원저 Lab Med Online Vol. 5, No. 2: 77-83, April 2015 진단면역학 매독특이항체검출을위한 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis 와 Mediace TPLA 시약의비교평가 Evaluation of Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, and Mediace TPLA for Detecting Treponemal Antibodies 서동희 1 황동희 2 주신영 2 최현희 1 Dong Hee Seo, M.D. 1, Dong Hee Whang, M.D. 2, Shin Young Joo, M.D. 2, Hyen Hee Choi 1 랩지노믹스의학연구소 1, 인제대학교의과대학서울백병원진단검사의학과 2 Labgenomics Clinical Laboratories 1, Seoul; Department of Laboratory Medicine 2, Seoul Paik Hospital, Inje University College of Medicine, Seoul, Korea Background: We evaluated the efficacy of two chemiluminescence immunoassays that detect treponemal antibodies, Centaur Syphilis and Immulite Syphilis, in comparison with Mediace Treponema pallidum latex agglutination (TPLA). Methods: The study was conducted in two phases. In the first phase, we tested 1,147 serum samples that were sequentially submitted for routine syphilis serology. In the second phase, we tested a panel of 119 frozen serum samples that had previously tested positive by Mediace RPR. The kappa value, total agreement percentage, and sensitivity and specificity were analyzed. Results: Of the 1,147 random samples, 24 (2.09%) tested positive with Centaur Syphilis, 16 (1.39%) with Immulite Syphilis, and 19 (1.66%) with Mediace TPLA. Of the 119 Mediace RPR-positive samples, 103 (86.6%) tested positive with Centaur Syphilis, 101 (84.9%) with Immulite Syphilis, and 105 (88.2%) with Mediace TPLA. The percent agreements (kappa values) were 98.8% (0.934) between Centaur Syphilis and Mediace TPLA, 99.0% (0.94) between Immulite Syphilis and Mediace TPLA, and 99.2% (0.955) between Centaur Syphilis and Immulite Syphilis. To measure the sensitivity and specificity of each treponemal test, samples showing agreement in three or four of the tests (three treponemal tests and Mediace- RPR) were regarded as true positive (n=117) or true negative (n=1,142). The respective values for sensitivity and specificity were 100% and 99.6% for Centaur Syphilis, 98.3% and 100% for Immulite Syphilis, and 99.2% and 99.7% for Mediace TPLA. Conclusions: Results from the three treponemal assays were in good agreement. Greater sensitivity of Centaur Syphilis and