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지희 군
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1 J Koren So Foo Si Nutr 한국식품영양과학회지 44(1), 145~1457(215) 유산균종류에따른발효톳추출물의항염증활성 권명숙 1 문옥주 1 배민주 1 이슬기 1 김미향 1 이상현 2 유기환 3 김육용 3 공창숙 1 1 신라대학교의생명과학대학식품영양학과 2 신라대학교의생명과학대학바이오산업학부제약공학전공 3 ( 주 ) 이삭에프앤비 Anti-Inflmmtory Ativity of Ethnol Extrts from Hiziki fusiformis Fermente with Lti Ai Bteri in LPS-Stimulte RAW264.7 Mrophges Myeong Sook Kwon 1, Ok-Ju Mun 1, Min Joo Be 1, Seul-Gi Lee 1, Mihyng Kim 1, Sng-Hyeon Lee 2, Ki Hwn Yu 3, Yuk Yong Kim 3, n Chng-Suk Kong 1 1 Deprtment of Foo n Nutrition n 2 Mjor in Phrmeutil Division of Bioinustry, College of Meil n Life Sienes, Sill University 3 ISAAC F& Co. ABSTRACT The nti-inflmmtory effet of ethnol extrts from Hiziki fusiformis fermente with n without lti i teri ws ompre in lipopolyshrie (LPS)-stimulte RAW mouse mrophges. The fermenttion ws one using Weissell sp. SH-1 n Ltoillus sei in mixture of gluose n ltte soure t 3 C for 3 ys. As result, we onfirme tht the fermenttion of H. fusiformis with lti i teri inhiite LPS-stimulte nitri oxie (NO) proution n the expression of inuile nitri oxie synthse (inos), ylooxygense (COX)-2, interleukin (IL)-6, tumor nerosis ftor α, n IL-1β s importnt inflmmtory ftors. During omprison nlysis, we foun tht L. sei fermente groups signifintly suppresse NO proution y regulting inos n COX-2 expression. Also, the effetive suppression of pro-inflmmtory ytokine n LPS-inue tivtion of mitogen-tivte protein kinse inite tht the fermenttion using Weissell sp. SH-1 n L. sei my provie n inrement towrs the extrtion of tive omponents, whih re effetive nti-inflmmtory gents. Key wors: Hiziki fusiformis, Weissell sp. SH-1, Ltoillus sei, fermenttion, inflmmtion 서 갈조식물모자반과에속하는톳 (Hiziki fusiformis) 은우리나라에서식용으로널리이용되고있는바닷말의일종으로우리나라의서해안, 남해안및제주지역뿐만아니라일본과중국등지에널리분포하고있다 (1,2). 일반적으로톳은칼슘과철등의무기질과비타민뿐만아니라천연정미성분인아미노산과식이섬유가풍부하게함유되어있는것으로알려져있다 (3). 최근의연구에서는면역개선작용, 항균, 항산화, 항고지혈증, 항콜레스테롤효과가있는것으로보고되고있다 (1,3,4). 톳의유용성에대한연구에서는주로열수또는주정을이용한추출이나알칼리및산처리또는효소처리등의방법들이이용되고있으나, 이들방법은해조류에포함된비소화성복합다당류등의유용성분을효과 Reeive 18 June 215; Aepte 14 Septemer 215 Corresponing uthor: Chng-Suk Kong, Deprtment of Foo n Nutrition, College of Meil n Life Sienes, Sill University, Busn 46958, Kore E-mil: skong@sill..kr, Phone: 론 적으로추출하기어렵다는단점을가지고있다 (4). 또한해조류특유의이취는해조류를이용한제품개발을어렵게하고있다. 이에대한대안으로서유용미생물을이용한발효방법으로제품개발에응용하고자하는시도가이루어지고있다 (5-8). 유용미생물을이용한발효는생물전환을통한새로운물질의합성과유용성분의증대효과가있는것으로보고되고있다 (9). 염증은다양한세포와 ytokine들이관여하는일련의과정으로외부자극원에대한생체방어반응중하나이다 (1). 염증반응에관여하는대식세포는인체내선천적면역반응을담당하는면역세포로염증매개물질을분비하여초기염증반응에중요한역할을한다 (11). 지속된염증반응시염증반응을촉진하는 ylooxygense-2(cox-2), inuile nitri oxie synthse(inos), interleukin-6(il- 6), tumor nerosis ftor-α(tnf-α), IL-1β와같은 ytokine들이생성되며이들은관절염, 당뇨병과심혈관질환등각종질병을발생시킨다 (12). 본연구에서는해조류를이용한항염증소재개발연구의일환으로유산균을이용하여발효한톳추출물의 NO 생성

