01_0274_소음

KOREAN JOURNAL OF ICHTHYOLOGY, Vol. 2, No. 3, 149-155, Septemer 28 ISSN: 1225-8598 Reeived : July 14, 28 Revised : Septemer 17, 28 Aepted : Septemer 19, 28 소음스트레스가조피볼락, Sestes shlegeli 의 ortisol 과 gluoortioid reeptor 의발현에미치는영향 심민경 한경남 인하대학교해양과학과 Effets of Noise Stress on Cortisol nd Gluoortioid Reeptor Expression of Koren Rokfish, Sestes shlegeli y Min Kyung Shim nd Kyung Nm Hn (Deprtment of Oen Siene, Inh University, Inheon 42-751, Kore) ABSTRACT The effets of noise stress respoe on hemtologil prmeters (hemogloin, hemtorit nd MCHC) nd plsm prmeters (ortisol, gluose nd lumin) in Koren rokfish (Sestes shlegeli), very importnt ommeril mrine fish in Kore, were investigted. These prmeters were nlyzed on fish exposed to n explosion of noise. There were no signifint differenes or trends in hemtologil prmeters (hemtorit; ontrol 29.7±4.8%, experiment 32. 35.5%; hemogloin; ontrol 6.5±.7 g/dl, experiment 6.2 7.8 g/dl; MCHC; ontrol 19.6±.6 g/dl, experiment 19.9~ 22.2 g/dl). However, plsm ortisol nd gluose exhiited signifint differenes from strt to finish nd displyed the following ptter (ortisol; ontrol 18.7±35.4 ng/ml, experiment 247. 444.5 ng/ ml; gluose; ontrol 32.5±6.3 mg/dl, experiment 5.5 19. mg/dl). In ddition, the gluoortioid reeptor (GR) mrna expression nd sl levels of vrious tissues (eye, gills, liver, intestine, skin nd gonds) were investigted for the first time in this mrine fish. When the Koren rokfish ws exposed to explosive noise stress, the GR mrna ws expressed more in the gonds thn in other tissues tested nd ws elevted signifintly from two nd four times in the liver nd gills, respetively, fter noise exposure. Key words : Noise Stress, hemtologil prmeters, ortisol, Koren Rokfish (Sestes shlegeli ), gluoortioid reeptor mrna 서 최근해양활동의현저한증가로다양한인위적인소음이증가하여어류가수중에서생활하는데방해를받아스트레스반응을나타낸다 (Gu nd Choi, 26). 이러한스트레스를받은어류는스트레스상황을인지함과동시에 ortisol을분비한다 (Sturmhofel nd Brtke, 1998). 분비된 ortisol은 gluoortioid 호르몬의일종으로혈액을통해조직내로들어가조직내의 gluoortioid reeptor (GR) 와결합하여조직내의 glyogen을분해하여 gluose를혈액내로방출하며이를에너지원으로사용, 스트레스상황에 론 교신저자 : 한경남 Tel: 82-32-86-864, Fx: 82-32-862-5236, E-mil: knhn@inh..kr 대처함으로항상성을되찾게되므로 ortisol과결합하는 GR mrna를정량하면스트레스에따라유전자수준에서어류가얼마만큼생리학적으로스트레스내성에대하여활성되었는지알수있다 (Bong, 1997). 