RESEARCH ARTICLE Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 2, , April 2015 스피루리나추출물의항염증및항노화, 멜라닌합성억제효과 장혜진, 최은영 * 건국대학교일반대학원생물공학과 Effects of Spir

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보규 왕
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1 RESEARCH ARTICLE 장혜진, 최은영 * 건국대학교일반대학원생물공학과 Effects of Spirulina Platensis Extract, the Act of which are Antiinflammation, Anti-aging, As well as Suppressing Melanin Synthesis Hye-Jin Jang, Eun-Young Choi* Department of Bioengineering, Graduate School of Konkuk University Abstract This research is intended to clarify the physiological functions of Spirulina platensis so as to check a possibility whether to employ it or not as an ingredient of cosmetics which requires effects of antiinflammation, anti-aging, and suppressing melanin synthesis. Taking into account Spirulina platensis, it is reported that a large volume of phenoic acid, tocopherols, β-carotene which especially plays an antioxidant role are contained, as well as vitamin B12. In connection with anti-inflammation act of Spirulina platensis, it is confirmed that the act is not followed by being poison to RAW cell. In connection with the amount of NO production which is deemed as an inducer of inflammation, it is revealed that not less than 35% of the production is reduced at the 25 μg /ml concentration of Spirulina platensis, the ratio of which is compared to that of the LPS treatment group. In connection with whitening physiological function, it is proven that B16F1 melanoma is not followed by being poison to cells, moreover it is found that the melanin production is decreased depending on the concentration of Spirulina platensis. Additionally, it is found that tyrosinase is suppressed in accordance with the concentration in ways of treating α-msh by each concentration and analyzing westen blotting. With respect to anti-aging effect, there is poison to HDF cell to be found. And with respect to MMP-1 occurrence, there is also decrease to be found which is compared to the group where UVB only is checked. As a result, it is predicted there is a possibility of employing it as a whitening cosmetic ingredient which needs an effect of suppressing melanin synthesis as the Spirulina platensis extract can suppress various inflammation-related mechanisms. Furthermore, it is thought there is an ingredient worthy for anti-aging cosmetics that will really work. Keywords: Spirulina platensis, Anti-inflammation, Anti-aging, Melanin synthesis, B16F1 melanoma cell Ⅰ 경제적인발전과더불어소득의증가와삶의질의향상으로피부미용에대한관심이높아지고오염된환경과스트레스로거칠어가는본인의피부를걱정하는사람들이늘어나면서화장품시장은일반화장품에비해효능및효과에기능성이강조 되는화장품을선호하고있다. 