임상병려검사과학회지 : 제 31 권제 2 호 1999. 건강인의비인강내 MRSA 보균율과 methicillin 내성포도구균에서의 meca 와 fema 유전자의검출 원광보건대학임상병리과 원광대학병원임상병리과원광대학교치과대학구강미생물학교실 2 전남과학대학치위생과순천대학교대학원생물학과연세대학교의과대학임상병리과교실 5 검신무 송남경 신상희정재옥이규식 김유현 오재세 차정단 2 문상은 3 검강주 2 심은숙 4 검은철 4 성치남 3 정윤섭 5 Nasal Carriage of MRSA among Hea1thy Individual and Detection of meca and fema Gene from Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Kim, Shin Moo., Song, Nam Kyung., Shin, Sang Hee 1, Chung, Jae Ok 1, 2 Lee, Gyu Sik., Kim, Yoo Hyun., Oh, Jae Se., Cha, Chong D 뻐., Moon, Sang Eun'"'., Kim, K없 19 Ju 3, Shim, Eun Sook 4., Kim, Eun Chu1 4., Seong, Chi Nam 4, Chong, Yun SOp5 Dept. oj Medical Technol앵ν, Wonkwang Health Science College, Iksan, Korea Dept. oj Clinical Pathology, Wonkwanj University Hospital, Iksan. Korea 1 Dept. oj Oral Microbiology. College oj DentistTν. Wonkwang Universitν. Iksan. Korea 2 Dept. of Dental Hygiene. Chunnam Science College, Chunnam, Korea 3 Dept. oj Bωpν. Graduate School. Sunchon Universitν. Sunchon. Korea 4 Dept. oj Clinical Pathologν. Yonsei Univers때 College oj Medicine. Seoul Korea 5 Nasal carriage rate and methici11in resistance of Staphν lococcus aureus in healthy adults are not well known in Korea. In this study, nasal specimens collected from college students during March to June, 1998 were cultured for S. aureus and the susceptibility of the isolates was determined by agar di1ution method and the relationship of methici11in resistance level and 서 -lactamase production was analyzed. Also, presence of meca and fema was detected from the isolates by PCR. Isolation rate of S. aureus from the 339 subjects was 20%, and the rate was higher in female (21%) than in male (12%). Among the isolates, 2.1% were MRSAs. Against MSSA, clindamycin, fusidic acid, mupirocin and - 91 -
vancomycin were most active (MICso ::;; 1 μgjml and MIC90 2 μgj ml) and the resistance rates to cephalothin, eηthromycin, gentamicin and tetracyc1ine 드 20% and to chloramphenicol and penicillin G, were 73%. The MIC range of oxacillin against MRSA was 16-~ 128 μgj ml, while MICso and MIC90 were 32 μgjml and 128 μgjml, respectively. Fusidic acid, mupirocin and vancomycin were most active against MRSA (both MICso and MIC90 were 1 μgjml). Resistance rate of MRSA to c1indamycin was 18%, but they were ~59% to 6 other antibiotics. ß -lactamase-producing strains were more prevalent among the low level methicillin-resistant isolates. meca was detected from all