2 유산균발효톳추출물의항염증효과 1451 과염증성사이토카인발현에미치는영향을검토하여발효톳의항염증효과를알아보고자하였다. 이전연구에서는유기산첨가유무에따른유산균발효가톳의생리활성에미치는영향을조사하여유기산의첨가에의해항산화및 NO 생성억제활성이개선되는것을확인하였다 (5,13,14). 이에본연구에서는탄소원과 ltte를함유한배양액에서재래식물김치로부터분리한 Weissell sp. SH-1 균과치즈나발효식육제품에사용되는 Ltoillus sei 균 (15) 을이용하여발효시킨발효톳추출물이 NO 생성및염증성사이토카인의발현에미치는효과와세포내 mitogen-tivte protein kinse(mapk) 를통한염증발현기전에미치는영향을 lipopolyshrie(lps) 로자극한마우스유래 RAW264.7 mrophge ell 모델을이용하여조사하였다. 재료및방법실험재료및발효균주본실험에사용한톳 (Hiziki fusiformis) 은파라제주 (Jeju, Kore) 에서구입하여사용하였으며, 건조물을초미세기류식분쇄기 (KMS-2, Koremei Co., Degu, Kore) 로분쇄한후밀봉하여사용전까지 4 C에보관하였다. 발효균주로는재래식물김치로부터직접분리동정한 Weissell sp. SH-1 균 (5) 과 Ltoillus sei(meiogen Co., Jeheon, Kore) 를사용하였다. 발효균주를이용한톳발효액의제조발효균주인 Weissell sp. SH-1과 L. sei는유산균선택배지인 MRS 액체배지를이용하여 3 C에서정치배양하였다. 톳발효액의제조는 Yoo(16) 와 Prk 등 (5) 의방법에따라제조하였다. 건조톳분말 1 g에 5%(w/v) 의농도가되도록 H 2O를첨가한후, 탄소원으로 gluose(1%, w/v) 와유기산으로 ltte(.5%, w/v) 를첨가하여 121 C의가압조건에서 3분간멸균하였다. 여기에정치배양한발효균주를.5% 의농도로접종한후 3 C 배양기에서 3일간배양하여톳발효액을제조하였다. 발효톳의에탄올추출물제조발효가완료된톳발효액을감압조건하에서농축시킨다음동결건조장치 (FD8518, Ilshin BioBse, Gyeonggi, Kore) 를이용하여동결건조하여발효톳건조시료를얻었다. 건조시료에 1배량 (w/v) 의에탄올을첨가한후 8 C에서 4시간씩 2회추출을수행하였으며진공농축기를이용하여농축시켜추출물을얻었다. 세포배양 RAW264.7 대식세포는 1% fetl ovin serum(fbs, Atls iologils, Fort Collins, Coloro, USA) 과 1% L-glutmine peniillin streptomyin solution(sigm- Alrih Co., St. Louis, MO, USA) 이함유된 Duleo's moifie Egle's meium(dmem, Corning, Mnsss, VA, USA) 을배양액으로하여 37 C, 5% CO 2 조건에서배양하였다. 세포독성 RAW264.7 대식세포에대한세포독성은 3-(4,5-imethylthizol-2-yl)-2,5-iphenyltetrzolium romie(mtt) ssy를이용하여측정하였다. 세포를 ells/well이되도록 96 well plte에분주하고 37 C, 5% CO 2 inutor 에서 24시간배양한후발효톳의에탄올추출물을 5,, 5 μg/ml 농도로처리하여 24시간동안배양하였다. 각 well에배지를제거한후 MTT 용액을 1 mg/ml의농도로첨가하여동일한배양조건에서 3시간동안배양하고 formzn rystl의생성을유도하였다. 각 well에생성된 formzn rystl에 μg/ml의 imethyl sulfoxie (Sigm-Alrih Co.) 용액을가하여환원반응으로생성된보라색의 formzn rystl을완전히용해한후 ELISA Reer(Multiskn GO, Thermo Sientifi, Vnt, Finln) 를이용하여 54 nm에서흡광도를측정하여생존율 (%) 을구하였다. Cell viility (%)= 대조군의흡광도 - 시료처리군의흡광도 대조군의흡광도 Nitri oxie(no) 함량측정 RAW264.7 대식세포를 96 well pltes에 ells/ well로분주하여 37 C, 5% CO 2 inutor에서 1% FBS와 1% L-glutmine peniillin streptomyin이함유된 DMEM 으로 24시간동안배양하였다. 페놀레드가제거된새로운배지로교체한다음발효톳의에탄올추출물시료와 LPS (Sigm-Alrih Co.) 를 1 μg/ml의농도로처리하여 37 C, 5% CO 2 inutor에서 24시간동안배양하였다. 세포배양액을수거하여 Griess regent(sigm-alrih Co.) 와 1:1 의비율로혼합하고 15분동안실온에암반응시킨후 ELISA Reer(Multiskn GO, Thermo Sientifi) 를이용하여 54 nm에서흡광도를측정하였다. 생성된 NO의농도 (μm) 는 soium nitrite(nno 2) 용액의표준곡선을기준으로하여계산하였다. trnsription-polymerse hin retion(rt- PCR) 상기와동일한조건에서배양한 RAW264.7 대식세포를 phosphte uffere sline(pbs) 으로세척하고 Trizol regent(invitrogen Co., Crls, CA, USA) 를이용하여 totl RNA를분리하고정량하였다. 동량의 RNA(2 μg) 와 Oligo-T(Sigm-Alrih Co.) 를혼합하여 7 C에서 5분