최근에는다양한생리활성성분들이포함되어있는천연식물에대한관심으로항산화, 항노화, 항염, 미백등에효능이있는성분들을제약, 건강식품, 한방생약분야뿐만아니라화장품산업에서도다양하게이용되고있다 ( 김미선등, 12: 이정희, 1). 화장품에서요구되는효능, 효과에서미백은주름방지와더 *Corresponding author: Eun-Young Choi, Department of Bioengineering, Graduate School of Konkuk University, Neungdong-ro, Gwangjin-gu, Seoul , Republic of Korea eyoung1114@daum.net Received March 22, 15; Revised April, 15; Accepted April 24, 15; Published April 3,

2 불어가장필요한항목중하나이다. 피부의색소침착은표피의기저층에있는색소세포에의해생성되는멜라닌이그원인으로, 색소침착저해효과가있다고알려진 retinoid, kojicacid, arbutin, hydroquinone, pentadecenoic acid, oleanolic acid, ursodeoxycholic acid, vitamin C, catechol 등이있다 (Gendler, 1997). 화장품에서요구되는효능, 효과에서미백은피부노화와더불어가장필요한항목중하나이며멜라닌생성을저해하는천연물질은미백화장품의유효성원료로오래전부터활발한연구개발이진행되고있다 ( 박수남등 1: 이길홍, 4). 피부노화와관련이깊은항산화물질은동, 식물계에널리분포되어있는데, 과일과채소에많은 phenol성화합물, flavone 유도체, Tocopherol, Ascorbic acid, Selenium과같은항산화물질은지방의산화를지연시키거나방지하며, 노화방지에도중요한역할을한다 (Black, 1987). 항산화에효과가있는물질은동식물에다양하게분포되어있으나효능과경제성때문에인공합성항산화제가많이이용되고있다. 하지만인공합성화합물에대한안정성에대한논란에따라그사용이제한되고있다. 스피루리나 (Spirulina platensis) 는지구상에서가장오래된조류 (algae) 의하나로클로렐라와같이인간의좋은식량으로사용되어왔으며, 일부는생물학적활성을갖는물질을함유하고있어기능성식품으로활용되고있다 (Yang, 1997: Choi JH et al., 2). 또한많은비타민과무기질, phenoic acid, tocopherols, β-carotene를다량함유하고있을뿐아니라 (Herbert, 1982), 스피루리나의프로스타글란딘은혈소판의응집을막아주고, 혈액순환을향상, 항염증작용 ( 박지예, 2: 신유미, 7: Pinero et al., 1), 면역학적및비면역학적자극에대한즉각적인알레르기반응을억제 (Kim, 1998), 히스타민과 TNF-a 분비를억제하는항알러지물질을가지고있다고보고되었다 ( 송미영, 5: 박영인, ). 그러나스피루리나에대한화장품소재로서의항염증과항노화, 미백효과에대한보고는미비한상황이므로인체에무해하고안전성과경제성을갖춘천연물질인스피루리나추출물을이용하여피부트러블의완화와피부노화억제, 미백화장품의유효성분으로서의안정성과경제성을갖춘천연화장품응용소재로효과가있을것으로사료되어스피루리나추출물의항염증과항노화, 멜라닌합성억제효과를알아보고자이와같은연구를수행하였다. Ⅱ 1. 재료및기기실험에사용된시약은 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), butylat- ed hydroxy toluene (BHT), 3,5-dinitrosalocylic acid (DNS), glucose, caffeic acid, quercetin, arbutin, pyrogallol, griess reagent, tris-hcl buffer (tris[hydroxymethyl] amino-methane+edta), aluminium nirate, potassium acetate, sodium phosphate buffer를사용하고 (Sigma), Dulbecco s modified Eagle s medium (DMEM, Hyclone, USA), α-melanocyte stimulating hormone (α-msh) 와 L-tyrosine, fetal bovine serum, penicillin, streptomysin, formaldehyde, arbutin, phosphate buffered saline solution (PBS), easy blue, chloroform, isopropanol (Sigma) 를구입하여사용하였다. 저해제로 SP125 (JNK inhibitor), SB35 (P38 inhibitor), PD959 (ERK/MEK inhibitor), LY292 (PI3K inhibitor) 를구입하여사용하였고 (Calbiochem, USA), 그외의기타시약은특급시약을사용하였다. 