MRSAs, but none from MSSAs. fe ma was detected from all of the MRSAs and MSSAs and none in coagulase-negative staphylococcus. In conc1usion, hea1thy adults occasiona11y carη MRSAs, but they may have acquired them in hospitals. Fusidic acid and vancomycin should be useful to treat MRSA infection, while mupirocin should be useful to control nasal carriage. me 때 and fema may be used to differentiate MRSA from MSSA, and S. aureus from coagulsae-negative staphylococcus, respectively. Key Words : Nasal carrier, S. aureus, MRSA, ß -Iacfamase, meca, fema 이논문은 1999 년도원광보건대학연구비의보조로이루어졌음 1. 서로 Staph,ν 1ococcus aureus 는일부건강인의비 Jessen et a1., 1969). 우리나라에서는 1960 년 대에분리된포도구균중에는 MRSA 가없었으며 ( 박, 1969), 종합병원환자에서의분리율이 인강 (nasopharynx) 등에상재하는균종으로그 람양성세균중에서가장흔히화농성원외 (com 1976 년에는 5% 이었으나 ( 박등, 1977) 1994 년 에는 70% 로매우높아졌다 ( 이등, 1995). 병 munity acquired) 및 원내 (nosocomial) 감염 원직원의 10.8% 가비강내에 MRSA 보균자이었 을일으키는중요한병원균이다. 1941 년에 으며, 이들중 26.5% 는장기보균자이었다 ( 오 penicillin 이사용되기시작한이래로여러가지 등, 1997). 한편건강인의비인강내 MRSA 보균 항생물질의 실용화는감염증치료에큰공헌을 율이 2-6% 로보고 ( 김등, 1995) 되었는데이들 하였으나동시에항균제내성균의출현으로의료문제가되고있다. S. aureus중에 methicillin 내성 (methicillin-resistant S. aureus, MRSA) 인 것이 1961 년에영국에서최초로분리가보고 (Dowling, 1961) 된이후세계각처에서보고되 기 시작하였고 (Jevons et a1., 1963; Richard 이보유한세균이병원내에서전파된것인지병원외에서전파된것인지확실치않다. 또한 MRSA는 methicillin뿐만아니라 c1oxacillin, oxacillin, nafcillin 에대해서도동시에내성이고, cephalosporin 에대해서도내성을나타내는좋지않은특성이있다. MRSA는 ß -lactams, et a1., 1970), 그분리율이점차증가되어왔으 aminoglycoside, macrolides 와같은여러 항균 며 1972 년유럽에서의보고는 50% 라는높은 분리율을보고하였다 (Kayset and Mak, 1970; 제에대해흔히다제내성일뿐만아니라 methicillin 내성발현은배지의온도, ph, 식염 - 92 -
농도와같은여러가지의성장조건에영향을많를규명하고자하였다. 이 받으며매우복잡한유전적배경을가지므로 보통의항균제감수성검사로는검출해내기가 어려운것으로알려지고있다 ( 정, 1986). II. 실험재료및방법 Methicillin 의내성기전은매우복잡하여완전건강인의 MRSA 보균율조사를위해서는 히규명되지않았으나, ß -lactamase 의과잉생 1998 년 3-6 월에 339 명의원광보건대학임상병 산 (Sabath, 1982), 서 -lactam 항균제와친화리과재학생을대상으로하였다. 멸균된면봉으 성이낮은 penicillin-binding protein (PBP) 로비강에서검체를채취하였으며, mannitol 2' (2 허를생산하는 me 어유전자의발현 (Ubukata salt agar (MSA, Difc 이에접종한후통상방법 et al., 1989) 과 PBP 형의변화 (Wyke et al., 으로배양하였다 (Koneman et al., 1997). 1981) 때문으로생각되어왔다. 또한 meca 유전동정은혈액한천배지에서집락의형태, 그람염 자는 MRSA 이외에도 methicillin -resistan t coa- gulase-negative staphylococcus (MRCNS) 에도 색소견, MSA 배지와 DNase agar with methyl green (Difco) 에서의반응및시험관법 coagulase 존재하는것으로알려지고있다 (Yokoyama, 시험의결과를종합하여판정하였다. 분리된세 1991). 그러나 S. aureus 중의극히일부는 meca 유전자를가지고있음에도불구하고 methicillin 내성을나타내지않는균주도존재하 고, methicillin 내성은단지 meca 유전자의보 유에만의하지않음이보고되고있다 (Murakami et al., 1991; Tokue et al., 1992). meca 유전자주변에는 meca 유전자억제유전 균은감수성시험에쓰일때까지탈지우유 (skim milk) 에 넣어 -20 oc 에보관하였다. 