임상병리검사과학회지 : 제 30 권제 3 호 1998. 세균배지의청도관려에관한검토 경북대학교병원엄상병리과 대구보건대학 검경숙 조규현 성희락 이석구 이해숙 이건섭 An Experience of Quality Control in a Clinical Bacteriological Laboratory Kim, Kyung sook., Cho, Kyu Hyeon., SUng, Hee Lag., Lee, Seok Gu., Lee, Hae Sook. Lee, Gun Sup Dept. 01 Clinical Patholo6Y, KyUIt 앞 'HJOk National University Hospital Dept. 01 Clinical 파 tholo6y, Taegu Hea1th College, 돼 egu, Korea* To estirnate the accuracy, 하 ficiency and 11 야 roducibility of the 않 st res 버 ts of c1 i 띠 cal 않 teriol 맹뎌 1 1 삶 XJra 따 y, we evaluated the prlonnance 않 st 때 sterility test for the n 빼 la and iæi1' 디 fica 디 on 1 많 gents from May 1 얽 7 야 1fOugh Ikember 1917. The results were; 1. By the sterility test for media, no contaminated organisms were is 이 ated. 2. By the performance test of the enrichment media, selective differential media, biochemical meida and identification reagents for the positive and negative control organisms, the acceptable data were yielded. 3. It should be boiled for 60 minutes that the best effective result of MacConkey agar, xylose lysine desoxycholate(xld) agar and salmoneliashigella(s-s) agar can be obtained and for the growth on the media bacteri 머 colony count must be more than 3 x 3-4 / ml. 4. The MacConkey agar showed the best growth of the three selective medium and XLD agar showed better detection for salmonella than S-S agar. 5. It showed that UV -light and dry media make the bacterial growth to be inhibited. For the best isolation and identification of the bacteria from the samples, we should always perform the quality control adivites in dinical bacteriological laboratory. -97 -
1. 서론 검사실에서의정도관리란검사결과의분석 전 brain-heart infusion broth(blll, Difco 뎌b., 미국 ) 는회사의지시대로직접만들어사용하였고, 혈액한천배지 (BAP, 삼광제약, 한국 ) 와효콜렛한천 후의모든과정에관여하는인력, 장비, 환경등의오류의원인을조기감지예방하며오류가검사결과에미치는영향을최소화하여신뢰성있는검사결과를만들고자하는모든노력이라고정의할수있다. 미생물검사실도다른검사실과마찬가지로정도관리가필요하며특히업무의특성상기계로검사하는검사실과는달리주로검사자의판단에의한수작업에의존하여검사가이루어지고, 또한검사실자체에서여러종류의배지를포함한시약을만들고있는실정에있다. 감염의원인을규명하는방법의하나로서미생물배양검사는세균의분리와동정에사용되는배지로서검체내에있는목표로하는세균올키워야하고, 또한나타난그반응으로써성상을결정하여미생물을동정하고있어임상미생물검사실에서수행되는검사업무의우수성은그검사 배지 (CAP, 삼광제약, 한국 ) 는상품화된배지를구 입하였다. 