지금까지소음에관련한국내연구로는양식가물치의행동에미치는파일작업소음의영향 (Shin, 1995), 양식향어의행동에미치는발파작업소음의영향 (Shin, 2) 등이있고국외연구에는소음에노출된 goldfish의스트레스반응과청각손실에관한연구 (Smith et l., 24), seismi irgun 소음이민물어류인 Esox luius, Coregonus nsus 및 Couesius plumeus의세종에미치는영향 (Popper et l., 25) 등으로국내외적으로민물어류에관한연구가대부분으로소음스트레스가해산어류에미치는영향은거의알려진바가없다. 149 http://www.fishkore.or.kr

15 심민경 한경남 따라서본실험에서는연안정착성해산어류인조피볼락이받는소음의영향을혈액학적지표와스트레스지표로알려져있는 ortisol 등의호르몬의변화를통하여알아보고자하였다. 또 GR mrna를분자생물학적방법으로정량하여소음에노출된시간에따른유전자수준에서의변화를관찰하여 ortisol과의연관성을확인하고, GR mrna의염기서열을밝혀향후해산어류의스트레스연구에도움이되고자본실험을실시하였다. 재료및방법 1. 실험조건조피볼락 ( 평균체장 : 27.1±.2 m, 평균체중 : 335.9± 12.98 g) 을 1 L 둥근플라스틱수조에서약 1주일간순치시킨후실험에사용하였다. 순치기간에체중의 2~1% 생사료를 1일 2회 (8 : 3, 15 : ) 공급하였고실험하루전부터절식하였다. 실험수조 ( 길이 3 m, 지름 65 m, 부피 1.3 m 3 ; 한면에스피커장착하여소음원발생 ) 에서소음노출실험구 (2마리) 와대조구 (3마리) 를순치시킨후실험을실시하였다. 실험하는동안먹이공급을하지않았으며폭기는 155~165 ml/min 및 DO 6.4~7.3 mg/l로유지시키면서지수식으로관리하였다. 스트레스원으로시화호조력발전건설현장에서발파시발생되는소음을수중에서녹음한최대치음압평균 212 db/up, 충격파최대음압음원준위 254 db/up의소음을사용하여실험하였다. 샘플채취는소음스트레스에노출시킨직후와 2, 6, 12시간후에바로실시하였으며총 12시간동안실험하였다. 2. 혈액학적제지수소음에노출시킨직후 2-phenoxyethnol (1 : 1; Sigm, MO) 로마취후2분이내에 2 IU/mL heprin sodium 처리된주사기 (3 ml-23 G) (BD Dignostis, UK) 로미병부혈관에서채혈하여즉시 hemogloin (H) 과 hemtorit (Ht) 을측정하였고평균혈구내헤모글로빈농도 (Men Corpusulr Hemogloin Conentrtion, MCHC) 도구하였다. Cortisol 농도는 rdio-immunossy (RIA) 로분석하였고 Gluose는 hexokinse method 을이용하여 NADH의흡광도증가율을측정하였으며 Alumin 농도는비색종말법을이용하여정량적으로 BCG (Bromresol green) 와비례결합을유도하여 596 nm에서흡광도를측정하였다. 3. 유전자염기서열분석과정량분석 분자생물학적분석을위한재료는 2-phenoxyethnol (Sigm-Aldrih, MO) 로마취후해부하여눈, 아가미, 간, 장, 생식소및피부를각각절취하여 RNA lter (Sigm- Aldrih, MO) 에담아분석전까지-7 C 에서냉동보관하였다. 각조직샘플에 Axygen kit (AxyPrep Multisoure Totl RNA Miniprep Kit, Axygen, USA) 를사용하여 totl RNA를추출후 DEPC-treted wter로 RNA를녹이며 BioPhotometer (Eppendorf, Germny) 로정량하고 PrimeSript TM 1st strnd DNA Synthesis Kit (Tkr, Jpn) 를사용하여전처리를한후 polymerse hin retion (PCR) (Tkr, Jpn) 수행을마치고사용전까지 -2 C 에보관하였다. Regenertive primer는 GenBnk (http://www.ni.nlm.nih. gov) 에보고된경골어류의 GR 유전자의 DNA를 lignment 한후상동성이높은부분을택하여 NetPrimer softwre (Premier Biosoft Interntionl, USA) 를이용하여다음과같이제작하였다. see primer 5 -GTC TGC TCT GAC GAG GCT TC ntisee primer 