https://doi.org/10.14368/jdras.2016.32.4.274 ISSN 2384-4353 eissn 2384-4272 Original Article Prevention of Candida albicans infection in dental polishing lathe by chlorhexidine Young-Gyun Song* Department of Prosthodontics, College of Dentistry, Dankook University, Cheonan, Republic of Korea Purpose: The purpose of this study was to evaluate the transmission of candida in denture by dental polishing lathe. Materials and Methods: Maxillary complete dentures made from the same model were infected with Candida albicans. Polishing wheels were keep in various chlorhexidine solution and distilled water for an hour. The infected dentures were polished by prepared dental polishing lathe with sterile pumice and distilled water. And then sterile maxillary complete dentures were polished with same method. Polishing surface was wiped with a cotton swab and the sample was regrown for checking Candida albicans. Results: All polishing wheel with chlorhexidine resist fungal infection. But the polishing wheel with distilled water is infected with Candida albicans. Conclusion: A chlorhexidine is highly efficient in fungal infection prevention on dental polishing lathe. (J Dent Rehabil Appl Sci 2016;32(4):274-9) Key words: Candida; dental polishing lathe; chlorhexidine 서론 칸디다 (Candida) 와연관된의치성구내염은구강칸디다증의대부분을차지하고있으며, 이것은의치상의감염으로부터기인한다. 1 그중칸디다알비칸스 (Candida albicans, C. abicans) 는 30-40% 의발병률을보이는구강칸디다증의주요한진균이다. 2 국내의경우, 2012년총의치의 75세이상환자의급여화를시작으로 2016년 7 월이후에는 65세이상으로급여대상자가확대시행됨에따라의치성구내염환자또한늘어날것으로사료된다. 의치의유지관리또한급여화가됨에따라, 의치를유지관리하는사례가늘어나는것은환자에게긍정적인영향을미칠것이나, 환자가사용하던의치를조절해야하는임상가입장에서는더욱감염방지에주의를기울여야할것이다. Lee와 Song에따르면, 칸디다에감염된의치를이용하여치과기공용연마기로연마시, 다른의치에 칸디다균을감염시킬수있으며, 상온을기준으로 2일후까지감염력이유지된다. 3 연마용휠은연마시마다교체하기에는한계점이있기때문에효과및경제성을고려한감염방지법이필요한현실이다. 이에본연구에서는쉽게구할수있는클로르헥시딘을이용하여치과기공용연마기의칸디다균의전염성차단에대해알아보고자하였다. 연구재료및방법 1. 연구재료 본실험에사용된균주는의치성구내염관련세균으로 Candida albicans ATCC 10231을사용하였다. 단순진균증식을위해서 Trypticase soy broth (TSB; BD bioscience, San Jose, USA) 를이용하여 37 C 호기성배 *Correspondence to: Young-Gyun Song Assistant Professor, Department of Prosthodontics, College of Dentistry, Dankook University, 119, Dandae-ro, Dongnam-gu, Cheonan, 31116, Republic of Korea Tel: +82-41-550,1932, Fax: +82-41-550-0116, E-mail: ygsong@dankook.ac.kr Received: December 3, 2016/Last Revision: December 13, 2016/Accepted: December 16, 2016 Copyright 2016 The Korean Academy of Stomatognathic Function and Occlusion. cc It is identical to Creative Commons Non-Commercial License. 274
