 김대원, 한규섭, 석종성, 박명희, 김상인. Lactose fermenting vibrio (Vibrio vulnificus) 패혈증 5예. 대한병리학회지 1982; 16: 463-8. 6. Famer JJ III, Janda M, Birkhead K. Vibrio In: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, and Yolken RH, eds. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed. Washington, D.C.: ASM Press 2003: 706-18. 7. 백강우, 문범, 박창환, 김기태, 지미선, 최성규등. Vibrio vulnificus 감염증으로확진된 92예의임상적고찰. 감염 1995; 27: 355-64. 8. Robinson A, McCarter YS, Tetreault J. Comparison of crystal Enteric/Nonfermenter system, API 20E system, and Vitek AutoMicrobic system for identification of gram-negative bacilli. J Clin Microbiol 1995; 33: 364-70. 9. Bourbeau PP and Heiter BJ. Comparison of Vitek GNI and GNI+cards for identification of gram-negative bacteria. J Clin Microbiol 1998; 36: 2775-7. 10. Microscan WalkAway Operator s Manual, 9020-6433, Rev B, Dade Behring Inc, USA. 2002. 11. Vitek 2 Manual, version VT2-R03.01, BioMerieux, USA. 12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 8th ed. NCCLS document M2-A8. Pennsylvania, USA: NCCLS, 2003. 13. O Hara CM, Sowers EG, Bopp CA, Duda SB, Strockbine NA. Accuracy of six commercially available systems for identification of members of the family Vibrionaceae. J Clin Microbiol 2003; 41: 5654-9. 14. 윤명, 김광진, 신종희, 서순팔, 양동욱. Vitek GNI+ card를이용한vibrio vulnificus의동정. 대한임상병리학회지2000; 20: 314-9. 15. 신종희, 신명근, 양동욱. Vibrio vulnificus 동정에있어서 ATB 32GN System의유용성검토. 대한임상병리학회지 1993; 13: 281-6. 16. Ryang DW, Koo SB, Shin MG, Shin JH, Suh SP. Molecular typing of Vibrio vulnificus isolated from clinical specimens by pulsed-field gel electrophoresis and random amplified polymorphic DNA analysis. Jpn J Infect Dis 1999; 52: 38-41. 17. Colodner R, Raz R, Meir I, Lazarovich T, Lerner L, Kopelowitz J, et al. Identification of the emerging pathogen Vibrio vulnificus biotype 3 by commercially available phenotypic methods. J Clin Microbiol 2004; 42: 4137-40. 18. Bisharat N, Agmon V, Finkelstein R, Raz R, Ben-Dror G, Lerner L, et al. Clinical, epidermiological, and microbiological features of Vibrio vulnificus biogroup 3 causing outbreaks of wound infection and bacteraemia in Israel. Vibrio Study Group. Lancet 1999; 354: 1421-4.