3 -CTC CTC ACG CTT TAC GAT GG Tle 1. List of verterte texon used in this study for the regenertive primers Speies Gene GenBnk ession no. Sole senegleis β-tin mrna GI94537156 Anthopgrus shlegelii β-tin mrna GI43627 Sprus urt GR mrna GI9454531 Dientrrhus lrx GR mrna GI4825685 Prlihthys oliveus GR mrna GI312374 Asttotilpi urtoni GR mrna GI256313 Tle 2. Primers used in this study Gene Oligo nme Sequene (5 3 ) Nuleotide position Remrks GR mrna RT-F AAG ATC CGG AGG AAG AAC TG 31 51 ORF mplifition GR mrna RT-R AAA CCT GCA GTC TGA CGA AC 61 621 ORF mplifition GR mrna qpcr-f GGC TCT TCC TCA TGT CCT TC 424 444 Rel-time PCR GR mrna qpcr-r GCT TCA TAC GCT CTT TGT TG 512 532 Rel-time PCR β-tin RT-F CAG AAG GAC AGC TAT GTT GG 123 143 ORF mplifition β-tin RT-R TGA TCT CCT TCT GCA TCC TG 929 949 ORF mplifition β-tin qpcr-f GCC AGA AGG ACA GCT ATG TTG 12 141 Rel-time PCR β-tin qpcr-r CAA CTG GGA TGA CAT GGA GA 28 228 Rel-time PCR

소음스트레스가조피볼락의호르몬과 GR reeptor 의발현에미치는영향 151 Primer 제작에사용된어류들은 Tle 1에나타내었다. 조피볼락의 GR mrna를증폭시키기위하여 Tkr Ex Tq kit의지시를따라 PCR을수행하였다. 반응생성물의 se- 1 8 quene 분석을의뢰하여 (Bionis, Kore) 획득한 sequene 정보를 lst 분석하여 GR gene 여부를확인하였다. 또정량분석시 house keeping 유전자로 β-tin 유전자도병행하여 g/dl 6 4 증폭하였다. 정량분석은획득한부분 sequene에서유전자특이적인 2 증폭을위하여 rel-time PCR primer를제작하고 (Tle 2) LightCyler 48 SYBR Green 1 Mster (Rohe, Germny) 에준하여 PCR (LightCyler 48, Rohe, Germny) 을수행하였다. 5 Control 2 6 12 4 4. 통계처리 3 통계처리는 SPSS 12. 버전으로 one-wy Anlysis of Vrine (ANOVA) test를실시하였고이후 Dunn s multiple % 2 rnge test 로 95% 유의수준내에서사후검정하였다. 1 결과 1. Hemtologil prmeters 소음스트레스에노출시킨후 12시간동안의 H의변화를 Fig. 1에나타내었다. 실험개시시에는 6.2±1.1 g/dl, 실험종료시에는 6.9±.6 g/dl로점차증가하는경향을보였지만대조구와유의적인차이를보이지않았다 g/dl 25 2 15 1 Control 2 6 12 (P.5). Ht 의변화역시대조구와유의성은검정되지않 5 았지만 H와같이점차로증가하는경향을나타내었다 (P.5) (Fig. 1). MCHC의농도또한유의적차이를나 Control 2 6 12 타내지않았다 (P.5) (Fig. 1). 2. Plsm prmeters Cortisol의농도변화를 Fig. 2에나타내었다. 소음에대한스트레스를가한직후의 ortisol의농도는 444.5±38.6 ng/ml로대조구농도 18.7±35.3 ng/ml와비교하여유의한차이를나타내었다 (P.5). 실험종료시에는대조구와유의차는인정되지않았으며전체적으로실험개시시에크게증가하였다가종료시대조구수준으로낮아짐을확인하였다. Gluose 농도는 97.5±4.8 mg/dl로대조구 32.5±6.3 mg/dl에비하여급격하게증가하였으며노출후경과시간에따라큰차이를보이고있지만전구간에서유의한차이를나타내며전체적으로증가하였고 ortisol과비슷한경향성을보였다 (P.5) (Fig. 2). 