greater specificity of Immulite Syphilis were suggested. Key Words: Syphilis, Treponema pallidum, Chemiluminescence immunoassay, Treponemal test, Non-treponemal test 서론 매독은 Treponema pallidum 이라는세균에의해발병하는성 Corresponding author: Dong Hee Whang Department of Laboratory Medicine, Inje University Seoul Paik Hospital, 9 Mareunnae-ro, Jung-gu, Seoul 100-032, Korea Tel: +82-2-2270-0152, Fax: +82-2-2270-0148 E-mail: dhwhang@lycos.co.kr Received: July 21, 2014 Revision received: October 1, 2014 Accepted: November 4, 2014 This article is available from http://www.labmedonline.org 2015, Laboratory Medicine Online This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. 매개감염병이다. 일반적으로매독진단의표준방법은병변에서직접균을검출하는방법이지만민감도가낮고검사가어려워, 실제병원에오는환자나공혈자를대상으로한매독선별검사에는주로혈청학적인방법이사용된다. 혈청학적검사방법에는감작항체 (reagin) 를검출하는비트레포네마검사 (non-treponemal test) 와매독균특이항체를검사하는트레포네마검사 (treponemal test) 가있다 [1]. 비트레포네마검사에는 VDRL, Rapid plasma regain (RPR) 검사등이사용되고, 매독특이항체를검사하는트레포네마검사에는 Treponema pallidum hemagglutination (TPHA), Treponema pallidum latex agglutination (TPLA), Treponema pallidum particle agglutination (TPPA), 형광매독항체흡수검사 (fluorescent treponemal antibody absorption test, FTA-ABS) 법, 효소면역분석법 (Enzyme immunoassay, EIA), 화학발광면역측정법 (Chemiluminescence immunoassay, CLIA) 등이사용된다. eissn 2093-6338 www.labmedonline.org 77
전통적인알고리즘은주로우리나라나미국을포함한대부분의나라에서시행해왔던방법으로매독에대한선별검사를비트레포네마검사로시행하고트레포네마검사로확인하는순서로많이사용되어왔지만 [2, 3], 최근들어역순매독선별검사 (Reverse sequence screening for syphilis) 가도입되면서현재유럽에서는 EIA ( 또는이에상응하는 CLIA) 를이용한트레포네마검사를먼저실시하고, 이결과에따라비트레포네마검사를추가로실시하는새로운검사알고리즘이권장되고있다 [4]. 2000년대에들어서는국내에서도트레포네마검사에대량자동화검사가가능한 EIA가사용되면서대한적십자사혈액원도 2001년 6월부터헌혈자매독선별검사를기존의 VDRL법에서 EIA법으로전환하였다. 또한 2011년도에만들어진질병관리본부의성매개감염진료지침에따르면트레포네마 EIA 검사를먼저실시할것을권장하고있으며 [5], 최근미국질병관리본부에서도전통적인알고리즘과더불어역순매독선별검사를인정해주고있다 [6, 7]. 이런변화의추세대로최근에는자동화장비를이용하여검사가가능하여매독의선별검사로활용이가능한 CLIA 트레포네마검사시약이여러회사에서개발되었다. 이에본연구에서는 SIE- MENS사에서최근개발된 CLIA 트레포네마검사시약인 ADVIA Centaur Syphilis assay ( 이하 Centaur Syphiilis; Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY, USA) 시약과 Immulite 2000 Syphilis screen ( 이하 Immulite Syphilis; Siemens Healthcare Diagnostics Inc.) 시약을기존에사용되고있던 Mediace TPLA (Sekisui Chemical Co., Ltd, Osaka, Japan) 시약과상대비교평가해보고자하였다. 대상및방법 첫번째로는 2012년 11월 26일부터 30일까지약 5일간연속적으로랩지노믹스검사센터에 RPR 정밀검사가의뢰된 1,147명의검체에대해서검사를시행하였다. 