J Koren So Foo Si Nutr 한국식품영양과학회지 46(3), 32~326(217) https://oi.org/1.3746/jkfn.217.46.3.32 B16F1 Melnom 세포에서낙과배물추출물의멜라닌생성저해효과 신보연 1 정보람 1 정종기 1 조승식 2 방미애 1 1 ( 재 ) 전남생물산업진흥원식품산업연구센터 2 목포대학교약학과 Inhiitory Effets on Melnin Proution in B16 Melnom Cells of Fllen Per Bo Yeon Shin 1, Bo Rm Jung 1, Jong Gi Jung 1, Seung Sik Cho 2, n Mi Ae Bng 1 1 Foo Reserh Center, Jeonnm Bioinustry Fountion 2 Deprtment of Phrmy, College of Phrmy, Mokpo Ntionl University ABSTRACT This stuy investigte the wter extrts of fllen per (FPWE) on tyrosinse tivity n melnogenesis. In the present stuy, we exmine the effets of FPWE on mushroom tyrosinse tivity in vitro, B16F1 melnom ell tyrosinse tivity, melnin ontents, n expression of melnogeni enzyme proteins suh s tyrosinse. An pprent own-regultory effet on tyrosinse tivity ws oserve when B16F1 ells were inute with FPWE. Results of melnin ssy using B16F1 ells trete with ifferent onentrtions (, 12, n 2 μg/ml) of FPWE showe ose-epenent erese in melnin ontent. To etermine whether or not FPWE iniretly ffets tyrosinse tivity, we ssesse mushroom tyrosinse tivity upon tretment with vrious onentrtions (12, 2,, n 1, μg/ml) of FPWE. In ition, we investigte hnges in the protein level of tyrosinse y using Western lotting. Tyrosinse n mirophthlmi-ssoite trnsription ftor expression levels in B16F1 melnom ells were reue in ose-epenent mnner y FPWE. These results suggest tht FPWE reue melnin formtion y inhiition of tyrosinse tivity. Therefore, we suggest tht FPWE oul e use n effetive whitening gent for skin. Key wors: fllen per, B16F1 melnom ell, melnin, tyrosinse, mushroom tyrosinse 서 사람의피부색을결정하는요인중 melnin의영향이가장큰것으로알려져있다. Melnin의합성에관여하는몇가지효소중에구리를함유한 tyrosinse는생체내 tyrosine을 DOPA로, 나아가 DOPA quinone으로산화되는과정을촉매하여 melnin 생합성에관여한다 (1). Melnoyte 에 α-melnoyte stimulting hormone(α-msh) 을처리하면 tyrosinse의발현이증가한다. α-msh는 melnoortin-1-reeptor(mc1r) 를통해 yli AMP(AMP) 를증가시키고활성화된 MiTF에의해 tyrosinse의발현이증가한다 (2). 현재미백제로가장많이사용되는 rutin은 L- tyrosine과경쟁적으로작용하는저해제이며 (3), rutin은 tyrosinse 활성부위의 opper를 helting 하여 tyrosine 에서 DOPA 그리고 DOPA에서 DOPA quinone으로진행되는과정을저해한다 (4). 그러나피부안정성, 제형안정성문제로인해현재의학계나화장품업계에서는제한된양만 Reeive 2 Otoer 216; Aepte 24 Ferury 217 Corresponing uthor: Mi Ae Bng, Foo Reserh Center, Jeonnm Bioinustry Fountion, Nju, Jeonnm 827, Kore E-mil: methyl@nte.om, Phone: +82-61-339-12 론 이사용되고있어천연물물추출물에대한관심이고조되고있다 (,6). 배는배나무과 (Pomoiee), 배나무속 (Pyrus) 에속하는식물로세계에서가장많이소비되는과일중하나이며, 원산지에따라동양배 (Pyrus pyrifoli), 서양배 (Pyrus ommunis) 및중국배 (Pyrus ussuriensis) 로분류된다 (7,8). 예로부터배는잎과껍질, 과실을민간요법으로사용되어왔으며, 잎은토사광난의약을, 껍질은부스럼이나피부질환에사용하였으며, 과일은가래기침, 숙취, 해열, 배변, 연육등에쓰여왔다 (9). 과일에는많은폴리페놀과플라보노이드성분등다양한기능성성분이함유되어있어항산화, 항노화, 항암, 항염작용등효과가있는것으로알려지고있으며, 배에관한연구로는품종별가공적성, 항산화생리활성 (1), 배폴리페놀분획물의지질대사 (11) 및배의저장중의포장재에따른품질변화 (12) 등의연구가있다. 배에는 rutin, hlorogeni i 등이함유되어있어다양한기능성활성을나타내는것으로알려져왔다. 특히 rutin은피부미백작용이있는물질로배에다량함유되어있는것으로알려져있다. Arutin은 melnin 색소가피부에침착되어발생하는기미, 주근깨의원인이되는물질인 tyrosinse의활성을