3 1452 권명숙 문옥주 배민주 이슬기 김미향 이상현 유기환 김육용 공창숙 간반응시켜냉각한다음, RT uffer 5 μl, M-MLV RT 1 μl, 1 mm NTP 5 μl, DEPC wter 1 μl를첨가하여 37 C에서 1시간반응시켜 DNA를합성하였다. 합성된 DNA에 PCR Green uffer(5 ) 5 μl, DNA polymerse.125 μl, 1 mm NTP.5 μl, DEPC wter μl 와염증관련 primer를첨가하였으며 internl ontrol로는 β-tin을사용하였다 (Tle 1). Therml Cyle(Bio-R Lortories, Herules, CA, USA) 을이용하여 95 C에서 3초간 enturtion, 6 C에서 45초간 nneling, 72 C 에서 1분간 extension 하는과정을 3번반복하여증폭시킨후마지막으로 72 C에서 5분간 extension 한다음 4 C 에서종결하였다. 증폭된 PCR 산물들은 TAE uffer(biosesng, Gyeonggi, Kore) 를전해질로사용한 1.5% grose gel에 loing 하여 V에서 2분간전기영동시킨후, ethiium romie(etbr, Amreso, Solon, OH, USA) 용액에서 3분동안반응시킨다음 UV(Dvinh-Chemi imger, CAS-4SM, Dvinh-K, Seoul, Kore) 하에서 mrna 발현을확인하였다. Western lot에의한단백질발현분석상기와동일한조건에서배양한 RAW264.7 대식세포를 PBS로세척하고 RIPA uffer(sigm-alrih Co.) 를첨가하여세포를균질화하였다. 회수한세포는 13, rpm에서 1분간원심분리하여상등액을취한다음 BCA Protein Assy kit(thermo Sientifi, Rokfor, IL, USA) 을이용하여단백질농도를정량하였다. 동일양의단백질 (2 μg) 을 SDS-PAGE법을통해전기영동하여분리한후 nitroellulose memrne에 trnsfer 한다음, 5% skim milk로 1시간동안 loking 하고 1차항체 (1:1,) 를붙여 1시간이상반응시켰다. TBS-T uffer(biosesng) 로세척한후 2 차항체는 1:1, 비율로처리하여상온에서 1시간반응시켰다. TBS-T uffer로세척하고암실에서 eteting solution(amershm ECL Western Blotting Detetion Regents, GE Helthre, Bukinghmshire, UK) 에반응시킨후이미지분석장치 (Dvinh-Chemi imger, CAS-4SM) 를이용하여단백질발현정도를분석하였다. 