모든검체에대해서 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, Mediace TPLA 시약을이용하여세가지트레포네마검사를시행하였다. 장비는각각 ADVIA Centaur XP Immunoassay System (Siemens Healthcare Diagnostics Inc.), Immulite 2000 systems analyzer (Siemens Healthcare Diagnostics Inc.), ADVIA 2400 chemistry system (Siemens Healthcare Diagnostics Inc.) 을이용하여검사하였다. 두번째로는 2012년 5월 1일부터 11 월 25일까지랩지노믹스검사센터에서 Mediace RPR 정밀검사상양성결과를보인 119명의혈청검체를수집하여위와같은세가지검사를시행하였다. 연속적으로채집된 1,147명의검체에대해서는냉장후당일검사를시행하였고 RPR 정밀양성검체 119개에대해서는 -20 C에냉동보관한후검사를시행하였다. Mediace RPR 정밀검사는비트레포네마검사로지질항원을감작시킨폴리스티렌라텍스와검체를일정조건하에서반응시켜검체중의매독으로인한항지질항체와라텍스의응집덩어리를형성시킨후응집덩어리형성에의한탁도의상승을반응전후의탁도차 ( 탁도변화량 ) 를측정하여검체중의매독으로인한항지질항체의검체가를구하는것이다. 검사는시약설명서대로시행하였으며 ADVIA 2400 chemistry system을이용하여측정한후결과치가 1.0 RPR Unit (R.U.) 이상일때양성으로판정하였다. 모든검사는시약에포함된시약설명서에따라시행하였다. Centaur Syphilis는 CLIA를이용하여사람의혈청이나혈장내에있는 Treponema pallidum 특이항체를검출하기위한자동화항원 sandwich 면역검사법이다. 검사시약내에존재하는 acridinium-ester 가표지되어있는 T. pallidum 15 (Tp15) 나 Tp17 항원과같은 T. pallidum 재조합항원이검체내에있는항체와결합한다. 이결합물을고체상 (solid phase) 시약인 streptavidin이코팅된자성의 (magnetic) 라텍스입자에결합된 Tp15 나 Tp17 항원과같은 T. pallidum 재조합항원이포착하여결합한다. 세척후항원-항체-항원결합체의 acridinium ester를발광시킨다. 발광반응을측정하여 Index value가 1.1 이상인경우양성으로판단하였다. Mediace TPLA는 Treponema pallidum 에서유래한항원감작라텍스와검체를일정한조건하에반응시켜, 검체중의 T. pallidum 특이항체와라텍스의응집덩어리를형성시킨후응집덩어리형성에의한탁도의상승을반응전후의탁도차 ( 탁도변화량 ) 를측정하여검체중의항트레포네마항체가를구하는것이다. AD- VIA 2400 chemistry system을이용하여측정한후결과치가 10.0 Titer Unit (T.U.) 이상일때양성으로판정하였다. Immulite Syphilis는 CLIA를이용하여 T. pallidum 특이항체를정성적으로검출하는검사로정제된재조합 Tp17 항원으로코팅된고체상 ( 구슬 ) 과환자의검체, alkaline phosphatase가부착된정제된재조합 Tp17 항원이포함된액상시약과반응시키면검체내의 T. pallidum에대한항체와구슬에코팅된재조합 Tp17 항원, 효소와결합된재조합 Tp17 항원이 sandwich 결합물을형성하고세척을거쳐서결합되지않은검체나효소를제거한다. 마지막으로화학발광기질을첨가하면결합된효소에비례하여화학발광신호를낸다. 발광반응은시약설명서에따라측정하여 S/CO ratio가 1.1 이상인경우양성으로판단하였다. 본연구는랩지노믹스진단검사의학의원의임상시험위원회심의를통과한후시행되었다. 통계적분석 세가지트레포네마검사결과를두가지검사씩짝을지어서로 78 www.labmedonline.org
간에얼마나결과값이일치하는지검사결과간일치율및 kappa 값분석을시행하였다. 각트레포네마검사의민감도는세가지트레포네마검사가모두양성을보인검체나세가지트레포네마검사중두개이상양성을보인검체중에서 Mediace RPR 검사에서양성을보인검체, 즉최소 3개이상의검사에서양성을보인검체를진양성으로간주하여구하였다. 특이도는세가지트레포네마검사모두음성을보인검체나세가지트레포네마검사중두개이상음성을보인검체중에서 Mediace RPR 검사에서음성을보인검체, 즉최소 3개이상의검사에서음성을보인검체를진음성으로간주하여구하였다. 모든분석은 MedCalc version 13.1.2 프로그램 (MedCalc software, Ostend, Belgium) 을이용하여시행하였다. 