실험에사용한세포주인 B16F1 melanoma 세포, RAW macrophage는한국세포주은행에서분양하여사용하였으며, 배양시에는 High glucose Dulbecco s modified Eagle s medium (DMEM, Hyclone, USA) 에사용하였으며, 1% fetal bovine serum (FBS, Sigma) 과 1% penicillin/ streptomycin ( IU/ 5 mg/ml) 이첨가하여 37 C로유지되는 5% CO2 습윤배양기에서배양하였다. 2. 방법 1) 시료의준비본연구에서실험재료로사용된스피루리나는 14년 3월 11일 Purebulk (USA) 로부터구입하여사용하였다. 스피루리나는 배무게의증류수를가한후 4 h 냉동실에서냉동하여 25, 15 rpm의인큐베이터에서 72 h 진탕하여그추출액에 min간초음파적용후원심분리기에서 8, rpm, min 간원심분리하여상층액을얻어동결건조하여항염증과미백효과실험에사용하였다. 2) 항염증측정 (1) 세포독성측정실험에서사용된시료의독성농도범위를알아보기위하여 Neutral Red (NR) assay를이용하여측정하였다 (Borenfreund & Puemer, 1985). 세포주는 RAW264.7, B16F1 melanoma 세포를사용하였으며, 96 well plate에 well당 3 1⁴ cells/ well의농도로분주하고스피루리나을각각농도가되도록첨가한후 24 h 동안 37 에서 CO 2 배양기에서부착시켰다. 세포부착확인후시료를농도별로무혈청배지에희석하여처리한후 48 h 배양하였다. 배양한세포는배양액을 NR solution (Sigma, USA) 이 1% 포함된무혈청배지로교환하여 3 h 배양한다음현미경하에서 neutral red의결정화유무를확 244

3 인하였다. 세포고정액으로 formaldehyde 용액 1% 가첨가 된 phosphate buffered saline (PBS) 을각 well 에 µl 로 min 처리하여고정하였다. NR desorb solution (1% glacial acetic acid, 49% ethanol, 5% distilled water) 을각 well 에 µl 씩분주하여세포내의 neutral red 를추출하고 microplate reader (Synergy-HT, BIO-TEK instruments, USA) 를이용하여 5 nm 에서흡광도를측정하였고, 세포생 존율은다음의식에따라계산하였다 ( 김은주, 13). 세포생존율 (%) = (2) Nitric oxide 생성억제능측정 시료첨가군의 O.D. at 5 nm 시료무첨가군의 O.D. at 5 nm Green et al. (1982) 의방법에따라 NO 생성저해능을측정 하기위하여세포배양액내 NO 양을측정하였다. RAW 세포를 96 well plate 에 well 당 5 1⁴ cells/well 의농도로분 주하고 24 h 동안배양한다. 배양후배지를제거하고 LPS (lipopolysaccharide) 1 µl/ml 이처리된배지에스피루리나를 각농도별로가하여 48 h 동안배양한다. New plate 에배양된 세포배양상층액 µl 와 griess reagent µl 을가하여 차광된상태에서 1 min 간반응시키고 5 nm 에서흡광도를 측정하였고, LPS 처리군과비교하여백분율로표시하였다. NO 생성억제능 (%) = - 2) 멜라닌생성억제측정 (1) 멜라닌색소생성억제 시료첨가군의 O.D. at 5 nm 시료무첨가군의 O.D. at 5 nm B16F1 melanoma 세포를이용하여스피루리나의멜라닌 생성억제능을측정하였다. 96 well plate 에 B16F1 melanoma 세포를 2 1³ cells/well 의농도로분주하고, 세포가바닥에부 착할수있도록 24 h 동안배양하였다. 세포부착확인후멜라 닌생성을촉진하기위하여혈청 5% 와 α-msh 1 μm 이포함 된배지로갈아준후, 스피루리나를각농도별로처리후배양 하였다. 분비된멜라닌의양은 Microplate reader 를이용하여 5 nm 에서측정하였고양성대조군으로 arbutin 을배양용배 지에용해하여사용하였으며, 멜라닌생성량을 α-msh 무처리 군과비교하여백분율로표시하였다 ( 김은주, 13). (2) 티로시나아제활성억제 스피루리나에의한세포내 kinase 의활성화를확인하기위 해 western blotting 을실시하였다. 스피루리나 1 μm 을처리 하고 24 h 배양한 HDF 세포를수확하여 PBS 로세척후 RIPA buffer (5 mm Tris-Cl (ph 7.5), 5 mm NaCl, 1% NP-,.5% sodium deoxycholate,.1% SDS, proteaseinhibitor cocktail (Roche, Switzerland)) 를첨가하고얼음에서 3 min간방치하여세포를용해하였다. 용해된세포는 4 에서 12, g로 3 min간원심분리하여상등액을회수하였다. 회수된상등액은 SDS sample buffer ( mm Tris (ph 6.8), 14.4 mm 2-mercaptoethanol, 25% glycerol, 2% SDS,.1% bromo-phenol blue) 를첨가하고 에서 5 min간끓여단백질을 denatu- ration 시킨후단백질을 SDS-PAGE로분자량별로분리하였다. 