감별선택배지로 5종즉MacConkey agar(bbl, 미국 ), eosin rrethylene blue agar (Erv멈, BBL, 미국 ), xylose lysine desoxycholate agar CXLD, BBL, 미국 ) Loewens않in Jens없 n빼um (LJ, 삼광제약, 한국 ), {X)tato coi11iæal tween 00 ag뻐pcmf, 자가제조 ) 를사용하였고1 생 화학성상을동정하는배지로 11종즉, Simrmn s citrate (BBL, 미국 ), 벼미e sugar iron rr빼ia(tsl, BBL, 미국 ), m피lity rr뼈ia(difco 닙b., 미국 ), omith뾰 æcarooxyl뿔 (Difco Lab., 미국 ), Dì' 업se agar (BBL, 미국 ), bile esculin 떻ar{Difco Lab., 미국 ), urea broth{bbl, 미국 ), lysine decarboxylase (Difco Lab., 미국 ), ar링 nine 이hydrola se(showa, 일본 ), nitra않 I벼uctÎon(BBL, 미국 ), ind이.e test rr빼-um{difco Lab., 미국 ) 올사용하 였다. 실에서사용하고있는배지자체의품질에직접 그람염색시약 (Muto, 일본 ) 과항산균염색시 관련되어있다고할수있다. 그러므로 배지의 정도관리는목표로하는 미생물이배지상에서 증식되느냐여부와그미생물이나타내는물리, 화학적성상을확인하는배지의작업능력 ( 않fo nnance} 과배지조제상의오류를평가하는작업 이라고할수있다. 저자들은임상미생물검사결과의신뢰도를높 일목적의일환으로현재임상미생물검사실에서 제조하여사용하고있는증균배지와감별겸선택 및 동정용 ( 확인, 감별 ) 생화학배지의 멸균시험과 작업능력을 1æ7년 5월부터 12월까지조사하여 얻은결과를보고하는바이다. 11. 재료및방법 1. 재료증균배지로다noglycollate broth(bbl, 미국 ) 와 약 (Muto, 일본 ), cata1ase 검사에이용되는 3% 뀔 @ αlaglùase 검사에이용되는인혈청, 납 lcitracin disk(bbl, 미국 ) optochin disk(bbl, 미국 ), oxidase 검사에이용되는자가제조시약및 g.enn tube 어 l 이용되는혈청을조사하였다. 배지성능을검사하기위하여사용한균주로는 임상가겸물에서분리하여 vi 뼈 시스템 (biom 꾀많 x, 미국 ) 에으로동정된, Proteus mirabilis, Pnα 따 s v. 띠 g 따 s, salηrnella ljlj 벼., 당 7terdxx:ter c/,αzcae, Klebsiella pneumoniae, Serratia m:jrl escens, AcinetOOacter baunrirv1ii, PseudormrrJs aeru양 no있 :, EnterocooαJS faecalis, Staphylococcus αlreus, cægulase n멍ative staphylcεcεcus, group A str받jtococcus, Streptαxxcus mitis, viridans s 뾰 ptoccεcus, Strept,αXJCCUS pneumaψe, MycobacterÍl.un tubeti따 osis, Candida a1bimns 및 Aspergillus jionigatus등 19종이었 으며, M)α 故 terit.un tubenαllosis (35-26 OC) 에 -98-
Table 1. Perfonnance of enrichrrent ar념 su아 :nrtive rr빼la lv1t 영 la S 없 in 않 sted No.of 않st stams 1bioglycollate broth GnαIP A Streptlαaχus Result Brain-heart infusion broth Candicb a1bi01l1s 5 with cycloheximide Aspergillus.fumi따us No growth Blcx 성 agar 미 ate Chocolate agar 때ate StreptαXXXlJS P1e1.1l1'U1iae Group A Streptlαxxcus, B-hermlysis 40 StreptαXXXlJS mitis, a -hermlysis Streptαxxcus Table 2. B 하 onnanæ of d.ifferen 디외 m 념 S 리 ec 디 ve rr 빼 ia M 혀 ia No. of test Strains tested Result st:rams MaCC짜lkeyagar Eroli. rose 1벼 Proteus mirabilis 15, colorless No growth 과 1tercoccus faed 띠 is Eosin ræthylene bl많 agar E roli. black with 5 Proteus mitφilis 하없1, colorless Xylose lysine Salmmella ~ 따., I벼, black 5 desoxycholate agar E roli No growth or yellow Loewens떠 n-jensen m벼ilul1 Myαkχterium tuberrusis Potato comrr월1 tween Candida a1bilα1i1s 00 agar with cycloheximide Aspergillus fumi흉jtus No 서 4 주 ), C a1bimns 및 Afumi 양 πusg30 C 에서다. 