결과 1. 무작위검체에서의세가지트레포네마검사의양성률및검사결과간일치율 무작위 1,147 검체에대해 Centaur Syphilis 시약은 24개 (2.09%) 가, Immulite Syphilis 시약은 16개 (1.39%) 가, Mediace TPLA 시약은 19개 (1.66%) 가트레포네마항체양성반응을보였다. 트레포네마검사인 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, Mediace TPLA 세검사모두에서양성을보인검체가 14개, 두가지검사에서양성을보인경우가 5개, 한검사에서만양성을보인검체가 7검체였다 (Table 1). 세가지검사모두에서음성을보인검체는 1,121 검체였다. 세가지시약의검사결과가모두일치한결과간일치율은 99.0% 였다. 무작위 1,147 검체에대해통상적으로시행한 RPR 정밀검사에서두검체 (0.17%) 가양성을보였고, 나머지 1,145 검체는 RPR 정밀음성반응을보였다. RPR 정밀양성을보인두검체중한검체는세가지트레포네마검사에서모두양성을보였으나, 나머지한검체는 Centaur Syphilis와 Mediace TPLA로는양성을, Immulite Syphilis로는음성반응을보였다. 2. Mediace RPR 정밀양성검체에서세가지 트레포네마검사의양성률및검사결과간일치율 Mediace RPR 정밀양성 119 개검체에대해 Siemens 사의 Centaur Syphilis 는 103 개 (86.6%), Immulite Syphilis 는 101 개 (84.9%), Mediace TPLA 는 105 개 (88.2%) 가양성을보였다 (Table 2). 100 개 (84.0%) 의검체가세가지검사모두에서양성반응을보였다 (Table 2 의 group 2). 12 개 (10.1%) 의 RPR 정밀양성검체가 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, Mediace TPLA 검사모두에서음성반 응을보였다 (Table 2 의 group 1). 두가지검사에서음성을보인검 체가 5 개 (Table 2 의 group 3, 4), 하나의검사에서만음성을보인검 체 (Table 2 의 group 5, 6) 가 2 개였다. 세가지검사의결과가모두 일치한비율은 94.1% 이었다. 3. 전체검체에서세가지트레포네마검사의양성률및 검사결과간일치율 RPR 정밀양성검체 119 개와무작위검체 1,147 개를합한 1,266 개 에대한검사결과를 Table 3 에나타내었다. 세가지트레포네마검 사에서 1,133 개 (89.5%) 의검체가모두음성, 114 개 (9.0%) 의검체가 Table 2. Classification of Mediace RPR positive samples (n=119) based on reactivity to three treponemal assays, ADVIA Centaur Syphilis, Mediace TPLA, and IMMULITE 2000 Syphilis Screen Specimen group Number of specimens (%) ADVIA Centaur Syphilis Treponemal assay Mediace TPLA IMMULITE 2000 Syphilis Screen 1 12 (10.1) Nonreactive Nonreactive Nonreactive 2 100 (84.0) Reactive Reactive Reactive 3 1 (0.8) Reactive Nonreactive Nonreactive 4 4 (3.4) Nonreactive Reactive Nonreactive 5 1 (0.8) Reactive Nonreactive Reactive 6 1 (0.8) Reactive Reactive Nonreactive Total 119 (100.0) Table 1. Classification of sequentially RPR-requested serum samples (n=1,147) by reactivity to three treponemal assays, ADVIA Centaur Syphilis, Mediace TPLA, and IMMULITE 2000 Syphilis Screen Specimen group Number of specimens (%) Treponemal assay ADVIA Centaur Syphilis Mediace TPLA IMMULITE 2000 Syphilis Screen Mediace RPR 1 1,121 (97.7) Nonreactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive 2 13 (1.1) Reactive Reactive Reactive Nonreactive 3 1 (0.1) Reactive Reactive Reactive Reactive 4 5 (0.4) Reactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive 5 2 (0.2) Nonreactive Reactive Nonreactive Nonreactive 6 2 (0.2) Reactive Nonreactive Reactive Nonreactive 7 2 (0.2) Reactive Reactive Nonreactive Nonreactive 8 1 (0.1) Reactive Reactive Nonreactive Reactive Total 1,147 (100.0) www.labmedonline.org 79
모두양성을보였다. 따라서세가지트레포네마검사를대상으로해서검사간일치율을구하면 98.5% (1,247/1,266) 였고 1.5% (19/1,266) 에서불일치를보였다. 네가지검사중세가지검사에서일치를보인결과를진양성또는진음성으로간주하였을때 Centaur Syphilis는 5개의검체에서단독양성을보여위양성으로판단되었으며, 위음성은없었다. 그에반하여 Immulite Syphilis는 2개의검체에서단독음성을보여위음성으로판단되었으며, 위양성은없었다. 전체 1,266 검체중 Centaur Syphilis에서 127개 (10.0%), Immulite Syphilis에서 117개 (9.2%), Mediace TPLA에서 124개 (9.8%) 가트레포네마항체양성을보여 Centaur Syphilis 검사에서가장많은매독항체양성결과를보였고, Immulite Syphilis 검사에서가장적은항체양성결과를보였다. 4. Kappa값분석및두검사간일치율, 민감도와특이도분석결과세검사중두검사씩짝을지어검사결과간일치율과 kappa값 분석을시행한결과 Centaur Syphilis와 Mediace TPLA 간의일치율은 98.8% (0.934), Immulite Syphilis와 Mediace TPLA의일치율은 99.0%, kappa값 0.94, Centaur Syphilis와 Immulite Syphilis는일치율 99.2%, kappa값 0.955로상당히높은일치율을보였다 (Table 4). 민감도와특이도는일반적으로진양성및진음성검체를가지고평가하는게원칙이나본연구에서는다른연구에서처럼임상적으로나혈청학적으로확진된진양성이나진음성검체를구하기어려웠고 Western blot 같은확진검사를시행하지않았기때문에차선책으로본연구에이용된검체중일부검체를가지고민감도와특이도를평가하였다 [8]. 민감도는세가지트레포네마검사가모두양성이거나세가지트레포네마검사중 2개가양성이면서 Mediace-RPR 정밀검사에서양성인검체즉최소 3개이상의검사에서양성이확인된검체 (Table 3의 group 3, 4, 8, 10) 를진양성으로간주하여구하였다. 마찬가지로특이도는세가지트레포네마검사가모두음성이거나세가지트레포네마검사중 2개가음성이면서 Mediace-RPR 정밀검사에서음성인검체즉최소 3개이상의검사 Table 3. Consensus classification of all samples (n=1,266) on the basis of the majority results for reactivity to three treponemal assays, ADVIA Centaur Syphilis, Mediace TPLA, and IMMULITE 2000 Syphilis Screen, and Mediace RPR Specimen group Number of specimens (%) Treponemal assay Centaur Syphilis Mediace TPLA IMMULITE Syphilis Mediace RPR Final decision* 1 1,121 (88.5) Nonreactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive 2 12 (0.9) Nonreactive Nonreactive Nonreactive Reactive Nonreactive 3 13 (1.0) Reactive Reactive Reactive Nonreactive Reactive 4 101 (8.0) Reactive Reactive Reactive Reactive Reactive 5 5 (0.5) Reactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive 6 1 (0.1) Reactive Nonreactive