분리된단백질은 V의조건에서 1 h 동안 nitrocellulose membrane (W hatman, UK) 으로 transfer 하였다. 단백질이옮겨진 membrane은.1% BSA 용액에 blocking하고, 그후 membrane을 primary antibody 용액에담가 4 에서 18 h 교반하였다. Primary antibody가처리된 membrane은 TBS/T (1 mm Tris-Cl (ph 7.5), 15 mm NaCl,.2% Tween ) 로교반기에서 5 min씩 3회세척하였다. 세척된 membrane을화학적형광을낼수있는 horseradish peroxidase (HRP) 가결합되어있는 secondary antibody 용액에담가상온에서 2 h 처리후다시 TBS/T로 5 min씩 3 회세척하였다. Secondary antibody가처리된 membrane은 supersignal west pico solution (Pierce, USA) 을처리하고암실에서실험용필름 (Konica, Japan) 으로덮어필름에감광을유도한후자동현상기 (QX-13II, Konica) 를이용하여현상하였다. 현상된필름상에있는단백질 band는 densitometer program인 ImageJ (NIH, USA) 를이용하여 band 크기의변화를측정하였다. Antibody는 β-actin primary antibody (Sigma) 를사용하였다 ( 윤영민, 12). 3) 항노화측정 (1) 콜라겐생성촉진능측정 HDF 세포를 96 well plate에 cell/well 농도로분주하고 24 h 동안배양하여콜라겐생성촉진을측정하였다. 세포부착확인후시료를농도별로희석하여첨가하여 48 h 동안배양하였다. 배양상층액 5 ml을 maxisorb 96 well plate 에옮긴후 carbonate coating buffer (Na 2 CO 3 +NaHCO 3 +1% NaN 3, ph 9.5) ml을첨가하여 4 C에서 24 h 동안고정시켜 PBS-T (PBS,.5% Tween-) ml로 3 회 washing을하고 blocking solution (PBS,.1% BSA) ml로 37 C에서 1 h 동안 blocking을하였다. Blocking 후 PBS-T ml로 3회 washing 하고 blocking solution으로 배희석한 primary antibody (anti-collagen type Ⅰ -Ab mouse IgG) ml를각 well에처리하고 37 C에서 1 h 동안방치하였다. PBS-T ml로 3회 washing 후 alkaline phosphatase가접합된 secondary antibody (anti-mouse IgG-antibody) 를 blocking solution으로 배희석을한후 245

4 Relative cell viability(%) Relative concentration of NO(%) LPS LPS(+) LPS LPS(+) Figure 1. Change of cell viability of Raw treated with Spirulina platensis extract (Sp). Figure 2. Inhibition of nitric oxide production in RAW264.7 treated with Spirulina platensis extract (Sp). 각 well에 ml씩처리하고 37 C에서 1 h 동안방치하였다. 마지막으로 PBS-T ml로 3회 washing하고 substrate인 p-nitrophenyl phosphate (in 9.7% diethanolamine buffer,.5 mm MgCl 2, ph 9.8) 를각 well에 ml씩첨가한후 plate를 aluminium foil로감싼뒤 37 C에서 1 h 동안반응시키고 5 nm로흡광도를측정하였다. (2) MMP-1의발현억제측정 HDF cell을 96 well plate에 well당 씩부착시켜 12 h 후상등액을버리고 DMEM에녹인추출물을농도별로처리한후 UVB를 min간조사하고 24 h 배양하였다. 그리고배양상층액 µl를 96 well plate에옮긴후 coating buffer µl을첨가한후 overnight시켰다. 또한배양상층액제거후 washing buffer (.1% Tween을함유 ) 로 3번 washing 하였다. Blocking buffer (.1% BSA 함유 ) µl처리후 37 C에서 1 h 반응시키고, 배양상층액제거후 (.1% Tween 함유 ) buffer로 3번 washing 한다. 1,배희석한 primary antibody (anti-mmp-1 mouse antibody) 를 5 µl 처리후 37 C에서 1 h 방치한후배양상층액제거와 washing buffer 로 3번 washing (.1% Tween 함유 ) 한다. 4,배희석한 secondary antibody(alkaline phosphate conjugated antimouse IgG antibody) 를 5 µl 처리후 37 C에서 1 h 방치한다. 