또 lumin 농도는 1.2~1.6 g/dl, 평균 1.3±.2 g/dl로대조구농도 1.27 Fig. 1. Hemogloin, hemtorit nd MCHC hemtologil levels (men±sd) in Koren rokfish, Sestes shlegeli. Signifintly different (P.5). Not signifint (P.5). : Hemogloin, : Hemtorit nd : MCHC. ±.15 g/dl 와유의차를보이지않았다 (P.5) (Fig. 2). 3. Gluoortioid reeptor mrna 염기서열분석 조피볼락 GR mrna의 614 p의부분적인염기서열을획득하였고이를 Fig. 3에나타내었다. Blst 결과넙치, Prlihthys oliveus, Dientrrhus lrx, Asttotilpi urtoni, Neolmprologus pulher, Porihthys nottus, Onorhynhus mykiss, 잉어, Cyprinus rpio, 제브라피쉬 Dnio rerio, Gsterosteus uletus 들과 9% 내외의상동성을나타내

152 심민경 한경남 ng/ml mg/dl 8 7 6 5 4 3 2 1 12 1 8 6 4 Control 2 6 12 1 TGTGCTGGGAGGAATGACTGCATCATTGATAAGATCCGGAGGAAGAACTGTCCAGCCTGC C A G R N D C I I D K I R R K N C P A C 61 CGCTTCAGGAAATGTCTTAAAGCCGGGATGAACTTGGAAGCGAGGAAACACAAGAAGCTG R F R K C L K A G M N L E A R K H K K L 121 ACCAAGATGAAAGGGGTCCAGCAGAGCAACCCGCCCAAGCCCCCAAGCATCATGCCTGTT T K M K G V Q Q S N P P K P P S I M P V 181 CCAGTCATCCCCAGGCCCATGCCCCAACTCGTGCCCACCATGCTGTCCGTGCTCAAGGCC P V I P R P M P Q L V P T M L S V L K A 241 ATCGAGCCAGAGGTCATCTACTCGGGCTACGACAGCACGCTGCCCGACACCTCCTCGCGG I E P E V I Y S G Y D S T L P D T S S R 31 CTCATGAGCACTCTCAACAGGCTGGGGGGACAGCAGGTCATCTCTGCAGTCAAGTGGGCC L M S T L N R L G G Q Q V I S A V K W A 361 AAGTCACTGCCAGGCTTCCGCAACCTGCACCTGGATGACCAGATGACATTGCTGCAGTGC K S L P G F R N L H L D D Q M T L L Q C 421 TCCTGGCTCTTCCTCATGTCCTTCAGTCTCGGTTGGAGGTCGTATGAGCAGTGCAACGGT S W L F L M S F S L G W R S Y E Q C N G 481 AGCATGTTCTGCTTCGCCCCTGATCTCGTCATCAACAAAGAGCGTATGAAGCTGCCCTTC S M F C F A P D L V I N K E R M K L P F 541 ATGACCGACCAGTGCGAGCAGATGCTGAAGATCTGTAATGAGTTCGTCAGACTGCAGGTT M T D Q C E Q M L K I C N E F V R L Q V 61 TCCCACGACGAG S H D E 2 2. Control 2 6 12 Fig. 3. Prtil sequene of Koren rokfish, Sestes shlegeli gluoortioid reeptor mrna. 인조직은장이며아가미에비해약 7.6배, 간에비해약 6 배많은발현량을보였다. g/dl 1.5 1..5. Control 2 6 12 Fig. 2. Plsm ortisol, gluose nd lumin plsmti levels (men ± SD) in Koren rokfish, Sestes shlegeli. Signifintly different (P.5). Not signifint (P.5). : Cortisol, : Gluose nd : Alumin. 2) 소음노출에따른 GR mrna의변화조피볼락에서 GR mrna의간과아가미에서의발현량은소음에노출된직후대조구와비교하여유의적으로증가하였다 (P.5) (Fig. 4, ). 