Nonreactive Reactive Indeterminate 7 2 (0.2) Reactive Nonreactive Reactive Nonreactive Indeterminate 8 1 (0.1) Reactive Nonreactive Reactive Reactive Reactive 9 2 (0.2) Reactive Reactive Nonreactive Nonreactive Indeterminate 10 2 (0.2) Reactive Reactive Nonreactive Reactive Reactive 11 4 (0.3) Nonreactive Reactive Nonreactive Nonreactive Nonreactive 12 2 (0.2) Nonreactive Reactive Nonreactive Reactive Indeterminate Total 1,266 (100.0) *The final classification of a specimen was positive when three treponemal assays showed reactivity, or two of three treponemal assays and Mediace RPR showed reactivity; the specimens were classified as negative when three treponemal assays showed non-reactivity, or two of three treponemal assays and Mediace RPR showed non-reactivity. Table 4. Concordance among three treponemal assays TPLA* Agreement Immulite kappa N P (%) N P Agreement (%) Centaur N 1,133 6 98.8 0.934 N 1,139 0 99.2 0.955 P 9 118 P 10 117 Immulite N 1,139 10 99.0 0.940 P 3 114 *TPLA, Mediace TPLA; Immulite, IMMULITE 2000 Syphilis Screen; Centaur, ADVIA Centaur Syphilis. Abbreviations: N, negative; P, positive; TPLA, Treponema pallidum latex agglutination. kappa 80 www.labmedonline.org
에서음성이확인된검체 (Table 3의 group 1, 2, 5, 11) 를진음성으로간주하여구하였다. 총 1,266 검체에서세가지검사이상에서양성을보인진양성검체는 117 검체였고, 세가지검사이상에서음성을보인진음성검체는 1,142 검체였다. 이를근거로구한 Centaur Syphilis의민감도와특이도는각각 100% (117/117, 95% 신뢰구간 : 96.9-100.0%), 99.6% (1,137/1,142, 95% 신뢰구간 : 99.0-99.9%) 였고, Immulite Syphilis의민감도와특이도는각각 98.3% (115/117, 95% 신뢰구간 : 94.0-99.8%), 100% (1,142/1,142, 95% 신뢰구간 : 99.7-100.0%) 이었으며, Mediace TPLA의민감도와특이도는각각 99.2% (116/117, 95% 신뢰구간 : 95.3-100.0%), 99.7% (1,138/1,142, 95% 신뢰구간 : 99.1-99.9%) 이었다. 고찰 전통적으로 FTA-ABS 검사가트레포네마검사의표준으로여겨져왔지만검사판독이주관적이고훈련된검사자와형광현미경등의고가장비가필요한단점이있다. 또한검사실운영면에서자동화가불가능한것이가장큰단점이다. 이에비하여 EIA 또는 CLIA 를이용한트레포네마검사는자동화가가능하고객관적인검사결과의판독이가능하여최근들어사용이늘어나고있는추세이다. 또한유럽에서는혈액공여자, 모든임신부, 새로이성매개감염이진단된환자에서는일차적으로매독에대한선별검사를하도록권장되고있다 [4]. 이에본연구에서는 RPR-정밀검사가의뢰된총 1,266 검체를대상으로자동화장비로검사가가능한트레포네마검사시약인 Centaur Syphilis와 Immulite Syphilis 시약, 기존에사용하고있던 Mediace TPLA를포함하여세가지트레포네마검사의정성결과를비교함으로써검사간일치도및각시약의민감도와특이도를비교평가하고자하였다. 그결과세검사중두검사씩짝을지어평가하였을때결과간일치율은모두 98% 이상으로높게나타났으며 kappa값도모두 0.93 이상으로높게나타났다. 