한천 희석법감수성시험을위해서는 cephalothin, chloramphenicol, clindamycin, eηthromycin, gentamicin, penicillin G, tetracycline 및 vancomycin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.), fusidic acid ( 동화약품 ), mupi- 자인 meci 유전자, 유도유전자인 mecri 라고하는 rocin (Smith Kline Beecham) 의분말을사용 mec 조절유전자가있고 (Hiramatsu et al., 하였다. 1992), 염색체에있는 mec 이외의유전자즉 MRSA 판정은 oxacillin 디스크확산법 (NCCLS, fem 이라고하는유전자가 methicillin 내성의발 1993) 과 oxacillin 한천선별법으로하였다.Oxa- 현에관여함이밝혀졌다. 이들유전자는 MRSA cillin 한천선별법은 tryptic soy broth (TSB, 와 MSSA 에모두존재하나 coagulase-negative Difco) 에접종한균주를 McFarland 0.5 관탁도 staphylococcus (CNS) 에는없으며, fem 유전자로맞춘균액을면봉으로추가배지에접종하고, 에는 fema 를비롯하여 6 가지가있다 (Berger- 35 0 C 에 24 시간배양후증식된균주를 MRSA Baechi et 띠., 1992). 본연구에서는건강인의비인강내 S. aureus 와 MRSA의보균율을조사하고, 항균제감수성의양상을파악하며, 분리된포도구균의 a -lactamase 생성과메티실린내성정도와의관 계를비교하며, polymerase chain reaction (PCR) 을이용하여 meca 와 fema 유전자의분포 로판정하였다. 한천희석법 (NCCLS, 1993) 은 시험세균을 McFarland nephelometer 의 탁도로맞추고, 이것을다시 1 0.5 관 10 으로희석하 여 inoculator 로접종하고 35 0 C 에 24 시간항 온기에배양후판독하였다. 세균증식을완전히 억제시킨최소의항균제농도를최소억제농도 (minimum inhibitory concentration, MI C) 로 - 93 -
Table 1. Oligonuc1eotide sequen:ces of primers used for detection of the meca and fema gene from S. aureus Gene Orientation Primer Oligonuc1eotide sequence (5'-3') PCR product size (bp) - meca-1 ATGAGATTAGGCATCGTT1 C meα4 554 - meca-2 TGGATGACAGTACCTGAGCC - fema-1 CATGATGGCGAGATTACAGG fema 372 - fema-2 CGCTAAAGGTACTAACACACGG 판독하되 1 개의집락은무시하였다. 정도관리를 co., 대전 ) 을사용하였다. Primer-1 과 Primer-2 위해서는 S. aureus ATCC 25923과 Esche- 를각각 2 따, mixture reagent (dntp, Taq 바chia coli ATCC 25922 를동시에시험하여항 polymerase, MgCb) 4 μ, 8-MOP 9 따, DNA 균제의 MIC가허용범위에드는지를확인하였다 sample 3 μl을넣어 PCR반응의최종액을 20 시험된각항균제에대한감수성기준은 NCCLS 따로하였으며, primer와검체 DNA를제외한에따랐다. S. aureus 균주에서 oxacillin 최저모든반응액 (0.2 M datp, 50 mm KCl, 10 발육저지농도가 1-2 μgjml 인경우저농도내성으로, 4-16 μgjml 인경우중등도내성으로, 32 μgjml 이상인경우고도내성으로분류하였다. 더 -lactamase 의검출은 nitrocefin 디스크 (Cefinase, BBL, Cockeysvi11e, M) 법으로시험하였다. PCR을위한 S. aureus DNA는 microwave oven법으로추출하였다. 즉 1.5 μ tube 에 1 xwashing 용액 200 μ 와세균을섞어서우유벚정도의부유액을만든다음 8,000 rpm으로 2 분간원심분리하여세척한후 cell lysis buffer 30 μ (Genotek co., 대전 ) 을넣고완전히현탁시킨후광유 1 방울을넣은후원침하였다. Microtube를 microwave oven 에넣고 5분간 ( 출력 750 watt) 가열하여 DNA를용출하였다. Microcentrifuge를사용하여 12,000 rpm 에서 10분간원심분리한후, 상층액 3 μm를 PCR 반응에사용하였다. meca와 fema 유전자증폭을위한 PCR용 primer는이등 (1998) 의보고에따라서 (Table 1) 합성한것 (Genotek mm Tri-HCl ph 8.8, 1.5 mm MgCb 0.1% Triton x 100) 은실험조건을같게하기위해한 제조번호의상품화된 (Genotek Co. 