12-미생물(JE)

Journal of Radiation Industry 4 (4) : 365~372 (21) Review Paper 미생물발효셀룰로오스를이용한상처치료용하이드로겔의제조및특성 김미영 임윤묵 1, * 이종대 송성기 권희정 1 박종석 1 노영창 1 김성호 2 최영훈 3 이선이 3 ( 주 ) 큐젠바이오텍, 1 한국원자력연구원정읍방사선과학연구소, 2 경북대학교바이오식품과, 3 농촌진흥청국립원예특작과학원감귤시험장 Preparation and Characterization of Microorganism Fermentation Cellulose as Hydrogel Wound Dressing Mi-Yeong Kim, Youn-Mook Lim 1, *, Jong-Dae Lee, Sung-Gi Song, Hui-Jeong Gwon 1, Jong-Seok Park 1, Young-Chang Nho 1, Sung-Ho Kim 2, Young-Hun Choi 3 and Sun-Yi Lee 3 Quegenbiotech, Co., Ltd, Incheon 429-931, Korea 1 Advanced Radiation Technology Institute, Korea Atomic Energy Research Institute, Jeongeup 58-185, Korea 2 Department of Bio-Food, Kyungpook National University, Gyeongbuk 72-21, Korea 3 Citrus Research Station, National Institute of Horticultural and Herbal Science, Rural Development Administration, Seogwipo 699-943, Korea Abstract - Irradiation has been recognized as a highly suitable tool to aid in the formation of hydrogel. The radiation process has various advantage, such as easy process control and the lack of necessity for initiators and crosslinker. In this study, the hydrogel containing the citrus fermentation gel for the wound healing were successfully synthesized. The strength of hydrogel was increased as a function of a increasing the concentration of citrus and the irradiation doses. In addition, this hydrogel have been evaluated by the cytotoxicity and animal experiment. Key words : Irradiation crosslinking, Hydrogels, Wound healing, Citrus fermentation gel 서 생체의학분야에서천연물질과인공물질로생체조직을대신하는연구가활발히진행되고있다. 생체의학적응용면에서이러한목적에가장적합한물질중하나가 론 * Corresponding author: Youn-Mook Lim, Tel. +82-63-57-365, Fax. +82-63-57-379, E-mail. ymlim71@kaeri.re.kr 하이드로겔이다. 하이드로겔은혈액, 체액및생체조직과접촉했을때우수한생체적합성을갖는다. 그래서하이드로겔은상처치료용드레싱, 콘텍트렌즈, 인공연골이나막으로자주사용되었다 (Ralner 1981; Peppas 1986, 1987; Kudela 1989; Silver and Dollon 1989). 하이드로겔은친수성고분자로분자사슬이서로결합하여 3차원망상구조를만들어물에녹지않게된다. 이러한하이드로겔은원래의형태를유지하면서평형상태에 365