민감도와특이도에있어서는 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, Mediace TPLA 세가지검사중에서 Centaur Syphilis의민감도가다른두가지검사보다약간높았고 Immulite Syphilis의특이도가다른두가지검사보다약간높았으나큰차이는보이지않았다. 본연구에서는전체검체중에서적어도세가지트레포네마검사와 Mediace RPR 모두네가지중에서세가지검사가일치를보인검체만으로대상을좁혀서민감도와특이도를구하였기때문에검사결과분석에한계가있었다. 검사상두개는음성, 두개는양성으로나온검체는제외하였으므로실제보다민감도와특이도가모두높게나타났을것으로생각된다. 또한본연구에서민감도평가는 RPR 양성을보였던검체만을대상으로하였기에조기일차매독, 잠복매독, 만기 매독환자에대한완전한평가는이루어지지못한것으로생각된다. 더정확하게특이도와민감도를평가하기위해서는임상적, 실험실적으로정확히진양성및진음성여부가확진된좀더큰규모의검체를대상으로해야알수있을것으로생각된다. 본연구에서연속적으로의뢰된무작위 1,147 검체에대해검사를시행한결과현재선별검사로사용하고있는 RPR 정밀검사에서두검체 (0.17%) 가양성을보였고, Centaur Syphilis로는 2.09%, Immulite Syphilis로는 1.39%, Mediace TPLA로는 1.66% 의트레포네마항체양성률을보여트레포네마항체검사인 Centaur Syphilis, Immulite Syphilis, Mediace TPLA 검사의양성률이 RPR 정밀검사의양성률보다 8-12배높음을관찰할수있었다. 따라서실제상황에서트레포네마검사를사용하여매독을선별하는경우검사양성률이 1.4-2.1% 로현재의매독선별검사로사용되는비트레포네마검사인 RPR 정밀검사의양성률인 0.17% 보다매우높기때문에실제상황에서도비트레포네마검사를시행할때보다 10배정도더많은환자가확인검사의대상이될것으로생각된다. 연속적으로 RPR 검사가의뢰된 1,147명에서 Centaur Syphilis 기준으로트레포네마검사양성을보인 24명을대상으로분석했을때 19명이비트레포네마검사인 RPR 정밀검사가음성으로 91.6% (22/24) 의불일치율을보였다마찬가지로계산했을때 Immulite Syphilis 기준으로는 93.8% (15/16), Mediace TPLA 기준으로는 94.4% (17/19) 의불일치율을보였다. 이러한원인으로는 1) 그전의치료여부에관계없이비트레포네마항체의음성혈청전환이되고트레포네마항체는지속되는경우, 2) 트레포네마항체가위양성을보이는경우, 3) 조기일차매독으로아직비트레포네마검사가발현되지않은 window period인경우등을생각해볼수있겠다 [7]. 미국질병관리본부 (Centers for disease control, CDC) 에서발표한바에따르면 2006에서 2010년까지약 5년간 5개의검사실에서검사한기록에서 EIA 또는 CLIA 트레포네마검사로양성이나온검체를다시비트레포네마검사로검사했을때 56.7% ( 유병률이낮은집단에서는 60.6%, 유병률이높은집단에서는 50.6%) 에서음성을보였다고한다 [7]. 그런데실제이번연구결과에서트레포네마양성검체를다시비트레포네마검사로검사했을때음성이나올확률을보면 91.4-94.4% 로미국에서보다훨씬높다. 미국질병관리본부연구결과에서, 유병률이높은집단과낮은집단을나누어분석하였을때유병률이낮은집단의트레포네마양성검체에서비트레포네마음성이나온비율이상대적으로높은것으로보아본연구에서검사를시행한대상집단의유병률이낮아서비트레포네마검사양성률이낮았을수도있고혹은본연구에서시행한자동화장비를이용한 RPR 정밀검사가미국질병관리본부에서사용한 RPR 카드검사보다특이도가높아서양성률이더낮게나왔을가능성도생각해볼수있겠다. www.labmedonline.org 81
이에비해역순매독선별검사알고리즘이경제적으로는많은비용이드는구조임에도불구하고 EIA를초회검사로실시하도록권고하는이유는만기매독 (late syphilis) 이나 3기매독환자에서치료가되지않은상태에서높게는 30% 정도에서 RPR 검사가음성으로나타나기때문이다. 따라서초기선별검사에서매독특이항체양성을보이는약 1.4-2.1% 의검체에대해서는추가적으로비트레포네마검사나이차적인특이항체를실시하고검사대상자의현재의 RPR 반응성과과거감염여부등을확인하여검사결과의상담에활용한다면좀더많은매독환자를선별할수있고 RPR 검사의위음성결과로인하여매독진단을놓치지않는데도움이될것으로판단된다. 하루 200개의검체를선별검사하는검사실에서는 Centaur Syphilis나 Immulite Syphilis 시약을사용할경우약 3-4 개의검체가트레포네마항체양성을보일것으로예상된다. 외부신빙도조사현황에따르면아직까지국내에서는장비없이도손쉽게검사가가능하고비용면에서경제적인 RPR 카드검사가가장많이쓰이고있는것으로보인다 [9]. 