대전 ) 시약을 -70 oc 에보관하면서사용하였다. PCR에서첫째 cycle은 94 0 C 에서 5분간 predenatura - tion, 60 0 C 1 분, 72 0 C 1 분으로하였고이어서 2-30 cyc1es은 94 0 C 에서 1 분, 60 0 C 에서 1 분, 72 0 C 에서 1 분으로 31 째 cyc1 e은 94 0 C 1 분, 7 2 0 C last extention 5분의조건으로 thermal cyc1er (Turbo thermal cyc1er, Bioneer, 대전 ) 를이용하여증폭하였다. PCR 산물은 1.2% agarose gel 상에서 140 vo1t 15분간전기영동으로분획하고 ethidium bromide로염색후특이적인띠 (meca, 554 bp; fema, 372 bp) 를자외선하에서관찰하였다. III. 결 과 1998 년 3 월부터 6 월사이에시험한건강한 - 94 -
Table 2. Isolation of S. aureus and MRSA from anterior nares of hea1thly individuals Subjects No. tested No. (%) positive No. (%) with MRSA Males 43 Females 296 Total 339 5 (12) 61 (21) 66 (20) o (0) 7 (2.4) 7 (2.1) Table 3. Activities of oxaci11in against MSSA and MRSA by agar dilution test Organism No. (cumulative %) of isolates inhibited at (μgjml) (No. tested) ::;;0.25 0.5 2 4 8 16 32 64 128 ~128 MSSA* 30 (n=30) (100) MRSA (n=16) * MSSA : Methicillin-susceptible S. aureus. MRSA: Methicillin-resistant S. aureus. 7 5 2 (44) (75) (88) (94) (100) 대학생 339 명의비강내 S. aureus의보균율은 20% 이었다. 여자의보균율은 21% 로남자의 12% 보다여자가다소높았다 (Table 2). MRSA 의보균율은 2.1% 이었는데여자에서만분리되었으므로여자의보균율은, 2.4% 이었다 (Table 2). Oxacillin 의 MIC 범위, MICso 및 MIC90는 MSSA균주에대해서는모두드 0.25 μgjml 이었으나, MRSA균주에대해서는각각 16-:~~ 128 μgjml, 32 μgjml, 및는 128 μgjml 이었다 (Table 3). 낮은 MIC 범위를보인항균제는, MSSA 에대해서 c1indamycin 르 0.5-1 μgjml, fusidic acid 드 0.06-4 μgjml, mupirocin 0.25-0.5 μgjml 및 vancomycin 1-2 μgjml 이었고, MIC 90는모두 2 μgjml 이하이었다 MRSA 에대해서낮은 MIC 범위를보인항균제는 fusidic acid 드 0.06-8 μgjml, mupirocin 0.125-0.5 μgjml 및 vancomycin 0.5-2 μgjml 이었고, 이들항균제의 MIC90는 c1indamycin을제외하고모두 1 μgjml 이하로 MSSA와큰차이가없었으며, mupirocin은 MSSA와 MRSA 에대해서도모두 0.5 μgjml로가장낮았다 (Table 4). MSSA와 MRSA 에대한항균제의 MIC 비교에서 (Table 4) MSSA에대해서비교적낮은 MIC 범위를보인항균제는 caphalothin 드 0.5-64 μgjml, eηthromycin 드 0.5-2128 μgjml, gentamicin 드 0.5-128 μgjml 및 tetracyc1ine 드 0.5-64 μgjml 이었고, 이들항균제의 MIC90는모두 32 μgjml 이하이었으며, 가장높은 MIC 범위를보인항균제는 chloramphenico12128 μgjml, penici11in G 르 0.5-2256 μgjml 이었 고, MIC 90는각각늘 128 μgjml, 는 256 μgjml 이었다. MRSA 에대해서비교적낮은 MIC 범위의항균제는 tetracyc1ine으로드 0.5-64 μgj m1이 - 95 -