또작업능력시험은배지를새로만들거나 송 } 루 ) 를제외한일반세균들은사용하기효 } 루전에새로구입할때마다배지중에서무작위로추출 tlúolglycollate 배지에접종하여 35-:E oc, 18 - 하여시험하였으며, 양성및옴성대조균주를표 24 시간동안증균하여시험균주로사용하였다. 2. 방법 멸균시험은새로만든배지는약 5% 를대표적 으로표출하여 35-:E oc 에서 18-24 시간배양하 준량 (l\facfarland s 떠때때 tube No. 1.0 올표준 백금이를사용 ) 을접종하므로써시험올하였다. 증균배지, 감별선택배지및생화학동정용 ( 확인 및감별 ) 배지중자가제조를하였던것들은배지 를물에녹일때배지성분의변질을염려하여중 탕을하였고, 열에의한성분의변질올관찰하기 여오염여부를확인하였으며, 진균이나다른발위하여서는,:Ð 분, 00 분, 1 찌분동안끓는물에중 육이늦은오염균은 35-36 oc 2 일간배양한후탕하였다. 멸균방법으로는 121 "C æ 분간고압중 실온에서 5 일간방치하여오염여부를확인하였 기멸균법을사용하였으나, XLD 와 ss 는고압증 -99-
Table 3. 1밟onmnce 뼈 average colony nurrters of l\1ala파ey ag따, 져rlose lysine <ÈSoxycholate Mar and salmonella-shü~ella Mar by boiling tiræ CFlJ (min) Salmonella t1'phí MacConkey XLD ss MacOJ 따 ey XLD ss 30 00 1 30 00 13:> 30 00 13:> 30 00 1 30 00 13:> 30 00 13:> 3x lo U 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.5 0 0 0 3x 1 2 3 0 0 0 0 0 0 0 2 3 2 0.5 0.5 1 0 3x1 앤 6 6 6 0 0 0 0 0 0 7 9 7 3 5 4 l 2 2 3x1 앤 40 40 40 0 0 0 0 0 0 fi) 45 fi) 3:> 2) 15 18 18 18 3x 4 >lw >lw >lw 0 0 0 0 0 0 3x1(f >lw >lw >lw 0 0 0 0 0 0 >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw >lw * colony forming units/ul. inoculum.; **. Xylose Iysine desoxycholate agar; ***. Salmonella-Shigella agar Table 4. Perlormanæ of biochemi떠1 reac디 on rr때ia Ma: 퍼a Test organism Test no Result Sirrnmn scitrate Klebsiella pnwemoniae, bl많 E t/i Triple sugar iron agar Proteus mirabilis KlAG,Ii2S NAG Pseudornorns aen핑í1unl K!K Motility m핵um m Klebsiella pneunη1뼈 F뺑ative α끼ithine decarboxylase Enterobacter dαχræ, violet Pnαeus mirabilis DNase agar Staphyl,αXJCCUS α.lt'eus 때와따 se ne 聊 fve s, 짜까 yl,αvccus Bile esculin agar EnterlαXJCCUS fael때 'is 1fT'αψ A streptαxjccus Urea broth Proteus v띠흉uis E 따 i Lysine decarboxylase Salmonella typhi Proteus v띠αuis Arginine dihydrolase Enterobacter dαu:ae Proteus v띠 'RC1ris a Posi디ve, black f 쩔ative, red F뺑ative, violet, violet Nega디 ve Nitrate reduc디on Pseudornorns aen핑ínαii Posi디ve, J벼 Acintetobacter baum::innii Nega디 ve Inφ,le reac디on, red Klebsiella αleul11lx1 뼈 F 뺑 ative -0 -