배양상층액제거후 washing buffer로 5번 washing 한다. 1 mg/ml의농도로녹인 p-nitrophenyl phosphate (pnpp) µl를각 well당처리후 37 C 암실에서 1 h 방치한다. 그후 5 nm 흡광도에서측정한다. 본실험은 HDF 세포에대한스피루리나추출물의 MMP- 1 발현변화를알아보기위하여스피루리나추출물을 HDF 세포에 24 h 동안처리한후배양상층액을취하여 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 방법으로 MMP-1 함량을측정하였다. Ⅲ 1. 항염증효과 1) RAW 세포에대한세포독성세포의증식과생존율을확인하기위하여 NR assay를실시하였다. RAW 세포에대해스피루리나를 3, 6, 12, 25, 5 μg /ml 농도별로세포독성을실험한결과스피루리나농도 3 μg /ml에서세포생존도 85% 이상유지하는것을확인할수있었다. 또한선행연구에서염증유발물질인 LPS (lipopolysaccharide) μg /ml와이에반응하는스피루리나와같은녹조류인클로렐라추출물조절작용연구에서농도 3-5 μg /ml까지는세포독성을유발하지않는것을확인하였다 ( 홍종철, 3). 본연구에서도스피루리나농도 5 μg /ml 까지 RAW 세포생존율 85% 이상을유지하는것으로나타났다. 따라서농도별세포생존율에크게영향을주지않는다고판단하여스피루리나농도 5 μg /ml 이하의농도범위에서실시하였고, 화장품개발및응용에서피부안전성이매우우수할것으로사료된다 (Figure 1). 2) RAW 세포에대한 Nitric oxide 생성능억제염증유발물질인 NO 생성량을측정한결과, 각추출물 3, 6, 12, 25, 5 μg /ml의농도로처리하였을때, 스피루리나농도 12, 25, 5 μg /ml에서 NO 생성을 47, 63, % 차단하는것으로나타났다. 이결과는 RAW 세포에서스피루리나의 NO 생성억제에관한효과연구에서와같이스피루리나 5 μg /ml 농도범위내에서세포독성없이 NO 생성을억제하는결과와일치한다. 스피루리나는 RAW 세포에서염증반응과관련된효소인 inos와 COX-2의발현을억제하며 ( 김미정, 11), Immediate-tyoe allergic reactions를유도하는알레르기반응매개물인 β-hexosaminidase과 late-type allergic reaction를유도하는 Tumor necrosis factor-α (TNF-α) 의분비를억제한다고보고된바있다 ( 송미영, 5). 246

5 Relative cell viability(%) Relative melanin concetion(%) a _MSH α -MSH(+) Figure 3. Chang of cell viability of B16F1 melanoma treated with spirulina plantensis extract (Sp). a_msh Arbutin Arbutin Arbutin α -MSH(+) 25 5 Figure 4. Inhibition of melanin synthesis in B16F1 melanoma treated with Spirulina platensis extract (Sp). Control SP µg/ml SP SP 5 µg/ml 525µg/ml MITF Tyrosinase Rekatuve MITF, Tyrosinase band intensities(%) 15 5 MITF Tyrosinase β-actin α _MSH 52 5 α -MSH(+) Figure 5. Effect of Spirulina platensis extract (Sp) on the MITF and tyrosinase expression in B16F1 cell. 따라서스피루리나에의해많은염증관련메커니즘이제한받을수있을것으로사료된다 (Figure 2). 2. 멜라닌합성억제효과 1) B16F1 melanoma 세포에대한세포독성세포증식과생존율을확인하기위하여스피루리나의 B16F1 melanoma 세포에대한세포독성을나타낸것이다. 스피루리나농도가가장낮은 5 μg /ml부터 1,, 5, μg /ml까지세포생존도 % 이상을유지하여 B16F1 melanoma 세포에대한세포독성이없음을확인하였다 (Figure 3). 2) 멜라닌색소생성억제멜라닌형성세포인 B16F1 melanoma 세포에 α-msh 를가하여스피루리나추출물을농도별로적용하여멜라닌생합성억제효과를실험하였다. 스피루리나농도 12.5 μg /ml에서대조군인 Arbutin 3 μg /ml에비해약 4.6% 정도, 5 μg /ml에서는 14% 이상의멜라닌생성을저해하는것으로확인되었다. 전영식등 (13) 은고리매 (Scytosiphon lomentaria; SL), 미역쇠 (Endarachne binghamiae; EB), 왜모자반 (Sargassum yezoense; SY), 감태 (Ecklonia cava; EC), 톳 (Sargassum fusiforme; SF) 5가지해조류추출물의멜라닌생성저해효능을비교실험하였는데, μg/ml의농도에서각각 19.1, 52.9, 12.9, 1., 37.