Pνnιpμuω싸ω0.5 8 Table 4. In vitro activities of mupirocin and other antimicrobial agents against MRSA and MSSA Organism (No. tested) An timicro bial agent MIC (μgjml) Range 50% 90% MSSA (15) Cephalothin :::;;0.5 64 :::;;0.5 Chloramphenicol ~ 128 Clindamycin Erythromycin Fusidic acid Gentamicin Mupirocin Penici11in G Tetracyc1ine Vancomycin 드 0.5-1 :::;;0.5 으 128 드 0.06-4 드 0.5 128 0.25 드 0.5-256 :::;;0.5 rr~ 끼야이/i끼 8 는 128 :::;;0.5 드 0.5 0.06 0.5 64 :::;;0.5 1li /MRSA (17) Cephalothin 32 128 는 32 1li m PL 2 ~128 는 128 ~16 m 빼m 1 < nu 5 rl 는 128 :::;;0.5 ~128 ~4 m < nu 5 n m /m Fusidic acid Gentamicin Mupirocin Penicillin G Tetracyc1ine Vancomycin ζ0.06 ~128 4 ~128 8 32 는 256 16 0.5 2 MIC (μgjml) 01- breakpoint ( 직.~ of resistant 4 ~~ tant isolates 7 으 32 는 16 는 4 는 8 는 16 ~8 ~4 는 0.12 ~16 으 32 1l4 Fi u --L 1li --4 m o n o m o 긴η>- 뼈- ~128 32-128 0.125-0.5 128 - ~256 :::;;0.5 64 0.5 2 ~128 :::;;0.06 1 64 128 0.25 0.5 128 256 16 64 ~8 ~16 ~8 으 4 ~0.12 으 16 ~32 m mm 앙o m o m % 0 었으나 cephalothin, chloramphenicol, c1indamycin, erythromycin, gentamycin 및 penici11in G는모두드 0.5-128 μgjml 이상이었고, MIC 90는모두는 128 μgjml 이었다. 내성기준 (breakpoin t) 을적용하여내성균주의비율을비교하면 MSSA는 chloramphenicol과 penicillin G 에는각각 100%, 73% 가, cephalothin, eηthromycin, gentamicin, tetracyc1ine 에는모두 20% 이하가내성이었으나 c1indamycin, fusidic acid, mupirocin 및 vancomycin 에는 내성을보인균주는없었다. 한편 MRSA의내성비율은 chloram phenicol과 gentamicin 및 penici11in G 에는 100% 가, cephalothin 과 erγthromycin011 는각각 77% 와 82% 가c1in damycin과 tetracyc1 ine은각각 18% 와 59% 가내성을보였으나 fusidic acid, mupirocin 및 vancomycin 011 는내성을보인균주는없었다 (Table 4). - 96 -
르Table 5. Relation between the level of methicilin-resistance and 더 -lactamase production in MRSA Level of No. of isolates N o. (%) ß -lactamase resistance tested positive High 2 o (0) Intermediate 7 6 (85.7) Low 7 7 (100) Total 16 13 (8 1.3) Table 6. Detection of meca and fema genes from MRSA and MSSA Susceptibility to N o. of isolates meca fema methicillin tested No. (%) No. (%) MRSA 17 17 (100) 17 (100) MSSA 30 0 30 (100) *NT, not tested CNS 30 NT* 0 MRSA 에대한 methicillin 내성정도와더 CNS 는모두가음성이었다. -lactamase 생성과의비교에서 (Table 5) ß -lactamase를생성하는균주는 MRSA 16균주중에 13균주 (81.3%) 이었고, 이중 methicillin 에 N. 고찬고도내성 2 주는음성이었고, 중등도내성 7 주 Staphν lococcus 균속에는여러균종이있는데 중 6 주 (85.7%) 가양성이였으며, 는모두 (100%) 가생성하였다. 즉, 저도내성 7 주 ß -lactamase 1997 년까지 33 종이명명되었고, 이중임상겸체 에서는 17 종이알려져있으며흔히분리되는인 생성율은저도내성균주가고도및중등도내성 체의가장중요한병원성균종은 S. aureus 이다 에비하여높았다. ( 이등, 1998). 또한병원감염및항균제에대한 PCR법에의한 MSSA와 MRSA에서의 meca 다제내성을보이는 MRSA균주의보균상태는 3 와 fema 유전자검출에서 (Table 6, Fig. 1-2) 가지로구분할수있다고하였으며 ( 정등, MRSA 17균주중에서 meca 와 fema 유전자는 1997) 대상자중약 20% 는한가지형의 S. 모두양성이었고, MSSA 30균주는모두가 aureus를계속해서보균하는지속적보균자이고 meca 유전자음성이었다. 한편 fema 유전자는약 60% 는때때로보균하는간헐적보균자이고, MSSA 30균주 (100%) 모두가양성이었으나나머지약 20% 는보균하는일없는비보균자라 - 97 -