366 김미영 임윤묵 이종대 송성기 권희정 박종석 노영창 김성호 최영훈 이선이 이를때까지물에서팽윤하게된다. 하이드로겔이팽윤하는이유는고분자사슬의 -OH, -COOH, -CONH 2, -CONH, -SO 2H 기능기들과물사이의수화와삼투압현상, 모세관현상이작용하기때문이다. 또한, 친수성고분자로제조된하이드로겔이물에용해하지않는이유는정전기적작용과친유성작용의특성이기도하다. 하지만대부분은고분자사슬사이에공유결합을하기때문이다 (Rosiak 1994). 물에흡수하면서도기계적인특성과형태를갖추는것이하이드로겔의기본적요소이다. 하이드로겔은화상치료나습윤상태가지속적으로필요한피부재생을목적으로일시적으로이용되는재료로서, 이것은대개 9% 이상의수분을함유하고있으며, 치료를촉진시키는것으로알려져있다. 하이드로겔은일반적으로 PVP, PEG 등의합성고분자와천연고분자 carrageenan에의해제조되어진다. PVP는화학적가교방법으로하이드로겔을제조하기위해서는 PVP를증류수에용해시킨다음이것에 ethylene glycol dimethacrylate, propylene glycol dimethacrylate, Tetra ethylene glycol dimethacrylate 또는 Trimethylolpropane triacrylate 등의다관능성단량체를화학개시제와함께첨가하여가열하면가능하다. 이와같은화학적가교방법은반응이종료되면미반응개시제및단량체를세척하고제거해야되는데, 세척이불충분하면하이드로겔내부에미반응개시제나가교제가존재할수있다. 이러한것들은독성이강해생체재료로서사용시큰문제를야기시킬수있다. 이와같은화학적가교방법대신에방사선을이용하면효과적으로하이드로겔을얻을수있다 (Roger and Shalaby 199). PEG는보습상태를유지하는기능을가진물질로서의약품및화장품에많이쓰이는무독성수용성고분자이다. 생체적합성이좋아넓은범위의생체의학응용에이용되어오고있다. 이러한물성때문에 PEG로제조된하이드로겔은생체재료로서우수하다고할수있다 (Harris 1992; Peppas et al. 1999). Carrageenan은청정해역에서자라는돌가사리류, 나진두발류등의홍조류에다량함유되어있는점질성다당류로서 D-galactose와 3,6-anhydro-D-galactose가 α-1,3 또는 β-1,4 결합한구조에황산기 (SO 3- ) 가위치를달리하여결합한구조를가지며, 황산기의결합위치에따라 κ-, λ-, τ-carrageenan으로나뉜다 (Stanley 199; Park et al. 1995). Carrageenan은구조에서유래하는독특한물성으로인해다양한분야에서사용되고있으며, 특히식품의물성을조절하는당질로유가공, 육가공분야에서증점제, 유화안정제, 보수제등으로이용되고있다 (Araki 1965; Park et al. 1995). 또한황산기를다량함유 한 carrageenan이항혈액응고작용, 항균작용, 면역력증진작용, 항암및항알레르기작용과같은기능성을가지는것으로밝혀진바있다 (Araki 1965; Nishino and Nagumo 1992; Huamao et al. 26). 셀롤로오스 (cellulose) 는자연계에널리존재하는고등식물의세포벽의주성분으로서 β-1,4-glucose로구성된다당류이다. 식물셀룰로오스는 pectin, hemicellulose, lignin 등의다른다당류와혼합하여 heteropoly-saccharide 로이루어져있어결정화도가낮고기계적강도와흡착성이떨어진다 (Tsuji et al. 23). 반면세균이생산하는셀룰로오스는식물성셀룰로오스와달리 pectin, hemicellulose, lignin 등의다당류를함유하지않은순수한셀룰로오스집합체이며, 약.1 μm의두께를지닌 microfibril 이수소결합으로 3차원적망상구조를이루고있다 (Embuscado et al. 1994; Vandamme et al. 1998). 따라서결정화도가높고기계적강도와흡착성, 보수성, 현탁안정성, 결착성등의물리적인성질이우수하여 (Embuscado et al. 1994; Cho et al. 22) 식품, 화장품및의약품산업의신소재로써널리사용되고있다 (Fontana et al. 199; Chung et al. 1998; Sutherlan 1998; Cho et al. 22). 독일의경우인조혈관및화상환자용인조피부등의의료용품으로개발되고있다 (Fontana et al. 199; Klemm et al. 21; Backdahl et al. 26). 감귤은제주도에서연간 5~6만톤이생산되는국내최대생산과일품목으로대부분생과로이용되고있으며, 일부감귤주스를가공하기위한전단계에서감귤농축액상태로저장되고있을뿐가공품개발에의한소비가적고대부분한정된계절에생산되어보존가고에많은애로점이있다 (Chung et al. 2). 따라서감귤과즙을이용한다양한가공식품및기능성식품의개발이요구되고있다. 또한감귤에는 L-ascorbic acid, β-carotene 및식이성섬유소를다량함유하고있을뿐아니라항고혈압, 항산화및항노화성 flavonoid 화합물 (hesperidin, naringin) 을다량함유하고있다 (Kana et al. 1995; Lee et al. 1995; Marie et al. 1995). 특히 hesperidin은모세혈관의수축을촉진시켜혈압을강하하여고혈압을예방하며 (Son et al. 1992; Lee et al. 1995), naringin은혈액내ldl- cholesterol 함량을줄이는작용이있으며 (Bok et al. 1999), 그외항암, 항알러지, 항바이러스및항염증효과등다양한생리적기능이있는것으로밝혀지고있다 (Carrol et al. 1999). 이와같이영양및기능성이우수한감귤과즙을원료로하여대량생산가능한셀룰로오스발효겔이개발되었다. 본연구에서는국내산감귤과즙을이용하여고기능성세균셀룰로오스를대량생산하기위해앞서발표한실험결과를토대로감귤과즙으로부터감귤내