Prevention of Candida albicans infection in dental polishing lathe by chlorhexidine 양기 (WIG01105, Daihan Scientific Co., Seoul, Korea) 에서배양하였다. 2. 의치표면균사막형성 C. albicans의균사막 (biofilm) 을의치표면에형성시키기위해서동일한모형에서제작된상악총의치를에틸렌옥사이드가스멸균기 (Ethylene oxide gas sterillzer) 를이용하여멸균시켰다. 구강내진균형태 (hyphae) 의균사막형성을위해총의치를 Ham s F-12 nutrient 배지 (Hyclone, Rockford, USA) 에침적시키고단순배양된 C. albicans를접종한후, 37 C 호기상태에서 24시간배양하였다. 3. 교차감염된 C. albicans 배양 1000배희석하여, TSH agar 배지에접종하여. 37 C 호기성배양기에서 24시간재배양하여, 확인하였다. 정확한실험을위해 1000배희석한배양액은 Streptomycin (20 ug/ml) 이첨가된 Sabouraud s dextrose agar 표면에접종후 spreader를이용하여넓게펴준후, 37 C 호기상태에서 24시간배양하고집락수 (CFU; Colony forming unit) 를측정하였다. 4. 통계분석 1000배희석한배양액의집락수분석은 SPSS V24 (SPSS, Chicago, USA) 를이용하여, one-way analysis of variance (ANOVA) 로분석하였다. 유의수준은 95% 로정하였고, Tukey test를이용하여사후검정을시행하였다. 에틸렌옥사이드가스멸균기로멸균한연마용휠 (4 50ply polishing wheel, Sidaysa, Seoul, Korea) 를 0.1%, 0.2%, 1%, 2% 글루콘산클로르헥시딘용액 (Chlorhexidine gluconate solution) 과증류수에 1시간동안보관하였다. 이후준비한휠을치과기공용연마기에장착하고, 멸균된연마제 (Pumice, WhipMix corporation, Louisville, USA) 에증류수를혼합하여연마준비를하였다. 균사막이형성된총의치를흐르는증류수에 20초간세척한뒤치과기공용연마기 (L/H lathe motor, Sejong dental, Seoul, Korea) 를이용하여견치와견치사이의연마면에 30초간연마를수행하고멸균된총의치를같은방법으로 30초간연마를수행하였다 (Fig. 1). 연마작업을마친후에의치의연마면을면봉을이용하며, 가볍게닦아낸뒤면봉을 TSB배지에침적시킨후 37 C 호기성배양기에서 48시간배양하였다. 이후, 배양액을 10배, 100배, 결과 대조군을제외한모든실험군에서 C. albicasns 의감염 을확인할수없었다 (Fig. 2). 총집락수측정을위한재 Fig. 1. Intercanine polishing surface for checking of Candida albicans. A B C 0.1% 0.2% 1% 2% 0% 0.1% 0.2% 1% 2% 0% 0.1% 0.2% 1% 2% 0% Fig. 2. The colony of Candida albicans cultured from secondary infected denture. (A) 0.1% diluted culture solution, (B) 1% diluted culture solution, (C) 10% diluted culture solution. Each percentage are chlorhexidine percentage and a 0% is distilled water as control group. J Dent Rehabil Appl Sci 2016;32(4):274-9 275
Song YG 2500 2000 Total CFU count 1500 1000 500 0 0.10% 0.20% 1% 2% 0% (Control) Chlorhexidine concentration Fig. 3. Total colony forming unit of Candida albicans Cultured from secondary infected denture. CFU, colony forming unit. * Denotes difference significant at 0.05 value. 토의 Fig. 4. The colony of Candida albicans of control group cultured from 0.1% diluted culture solution for a day. 배양실험에서도대조군의총집락수는평균 2324.5 ± 363.3 개로나타났으나, 실험군에서는집락이관찰되지 않았다 (P < 0.05, Fig. 3, 4). 총의치장착환자들은총의치장착으로인해서, 구강내미생물균총의변화가생기며, 의치장착기간이늘어갈수록칸디다로인한감염의확률이높아진다. 4 또한, 가철성의치치태로인해의치성구내염의 69% 가유발이된다. 5 일부연구에따르면, 상악레진의치상총의치환자의 82.8% 에서칸디다균이검출되었으며, 하악총의치환자는상악보다는낮은비율이나, 75.8% 로높은비율을보였다. 6 칸디다균이검출된의치를착용한환자의경우라도모두구강칸디다증을보이지는않으나, 환자의상황에따라서적은양으로도발병할수있기때문에, 증상이없는환자의의치라도감염전파의가능성은항상염두해야한다. 의치의유지관리를위해치과에온환자는대부분기공용연마기를사용한처치를받게된다. 표면을세척한뒤에연마를시행한다고해도, 레진의치상의특성상의치상기공 (pore) 내의칸디다균까지제거하기힘들다. 일반적으로진균효과를나타내기위한클로르헥시딘용액의농도는 2% 로알려져있다. 7 치과용가글제로시 276 J Dent Rehabil Appl Sci 2016;32(4):274-9