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 554 ~ Fig 1. Agarose gel electrophoreis of amplified 554-bp DNA fragments of the meca genes of S. aureus isolates by PCR. Lane M, a 100 bp size marker, lanes 1-6, MRSA str 려 ns; lanes 7-8, MSSA str 밍 ns; lanes 9 and 10, me 때 -positive S. aureus ATCC 33591 and -negative control (P. aeruginosa) M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 372 률 Fig 2. Agarose gel electrophoreis of amplified 372-bp DNA fragments uf the fema genes of S. aureus isolates by PCR. Lane M, a 100 bp size marker, lanes 1-5, MRSA strains; lanes 6-8, S. epidermidis; lanes 9 and 10, fema -positive S. aureus ATCC 33591 and -negative control (P. aeruginosa). 고하였다. 지속적인보균자는소아중에많고 (Cookson et 띠., 1989; Tanaka et al., 1992) 입원중에다른균주의획득을막는보호작용이우리나라에서는이러한보고는드물어서건강인있으나항균제치료를하면보호작용이감소된다혹은병원에종사하는사람들에서의 S. aureus 고하였다. 따라서병원에서 S. aureus를획득와 MRSA 보균율을조사하는것은이세균감하고전파하는사람은주로간헐적인보균자와염의예방에대한문제점을해결하는데역학적인항균제치료를받는지속적인보균자로알려지고의의가있으리라고생각된다 Tanaka 등있다. MRSA는환자뿐만아니라의료인, 병원 (1992) 에의하면의과대학생 70 명에서 S. 환경및건강인의전비공 (anterior nares) 에서 aureus 17주 (24.3%) 가분리되였는데이중도종종분리되는것으로알려지고있으나 MRSA는없다고하였고, 김등 (1995) 은 1994-98 -
년에서 1996년사이에대학생 867 명 중에서 S. 는 penicillin G에는 73% 가, gentamicin 에는 aureus가 14.8%, MRSA는 0.5% 를보고하였으 20% 가, etythromycin과 tetracyc1ine 에는각각 나역학적인조사는없었다. 저자들연구에서는 13% 가, cephalothin 에는 7% 가내성을보였으 건강한 대학생 339 명의 비강검체에서의 S. 나 c1indamycin, fusidic acid, mupirocin 및 aureus 분리율이 20% 이었고, 이중남자는 12%, vancomycin 에는내성균은없었다. 한편 MRSA 여자는 21% 이어서 Tanaka 등 (1992) 의 는 gentamicin과 penicillin G 에는 모두가, 24.3% 보고보다낮았으나큰차이는없었으며 etythromycin 에는 82% 가 cepha10thin에는 또한남자가여자보다낮은것은대상이대부분 77% 가, tetracyc1ine에는 59% 가, c1indamycin 에 여자였기 때문으로 생각되었고, Kluytmans와 는 18% 가내성으로 MRSA보다내성율이현저 Belkum (1997) 가 보고한 일반인에서 S. 히 높음을보였으나 fusidic acid, mupirocin aureus의 보균율 19-50% ( 평균 37%) 범주에 및 vancomycin 내성균주는 없었다. Fusidic 포함되었다. 그러나 MRSA가근년에병원외감 acid 감수성시험방법이 NCCLS 의 표준방법에 염을일으켰다는보고와 MRSA에감염된성인의 는수록되어있지 않으며, 디스크의 제조회사에 28-4 1% 는입원전에감염되었다는보고가있으 따라디스크농도및감수성으로해석하는억제 며, Adcock 등 (1998) 은탁아소소아 38 명 중 대의지름도다르다 ( 정, 1986). 10 μg 농도의 9 명 (24%) 에서, 다른한곳에서는 61 명 중 2 명 디스크를썼을때감수성으로해석하는억제대의 (3%) 에서 MRSA를분리하였는데병원에서유래 지름은는 22 mm (Oxoid) 이며, 본연구에서는 되었다는증거를찾지못하였다고하였다. 오등 MIC 드 2 μgjml를감수성으로, ;;:::: 16 μgjml를 (1997) 은 1997 년에 MRSA 감염 유행시 병원 내성으로해석하는 Oxoid (England) 회사의 기 직원의 비강내 MRSA 보균율을조사하였는데 준을택하였다. MRSA 소수균주는 fusidic acid 10.8% 가보균자이었으며, 이들중 26.5% 는장 에내성이었다는보고가있으나 (Dixson et al., 기간보균자라고하였다. 