미생물발효치료용하이드로겔 367 성의 Gluconacetobacter hansenii TL-2C를선별한감귤발효겔을지지체제조에이용하였다 (Choi et al. 24). 하이드로겔제조에방사선가교를이용하였다. 방사선가교는화학적가교와비교하여인체에유해한가교제나개시제를사용하지않기때문에가교후정제할필요가없다. 그리고드레싱으로사용되기위해필수인멸균공정이가교와동시에이루어진다. 방사선가교는열을가하지않아도되고, 냉각상태에서도가교가가능한특성이있다. 방사선조사선량을조절하면조성물의변화없이물리적특성을자유롭게조절할수있다 (Rosiak et al. 1987; Clough et al. 199; Rosiak et al. 1995). 본연구에서는감귤발효겔을함유한하이드로겔의제조와그특성을겔화율, 팽윤도, 겔강도를알아보았다. 세포독성실험과동물실험을통하여제조된하이드로겔의드레싱으로사용가능성도관찰하였다. 재료및방법 1. 감귤발효겔을함유한하이드로겔의시약및재료 PVP (Poly(N-vinyl pyrrolidone)) 는 BASF사의 Luviskol 9 (Germany) 을구입하여사용하였다. PEG (Poly(ethylene glycol)) 는 Aldritch사 (WI, USA) 에서구입하였고, κ-carrageenan (KC) 은 MSC사 (Busan, Korea) 로부터구입하였다. 사용된고분자들은다른정제과정없이사용되었다. 감귤발효겔은제주산감귤껍질을발효하여미생물대사산물로얻어진겔을사용하였다. 모든실험에서물은 3 차증류수를사용하였다. 2. 하이드로겔의제조감귤발효겔을잘게잘라, 분쇄기로곱게갈아증류수로 2번세척하였다. 세척이완료된감귤발효겔을 PVP, PEG, KC와혼합하여각각의비율로 75 C 에서용해시켰다. 이때감귤발효겔은용해되지않는다. 수용성고분자가완전히용해되면상온에서형틀에넣어성형하고, 이형지를덮어은박포장지로약하게겔화된하이드로겔을포장한다. 포장이완료된하이드로겔은총선량 25 kgy, 선량율 1 kgy h -1 로조사하여하이드로겔의가교와멸균을동시에수행하였다. 3. 하이드로겔의물리학적특성평가 1) 겔화율하이드로겔을진공오븐에 65 C, 48시간건조시킨후무게를측정했다. 이무게가초기무게 (W i) 이다. 가교에 참여하지않는고분자를제거하기위해증류수에 48시간침지시켰다. 하이드로겔을거른후, 다시진공오븐에 65 C, 48시간건조시켰다. 건조후의하이드로겔의무게 (W d) 를측정하였다. W d Gel content (%)=mmm 1 W i 위식을이용하여초기하이드로겔의무게 (W i) 와건조후의남은하이드로겔의무게 (W d) 로부터겔화율을구하였다. 2) 팽윤도 하이드로겔을상처치료용드레싱으로이용되기위해서중요한물성인상처에서분비되는혈액과삼출물의흡수정도를파악하기위하여하이드로겔의팽윤도를측정하였다. 하이드로겔을물에 48시간이상충분히침지시켰다. 충분히침지된하이드로겔의표면을닦아낸후무게를잰다. 이때의무게가팽윤된겔의무게이다. 팽윤된겔의무게는 W s 이다. 무게를잰후, 팽윤된겔을진공오븐에넣어 65 C 에서 48시간건조하여무게를잰다. 건조된겔의무게를 W d 로나타낸다. W s -W d Water absorptivity (%)=mmmmmmm 1 W d 위식을이용하여팽윤된겔의무게 (W s) 와건조된겔의무게 (W d) 로부터팽윤도를계산하였다. 3) 겔강도 상처치료용드레싱으로이용되기에적합한강도를갖는지판단하기위하여하이드로겔의겔강도를측정하였다. 제조된하이드로겔의기계적물성을알아보기위해겔강도를측정하였다. 감귤발효겔의함량의조성비를다양하게하여그인자들이하이드로겔의강도에미치는영향에대하여알아보았다. 하이드로겔강도는식품의물성을측정하는 TA-XT2 Texture-Analyzer (SMS Co Ltd, England) 를이용하였다. 하이드로겔강도측정에이용된시편의두께는 3.~3.5 mm, 넓이는 2 cm 2 로제조하였다. 인장강도측정시 cross head speed는 15 mm min -1 로하였다. 4. 하이드로겔의체외세포독성평가 1) 세포독성실험의시약및재료 각질형성세포주 (Human Keratinocytes, HaCaT) 와흰쥐의섬유아세포 (Mouse Fibroblast, L929) 는한국세포주은