Table 5. Perlonnance of stains, biochemica1 reaction 뻐d 버fferential disk tests. Stain and 않 st Testo 멍 anism Test no Result Gram stain S따껴1[,αg찌S αu-eus l/wæk Dark blue. violet Red Acid fast s떠in Mycobacteriuym tuben다 Jlosis liwæk Red E co/i Blue Catalase test S때짜,/,α:occus aureus l/day GrOlψ A Streptoco<χ:us @ 쟁띠ase test StaJ껴 '/1αXJCCUS αu-eus liday Agglutination G찍 'glase negative s, 따쩨,[,αxxrus No agglutination 않 :teitracin 이sk 않st GrOlψ A Streptococcus >15mm GrOUP C Streptococcus Optochin disk 않st StreptOlχ)CQJS pnet.ma7iae 츠 14mm Streptococcus mitis <1강run oxi 없 se test Pse, 따 :kxrr:n1s aen 핑 Íf1(ßl Genn tube test Candicb albicans ν'day 기멸균올하지않고완전히녹올때까지끓인후사용하였고감별선택배지의민감도를확인하기위하여는대조균주를 l\1acfarlar닙 s turbi벼iretry 로집락수를조사하여 1.0 혼탁도를 0.45% NaCl 용액으로 배수연속회석하여접종하였다. 111. 성적증균배지의정도관리는배지를새로만들거나, 구입한평판배지는새로들어올때마다시험하였는데모두만족할만한성적을나타내었다 :(Table 1) 감별선택배지의수행능력은배지에붙어있는라벨의요구와일치하는성적올나타내었다. (Table 2) 감별선태배지의중탕시간에의한배지의변성과민감도를조사하기위하여실험을 7번하였는 데, Mac co따 :ey agar, XID 및 Sa1rmnella Shigella배지에 와 S Ó'J뻐i를 배수연속 희석하여접종한결과는다음과같았다.<1 닙 :ble 3) 생화학동정용배지의수행능력은배지에붙어 있는라벨의요구와일치하는성적을나타내었다 (Table 4). 그람염색및항산균염색시약및주요동정용 시혐의수행능력은 Table 5 에나타나었다. IV. 요약 저자들은임상미생물검사결과의정확성, 신뢰 성및재현성올높일목적의일환으로현재임 상미생물검사실에서제조하여사용하고있는배 지와동정용검사시약의작업능력과멸균시험을 1937 년 5 월부터 12 월까지조사하여아래와같은 결론을얻었다. 1. 배지의멸균시험으로오염균올확인하였으나 오염균은없었다. -1 -
2. 증균배지, 감별선택배지및생화학 ( 감별, 확않 h 어., c.v. Mosby Co., St. 1ρ 띠 s (1982) 때 인 ) 배지및동정용시약의양성및음성대조균주 15-16 에대한수행능력검사에서는모두예상되는반웅 2. Dharan M Tota1 Quality Control in the 을나타내었다 Clinical LavoratOIY C.V. Mosby Co., St. 3. MaCCO따ey agar, XlD agar 및 S-S agar Iρ버 s (lgη) 때. 'ðl-없7 는 % 분끓이는것이가장효율적이며, 집락수가 3. Finegold SM Di떻nos디c Microbiol( 핑y, 3x1d- 4 /m1 은되어야균주성장이되었다. 4. 감별선태배지에서는 MacConkey agar 에서 가장잘자랐으며 S-S agar 보다는 XlD 떻 ar 에 서 salrmnella 검출률이높았다. 5. 그외자외선과건조에의하여서도배지가 변성되어균주의발육이억제됨올확인할수있었 다. 철저한정도관리를통하여배지와시약의수행 능력올최고로유지하므로써 미생물의분리와 정확한균주의동정이가능할수있다고결론지 올수있었다. 참고문헌 1. Bauer JD : Clinical Laboratory Methods, 7thed, C.V. Mosby Co., St. 1ρ 비 s (l~) pp. 23-27 4. 박승함 : 배 at 아미생물학검사정도관리소고, 감염, Vol. 13, No. 1,1-15, 1~ 1. 5. Ra 많 æl SS Lynch's l\ 때 ical Laboratory Technol( 핑 y, 4 단 1 어., W.B.Saunders Co., Philadelphia (1ffi3) w. 349-3fj) 6. Sinnenwirth AC, Jarett L Gradwohl s Clini떼 Lab야atory Methcxls and Di떻nosis, 8th ed, C.V.Mosby Co., St. Lo버 s (l9ð) w. 1478-14ffi 7. 이원길 : 세균배양용배지의정도관리임상병 리와정도관리학회지 Vol. 8, No 2, H 훌 8. 이경원. 정윤섭. 이삼열 : 최신진단미생물 p. 46-49 (1 댔 ) -2 -