통계처리실험결과는평균 ± 표준편차 (men±stnr evition, SD) 로표시하였으며, SPSS + /WIN12.(Sttistil Pkge for Soil Siene, version 12., IBM, Armonk, NY, USA) 통계프로그램을이용하여통계적유의성을검토하였다. 집단간의유의성을검정하기위해일원배치분산분석 (one wy nlysis of vrine, ANOVA) 을통해분석하였고, 사후검증은 Dunn's multiple rnge test를실시하여 P<.5 수준에서검증하였다. 결과및고찰세포독성에미치는효과유산균 Weissell sp. SH-1과 L. sei를이용하여발효한톳발효물을에탄올로추출하여제조한추출물의 RAW 대식세포에대한독성여부는 MTT ssy로확인하였다 (Fig. 1A). 유산균을무접종하여발효한톳의에탄올추출물과 Weissell sp. SH-1과 L. sei 균을접종하여발효한톳의에탄올추출물을각각 5,, 5 μg/ml 농도로처리하여세포생존율을측정한결과 RAW264.7 대식세포에대하여발효톳의에탄올추출물은 5 μg/ml의처리농도까지세포독성을보이지않아이농도에서항염증활성을검토하였다. NO 생성저해효과 LPS 는그람음성균의세포외막에존재하는내독소로 RAW 264.7과같은대식세포를자극하여 proytokine을증가시켜 NO와같은염증반응매개물질을분비하게된다 (17). 이러한사실을근거로하여유산균의종류에따른발효톳추출물이염증매개물질인세포내 NO 생성에미치는영향을 LPS 유도에의해활성화된 RAW264.7 세포내에서측정하였다 (Fig. 1B). LPS 처리에의해 NO의생성이현저히증가하였으며 (83.8±4.3 μm), LPS에의한 NO의생성은유산균 Tle 1. Sequenes of primes use for RT-PCR Gene Diretion Sequene COX-2 inos IL-6 TNF-α IL-1β β-atin Forwr Forwr Forwr Forwr Forwr Forwr 5'-AGA-AGG-AAA-TGG-CTG-CAG-AA-3' 5'-GCT-CGG-CTT-CCA-GTA-TTG-AG-3' 5'-TTC-CAG-AAT-CCC-TGG-ACA-AG-3' 5'-TGG-TCA-AAC-TCT-TGG-GGT-TC-3' 5'-AGT-TGC-CTT-CTT-GGG-ACT-GA-3' 5'-CAG-AAT-TGC-CAT-TGC-ACA-AC-3' 5'-AGC-CCC-CAG-TCT-GTA-TCC-TT-3' 5'-CAT-TCG-AGG-CTC-CAG-TGA-AT-3' 5'-GGG-CCT-CAA-AGG-AAA-GAA-TC-3' 5'-TAC-CAG-TTG-GGG-AAC-TCT-GC-3' 5'-CCA-CAG-CTG-AGA-GGG-AAA-TC-3' 5'-AAG-GAA-GGC-TGG-AAA-AGA-GC-3'