368 김미영 임윤묵 이종대 송성기 권희정 박종석 노영창 김성호 최영훈 이선이 행 (KTSS, Seoul, Korea) 으로부터구입하였다. Cell counting kit-8 (CCK-8) 은 Dojindo사 (Kumamoto, Japan) 에서구입하였고, Dulbecco s Modified Eagle Medium-High Glucose (DMEM), Dulbecco s phosphate Bufferd saline (DPBS), Iscove s Modified Dulbecco s Medium (IMDM), Pen Strep- Penicillin Streptomycin, Fetal Bovine Serum (FBS) 은 GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA) 에서구입하였다. 2) 세포배양흰쥐의섬유아세포 (L929), 각질형성세포주 (HaCaT), 비만세포 (HMC-1) 는한국세포주은행 (Seoul, Korea) 으로부터구입하였고, 세포배양액은 L929와 HaCaT의경우 DMEM에 1% heat-inactivated FBS, 1% 의 penicillin과 1% 의 streptomycin을첨가한것을사용하였으며, HMC- 1의경우 IMDM에 1% FBS, 1% 의 penicillin과 1% 의 streptomycin을첨가한것을사용하였다. 배양은배양기를이용하여 37 C, 5% CO 2 상태를유지하였다. 3) 체외세포독성평가흰쥐의섬유아세포 (L929) 에서 25 kgy로방사선조사한감귤발효겔함유한하이드로겔의세포독성실험은 CCK-8 (Cell counting kit-8, Dojindo Lab, Japan) assay를이용한세포생존율을측정하여확인하였다. 세포독성실험은 L929 세포는 96-well culture plate에 1 1 4 cells well -1 로 seed하여 5% CO 2 가포함된 37 C 에서 24시간동안배양하였다. 이후세포를 PBS로 2회씻어준후감귤발효겔함량에따른하이드로겔을 5% CO 2 가포함된 37 C 에서 24시간동안배양한다음 CCK-8 1 μl를첨가하고 2시간배양후, ELISA microplate reader (Bio-Tak instruments, Winooski, VT, USA) 를사용하여 45 nm에서 OD값을측정하였다. 5. 하이드로겔의상처치유능력시험 1) 동물실험의약품및도구실험용쥐로는체중 2~25 g의 Sprague-Dawley계인 7~8주령인수컷흰쥐를 ORIENT (Korea) 에서구입하였다. 사육환경은온도 23 ±1 C, 습도 5±1% 의항온항습사육실에서자유급수하에서고형사료로사육하였다. 마취제로사용된 Diethyl ether와 Ketamine은 Aldrich사 (WI, USA) 와유한양행 (Seoul, Korea) 에서구입하였다. 살균 소독제로사용된과산화수소, 포비돈국소도포용액을성광제약 (Buchon, Korea) 에서구입하였다. 치료효과비교를위해사용된바셀린거즈는 Tegaderm을 3M (USA) 에서구입하였다. 봉합사는 Ethicon사 (Edinburgh, England) 제품을사용하였다. 2) 치료방법및상처면적 털이제거된쥐의등에직경 1~1.5 cm의원형으로표피를제거하여 3개의상처를만들어전처리하였다. 3 개의상처에각각다른방법의치료를하였다. 1개의상처에제조된하이드로겔 (Fruit), 다른 1개의상처에는제품화된하이드로겔 (Cligel), 또다른상처에는아무런처리 (control) 를하지않았다. 상업용바셀린거즈를두께 3 mm, 크기 2cm 2cm로붙여드레싱하였다. 그위에 3cm 3 cm Tegaderm을덮고봉합사로꿰매어상처에고정시킨후, 2일간격으로드레싱을교체하며치료경과를지켜보았다. 나중상처의면적 (mm) Wound area (%)=mmmmmmmmmmmmmmmmmmmm 1 처음상처의면적 (mm) 1. 겔화율 결과및논의 25 kgy로방사선조사한감귤발효겔을함유한하이드로겔의함량에따른겔화율을보여준다 (Fig. 1). 하이드로겔을 4~1 wt% 의조성비를점차증가시켰다. Total concentration 8~9 wt% 에서잠시겔화율의값에변화가없었지만, 1 wt% 에서 48% 로증가함을보였다. 하이드로겔이조성이커질수록겔화율이증가하는것을알수있다. 그리고겔화율이큰이유는감귤발효겔보다다른고분자들이가교반응에많이참여하기때문이다. 2. 팽윤도 25 kgy로방사선조사한감귤발효겔을함유한하이드로겔의함량에따른팽윤도를보여준다 (Fig. 2). 하이드 Gel content (%) 6 55 5 45 4 35 3 25 2 15 1 5 4 5 6 7 8 9 1 Total concentration (wt.%) Fig. 1. Gel content of hydrogels containing citrus gel as a function of concentration.

