J Korn So Foo Si Nutr 한국식품영양과학회지 47(2), 143~149(218) https://oi.org/1.3746/jkfn.218.47.2.143 양태반의 UVB 로손상을유도한각질형성세포와 IBMX 로분화를유도한흑색종양세포의보호효과 이다솜 1 이민희 1 박수정 1 윤정문 1 김다경 1 김지훈 2 이민재 2 우용호 2 이정민 1,3 1 경희대학교의학영양학과 2 ( 주 ) 프롬바이오 3 경희대학교임상영양연구소 Prottiv Effts of Lm on UVB-Inu Krtinoyts n IBMX-Inu Mlnoyts Dsom L 1, Minh L 1, Soo-Jung Prk 1, Jongmoon Yun 1, Dkyung Kim 1, Ji Hoon Kim 2, Min J L 2, Young Ho Woo 2, n Jongmin L 1,3 1 Dprtmnt of Mil Nutrition n 3 Rsrh Institut of Mil Nutrition, Kyung H Univrsity 2 FromBio Co., Lt. ABSTRACT In this stuy, w invstigt th prottiv ffts of lm plnt on UVB-inu krtinoyts n 3-isoutyl-1-mthylxnthin (IBMX)-inu mlnoyts. HCT lls wr stimult y UVB 5 mj/m 2, whih inu inrss in ll th n pro-inflmmtory ytokin proution n rss in hyluroni i synths (HAS) mrna xprssion. Howvr, plnt trtmnt inhiit UVB-inu ll th n pro-inflmmtory ytokin proution n inrs HAS. In IBMX-inu mlnoyts, plnt trtmnt supprss mlnin proution. In ition, plnt trtmnt irtly inhiit tyrosins tivtion. In onlusion, ths rsults show tht lm plnt hs prottiv ffts ginst UVB-inu krtinoyt mg n IBMX-inu mlnoyts. Thus, w suggst tht lm plnt is fftiv s osmutil ingrint. Ky wors: lm plnt, krtinoyts, mlnoyts, skin hlth, mlnin 서 피부는외피체계 (intgumntry systm) 에서가장큰상피 (pithlil) 조직으로체내기관을외부환경으로부터보호하는장벽기능을할뿐만아니라감각기능, 열조절기능등을하는조직이다 (1). 외부환경에의한피부스트레스는피부노화, 피부염, 화상등다양한질환을유발시킬수있으며, 외부요인중자외선은가장흔하게노출되는요인이다 (2). 지속적인자외선노출에의한광노화는피부의탄력을감소시켜주름을유발하고불규칙한색소침착, 건조함, 탄력섬유증등을유발한다. 따라서자외선에의한피부손상을감소시키는것은피부의노화를지연시켜피부건강을유지시키기위해중요하다 (3). 피부조직은표피 (pirmis), 진피 (rmis), 피하지방층으로구성되어있는데, 표피에는각질형성세포 (krtinoyt), 멜라닌세포 (mlnoyt), 랑게르한스 (Lngrhns) Riv 16 Novmr 217; Apt 8 Jnury 218 Corrsponing uthor: Jongmin L, Dprtmnt of Mil Nutrition, Kyung H Univrsity, Yongin, Gyonggi 1714, Kor E-mil: jl27@khu..kr, Phon: +82-31-21-3779 론 세포등이분포하고, 진피는섬유아세포 (firolst) 에의해합성되는교원섬유 (ollgn fir), 탄력섬유 (lstin fir) 로구성되는결체조직과기질 (rm mtrix) 로이루어져있다 (4). 표피에서각질형성세포는 8~9% 를구성하는주요세포로각질을형성하여피부를보호하는기능을할뿐아니라면역세포와같은사이토카인을분비함으로써면역작용에의하여피부를보호할수있다 (5). 하지만지속적또는과도한스트레스는각질형성세포에서비정상적으로많은사이토카인분비를유발하여각질형성세포뿐만아니라섬유아세포에도영향을미쳐피부손상및탄력감소를일으킬수있다 (5,6). 한편멜라닌세포는 1개당약 36개의각질형성세포와함께분포하여멜라닌을합성하여피부색을결정하는중요한기능을한다 (7). 멜라닌세포의세포질에있는멜라노좀 (mlnosom) 에서 tyrosins의작용에의해 tyrosin을 DOPA와 opquinon으로전환시켜멜라닌을합성한다. 따라서표피의각질형성세포와멜라닌세포가노화와손상에의해피부탄력과피부색이변화할수있다 (7,8). 태반 (plnt) 은양막과자궁을연결하는곳에위치하여모체와태아사이에영양물질을운반하거나임신을유지시