본연구에서건강한대 1985) 대부분의 연구에서는 fusidic acid 의 학생 7 명 (2.1%) 으로부터 MRSA가분리되었는 MIC가대단히낮고 (Chokkavelu et al., 1984; 데 이 중 2 명은대학병원종사자이고나머지 5 Markowitz et al., 1983; Foldes et al., 1983; 명은 1 개월에서 10월사이에종합병원에서환자 Graninger et al., 1985) 내성균주가드물다고 와 1 주일이상접촉한일이있었던사실로보아 보고되어있고, MRSA의 다른항균제에대한감 7 명 모두병원내 획득으로추측되었고, 이러한 수성에 관계없이 fusidic acid 의 MIC는 보균자로부터건강한다른사람에게도전파될가 0.03-0.12 μgjml 정도로대단히 낮은것으로 능성이 있다하겠으며 앞으로 MRSA는병원내 알려져있다. 이 연구에있어서는 methicillin 감 감염뿐만아니라병원외감염도우리나라에서도 수성에관계없이 fusidic acid 의 MIC는 0.06-8 발생할가능성을배제할수없으므로병원에내원한사실이없는건강인을대상으로더많은연구가필요하겠다. MRSA는대부분다약제내성이므로 (Locksley μgjml 이하로다른외국보고자들보다다소높았으나 MIC90은 1 μgjml로낮았다. Mupirocin (Slocombe and Perty, 1991) 은 Pseudomonas ηuorescens가생성하는항균제 et al., 1982; Crossly et al., 1985) 환자치료 로세균의 isoleucyl-trna synthetase와결합 가어렵다고알려져있다. 본연구에서도 MSSA 하여 RNA의 단백질합성을저해하여항균력을 - 99 -
나타낸다. MSSA 와 MRSA 에대한항균력이크 고다른세균에대한항균력이적은 mupirocin MRSA 가메티실린을포함한 ß -lactam 제에 내성을획득하는기전은 Sabath (1982) 는 β 의연고제는비강에서이세균을제거하기에유 -lactamase 의 과잉생산, Ubukata 등 (1989) 은 용함이알려져있으나이 항균제에내성인균주 셔 -lactam 제에저친화성을보이는 PBP 2a 를 가외국에서보고되고있다. Mupirocin 의내성 breakpoint는는 4 μgjml로권장되고있다. 이등 (1995) 은 1994 년에종합병원환자에서분리된 MSSA와 MRSA에 mupirocin 의 MIC는모 생산하는 meca 유전자의발현, 또 Wyke 등 (1981) 은 PBP 형의변화라고하였다. ß -lactamase 를다량으로생산하는포도구균은 a -lactam 제제에저도내성으로되는것이보고되 두 0.06-0.125μgJml 로보고하였다. 이 연구에서 었다 (Ncdougal and Thornsberry, 1989). 그 는 MSSA 와 MRSA 의 MIC 는각각 0.25-0.5 μg 러나平松 (1992) 은더 -lactam 제제에대한중 Jml, 0.125-0.5 μgjml 이고, MIC90은 0.5 μg Jml로는 4 μgjml를내성으로해석하면 mupirocin 내성인 MSSA와 MRSA는드물며따라서 mupirocin 연고제는 MRSA 비강보균자를줄이는데이지역에서는유용하다하겠다. Vancomycin은 Streptomνces orientalis가생성하는항균제로써세포벽의합성을저해하는살균성 등도이상의내성은공통적으로 PBP 의변화에 의하여초래된다고하였고, Yokoyama ( 權山, 1991) 은메티실린내성정도에따라 a -lactamase 양성율의차이를보고하였다. 본연구에서도 MRSA 중고도내성 2 균주는더 -lactamase 생성주가없었으나중등도내성 7 주 는 85.7%, 저도내성균주는 100%7} ß glycopeptide 계열로 MRSA 에 대한 MIC 가비 -lactamase 를생성하며, 서 -lactam 제제에 내성 교적낮은것으로현재사용되는제제중에임상적으로효과가있을정도로친화성이큰것은없다고간주되고있다. 또한 S. haemolytiαs 중에는 vancomycin 내성인균주가있지만 S. aureus나그밖의 Staph,νlococcus 균종중에는내성인균종이없는것으로알려졌으나 1997년에일본준텐도병원에서 vancomycin의 MIC가 8 μgjml 인 MRSA (Hiramastsu et al., 1997) 가보고되었다. 이세균은전자현미경소견에서 vancomycin 내성은세포벽의두께가정상세균의 2 배가됨이관찰되었고, PBP 2 와 PBP 2a의생성량이 3배로증가된점으로미루어세포벽합성의증가때문으로추측하고있으며, 이병원에서분리되는 MRSA의 2% 는이와같거나유사한균주라고하였다. 본연구에서 vancomycin의 MSSA와 MRSA의 MIC는각각 1-2 μgjml, 0.5-2 μgjml 이고, MIC90은 0.2 μgjml로낮았다. 