4 유산균발효톳추출물의항염증효과 1453 A Cell vivility (%). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei B NO (μm). 5 e e No tei Weissell sp.sh-1 L. sei H. fusiformis (μg/ml) Fig. 1. Effets of ethnol extrts from fermente Hiziki fusiformis with/without lti i teri on intrellulr ell viility (A) n NO level (B) in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges. The ells were pretrete with fermente H. fusiformis for 1 h n following y treting with LPS (1 μg/ml) for 24 h. The nitrite ontent of ulture mei ws nlyze. Mens with the ifferent letters (-e) ove the rs re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. No teri, fermente without lti i teri; Weissell sp. SH-1, fermente with Weissell sp. SH-1; L. sei, fermente with L. sei. P<.5. 무접종군의처리에의해농도의존적으로유의성있게억제되었다. 이러한억제효과는유산균인 Weissell sp. SH-1 과 L. sei를이용하여발효한톳추출물의처리에의해더욱현저하게나타났다. 즉 5,, 5 μg/ml의처리농도에서 NO 생성정도를비교한결과유산균무접종군은각각 74.8±3.8 μm, 57.9±3.8 μm, 33.3±2.2 μm의값을, Weissell sp. SH-1 접종군은각각 52.4±9.5 μm, 3.2± 1.8 μm, 2.1±2. μm의값을, L. sei 접종군은각각 56.2 ±3.1 μm, 29.8±6.1 μm, 13.7±5.2 μm의값을나타내었다. 발효균주 2종을비교한결과에서는 5 μg/ml의처리농도에서 Weissell sp. SH-1 접종군보다 L. sei 접종군에서 NO 생성억제능이우수한것으로확인되었다. inos, COX-2 및 IL-6 발현에미치는효과 inos와 COX-2는 pro-inflmmtory gent에의해발현되어면역관련세포의활성유도를통해염증반응및각종퇴행성질환의발병에관여하는역할을하는것으로알려져있다 (18,19). 염증상태에서는 NO와같은염증매개물질은 inos와 COX-2의유도에의해형성된다 (17). 유산균의종류를달리하여발효한톳의에탄올추출물의 NO 생성억제효과와염증관련인자와의연관성을알아보기위하여 LPS 로유도된세포에서의 inos(fig. 2) 와 COX-2(Fig. 3) 의발현정도를 RT-PCR과 western lot 분석을통해확인하였다. LPS 처리에의해 inos의발현량은현저하게증가하였으나, 유산균무접종군에서는처리농도에따라미세한차이가있지만감소하는경향을나타내었고유산균접종군의처리에의해 inos의발현은효과적으로억제되었다. COX-2 의발현량을검토한결과 Weissell sp. SH-1 접종군보다는유산균무접종군과 L. sei 접종군에의해 COX-2의발현이억제되었다. 발효균주 2종을비교한결과 inos 발현억제능은 Weissell sp. SH-1 접종군이 L. sei 접종군보 다더높은것을확인할수있었다. COX-2 발현억제능은농도 5 μg/ml에서 Weissell sp. SH-1 접종군과 L. sei 접종군보다 No teri가높았지만, 발효톳추출물처리농도가증가할수록 L. sei의 COX-2 발현억제능이더높은것을확인하였다. 대표적인염증성 proytokine의일종인 IL-6, TNF-α, IL-1β는 in vitro 및 in vivo 상에서염증반응을조절하는물질로 LPS와같은염증자극물질에의해생성이촉진되는것으로알려져있다 (2,21). 유산균 Weissell sp. SH-1과 L. sei를접종하여발효한톳의추출물은 IL-6의발현을유의적으로감소시켰다 (Fig. 4). TNF-α와 IL-1β의발현은 L. sei 접종군에서유의적으로저해되었다 (Fig. 5). 이러한결과로부터발효톳추출물의 NO 생성억제능은염증자극유발인자들의활성화가저해됨에의한것으로사료된다. MAPK 활성화에미치는영향염증반응에관여하는 MAPK 신호전달경로는 extrellulr signl-regulte protein kinse(erk), - Jun terminl kinse(jnk), p38 등최소한 3가지주요신호전달경로가있는것으로알려져있다 (22). 이들신호전달경로는 ERK, JNK와 p38의인산화에의해활성화되며염증성사이토카인의전사및세포사멸을유도한다 (23). 본연구에서는 LPS로유도된세포에서항염증활성이 MAPK의인산화와관련이있는지알아보았다. 그결과유산균의종류에따라다른신호전달경로를나타내는것을확인할수있었다. Weissell sp. SH-1 접종군은 5 μg/ml 농도에서 p-erk, p-p38, p-jnk 발현이억제되었으며, L. sei 접종군에서는 p-jnk 발현이확연히감소한것을확인하였다 (Fig. 6). 이결과로 Weissell sp. SH-1 균과 L. sei 균을첨가하여발효한톳추출물은각각 ERK 및 p38의활성화와 JNK의활성화와관련된 MAPK 신호전달경로의억제