144 이다솜 이민희 박수정 윤정문 김다경 김지훈 이민재 우용호 이정민 키기위한중요한내분비물질을공급하는중요한기관이다 (9). 태반은세포재생을강화시켜주는다양한인자들을가지고있어의료용으로사용되고있으며, 특히피부미용에탁월한효과가있다고알려져있다 (1,11). 하지만인체태반사용에대한윤리성문제가있어돼지, 말, 양등의태반을이용하여기능성원료로사용되고있다. 본연구에서는사람태반과단백질분자구조가가장유사한양태반이피부건강에미치는영향을자외선을조사한각질형성세포에서 ollgn과염증성사이토카인의변화및흑색종양세포에서멜라닌생성에미치는영향을관찰하여광노화억제효능및피부미백작용을확인함으로써기능성물질로활용하기위한기초자료로사용하기위해수행하였다 (12). 재료및방법재료및시약실험에사용한양태반분말 (FSH-SP) 은동결된상태의양태반을파편으로잘게절단하고가염과가온후발생한액체층을제거한고형물만을 11 C에서 3시간동안건조시킨다음조분쇄, 유동성개선제 ( 말토덱스트린 ) 첨가및미세분쇄, 살균공정을거친시료이며 ( 주 ) 프롬바이오 (Suwon, Kor) 를통해공급받았다. 양성대조군으로 L-sori i와알부틴을사용하였으며, Sigm-Alrih Co.(St. Louis, MO, USA) 에서구입하여사용하였다. 양태반분말및 L-sori i, 알부틴은 3차증류수에용해시켜시료로사용하였다. 세포배양에사용된 Dulo s moifi Egl s mium(dmem), pniillin-strptomyin, HEPES, L-glutmin,.25% EDTA trypsin은 Hylons사 (Wlthm, MA, USA) 에서, ftl ovin srum(fbs) 은 Alphiorgn(Suffolk County, MA, USA) 에서구입하였으며 gntmiin rgnt solution은 Gio-BRL(Grn Isln, NY, USA) 에서, Dulo s phospht-uffr slin(dpbs) 은 Wlgn(Gyongsn, Kor) 에서구매하였으며, 3- (4,5-imthylthizol-2-yl)-2,5-iphnylttrzolium romi(mtt), imthyl sulfoxi(dmso), ovin srum lumin, 3-isoutyl-1-mthylxnthin(IBMX), Cl Lyti TM MT Cll lysis rgnt uffr는 Sigm-Alrih Co. 에서구입하여사용하였다. 일반성분분석본실험에사용한양태반분말의수분함량, 조단백질, 조지방등을측정하였다. 수분은 15 C 상압가열건조법, 조단백질은자동질소증류장치 (Foss Kjlt 84 nlyzr, Foss Co., Hillrø, Dnmrk) 를이용한 Miro-Kjlhl 질소정량법, 조지방은자동조지방추출기 (Soxhlt Avnti 25, Foss Co.) 를이용하여측정하였으며, 시험방법은식 품공전에근거하여한국기능식품연구원 (Songnm, Kor) 에의뢰하여진행하였다. 세포배양본실험에사용된인체피부표피에존재하는각질형성세포 (humn krtinoyt) HCT는경희대학교생명과학대학황재성교수로부터분양받아사용하였다. 흑색종양세포 (mous mlnom) B16F1은 Amrin Typ Cultur Colltion(ATCC, Mnsss, VA, USA) 에서구매하였으며, 1% FBS와 pniillin-strptomyin( units/ ml), L-glutmin(2 mm), HEPES(1 M), gntmiin rgnt(1 mg/ml) 가함유된 high-gluos DMEM 배지를사용하였고, 37 C, 5% CO 2, 95% humi ir로조절된배양기 (Thrmo Fishr Sintifi In., Pittsurgh, PA, USA) 에서배양하였다. 세포독성평가 HCT 세포를 5 1 3 lls/wll 농도로 96-wll plt 에분주하여 24시간동안배양한후각 wll에양태반농도별로투여해 24시간배양시켜양태반의독성을살펴보았다. 