% 의저해율을보였고, 세포생존율실험결과세포독성에의한것이아님을확인하였고, 미역쇠추출물 μg/ml 농도로처리시, 양성대조군인 Arbutin을 μm 처리 (42.7%) 했을때보다멜라닌생성저해효능이통계학적으로유의성있게해조류의미백효과가우수함을보고하였다. 따라서, 합성원료로쓰이는대표적인 Tyrosinase 활성억제제인 Arbutin을사용한미백화장품보다높은멜라닌생성억제효과를가지고있는천연물질인해조류의스피루리나추출물이미백화장품제제로써의가능성을시사하여준다 (Figure 4). 3) 티로시나아제활성억제능멜라닌생합성을자극하는호르몬으로널리알려진 α-msh 를농도별로처리한후 Westen blotting 분석한결과를나타내었다. 멜라닌합성을하는데필요한산화효소인티로시나아제는스피루리나의농도 5 μg /ml 농도에서는낮은활성억제능을보였고, 25 μg /ml 농도에서는저농도에비해크게활성억제능을나타내어농도의존적으로억제되는것을확인하였다. α-msh가티로시나아제활성과밀접한관련이있으나그의효 247

6 Relative cell viability(%) Relative concentration of MMP Concentration of SP(g/ml) UVB(+)... Figure 6. Chang of cell viability of HDF treated with Spirulina platensis extract (Sp). Figure 7. Inhibition of MMP-1 production in HDF treated with Spirulina platensis extract (Sp). 과는처리농도에따라크게영향을받는것으로생각된다. 따라 서, 스피루리나추출물은천연물질로서미백효능이있다고사 료된다 (Figure 5). tocopherols, β-carotene 를다량함유하고있다 (Herbert, 1982) 고보고되고있다. 따라서스피루리나가항노화에많은 영향을미칠것으로사료된다 (Figure 7). 3. 항노화효과 1) HDF 세포에대한세포독성스피루리나가 HDF 세포에대한세포독성을알아보기위하여스피루리나농도 5, 1,, 5. μg /ml에서실험한결과 5- μg /ml까지모든농도범위에서세포생존율 % 이상을유지하여스피루리나농도 μg /ml까지는실험이가능한것으로나타났다 (Figure 6). 2) MMP-1 발현에미치는영향 HDF 세포에 UVB가조사되면세포내 DNA 손상뿐만아니라광노화현상이발생하며, HDF 세포의광노화는성장을저해하며 MMP의발현을촉진하여진피층에존재하는콜라겐의분해를촉진시킨다 (Kim et al., 11a; Yoon, 12). 발현된 MMP는콜라겐의분해를촉진하여주름생성과탄력감소를야기한다 (Kang et al., 3). UVB ( mj/cm²) 가조사된 HDF 세포에서스피루리나가 MMP-1 발현에미치는영향을실험한결과, HDF 세포에자외선을조사하였을때, 스피루리나농도 5 μg /ml에서는 MMP- 1 발현이감소하지않았으나, 1,, 5, μg /ml이후 UVB만조사한 % 보다 33, 44, 5, 53% MMP-1 발현이감소하였다 (Figure 7). 스피루리나추출물의 NHDF 자외선을조사한시료를각농도별로측정하여.5-.5% 의모든범위에서자외선처리로감소한콜라겐합성량을증가시켰으며, Lactobacillus와 Bacillus 발효한스피루리나의경우 UV 조사시보다.5% 농도에서 31.3% 증가하는효과를나타낸보고가있었다 ( 김동현, 9). 스피루리나는많은비타민과무기질을포함하고있는데특히, 비타민 B12와항산화제역할을하는 phenoic acid, Ⅳ RAW 세포에대한세포독성실험결과, 스피루리나의농도 3-5 μg /ml에서세포생존도 85% 이상을유지하여세포독성이없음을확인하였고, 염증유발물질인 NO 생성량을측정에서는 LPS처리군보다스피루리나의농도 25 μg /ml에서 NO 생성을 35% 이상차단하는것을확인하였다. 또한미백생리활성은멜라닌세포인 B16F1 melanoma 세포에대한세포증식과생존율을확인하기위하여스피루리나의농도가가장낮은 5 μg /ml부터 1,, 5, μg /ml까지세포독성이없음을확인하였다. 미백효능은스피루리나의농도 12.5 μg /ml 에서대조군인 Arbutin 3 μg /ml에비해약 4.6% 정도, 5 μg /ml에서는 14% 이상멜라닌생성을저해하는것을확인하였다. 또한 α-msh를농도별로처리한후 Westen blotting 분석을실시하여멜라닌합성을하는데필요한산화효소인티로시나아제를농도의존적으로억제함을확인하였다. 또한 MMP는콜라겐의분해를촉진하여주름생성과탄력감소를야기하여항노화와관련이많은데본연구에서의항노화효과는 HDF 세포에대한세포독성을확인하여, HDF 세포에자외선을조사하여, 스피루리나농도 1,, 5, μg /ml 에서 UVB만조사한 % 보다 33, 44, 5, 53% MMP-1 발현이감소되었음을확인하였다. 따라서, 스피루리나추출물은많은염증관련메커니즘을제한하며, 멜라닌생성억제효과를가지는미백화장품제제로써의가능성을시사하며, 항노화에많은영향을미치는화장품의소재로써충분한가치가있는것으로사료된다. 248