간의 GR mrna의발현양상은대조구와비교하여유의적인차이를보이며 2배이상증가하여 2시간후까지유지되다가 6시간이후에는대조구와비교하여 1/2 이상유의적으로급격하게낮아짐을보였다 (P.5). 반면아가미에서는노출직후의발현양이대조구와비교하여 4배정도로급격하게증가하였다가 2시간후부터는대조구수준으로회복되는결과를나타내었다 (P.5). 었다 (http://lst.ni.nlm.nih.gov/blst.gi). 고 찰 4. 유전자정량분석 1) Bsl levels 실험결과생식소, 장, 피부, 눈, 간, 아가미순으로 GR mrna가많이발현되는결과를보였다 (Fig. 4). 생식소에서의 GR mrna 발현량은아가미에서발현량의약 9배이상많은양이고, 간의발현량과비교하면약 7배정도더많이발현한것으로나타났다. 다음으로많은발현량을보 증가된소음스트레스는성장률을감소시키거나, 공격성을높이고, 섭식률을저하시키는등의잠재적으로건강을손상시킬수있다고보고되어있지만 (Wysoki et l., 27) 본실험에서는육안으로확인할수있는유의한영향을보이지않았다. 다만청각기관은시야가제한되어있는수중척추동물에있어짝과먹이를찾고포식자로부터도망가는등의생존과관련된정보를제공하는데최근선박소음이나발전소건설과같은인위적인소음이늘어가고있어어류

소음스트레스가조피볼락의호르몬과 GR reeptor 의발현에미치는영향 153 Reltive gluoortioid reeptor mrna expression Reltive gluoortioid reeptor mrna expression Reltive gluoortioid reeptor mrna expression.6.5.4.3.2.1. 3. 2.5 2. 1.5 1..5. 5 4 3 2 1 Liver Gill Eye Intestine Gond Skin Tissues Control 2 6 12 Control 2 6 12 의청각에있어환경적압박으로 (Wysoki nd Ldih, 25), 결국에는어류에게내분비스트레스반응을불러일으킬수있을것으로사료된다. 일반적으로 H과 Ht는스트레스로인해높은에너지가요구되는동안에생체의산소운반능력을나타낸다 (Hur et l., 21; Ortuno et l. 21). 본실험은 Rnl et l. (23) 의 gilthed se rem에저수온과절식이미치는영향연구, Brellos et l. (23) 의수조이동에따른급성스트레스가수컷 jundi에미치는영향등은본실험과같이급성스트레스이나스트레스의종류와강도는같지않아서직접비교는어렵지만이와같이다양한스트레스상황에서유의적인차이를보이지않아본실험결과와비슷한결 Fig. 4. Bsl levels nd gluoortioid reeptor mrna reltive expressio in Koren rokfish, Sestes shlegeli. Signifintly different (P.5). Not signifint (P.5). : Bsl levels, : reltive GR mrna expression in liver, : reltive GR mrna expression in gills. d 과를보였다. MCHC는한개의적혈구안에들어있는 H 의백분율또는 H의평균농축정도를나타내는지표이며본실험에서는유의성을보이지않았다. 일반적으로급성스트레스에반응하여증가한어류의혈장 ortisol의농도는 3~3 ng/ml의범위를보이며스트레스에노출후급격히분비되어.5~1시간후가장높은증가율을보이는것으로알려져있으며 (Espelid et l., 1996; Bong, 1997), 본실험에서도 ortisol이급격하게증가하는것으로보아소음스트레스가어류에게급성스트레스로여겨질수있다고보여진다. 또한 Ortuno et l. (21) 의보고에따르면급성스트레스에의해증가된혈장 ortisol의농도는보통 6~24시간후회복된다고알려져있으며본실험에서는소음에노출된 2시간후부터실험종료시인12시간후까지혈장 ortisol의농도가 27.3 ±15.7 ng/ml로대조구수준으로떨어지지않은것으로보아소음에의한스트레스의영향이 12시간내에는호르몬수준에서의회복은되지않은것으로보여진다. 혈장 gluose는스트레스시 ortisol과같은경향성을보이는데 (Mommsen, 1999; Cruso et l., 25) 본실험에서도혈장 gluose의농도는 ortisol과비슷한경향을보이며전실험구간에서유의한차이를보였다 (P.5). 