Prevention of Candida albicans infection in dental polishing lathe by chlorhexidine 판되는클로르헥시딘용액의농도는 0.2% 이다. 때문에클로르헥시딘용액의저농도인 0.1% 에서 2% 로추천농도와임상에서사용하기용이한농도를실험에포함시켰다. 칸디다균사막에항진균효과를나타낸클로르헥시딘의농도는 4% 라고보고한연구도있다. 8 이번실험에서는 0.1% 의농도로칸디다의전염을방지할수있는것으로나타났다. MTT(3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2, 5-diphenyl -2h- tetrazolium bromide) 분석을시도하였으나, 배지의특성상 MTT 용액으로인한탁도의증가로분석이어려울것으로사료되어재배양법을시행하였다. 클로르헥시딘은광범위한항균제로일부바이러스를제외한세균및진균에효과적이며, 세포벽에작용하여고농도에서는살균효과를보이며, 저농도에서는정균효과를나타낸다. 9 칸디다의경우에는클로르헥시딘이핵단백질의응집을억제하고, 세포벽을통한세포질의소통을억제하여항진균효과를나타나는것으로알려졌다. 10 치과영역뿐만아니라, 수술기구의소독등에도광범위하게사용되고있으며, 비용이저렴하고, 구입이용이하기때문에, 널리사용되는항균제이다. 이번실험의대조군과다른연구에따르면, 기공용의치연마기를통해칸디다의전염이가능한것으로나타났다. 3 그러나낮은농도의클로르헥시딘용액만으로도전염은나타나지않았으며, 이것은치과나기공소에서적은비용으로효과적인감염관리가가능할것으로사료된다. 최근에는구강세척용클로르헥시딘용액에색소가첨가되지않은무색소용액이있어서색소침착의우려도적어졌다. 이실험의경우, 클로르헥시딘용액이보관한휠을사용하여실험을하였다. 예비시험에서건조된기공용휠에서항진균효과를확인하였기때문에, 치과기공용휠은사용시, 휠에함유된수분이회전력에의해빠져나가게되지만, 함유된클로르헥시딘성분은휠에남아있을것으로사료된다. 하지만, 본실험의경우, 의치의일정부분만을사용하여실험을하였기때문에임상에서전체적으로의치연마를시행하거나, 동일한휠을반복적으로많이사용하게되면, 휠의외측부의항진균제의농도가떨어질것으로예상되기때문에높은농도의클로르헥시딘용액을사용하는하거나, 여러개의휠을번갈아가며사용한다면, 더높은감염방지효과를얻을수있을것이다. 이실험에서저농도의클로르헥시딘용액으로실험을진행하지못한것이한계점이나, 0.1% 이하의농도에서의실험은임상적용에한계가있을것으로예상된다. 결론 본실험의결과, 칸디다균에감염된의치를연마할때, 다른의치에감염을방지하기위해기공용휠을 0.1% 이 상의클로르헥시딘용액에보관할경우, 칸디다의감염 전파를방지할수있을것으로사료된다. Acknowledgements 이연구는 2015 학년도단국대학교대학연구비지원으 로연구되었음 ( 과제번호 : R000128762). ORCID Young-Gyun Song http://orcid.org/0000-0003-3789-9585 References 1. Koray M, Ak G, Kurklu E, Issever H, Tanyeri H, Kulekci G, Guc U. Fluconazole and/or hexetidine for management of oral candidiasis associated with denture-induced stomatitis. Oral Dis 2005;11:309-13. 2. Arendorf TM, Walker DM. The prevalence and intra-oral distribution of Candida albicans in man. Arch Oral Biol 1980;25:1-10. 3. Lee GH, Song YG. Study of transmission of Candida albicans in denture by dental polishing lathe. J Dent Rehabil Appl Sci 2014;30:199-205. 4. Marples MJ, Di Menna ME. The incidence of Candida albicans in Dunedin, New Zealand. J Pathol Bacteriol 1952;64:497-502. 5. Budtz-Jörgensen E. The significance of Candida albicans in denture stomatitis. Scand J Dent Res 1974;82:151-90. 6. Vanden Abbeele A, de Meel H, Ahariz M, Perraudin JP, Beyer I, Courtois P. Denture contamination by yeasts in the elderly. Gerodontology 2008;25:222-8. 7. Al-Nazhan S, Al-Obaida M. Effectiveness of a 2% chlorhexidine solution mixed with calcium hydroxide against Candida albicans. Aust Endod J 2008;34:133-5. J Dent Rehabil Appl Sci 2016;32(4):274-9 277
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Original Article 클로르헥시딘을이용한치과기공용연마기캔디다균의감염방지 송영균 * 단국대학교치과대학치과보철학교실 목적 : 치과기공용연마기휠을소독하기위한클로르헥시딘의농도에따른캔디다균의감염방지효과에대해알아보고자하였다. 연구재료및방법 : 동일한모형에서제작된상악총의치를캔디다균에감염시키고, 서로다른농도의클로르헥시딘용액에 1시간보관한연마휠과멸균된퍼미스와증류수를이용하여, 치과기공용연마기로연마하였다. 이후멸균된상악총의치를연이어연마한뒤연마한부위를면봉으로채취하여, 재배양후칸디다균의여부를확인하였다. 결과 : 클로르헥시딘을적용한연마휠은농도에관계없이감염의전파가일어나지않았으나, 증류수만을사용한연마휠에서는감염의전파가나타났다. 결론 : 의치연마기휠의감염방지를위해클로르헥시딘용액은효과적이다. ( 구강회복응용과학지 2016;32(4):274-9) 주요어 : 칸디다균 ; 치과기공용연마기 ; 클로르헥시딘 * 교신저자 : 송영균 (31116) 충남천안시동남구단대로 119 단국대학교치과대학치과보철학교실 Tel: 041-550-1932 Fax: 041-550-0116 E-mail: ygsong@dankook.ac.kr 접수일 : 2016 년 12 월 3 일 수정일 : 2016 년 12 월 13 일 채택일 : 2016 년 12 월 16 일 279