7 강수경, 김연주, 김현주. 피부생리학. 청구문화사, pp61-3, 2. 김동현. 스피루리나발효에의한항산화력증진및항노화효과. 동국대학교석사학위논문, 9. 김미선, 권경진, 이민진, 안선미, 손호용. 35종해조류추출물의병원성세균및 Candida 진균에한항균활성평가. Kor. J. Microbiol. Biotechnol., : , 12. 김미정. 췌장세포에서싸이토카인의세포독성에대한스피루리나막시마추출물의방어기작. 을지대학교석사학위논문, 11. 김은주. 효소변환을통한상백피추출물의티로시나에제저해제생산. 건국대학교박사학위논문, 13. 김희진. 대초반여성의피부건강상태관련요인과평가지표. 한국미용학회지, 11: , 6. 박수남, 고진아, 박영준. 식물유래성분의미백화장품 ( 기능성화장품 ) 에의응용. Seoul National University of Technology, 52: 5-2, 1. 박영인. Spirulina로부터항알레르기물질의분리및정제. Kor. J. Microbiol. Symposium, pp-82,. 박정신. 감성형용사를이용한자가피부상태평가도구개발. 광주여자대학교박사학위논문, 1. 박지예. 스피루리나복용이인체의혈중지질농도, 항산화능및면역능에미치는영향. 이화여자대학교석사학위논문, 2. 송미영. Identification of the Anti-allergic Activity from Spirulina platensis. 고려대학교석사학위논문, 5. 신유미. 스피루리나를첨가한기능성요구르트개발에관한연구. 충남대학교석사학위논문, 7. 신혜령. 천연추출물의항산화및미백효과에대한연구. 수원대학교석사학위논문, 1. 유인식. 싸리꽃에탄올추출물의피부생리활성연구. 원광대학교박사학위논문, 6. 윤영민. Silibinin이가지는인간진피섬유아세포에서의광노화억제효과. 건국대학교박사학위논문, 12. 이길홍. 대두이소플라본인제니스테인의항산화성질과미백화장품에의응용. 서울산업대학교석사학위논문, 3. 이정희. 오미자추출물화장품의중년여성피부미용에대한효과. 건국대학교박사학위논문, 13. 전영식, 정유정, 염종경, 김용기, 김수남. 미역쇠 (Endarachne binghamiae) 추출물의멜라닌생성억제효과, 한국자원식물학회지, 26: , 13. 하병조. 기능성화장품. 신광출판사, pp33-43, 1. 홍종철. 클로렐라추출물이동맥경화관련유전자의발현에미치는영향에관한연구. 인하대학교석사학위논문, 3. Borenfreund E, Puerner JA. Toxicity determined in vitro by morphological alterations and neutral red absorption. Toxicol. Lett., 24: , Black HS. Potential involvement of free radical reactions in ultraviolet light mediated cutaneous damage. Photochem. Photobiol., 46: , Choi JH, Kim MH, Cho MS, Lee HS, Kim WY. Thenutritional status and dietry pattern by BMI in Korean elderly. Korean Nutr. Sci., 35: 1-7, 2. Gendler EC. The opical treatment of the aging face. Dermatol. Clinics, 15: , Kang S, Chung JH, Lee JH, Fisher GJ, Wan YS, Duell EA, Voorhees JJ. Topical N-acetyl cysteine and genistein prevent ultraviolet-light-induced signaling that leads to photoaging in human skin in vivo. J. Invest. Dermatol., : , 3. Kim HM, Lee EH, Cho HH, Moon YH. Inhibitory effect of mast cell-mediated immediate-type allergic reaction in rats by spirulina. Biochem. Pharmacol., 55: , Kim J, Lee CW, Kim EK, Lee SJ, Park NH, Kim HS, Kim HK, Char K, Jang YP, Kim JW. Inhibition effect of Gynura procumbens extract on UV-B-induced matrix-metalloproteinase expression in human dermal fibroblasts. J. Ethnopharmacol., 137: , 11. Pinero Estrada JE, Bermejo Descos P, Villar del Fresno AM. Antioxidant activity of different fractions of spirulina platensis protean extract. Farmacol., 56: 497-5, 1. Yang HN, Lee EH, Kim HM. Spirulina platensis inhibits anaphylactic reaction. Life Sci., 61: ,

Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,