또한스트레스받은어류의혈액 gluose와혈장ortisol 수준은스트레스받은즉시빠르게증가하며각각 1, 2일이면대조구수준으로회복되지만 (Ortuno et l., 21) 본실험은 12시간후종료하였기때문에호르몬수준의회복여부는알수없었다. Rnl et l. (23) 에의하면혈장 lumin은세포의영양단백의보급원으로각종성분을결합시키거나운반, 제거하는생리학적기능을수행하므로 lumin의감소는곧혈액내전체단백질의감소로이어져이또한스트레스의지표가될수있다고보고하였다. 하지만본실험에서 lumin의결과에는유의성이없었는데 Keum et l. (25) 의 Bisphenol A가조피볼락의혈액에미치는영향연구에서도 lumin은 1.~1.1 g/dl의범위로본실험과주어진스트레스는같지않지만유사한결과를나타내었다. Gluoortioids는여러조직에존재하며삼투조절, gluose 대사등을돕는역할을하며 (Greenwood et l., 23; Prunet et l., 26), 스트레스에반응하여생성되며, 스트레스반응과정, 특히스트레스에적응하는대사과정에서중요한역할을한다 (Mommsen, 1999). 경골어류에서 GR mrna 조절에관한대부분의연구는증가된혈장 ortisol 농도가 GR mrna 양을 up-regultion한다고보고하였다 (Millign, 23; Sthiy nd Vijyn 23). GR mrna는다른경골어류에서는 lone된적이있지만 (Greenwood et l., 23; Aerete et l., 27) 해산어인조피볼락에서는아직없다. 또한항상성을유지하는데필요한 GR mrna가얼마나

154 심민경 한경남 발현하는지는알아보기위한실험을실시하였는데, 이분야에서연구가활발하게진행된담수어인무지개송어와같은연어과어류에서는간, 아가미장조직에서 GR mrna의발현양이현저히높은것으로보고되어있지만 (Singer et l., 27; Vzzn et l., 28) 해산어를사용한본실험에서는장과생식소에서다른조직에비하여많이발현되는결과를보였다 (Fig. 8). H. urtoni에서도 GR mrna는심장, 간, 췌장에서많이발현하여 (Greenwood et l., 23) 조직마다다른발현양상을보였는데이는표적조직에따라혈장 ortisol의 seitivity가다르기때문인것으로보인다. 조피볼락에서 GR mrna의간과아가미에서의발현량은소음에노출된직후대조구와비교하여유의적으로증가하였다. 간에서의 GR mrna의발현양상은소음에노출된후 2시간까지는대조구와비교하여유의적인차이를보이며 2배이상증가하였다가 6시간이후에는대조구와비교하여 1/2 이상유의적으로낮아짐을보였다. 스트레스에노출된직후에높은값을보이다가 ortisol이 6시간후에급격하게증가된것과관련하여 plsm ortisol과의관계가인정되므로 (Vijyn et l., 23) GR mrna 역시스트레스 inditor 또는 iomker로사용될수있다고사료된다. 반면아가미에서는노출직후발현량이대조구에비하여 4배정도로크게증가하였다가 2시간후부터는대조군수준으로회복되는결과를보였다. 현재까지 GR mrna 염기서열이밝혀진종들은대부분담수어종이므로본실험에서는비록부분적인염기서열이지만해산어종에대한실험결과이므로의의를갖으며, 추후스트레스의영향에관한연구에사용될수있을것으로사료된다. 사 이논문은인하대학교교내연구비지원에의하여연구되었습니다. 사 인용문헌 Aerete, L., J.C. Blsh, B. Cstelln, B. Redruello, N. Roher, A.V. Cnrio, J.V. Plns, S. MKenzie nd L. Tort. 27. Cloning of the gluoortioid reeptor (GR) in gilthed serem (Sprus urt) Differentil expression of GR nd immune genes in gilthed serem fter n immune hllenge. Comp. Biohem. Physiol., Prt B 148: 32-43. Brellos, L.J.G., L.C. Kreutz, L.B. Rodrigues, I. Fioreze, R.M. Quevedo, L. Cerito, J. Conrd, A.B. Soso, M. Fgundes, L. de A. Lerd nd S. Terr. 23. Hemtologil nd iohemil hrteristis of mle jundi (Rhmdi quelen Quoy & Gimrd Pimelodide): hnges fter ute stress. Aqu. Res., 34: 1465-1469. Bong, S.E.W. 1997. The stress respoe in fish. Physiologil Reviews, 77: 591-625. Cruso, G., L. Genovese, G. Mrihiolo nd A. Modi. 25. Hemtologil, iohemil nd immunologil prmeters s stress inditors in Dientrrhus lrx nd Sprus urt frmed in off-shore ges. Aqu. Interntionl, 13: 67-73. Espelid, S., G.B. Løkken, K. Steiro nd J. Bøgwld. 