24시간후 MTT 용액 (5 μg/ml) 을첨가하고 4시간동안배양한다음, 배지를제거하고 DMSO 2 μl를첨가하여 56 nm에서흡광도를측정하였다. 시료처리및자외선조사후세포생존율 HCT 세포를 1 1 4 lls/wll 세포수로 96-wll plt 에분주하여 24시간동안배양한후, DPBS로세척한다음 UVB lmp(5 Snkyo Dnki G5T5 lmps, Snkyo Dnki Co., Yokohm, Jpn) 를이용하여 4.2 mw/m 2 조사량을 12초노출시켜 5 mj/m 2 조사한후양성대조군인 L-sori i 및양태반을 5,, 2 μg/ml 농도로처리하였다. 24시간배양후 MTT 용액 (5 μg/ml) 을첨가하고 4시간동안반응시켰다. 배양한후배지를제거하고 DMSO 2 μl를첨가하여배양기에서용해시켰으며 ELISA rr(bio-r Lortoris, Hruls, CA, USA) 로 54 nm에서흡광도를측정하였다. RNA 추출및실시간정량 PCR HCT 세포를배양하여 6-wll plt 에 1 1 6 lls/wll 분주한후 24시간배양하였다. 배지를제거한후 DPBS로세척하고 UVB lmp를이용하여 5 mj/m 2 조사한다음양성대조군인 L-sori i 및양태반을 5,, 2 μg/ml 농도로처리하여 24시간배양하였다. 배양한 HCT 세포의 RNA는 RNsy Mini kit(qign, Vlni, CA, USA) 을이용하여추출하였다. isript DNA synthsis kit (Bio-R Lortoris) 을사용하여 RNA를 DNA로합성하였다. 유전자들의발현을측정하기위하여 SYBR Grn (iq SYBR Grn Suprmix, Bio-R Lortoris) 을이
양태반의피부보호효과 145 용한 Rl-tim PCR(Appli Biosystms, Fostr City, CA, USA) 을이용하였다. 각각의유전자에대한 PCR primr의염기서열은다음과같다. GAPDH forwr primr 5 -CCCCACACACATGCACTTACC-3, rvrs primr 5 -TTGCCAAGTTGCCTGTCCTT-3 ; tumor nrosis ftor-lph(tnf-α) forwr primr 5 -CTACAACCCG CATACAACTGAAAC-3, rvrs primr 5 -TGGCCCG CCACGAA-3 ; HAS2 forwr primr 5 -CAGGCGGAGT ATGAGATAA-3, rvrs primr 5 -AAGACTCAGCAG AACCCAGGAA-3. Rl-tim PCR 반응은총 2 μl 내에 1 μl의 2X SYBR mix, 2 μl DNA, forwr 및 rvrs primr 1 μl씩각각 pmol/μl를첨가하였고나머지볼륨은 nuls fr wtr로채워주었다. 모든유전자에대하여 PCR 증폭단계는다음과같고증폭 yl은 4 yl을실시하였다. Hot strt를위해 95 C에서 1분, nturtion을 95 C에서 15초, nnling을 52 C에서 3초, xtnsion을 72 C에서 3초간반복하며각 yl의 xtnsion 후에값이기록되었다. 모든 yl이완료된후 primr의특이성을확인하기위해 mlting urv 분석을실시하였다. 결과는 Appli Biosystms에서제공하는 On stp systm softwr vr. 2.1로분석하였으며 mrna의상대적인함량은자외선처리를하지않은군에대한상대적인양으로나타냈다. IL-6(intrlukin-6), IL-1β(intrlukin-1 t) 분비량측정 HCT 세포를배양하여 96-wll plt에 1 1 4 lls/ wll 분주한후 24시간배양하였다. 배지를제거한후 DPBS 로세척하고 UVB lmp를이용하여 5 mj/m 2 조사한후양태반을 5,, 2 μg/ml 농도로처리하여 24시간배양하였다. Cytokins(IL-6, IL-1β) 를측정하기위해 Duost ELISA kit(r&d systm, Minnpolis, MN, USA) 을이용하여검출하였으며 ELISA rr(bio-r Lortoris) 로 655 nm에서흡광도를측정하였다. 표준곡선 (stnr urv) 을이용해세포에서생성된사이토카인의양을계산하였다. 시험관내 tyrosins 활성능측정 Tyrosins의측정은 Kim 등 (13) 의방법을변형하여진행하였다. 