1454 권명숙 문옥주 배민주 이슬기 김미향 이상현 유기환 김육용 공창숙 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin inos mrna expression (/β-tin). 5 e e e No teri Weissell sp.

fusiformis with/without lti i teri on inos expression in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges.

5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin COX-2 mrna expression (/β-tin).

fusiformis with/without lti i teri on COX-2 expression in LPSstimulte RAW264.7 mrophges.

5 1454 권명숙 문옥주 배민주 이슬기 김미향 이상현 유기환 김육용 공창숙 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin inos mrna expression (/β-tin). 5 e e e No teri Weissell sp. SH-1 L. sei inos protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei Fig. 2. Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on inos expression in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges. The expression levels of inos in mrna n protein levels were etermine using RT-PCR n western lotting. Mens with the ifferent letters (-e) ove the rs re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin COX-2 mrna expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei COX-2 protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei e e Fig. 3. Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on COX-2 expression in LPSstimulte RAW264.7 mrophges. The expression levels of COX-2 in mrna n protein levels were etermine using RT-PCR n western lotting. Mens with the ifferent letters (-e) ove the rs re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. 를통해항염증활성을나타낸것으로사료되었다. 요약톳은여러생리활성이알려져있는해조류로본연구에서는톳의활용가능성을확장시키기위하여유산균의종류를달 리하여발효한톳을시료로하고추출물단계에서항염증효과를비교하였다. 유산균인 Weissell sp. SH-1과 Ltoillus sei를접종하여발효시킨톳추출물은무접종군에비하여높은 NO 억제활성을나타내었으며, 유산균간의비교에서는 Weissell sp. SH-1 접종군보다 L. sei 접종군에서 NO 생성억제효과가높게나타났다. 중요염증

유산균발효톳추출물의항염증효과 1455 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei IL-6 mrna expression (/β-tin). β-atin 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin IL-6 protein expression (/β-tin).

The expression levels of IL-6 in mrna n protein levels were etermine using RT-PCR n western lotting. Mens with the ifferent letters (-) ove the rs re signifintly ifferent (P<.

SH-1 L. sei IL-1β mrna expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei e Fig. 5. Effets of ethnol extrts from fermente H.

Mens with the ifferent letters (-e) re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. 유발인자인 inos, COX-2 및 IL-6의발현을비교한결과 Weissell sp.