정도가낮은균주의생성율이높게나타났으며, Mcdougal과 Thornsberη (1989) 의보고와일치하였다. MRSA와메티실린내성 CNS모두에서공통적으로 meca 유전자의산물인 PBP 2a에의한내성기전이있는것으로보고되어있고 (Chamber and Hackbarth, 1987), 이러한 meca 유전자가 c10ning되고 (Matsuhashi et al., 1986), 서열이결정되었다 (Song et al., 1987). 김등 (1993) 은 MRSA 40균주에서, Yokoyama (1991) 는 MRSA 30주중에모두를, Tanabe 등 (1993) 은 MRSA 62주중 9 1. 9% 에서, 이등 (1998) 은 MRSA 48주중 31.2% 에서 meca 검출을보고하였는데저자들은 MRSA 17주중에 17주 (100%) 모두에서 meca자검출되어 MRSA 확인시험으로활용될수있다하겠다. 염색체에있는 mec 이외의유전자즉 fem 유전자가메티실린내성의발현에관여함이밝혀졌으며 fema를비롯하여 femb, femc, femd, feme 및 - 100 -
femf의 6종류가알려지고있다 (Berger-Baechi et al., 1992). Oshima 등 (1993) 은 fema 유전자가 MSSA와 MRSA에는검출이되나 CNS 에서는검출이안된다고하였다. 이연구에서 MRSA 17주와 MSSA 30주모두에서 fema가 검출되어이등 (1998) 의 MRSA 43주중 60.5% 에서검출한것보다는높게나타났다. fema는메티실린내성의발현에관여하는유전자조사뿐만이아니라 S. aureus와 CNS를감별하는데유용한자료로활용할수도있다하겠다. damycin 의내성은 18% 이었으나시험된 6가지항균제는 59% 이상내성을보였다. MRSA의 3 -lactamase생성율은메티실린고도내성주보다는저도내성인주가높았다. MRSA는모두가 meca유전자양성이었으나 MSSA는모두음성이었고, fema유전자는 MRSA와 MSSA 모두가양성이었으나 CNS는모두음성이었다. 이결과에서건강인의비강에서분리된 S. aureus중에도 MRSA가드물게있으나대부분은원내에서전파된것으로추측되며, MRSA 감염 의치료에는 fusidic acid 및 vancomycin 01 유 V. 결료르 L- 효하게사용할수있겠으며, mupirocin 은보균 자치료에유용할것이며, MRSA 감별에는 meca 1998 년 3-6월에원광보건대학학생들의비유전자가 S. aureus와 CNS균주의감별에는강내 S. aureus 보균율에대해서검토하였고, fema 유전자가이용할수있다는결론을얻었분리된 MSSA 일부와 MRSA균주에대해서한천다. 희석법으로 MIC 를시험하였고, 또한 meca 와 fema유전자를 PCR로검출하였으며, MRSA균주에대한메티실린내성정도와더 -lactamase 생성유무를비교하여다음과같은결론을얻었다. 건강인 339 명중에서의 S. aureus의분리율은 20% 였고, 여자에서는 21% 로남자에서의 12% 보다다소높았으며, MRSA는 7명 (2.1%) 의여자에서만분리되었다. MSSA 에대해서는 clindamycin, fusidic acid, mupirocin 및 vancomycin 의항균력이가장켰으며, 모두 MICs o는 1 μgjml 이하였고, MIC90는 2 μgjml 이하였다. MSSA의 cephalothin, eηthromycin, gentamicin 및 tetracycline 에대한내성율은 20% 이하이었고, chloramphenicol과 penicillin G 에대해서는 73% 이상이었다. MRSA 에대한 oxacillin 의 MIC 범위는 16- 는 128 μgjml, MIC so는 32 μgjml, MIC90는 128 μgjml 이었다. MRSA 에대해서는 fusidic acid, mupirocin, vancomycin 의항균력이가장켰으며, MICs o 와 MIC 90 는모두 1 μgjml 이하였다. Clin- 참고문헌 1. Dowling HF The newer penicillins. Clin Pharmacol Ther 2: 572-580, 1961 2. Jevons MP, AM Coe, MT Parket Methicillin resistance in Staphν lococci. Lancet 1: 904, 1963. 3. Richard DO, WD Lawrence, JD Bonnie, NB Harη resistan t Stap 때 lococcus An outbreak of methicillin aureus infection. JAMA 213: 257, 1970. 4. Kayset FH, TM M 밟 : Methici1lin-resistant stap h,νlococci. Am J Med Sci 264: 197, 1970. 5. Jessen 0, K Rosendal, P Bulow, V Faver, KR Eriksen Changing Staphνlococci and staphylococcal infections. N Engl J Med 281: 627, 1969. 6. 박승함 : 한국인환자에서분리된병원성세 - 101 -
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