기질인 1.5 mm L-3,4-ihyroxyphnyllnin (L-DOPA) 을.1 M 인산염완충액 (ph 6.5) 에용해시켜처리시료인양성대조군알부틴 (rutin) 과양태반분말을 5,, 2 μg/ml 농도로준비하였다..1 M 인산염완충액 22 μl에처리시료액 2 μl, mushroom tyrosins(2, U/mL) 2 μl, 1.5 mm L-DOPA 4 μl를 96-wll plt에순차적으로첨가하였으며비교군으로시료액대신.1 M 인산염완충액 2 μl를첨가하였다. 37 C에서 1분동안반응시킨후얼음에서 5분간방치하여반응을중단시킨다 음 49 nm 에서흡광도를측정하였다. 시료처리및멜라닌생성억제실험 멜라닌생성억제실험은 Prk 등 (14) 의방법을참고하여진행하였다. B16F1 세포를배양하여 24-wll plt에 5 1 4 lls/wll로분주하고 24시간동안배양하였다. 각 wll 에양성대조군알부틴과양태반분말을 5,, 2 μg/ ml 농도로멜라닌합성을유도하는 IBMX 25 μm 분화시약과동시투여하여 72시간배양시켜 24시간마다배지를교체하였다. 72시간배양한후각 wll을 DPBS로세척하고 Cll lysis rgnt uffr를 125 μl 분주하여세포를분리하였다. 상층액을분리하여 Brfor Dy Rgnt로단백질을정량하고, 세포에 1 N NOH에 1% DMSO가함유된용액을 3 μl를첨가하여 C에서 1분동안용해시켜 ELISA rr(bio-r Lortoris) 로 45 nm에서흡광도를측정하였다. 통계처리본실험은 SPSS(Sttistil Pkg for Soil Sin, vrsion 23., SPSS In., Chigo, IL, USA) 통계프로그램을사용하였다. 각실험군의측정항목의결과는평균 ± 표준편차 (mn±sd) 로표시하였으며, 실험군간평균차이를 on-wy ANOVA로확인한후그룹간의통계적유의성을 Stunt s t-tst와 Dunn s multipl rng tst를이용하여실시하였다. 실험군간의유의성을 P<.5 수준에서검정하였다. 결과및고찰 양태반의일반성분함량양태반분말의일반성분을분석한결과는 Tl 1과같다. 양태반일반성분분석결과수분 1.2%, 조단백질 63.62 %, 조지방 7.38%, 회분 17.1%, 식이섬유 4.5% 의결과를확인하였다. 자외선조사에의한각질형성세포손상자외선은 UVA(32~4 nm), UVB(28~32 nm), UVC (2~28 nm) 가존재하며그중 UVA와 UVB는지표면에도달할수있어피부에영향을미친다 (15,16). 노출되는양은 UVA가 UVB보다높으나 UVB가 DNA 손상을일으킬 Tl 1. Chmil ompositions of plnt 1) (%) Moistur Cru protin Cru ft Ash Fir 1) Th rsults wr prsnt s mn. 1.2 63.62 7.38 17.1 4.5
146 이다솜 이민희 박수정 윤정문 김다경 김지훈 이민재 우용호 이정민 수있어직접피부표피세포손상을유발하여피부노화를일으키는주요자외선이라고알려져있다 (15,16). 따라서 UVB 조사에의한각질형성세포손상을억제하는것은피부노화를감소시킬수있다. 본연구에앞서양태반처리가세포독성을일으키는지확인하기위하여 MTT ssy를실시하였다. HCT 세포대한양태반의농도별세포생존율은 Fig. 1A에나타내었다. 양태반 3 µg/ml 에서 85.6±2.13% 생존율을보이면서유의적인차이를보이기시작하였고 (P<.1), 2 µg/ml 이하농도에서는유의적인차이가없었음을확인하여추후진행하는양태반의농도는 2 µg/ml까지처리하였다. 자외선 5 mj/m 2 를조사후양태반의처리가 HCT 세포생존율에미치는영향을살펴본결과는 Fig. 1B와같다. 자외선조사를하지않은군 (NT) 과비교하여자외선 5 mj/m 2 를조사한군 (C) 은 74.3±5.1% 로생존율이유의적으로감소하였다. 하지만양성대조군비타민 C 2 µg/ml A Cll viility (%). B Cll viility (%). 