B16F1 Melnom 세포에서낙과배물추출물의멜라닌생성저해효과 321 저해함으로써미백작용을한다고보고되었다 (13,14). 낙과는완숙과와비교하여외형상의손실로인하여상품가치를상실할뿐비슷한건강기능적, 영양적품질을보유하고있다. 하지만대부분의낙과는비상품성미과수로분류되어사료, 쨈, 주스등으로제한적식품가공원료로이용되고있어낙과의부가가치를높일수있는기능성연구가필요한실정이다. 따라서본연구에서는낙과배를이용하여피부기능성소재로써이용가능성이있는지를확인하였다. 낙과배물추출물을 α-msh로자극한 B16F1 melnom 세포에서 melnin 생성억제및 tyrosinse 효소활성저해효과를통해미백활성을규명하고자하였다. 재료및방법 Tle 1. Anlytil onitions of HPLC for nlysis of rutin Prmeters Column Flow rte Injetion volume UV etetion Run time Grient Conitions Zorx exten-c18 Anlytil (4.6 1 mm, μm) 1. ml/min 2 μl 28 nm 3 min Time (min) % A 1) % B 2) 1 2 26 3 1) Methnol. 2).2% eti i. 1 시료제조본실험에서사용한낙과배는좋은영농조합법인에서제공받아동결건조하여분쇄한후사용하였다. 시료 2 g에 2배수의증류수, 2,, 7, 1% 에탄올 가지용매로상온에서 24시간동안추출하였다. 상온에서 24시간추출하여여과지 (Whtmn No. 1, GE Helthre, Arlington Heights, IL, USA) 로감압여과한후, 농축하여동결건조한것을실험에사용하였다. 세포및시약미백효과측정에사용된세포 B16F1은 Koren Cell Line Bnk(Seoul, Kore) 에서구입하여사용하였다. 구입한세포는 1% fetl ovine serum(fbs, Gio BRL Co., Grn Isln, NY, USA), 1% peniillin/streptomyin을함유한 Duleo s moifie Egle s meium(dmem, Gio BRL Co.) 배지에 1 nm α-melnoyte stimulting hormone(α-msh, Sigm-Alrih Co., St. Louis, MO, USA) 을첨가하여 37 C, % CO 2 배양기에서배양하였다. 세포생존율측정시약 3-(4,-imethyl thizol-2-yl)- 2,-iphenyltetrzoliumromie(MTT), L-DOPA, L-tyrosine, rutin, imethyl sulfoxie(dmso) 등은 Sigm- Alrih Co. 에서구입하여사용하였다. Tyrosinse 항체는 Snt Cruz Biotehnology(Texs, CA, USA) 에서구입하였으며, MiTF 및 2차항체는 Am(Cmrige, MA, USA) 에서구입하여사용하였다. 든용매는사용전탈기및필터로여과후사용하였다. 칼럼의유속은 1. ml/min이었고 33 nm 파장에서측정하였으며, 시료는 2 μl를주입하였다. MTT ssy 를이용한세포독성확인마우스흑색종 (mouse melnom, B16F1) 세포를 96- well plte에 1 4 ells/well이되도록분주하여 24시간동안배양한후시료를농도별로조제하여처리하고 37 C, % CO 2 inutor에서 4~일동안배양하였다. 여기에 mg/ml 농도로제조한 MTT 용액.1 ml를첨가하여 4시간배양한후배양액을제거하고각 well당 DMSO를.2 ml씩넣어 formzn rystl 생성물을용해시킨후 7 nm 파장에서흡광도를측정하였다. 기질에따른 tyrosinse 측정 Tyrosinse 활성측정시기질은 L-DOPA와 L-tyrosine 을사용하였다. L-DOPA와 L-tyrosine은 1 mm potssium phosphte uffer(ph 6.8) 로완전히녹이고, tyrosinse는 2 units/ml와 12 units/ml로각각만들었다. L-DOPA는 2 mg/ml와 L-tyrosine.3 mg/ml를 Eppenorf tue에 4 μl를넣고, 시료는최종농도를조절하여 μl를가했다. Tyrosinse는최종농도가각각 2 units/ ml, 12 units/ml가되도록계산하여 μl를처치하였으며 37 C에서 3분반응시킨다음 47 nm에서흡광도를측정하였다. Arutin 함량분석낙과배추출물에함유되어있는 rutin 분석을위한 HPLC 분석조건은 Tle 1에요약하였다. HPLC 칼럼은 Zorx exten-c18 Anlytil(4.6 1 mm, μm) 을사용하였고, pump, utosmpler, olumn oven, photoioe rry UV/VIS etetor(wters HPLC system, Wters Corp., Milfor, MA, USA) 장비를사용하였다. A 용매는 methnol, B 용매는.2% eti i를사용하였으며모 세포내 melnin 생성억제효과 B16F1 세포를이용한 melnin 생합성저해측정은 Hosoi 등 (1) 의연구방법을변형하여측정하였다. DMEM 배지로배양된 B16F1 세포를 6-well plte에적정세포수 (2 1 4 ells/well) 로분주하였으며, 37 C, % CO 2 inutor에서 24시간배양한후시료를처치하였다. 72시간배양후인산완충액 (ph 7.4) 으로세척한다음원심분리하여세포침전물을얻었다. 1% DMSO가첨가된 1 N NOH 용액을 13