하지만국내에서 2011년도에만들어진질병관리본부의성매개감염진료지침 [5] 에서는매독이의심되는환자에서 EIA를이용한트레포네마검사를먼저실시할것을권장하고있다. 따라서미국에서와마찬가지로향후작은규모의검사실에서는 RPR 카드검사를선별검사로먼저실시하는전통적인방식을고수하더라도큰규모의검사실에서는인건비를줄일수있고대량으로자동화검사가가능한 EIA나 CLIA를이용한매독검사법을도입해야한다는주장이활발해질것으로예상된다 [10]. 결론적으로본연구에서는 Siemens사에서개발된 CLIA 트레포네마검사시약인 Centaur Syphilis와 Immulite Syphilis를기존에사용되고있던 Mediace TPLA 시약과상대적으로비교평가하였는데세검사시약간에는높은검사결과간일치율을나타냈으며민감도는 Centaur Syphilis가다른두검사보다약간높고특이도는 Immulite Syphilis가다른두검사보다약간높은것으로나타났다. Centaur Syphilis와 Immulite Syphilis 검사는기존에쓰이는 RPR 카드검사나 FTA-ABS 검사에비하여자동화가가능하고판독이객관적이고용이한장점을가지고있어대규모검체를대상으로한매독의선별검사로이용될수있을것이다. 요약 배경 : 본연구에서는트레포네마항체검출을위한화학발광면역측정시약인 ADVIA Centaur Syphilis와 Immulite 2000 Syphilis screen을 Mediace Treponema pallidum latex agglutination (TPLA) 과의비교를통하여평가하였다. 방법 : 본연구는두단계로진행되었다. 첫번째는 2012년 11월에 랩지노믹스의학연구소에 Mediace RPR 정밀검사가의뢰된 1,147 개의연속적인검체에대해서검사를시행하였고, 두번째는 Mediace RPR 정밀검사에서양성으로나왔던 119개의동결된검체를검사하였다. 모든혈청검체에대해서 Centaur Syphilis, Mediace TPLA, 그리고 Immulite Syphilis 검사를시행하였다. 검사간일치율, kappa값, 각검사의민감도및특이도를분석하였다. 결과 : 무작위 1,147 검체에대해 Centaur Syphilis는 24개 (2.09%) 가양성을, Mediace TPLA로는 19개 (1.66%) 가양성을, Immulite Syphilis로는 16개 (1.39%) 가트레포네마항체양성반응을보였다. RPR정밀양성 119개검체에대해 Centaur Syphilis로는 103개 (86.6%) 가양성을보였고, Immulite Syphilis로는 101개 (84.9%) 가, Mediace TPLA로는 105개 (88.2%) 가양성을보였다. 검사결과간일치율 (kappa값) 은 Centaur syphilis와 Mediace TPLA는 98.8% (0.934), Immulite Syphilis와 Mediace TPLA는 99.0% (0.94), Centaur Syphilis와 Immulite Syphilis는 99.2% (0.955) 를보였다. 세가지트레포네마검사와 RPR 검사중 3개이상이일치한검체를진양성 (n = 117) 또는진음성 (n=1,142) 으로간주하여평가한트레포네마검사의민감도와특이도는각각 Centaur Syphilis 100%, 99.6%, Immulite Syphilis 98.3%, 100%, Mediace TPLA 99.2%, 99.7% 였다. 결론 : 세가지트레포네마검사, Centaur Syphilis, Mediace TPLA, Immulite Syphilis는높은검사결과간일치율을보였다. 다른검사보다 Centaur syphilis가조금더높은민감도를, Immulite syphilis가조금더높은특이도를보이는것으로생각되었지만정확한평가를위해서는혈청학적으로확진된대규모검체를대상으로한추가적인연구가필요할것으로생각된다. 감사의글 본논문은 2011년도인제대학교학술연구조성비보조에의한것임. 이해관계 한국지멘스헬스케어에서이연구에필요한 ADVIA Centaur Syphilis assay와 Immulite 2000 Syphilis screen 시약을제공하였음. 저자들은본연구와관련하여해당회사와이해관계가없음. REFERENCES 1. Larsen SA, Steiner BM, Rudolph AH. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis. Clin Microbiol Rev 1995;8:1-21. 2. Choi KC and Song JY. Recent trends in clinical observation of syphilis 82 www.labmedonline.org
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