12 8 * ** ** 6 2 3 4 5 6 7 8 9 12 8 6 Conntrtion (μg/ml) NT C 5 2 5 2 L-Asori i ** Fig. 1. Cll viilitis of HCT lls following 24 h of trtmnt with iffrnt onntrtions of plnt (A) n th ntiytotoxi fft of plnt on HCT lls viilitis unr UVB irrition (B). (A) Th lls ultur in th prsn of vrious onntrtions of plnt for 24 h t 37 C in 5% CO 2. (B) Th lls wr trt with UVB (5 mj/m 2 ) xpt NT n ultur in th prsn of vrious onntrtions of smpls for 24 h t 37 C in 5% CO 2. Th rsults wr prsnt mn±sd t lst thr inpnnt xprimnts, h prform in triplit (n=3). Astrisks init sttistilly signifint iffrns from plnt µg/ml group ( * P<.5, ** P<.1, P<.1) (A). Diffrnt lttrs ov th rs show signifint iffrn t P<.5 s trmin y Dunn s multipl rng tst (B). 처리군과양태반 2 µg/ml 처리군에서는자외선을조사한군 (C) 보다유의적으로생존율이증가하였다 (P<.5). 따라서양태반은자외선조사에의한각질형성세포의손상을감소시켜줄수있다고생각된다. 자외선조사에의한염증성사이토카인형성피부표피에도달한 UVB는활성산소종 (rtiv oxygn spis, ROS) 이생성을자극하여세포막지질의산화적손상을유발하면서 IL-1β, TNF-α, IL-6 등의염증성사이토카인분비를촉진한다 (15,17). 이러한염증반응은피부의주름형성, 아토피피부염, 건선등과같은피부질환을일으킬수있다 (18). 각질형성세포에서분비된염증성사이토카인은섬유아세포에서 mtrix mtlloprotinss(mmps) 발현을증가시켜 ollgn 합성감소및분해촉진에의해피부탄력을감소시키고주름을형성하여피부노화를촉진시킨다고알려져있다 (19). 따라서본연구에서는자외선조사에의한염증성사이토카인분비가자극된각질형성세포에양태반이미치는영향을관찰하였다. HCT 세포에자외선을조사하였을때 (C) TNF-α의 mrna 발현이 4.51±.24로자외선을조사하지않은군 (NT) 과비교하여유의적으로증가함을확인하였다. 하지만자외선조사에의해증가한 TNF-α mrna 발현이양태반 µg/ml와 2 µg/ml 처리군에서자외선을조사한군과비교하여각각 2.2±.52, 1.52±.8로유의적으로감소하였다 (P<.5)(Fig. 2A). HCT 세포에서자외선에의한 IL-1β와 IL-6 분비량변화는 Fig. 2B 및 2C와같다. 각질형성세포에자외선을조사한군 (C) 에서 IL-1β와 IL-6 분비량이자외선을조사하지않은군 (NT) 과비교하여각각 6.67±1.41, 57.9±3.15 로유의적으로증가함을확인하였다. 반면양태반을처리한모든농도군에서는 IL-1β 분비량이자외선을조사한군과비교하여유의적으로감소하였다. IL-6 분비량결과양태반 2 µg/ml를처리한군에서 51.8±5.19로자외선을조사한군과비교하여유의적으로감소하였음을확인하였다 (P<.5). 따라서본연구결과에의해양태반이자외선조사에의한각질형성세포의손상과염증성사이토카인의형성을억제하여피부건강에도움을줄수있다고제안한다. 자외선조사에의한히알루론산합성효소활성피부표피의각질층은약 1~2% 정도의수분을함유하고있으며, 각질층의수분이 1% 이하로떨어지게되면피부가건조해지고거칠어지며피부장벽손상에의해수분손실량이증가하여다양한피부질환을유발할수있다 (2). 히알루론산은다량의물을보유할수있어화장품의보습제로많이사용되고있다. 이러한히알루론산은표피의유극층과기저층에존재하는데피부노화가진행되면서피부수분함량의감소와함께히알루론산의양도감소하게된다 (2, 21). 따라서본연구에서는양태반이자외선을조사한각질
양태반의피부보호효과 147 A 6 6 Rltiv mrna xprssion. of TNF-α. 5 4 3 2 1 Rltiv mrna xprssion. Of HAS2. 5 4 3 2 1 f f B IL-1β proution (pg/ml). C IL-6 proution (pg/ml). 1 8 6 4 2 8 6 4 2 NT C 5 2 5 2 L-Asori i NT C 5 2 5 2 L-Asori i NT C 5 2 5 2 L-Asori i Fig. 2. Anti-inflmmtory fft of plnt on pro-inflmmtory ytokins in UVB-irrit HCT lls. Th lls wr trt with UVB (5 mj/m 2 ) xpt NC n ultur in th prsn of vrious onntrtions of smpls for 24 h t 37 C in 5% CO 2. Vlus r mn±sd. Diffrnt lttrs ov th rs show signifint iffrn t P<.5 s trmin y Dunn s multipl rng tst. 