6 유산균발효톳추출물의항염증효과 1455 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei IL-6 mrna expression (/β-tin). β-atin 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin IL-6 protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei e Fig. 4. Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on IL-6 expression in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges. The expression levels of IL-6 in mrna n protein levels were etermine using RT-PCR n western lotting. Mens with the ifferent letters (-) ove the rs re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin TNF-α mrna expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei IL-1β mrna expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei e Fig. 5. Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on TNF-α n IL-1β expression in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges. The expression levels of TNF-α n IL-1β in mrna n protein levels were etermine using RT-PCR. Mens with the ifferent letters (-e) re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. 유발인자인 inos, COX-2 및 IL-6의발현을비교한결과 Weissell sp. SH-1 접종군에의한 inos 억제능이높았으며 COX-2, IL-6 발현은 L. sei 접종군에의해효과적으로억제되었다. 유산균에의한염증유발인자억제능에대한 MAPK 신호전달경로를알아본결과 ERK, p38, JNK의인산화에의해항염증활성이나타나는것을알수있었다. 이상의결과로부터유산균 Weissell sp. SH-1과 L. sei 를이용한발효는염증억제에효과가있는유효성분의추출을증진시킬수있음을간접적으로확인할수있었다. 향후본연구결과를바탕으로유산균 Weissell sp. SH-1과 L. sei를이용한발효방법을활용하여기능성식품소재및제품개발에응용이가능할것으로기대된다.

1456 권명숙 문옥주 배민주 이슬기 김미향 이상현 유기환 김육용 공창숙 No teri Weissell sp. SH-1 A L. sei β-atin p-erk protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei No teri Weissell sp. SH-1 B L.

Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on tivtion of MAPK in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges.

7 1456 권명숙 문옥주 배민주 이슬기 김미향 이상현 유기환 김육용 공창숙 No teri Weissell sp. SH-1 A L. sei β-atin p-erk protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei No teri Weissell sp. SH-1 B L. sei p-p38 protein expression (/β-tin). β-atin 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei No teri Weissell sp. SH-1 L. sei β-atin C p-jnk protein expression (/β-tin). 5 No teri Weissell sp. SH-1 L. sei Fig. 6. Effets of ethnol extrts from fermente H. fusiformis with/without lti i teri on tivtion of MAPK in LPS-stimulte RAW264.7 mrophges. The expression levels of p-erk (A), p-p38 (B), n p-jnk (C) protein levels were etermine using western lotting. Mens with the ifferent letters (-) ove the rs re signifintly ifferent (P<.5) in eh teri tretment y Dunn's multiple rnge test. P<.5. 감사의글 본연구는교육과학기술부와한국연구재단의지역혁신인력양성사업으로수행된연구결과이며이에감사드립니다 (NO. NRF-213H1B8A23221). REFERENCES 1. Kim HS, Choi EO, Prk C, Choi YH, Hyun SK, Hwng HJ Effet of Hiziki fusiforme extrts on ntioxint enzyme tivity n vitmin E onentrtion in rts. J Koren So Foo Si Nutr 4: Lee DG Bone protetive effet of fermente Hiziki on ovrietomy-inue one loss in rts. MS Thesis. Kyung Hee University, Suwon, Kore. 3. Kim JH, Song HS, Yng JY Nutritionl hrteristis of Kohujng e with fermente extrts of Hiziki fusiforme. J F Hyg Sfety 27: Song HS, Eom SH, Kng YM, Choi JD, Kim YM Enhnement of the ntioxint n nti-inflmmtory tivity of Hiziki fusiforme wter extrt y lti i teri fermenttion. Kor J Fish Aqut Si 44: Prk SH, Lee SJ, Jeon MJ, Kim SY, Mun OJ, Kim M, Kong CS, Lee DG, Yu KH, Kim YY, Lee SH Evlution of iologil tivities of fermente Hiziki fusiformis extrts. J Life Si 24: Choi WS, Kwon HS, No RH, Choi GP, Lee HY Enhnement of nti-inflmmtory tivities of fermente Sutellri ilensis extrts using Ltoillus rhmnosus. J So Cosmet Sientists Kore 39: Moon YG, Lee KJ Kim KY, Song CB, Jeon YJ, Heo MS. 26. Chrteristis of itrus y-prout ferment using pro-