미생물발효치료용하이드로겔 369 18 12 Degree of swelling (%) 16 14 12 1 8 6 4 2 1 8 6 4 2 4 5 6 7 8 9 1 Total concentration (wt.%) 1 1 5 2.5 1.1 mg ml -1 Fig. 2. Degree of swelling of hydrogels containing citrus gel as a function of concentration. Fig. 4. Cell viability of citrus gel/pvp/peg/κ-carrageenan hydrogels. 5 Day Day 2 Day 4 Day 6 4.5 Stress at peak (kgf mm -2 ) 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1.5 4 5 6 7 8 9 1 Total concentration (wt.%) Day 8 Day 1 Day 12 Day 14 Fig. 3. Stress at peak of hydrogels containing citrus gel as a function of concentration. 로겔의팽윤도는 2,9~15,7% 의값을나타내었다. Total concentration 4~1 wt% 까지모두점차적으로팽윤도가증가하는것을보인다. 낮은겔화율을보였던하이드로겔이높은팽윤도를보인다. 그이유는감귤발효겔의 3차원망상구조가감소되어물을함유할수있는체적이증가하게된다. 따라서감귤발효겔의겔화율은감소하고팽윤도가증가한다. 감귤발효겔의겔화율과팽윤도는반비례관계를갖는다. 3. 기계적물성방사선조사한감귤발효겔을함유한하이드로겔의함량에따른인장강도를보여준다 (Fig. 3). 하이드로겔의인장강도는 2.6~4.5 kgf mm -2 의값을나타냈다. Total concentration 4~1 wt% 일동안기계적강도는 1.9 kgf mm -2 만큼감소하였다. 제조된하이드로겔의기계적강도는감소하였다. 그이유는감귤발효겔이발효미생물에의해가교가되어있어하이드로겔제조시화학적결 Fig. 5. Healing process of wound using citrus gel/pvp/peg/κ-carrageenan hydrogels. 합을이루지못해결정구조를갖지못하기때문이다. 결과적으로감귤발효겔의발효미생물로인해팽윤도는증가하고겔화율과기계적강도는감소한다. 4. 하이드로겔의체외세포독성평가 상처치료용감귤발효겔을함유한하이드로겔의체외세포독성실험을수행하였다. 그결과감귤발효겔을함유한하이드로겔의세포독성평가결과세포생존율이모두 8% 이상나타났을뿐만아니라, 2.5~.1 mg ml -1 는

37 김미영 임윤묵 이종대 송성기 권희정 박종석 노영창 김성호 최영훈 이선이 Wound area (%) 1 8 6 4 2 Fig. 6. Wound area of citrus gel/pvp/peg/κ-carrageenan hydrogels. 1% 의값을나타내었다 (Fig. 4). 이결과로하이드로겔을인체에적용해도무방한것으로확인된다. 5. 하이드로겔의상처치유능력 드레싱용하이드로겔은앞에서보인감귤발효겔을함유한하이드로겔이다. 이하이드로겔은겔강도가우수하고세포독성이없으며, 팽윤도또한뛰어났다. 상처에서삼출물이나올때팽윤도가높으면삼출물을빠르게흡수하여상처면을깨끗하고효과적으로안정시킬수있으며, 회복기간도단축시킬수있다. 또한상처표면에대한점착력도우수하여, 쥐의움직임에도하이드로겔이상처에떨어지지않았다. 감귤발효겔을함유한하이드로겔을이용한상처처리, 제품화된하이드로겔을이용한상처처리, 아무런처리를 하지않은상처를동물실험을통해비교관찰하였다 (Fig. 5). 감귤발효겔을함유한하이드로겔 (Fruit) 로드레싱한쥐의상처는치료 6일후6% 이상상처가치료되어, 기존상업용제품 (Cligel) 보다우수한상처치료효과를나타냈다. 이의결과는발효과정에서생성된식물성셀룰로로스가독성이없고, 수분보유력이우수하여상처에습윤을유지하고외부와의공기차단성이높기때문에상처치료율이우수한것으로사료된다. 