형성세포의히알루론산합성에미치는영향을평가하기위해 hyluroni i synths(has) mrna 발현을측정하였다. 본연구결과 HCT 세포에자외선을조사하였을때 (C) HAS의 mrna 발현이.41±.16으로자외선을조사하지않은군 (NT) 과비교하여유의적으로감소함을확인하였다. 반면자외선조사에의해감소한 HAS mrna 발현이양태반 µg/ml와 2 µg/ml 처리군에서각각 1.11±.12, 1.45±.19로자외선을조사한군과비교하여유의적으로증가하였다 (P<.5)(Fig. 3). 따라서본연구결과를통하여 NT C 5 2 5 2 L-Asori i Fig. 3. Effts of plnt on hyluroni i synths 2 (HAS2) in UVB-irrit HCT lls. Th lls wr trt with UVB (5 mj/m 2 ) xpt NC n ultur in th prsn of vrious onntrtions of smpls for 24 h t 37 C in 5% CO 2. Vlus r mn±sd. Diffrnt lttrs ov th rs show signifint iffrn t P<.5 s trmin y Dunn s multipl rng tst. 양태반이자외선손상에의해저하된피부각질층의히알루론산합성효소를증가시켜수분보유에도움을주는히알루론산보호에도움을줄것이라고기대할수있다. 시험관내 tyrosins 활성및분화를유도한흑색종양세포에서멜라닌생성멜라닌세포에서발현이증가한 tyrosins는 L-tyrosin 을 L-DOPA 로변화시키며, L-DOPA 는 tyrosins-rlt protin 1(TRP-1), tyrosins-rlt protin 2(TRP- 2) 에의해서최종적으로멜라닌으로전환된다 (22,23). 따라서 tyrosins는멜라닌생성반응을조절하는대표적인효소로피부미백을위해 tyrosins의활성억제효능을가진원료인알부틴등을이용하여기능성제품이개발되고있다 (24). 따라서본연구에서는양태반의피부미백효능평가를위하여양태반이직접 tyrosins 활성억제효능을가지는지평가하였고 IBMX 처리로멜라닌생성을유도한 B16 F1 세포를이용하여멜라닌생성억제효능을평가하였다. Tyrosins 활성을평가한결과에서 mushroom tyrosins만있는 C군 ±4.29% 대비양성대조군과양태반모두유의적으로활성이감소하였음을확인하였다. 양태반 2 µg/ml를처리한군이 8.78±2.91% 로 5 µg/ml, µg/ml를처리한군인 88.46±3.48%, 86.8±1.25% 보다유의적으로 tyrosins 활성억제효능이높았음을확인하였다 (P<.5)(Fig. 4). 흑색종양세포인 B16F1 세포에서멜라닌형성을관찰한결과에서 IBMX 처리로멜라닌형성을유도한군 (C) 에서는 53.3±39.39% 로처리하지않은군 (NT) ±2.87% 와비교하여유의적으로멜라닌형성이높아졌다. 하지만양성대조군알부틴과양태반을처리한모든군에서멜라닌형성을유도한군과비교하여유의적으로멜라닌형성이감소하였음을확인하였다 (P<.5)(Fig. 5). 따라서본연구결과
148 이다솜 이민희 박수정 윤정문 김다경 김지훈 이민재 우용호 이정민 Tyrosins tivity (% of ontrol). 12 8 6 NT 5 2 5 2 Arutin Fig. 4. Effts of plnt on tyrosins tivity. C, mushroom tyrosins+l-dopa; Arutin n, mushroom tyrosins +L-DOPA+iffrnt smpls. Vlus r mn±sd. Diffrnt lttrs ov th rs show signifint iffrn t P<.5 s trmin y Dunn s multipl rng tst. 양태반이피부각질형성세포와흑색종양세포에미치는보호효과를관찰하였다. 피부각질형성세포에서자외선처리에의한세포손상및자외선조사에의해증가된염증성사이토카인인 TNF-α, IL-1β, IL-6 결과공통적으로 2 μg/ ml에서자외선조사군에비해유의적으로보호효과를확인하였다. 