8 유산균발효톳추출물의항염증효과 1457 iotis s strter. Kor J Miroiol Biotehnol 34: Hyon JS, Kng SM, Hn SW, Kng MC, Oh MC, Oh CK, Kim DW, Jeon YJ, Kim SH. 29. Flvonoi omponent hnges n ntioxint tivities of fermente Citrus grnis Osek peel. J Koren So Foo Si Nutr 38: Lee SY, Hyun JM, Kim SS, Prk SM, Prk KJ, Choi YH, Kim SH, Yu SN, Ahn SC Anti-inflmmtory effet of Citrus unshiu peels fermente with Aspergillus niger. J Life Si 24: Ko WM, Lee DS, Jng M, Kim KS, Lee SH, Bek HY, Oh HC, Kim YC A omprison of nti-inflmmtory effets of Sophore Flos EtOH extrts t the ifferent flowering stges on LPS-inue inflmmtion in RAW264.7 ells. Kor J Phrmogn 44: Kim CM, Prk YK. 29. The effets of ifferent extrts of Osterium korenum on the proution of inflmmtory meitors in LPS-stimulte RAW264.7 ells. Kor J Herology 24: Prk SH, Kim JI, Jeong YK, Choi YH Extrts of Allium fistulosum ttenutes pro-inflmmtory tion in the lipopolyshrie-stimulte BV2 mirogli ells. J Life Si 21: Lee SJ, Lee DG, Prk SH, Kim M, Kong CS, Kim YY, Lee SH Comprison of iologil tivities in Srgssum siliqunstrum fermente y isolte lti i teri. Biotehnol Bioproess Eng 2: Mun OJ, Kwon MS, Be MJ, Ahn BN, Kreniz F, Kim M, Lee SH, Yu KH, Kim YY, Seo Y, Kong CS Anti-inflmmtory tivity of Hiziki fusiformis extrts fermente with Ltoillus sei in LPS-stimulte RAW mrophges. Koren So Biotehnol Bioeng J 3: Kim JG, Lee YW Effet of Ltoillus sei n fermente milk on the growth n fltoxin proution of Aspergillus prsitius. J F Hyg Sfety 13: Yoo KH. 2. Deooriztion of sewee prout off-flvors y lti i teri fermenttion. MS Thesis. Kngnung Ntionl University, Kngwon, Kore. 17. Kim YJ, Son DY Inflmmtory meitor regultion of the Zizyphus jujue lef frtions in the LPS-stimulte Rw264.7 mouse mrophge. Koren J Foo Preserv 21: Noh KH, Jng JH, Min KH, Chinzorig R, Lee MO, Song YS Suppressive effet of green te see ot ethyl ette ftion on inflmmtion n its mehnism in RAW mrophge ell. J Koren So Foo Si Nutr 4: Jeong DH, Kim KBWR, Kng BK, Jung SA, Kim HY, Jeong HY, Brk SW, Ahn DH Anti-inflmmtory tivity of the wter extrt of Srgssum fulvellum. Koren So Biotehnol Bioeng J 27: Hn MH, Lee MH, Hong SH, Choi YH, Moon JS, Song MK, Kim MJ, Shin SJ, Hwng HJ Comprison of nti-inflmmtory tivities mong ethnol extrts of Sophor flvesens, Glyyrrhiz urlensis n Ditmnus syrpus, n their mixtures in RAW murine mrophges. J Life Si 24: Kong CS Anti-inflmmtory tivity of the solventprtitione frtions from Spergulri mrin in LPS-stimulte RAW ells. Prev Nutr Foo Si 19: Kim SY Anti-inflmmtory effet of Stevi reuin s results of NF-ĸB n MAPK inhiition. MS Thesis. Degu Hny University, Degu, Kore. 23. Shin DB, Hn EH, Prk SS Cytoprotetive effets of pheophyt extrts from the ost of Jeju Isln in HT- 22 mouse neuronl ells. J Koren So Foo Si Nutr 43:

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