결 본연구에서는감귤발효겔을 %, 1%, 2% 로함량을달리하여 PVP, PEG, κ-carrageenan, 혼합물과방사선가교를이용해하이드로겔을제조하였다. 제조된감귤발효겔의함량에따른하이드로겔의겔화율, 팽윤도, 겔강 론 Fruit Cligel Control 2 4 6 8 1 12 14 Day 도, 세포독성실험을통해특성평가를진행하였다. 겔화율은하이드로겔을 4~1 wt% 의조성비를점차증가시켰다. 하이드로겔이조성이커질수록겔화율이증가하는것을알수있다. Total concentration 8~9 wt% 에서잠시겔화율의값에는변화가없었지만, 1 wt% 에서 48% 로증가함을보였다. 하이드로겔이조성이커질수록겔화율이증가하는것을알수있다. 그리고겔화율이큰이유는감귤발효겔보다다른고분자들이가교반응에많이참여하기때문이다. 팽윤도는겔화율과반비례의결과가나왔다. Total concentration 4~1 wt% 까지모두점차적으로팽윤도가증가하는것을보인다. 낮은겔화율을보였던하이드로겔이높은팽윤도를보인다. 그이유는감귤발효겔의 3차원망상구조가감소되어물을함유할수있는체적이증가하게된다. 따라서감귤발효겔이증가할수록겔화율은감소하고팽윤도가증가하였다. 제조된하이드로겔의기계적강도는감귤발효겔이발효미생물에의해가교가되어있어하이드로겔제조시화학적결합을이루지못해결정구조를갖지못하였다. 그래서 Total concentration 4~1 wt% 로증가될때기계적강도는감소하였다. 세포독성평가결과는세포생존율이 8% 이상으로나타나감귤발효겔을함유한하이드로겔을인체에적용해도무방한결과가나왔다. 이에바탕으로상처치유드레싱용하이드로겔을제조하여동물실험을하였다. 상처를제품화된하이드로겔로치유하는것과아무런처리를하지않고치유하는것을대조군으로두었다. 그결과초기에는감귤발효겔을함유한하이드로겔이우수한치료효능을보였으나, 최종상처치유는제품화된하이드로겔에효능이떨어짐을확인할수있었다. 사 본연구는농촌진흥청바이오그린 21 사업단 ( 과제번호 : PJOO7177) 의연구비지원으로수행되었으며, 이에감사드립니다. 사 참고문헌 Araki CL. 1965. Some recent studies on the polysaccarides of Agarophytes. In Proc. Int. Seaweed Symp. Young EG, Maclahan JL, eds. Pergamin Press. London. pp. 3-17. Backdahl H, Helenius G, Bodin A, Nannmark U, Johansson BR, Risberg B and Gatenholm P. 26. Mechanical properties of bacterial cellulose and interactions with smooth muscle

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372 김미영 임윤묵 이종대 송성기 권희정 박종석 노영창 김성호 최영훈 이선이 Tsuji RF, Hoshino K, Noro Y, Tsuji NM, Kurokawa T, Masuda T, Akira S and Kowak B. 23. Suppression of allergic reaction by λ-carrageenan: toll-like receptor 4/My D88- dependent and -independent modulation of immunity. Clin. Exp. Allergy 33:249-258. Vandamme EJ, Baets SD, Vanbaelen A, Joris K and Wulf PD. 1998. Improved production of bacterial cellulose and its application potential. Polym. Degrad. Stab. 59:93-99. Manuscript Received: November 25, 21 Revision Accepted: December 1, 21