히알루론산을합성하는데주효소인 hyluroni i synths의발현량을확인한결과양태반, 2 μg/ml에서유의적으로증가하였다. 또한, 양태반이멜라닌합성의주효소인 tyrosins 활성억제를통해흑색종양세포에서멜라닌생성을유의적으로억제하였음을확인하여미백기능성을기대할수있다. 이러한기능성입증으로피부건강을위한원료로양태반을기초자료로사용함으로써활용가능성을기대할수있다. 감사의글 NT Arutin 5 Arutin 5 본연구는산업통산자원부와한국산업기술진흥원의 사업화연계기술개발사업 의지원을받아수행된연구결과 ( 과제번호 : N2384, 217) 입니다. REFERENCES C Mlnin ontnt. (% of norml ontrol). 6 5 4 3 2 Arutin 2 2 NT C 5 2 5 2 Arutin Fig. 5. Effts of plnt on mlnin synthsis in IBMX-inu B16F1 lls. Th lls wr xpos to IBMX (25 μm) in th prsn of C, Arutin, n for 72 h t 37 C in 5% CO 2. Vlus r mn±sd. Diffrnt lttrs ov th rs show signifint iffrn t P<.5 s trmin y Dunn s multipl rng tst. 양태반이 tyrosins 활성을직접억제하여멜라닌형성을억제하였음을확인하여양태반이피부미백효능에도움이될것이라고생각된다. 요 본연구에서는피부건강을위한기능성소재개발을위하여 약 1. Norlén L. 23. Skin rrir strutur, funtion n formtion-lrning from ryo-ltron mirosopy of vitrous, fully hyrt ntiv humn pirmis. Int J Cosmt Si 25: 29-226. 2. Bikrs DR, Athr M. 26. Oxitiv strss in th pthognsis of skin iss. J Invst Drmtol 126: 2565-2575. 3. Rivs M, Ary MC, C F, Rojs E, Clf GM. 211. Ultrviolt light xposur influns skin nr in ssoition with ltitu. Onol Rp 25: 1153-1159. 4. Rittié L, Fishr GJ. 22. UV-light-inu signl ss n skin ging. Aging Rs Rv 1: 75-72. 5. Proksh E, Fölstr-Holst R, Jnsn JM. 26. Skin rrir funtion, pirml prolifrtion n iffrntition in zm. J Drmtol Si 43: 159-169. 6. Psprkis M, Courtois G, Hfnr M, Shmit-Supprin M, Nni A, Toksoy A, Krmprt M, Golr M, Gillitzr R, Isrl A, Krig T, Rjwsky K, Hs I. 22. TNF-mit inflmmtory skin iss in mi with pirmis-spifi ltion of IKK2. Ntur 417: 861-866. 7. Tstmli M, Anns J, Thoy AJ. 22. Mlnoyt funtion n its ontrol y mlnoortin pptis. J Histohm Cytohm 5: 125-133. 8. Hring VJ. 25. Biognsis of pigmnt grnuls: snsitiv wy to rgult mlnoyt funtion. J Drmtol Si 37: 3-14. 9. Bur MK, Hring JE, Bsstt NS, Brir BH, Olivr MH, Gllhr BH, Evns PC, Wooll SM, Glukmn PD. 1998. Ftl growth n plntl funtion. Mol Cll Enorinol 14: 115-12. 1. Cho HR, Ryou JH, L JW, L MH. 28. Th ffts of plntl xtrt on firolst prolifrtion. J Cosmt Si 59: 195-22. 11. Anglui C, Lm G, Si G. 1999. Th growth of mlignnt n nonmlignnt humn lls is moult y humn plntl xtrt. Antinr Rs 19: 429-436.