1996. Effets of ortisol nd stress on the immune system in Atlnti Slmon (Slmo slr L.). Fish nd Shellfish Immunol., 6: 95-11. Greenwood, A.K., P.C. Butler, R.B. White, U. Demro, D. Pere nd R.D. Fernld. 23. Multiple ortiosteroid reeptors in teleost fish: Distint sequenes, expression ptter, nd trriptionl tivities. Endorinol., 144: 4226-4236 Gu, D.S. nd B.K. Choi. 26. The ssessment of the fish impt used y explosion noise. The Journl of Ititute of Mrine Industry, 19: 125-13. Hur, S.W., Y.J. Chng, H.K. Lim nd B.K. Lee. 21. Stress respoes of ultured fishes eliited y wter level redution in rering tnk nd fish trferene during seletion proess. Koren Fish. So., 34: 465-472. Keum, Y.H., J.H. Jee, O.H. Lee, S.I. Prk nd J.C. Kng. 25. In vivo effets of isphenol expression on hemtologil prmeters in Koren rokfish, Sestes shlegeli. Koren So. Fish Pthol., 18: 293-3. Millign. C.S. 23. A regultory role for ortisol in musle glyogen metolism in rinow trout Onorhynhus mykiss Wlum. J. Exp. Biol., 26: 3167-3173. Mommsen, T.P., M.M. Vijyn nd T.W. Moon. 1999. Cortisol in teleosts: dynmis, mehnisms of tion, nd metoli regultion. Reviews Fish Biol. Fish., 9: 211-268. Ortuno, J., M.A. Esten nd J. Meseguer. 21. Effets of shortterm rowding stress on the gilthed serem (Sprus urt L.) innte immune respoe. Fish nd Shellfish Immunol., 11: 187-197. Popper, A.N., M.E. Smith, P.A. Cott, B.W. Hnn, A.O. M- Gillivry, M.E. Austin nd D.A. Mnn. 25. Effets of exposure to seismi irgun use on hering of three fish speies. J. Aous. So. of Ameri, 117: 3958-3971. Prunet, P., A. Sturm nd S. Mill. 26. Multiple ortiosteroid reeptors in fish: From old ides to new onepts. Generl Comp. Endorinol., 147: 17-23. Rnl, M.S., J. Snhez, A. Irz, J. Fernndez-Borrs, J. Blso nd M.A. Gllrdo. 23. Effets of low tempertures nd fsting on hemtology nd plsm omposition of gilthed se rem (Sprus urt). Fish Physiol. nd Biohem., 29: 15-115.

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