양태반의피부보호효과 149 12. Brry JS, Anthony RV. 28. Th prgnnt shp s mol for humn prgnny. Thriognolgy 69: 55-67. 13. Kim SJ, Son KH, Chng HW, Kng SS, Kim HP. 23. Tyrosins inhiitory prnylt flvonois from Sophor flvsns. Biol Phrm Bull 26: 1348-135. 14. Prk SY, Jin ML, Kim YH, Kim YH, L SJ. 211. Aromtiturmron inhiits α-msh n IBMX-inu mlnognsis y intivting CREB n MITF signling pthwys. Arh Drmtol Rs 33: 737-744. 15. Fishr GJ, Wng ZQ, Dtt SC, Vrni J, Kng S, Voorhs JJ. 1997. Pthophysiology of prmtur skin ging inu y ultrviolt light. N Engl J M 337: 1419-1429. 16. Bisstt DL, Chttrj R, Hnnon DP. 199. Photoprottiv fft of suproxi-svnging ntioxints ginst ultrviolt rition-inu hroni skin mg in th hirlss mous. Photormtol Photoimmunol Photom 7: 56-62. 17. Yoshizumi M, Nkmur T, Kto M, Ishiok T, Kozw K, Wkmtsu K, Kimur H. 28. Rls of ytokins/hmokins n ll th in UVB-irrit humn krtinoyts, HCT. Cll Biol Int 32: 145-1411. 18. Grön A. 22. Krtinoyts n ytokins. Vt Immunol Immunopthol 88: 1-12. 19. Tlwr HS, Griffiths CEM, Fishr GJ, Hmilton TA, Voorhs JJ. 1995. Ru typ Ⅰ n typ Ⅲ proollgns in photomg ult humn skin. J Invst Drmtol 15: 285-29. 2. Psonn-Sppänn S, Krvinn S, Törrönn K, Hyttinn JMT, Jokl T, Lmmi MJ, Tmmi MI, Tmmi R. 23. EGF uprgults, whrs TGF-β ownrgults, th hyluronn synthss Hs2 n Hs3 in orgnotypi krtinoyt ulturs: orrltions with pirml prolifrtion n iffrntition. J Invst Drmtol 12: 138-144. 21. Tmmi R, Ripllino JA, Mrgolis RU, Tmmi M. 1988. Loliztion of pirml hyluroni i using th hyluront ining rgion of rtilg protoglyn s spifi pro. J Invst Drmtol 9: 412-414. 22. Koyshi T, Ur K, Winr A, Jiménz-Crvnts C, Imokw G, Brwington T, Solno F, Grí-Borrón JC, Hring VJ. 1994. Tyrosins rlt protin 1 (TRP1) funtions s DHICA oxis in mlnin iosynthsis. EMBO J 13: 5818-5825. 23. Iozumi K, Hognson GE, Pnnll R, Evrtt MA, Fullr BB. 1993. Rol of tyrosins s th trminnt of pigmnttion in ultur humn mlnoyts. J Invst Drmtol : 86-811. 24. M K, Fuku M. 1996. Arutin: mhnism of its pigmnting tion in humn mlnoyt ultur. J Phrmol Exp Thr 276: 765-769.