322 신보연 정보람 정종기 조승식 방미애 μl 첨가하고 6 C에서 1시간용해시켰으며 4 nm에서흡광도를측정하였다. Melnin 정량은대조군의 melnin 양에대한백분율로계산하여다음식에의해산출하였다. Melnin 생성량 (%) = ( Tle 2. The sequenes of the primers of the tyrosinse n GAPDH Gene Primer Sequene ('-3') Tyrosinse GAPDH Forwr Reverse Forwr Reverse 시료첨가구의흡광도 시료무첨가구의흡광도 세포내 tyrosinse 활성측정 ) 1 B16F1 세포에약물처치후배양이끝나면 1%(w/v) triton X-1을함유한 1 mm phosphte uffer(ph 6.8) 를 1 μl 가하고 분간 shking 한후세포와용액을모두 Eppenorf tue로이전시키고원심분리하여상층액을 tyrosinse 활성과단백질정량에이용하였다. 약물처치후얻은상층액은 96-well plte에 4 μl를분주하고,.1 M soium phosphte uffer(ph 7.2) 에녹인 1 mm L- DOPA 2 μl를가하여 37 C에서 3분동안배양하였다. Tyrosinse에의해생성된 DOPA hrome은 47 nm에서흡광도를측정하였다. Rel time PCR을통한미백관련 mrna 의발현측정 Totl RNA 추출은 RNesy mini kit(qigen, Vleni, CA, USA) 을이용하였다. DNA 합성은 2 μg의 totl RNA를 Reverse trnsription kit(qigen) 을이용하여역전사시켜합성하였다. DNA는고성능 DNA 합성 kit을사용하여증폭시켰다. Rel time PCR은 SYBR green premix(qigen) 를이용하여제조사의지시된방법에따라수행하였다. 프라이머는 Bioneer(Dejeon, Kore) 에서합성제작하였으며염기서열은 Tle 2와같다. PCR 조건은 C에서 3초 (enturtion), C에서 3초 (nneling), 72 C에서 9 초 (extension) 의반응을 3회반복하는것을기본으로하였다. 결과값은 glyerlehye-3-phosphte ehyrogense(gapdh) 의상대적인값으로보정하였다. GAC GGT CAC TGC ACA CTT TG GCC ATG ACC AGG ATG AC ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA Western lot 시료를 72시간처리한 B16F1 세포를모은후 lysis uffer 1 μl를첨가하여용해시키고원심분리 (1, g, 4 C, 1 min) 하였다. 원심분리하여얻은단백질은 Brfor ssy 로정량하여각샘플 4 μg의단백질을 1% polyrylmie gel에전기영동하고이를.4 μm pore size PVDF memrne에옮긴다음 8 V에서 1시간 trnsfer 하였다. Trnsfer가끝나면 % skim milk로 1시간 loking 하였다. 3회 TBST로 wshing 후 1차 ntioy를상온에서 2시간붙인다음 3회 wshing 하여 2차 ntioy를붙였다. 1시간 wshing 후 ECL kit(amershm Phrmi Bioteh, Uppsl, Sween) 을이용하여 n를확인하였다. 통계분석모든실험결과는 Sttistil Pkge for the Soil Sienes 17(SPSS In., Chigo, IL, USA) 통계프로그램을이용하여일원분산분석법을사용하였다. 통계적유의성은 Dunn s multiple rnge test로 P 값이. 미만일때통계적으로유의하다고판단하였다. Tle 3. The ontent of rutin of fllen per wter extrts n vrious onentrtion Smple EtOH (%) Arutin (mg/g) Extrt 결과및고찰 HPLC 분석을통한낙과배추출물의 rutin 함량낙과배추출물에존재하는유효성분으로써 rutin을선정하였다. Tle 1의분석법을바탕으로하여낙과배에탄올비율별추출물내의 rutin 함량을측정하였다. 그결과 rutin 은물추출시.69 mg/g으로제일높은함량을보였으며 (Tle 3), 에탄올함량이증가할수록점차감소하였다 (Fig. 1). 따라서미백기능성분인 rutin의함량을바탕으로낙과배물추출물을실험에사용하였다. MTT ssy 를이용한세포독성확인낙과배물추출물을세포에장시간노출하는실험으로세포독성이있는지를확인하기위해 MTT를이용하여낙과배에탄올추출물을농도별처리하여세포독성을측정하였다. 낙과배,, 1% 에탄올추출물을농도별세포독성을측정한결과물추출물을제외한에탄올추출물에서는세포독성을나타내었다 (t not shown). 낙과배물추출물은 ~1, μg/ml의농도로 72시간측정한결과 ~ 2 μg/ml의농도에서는 9% 이상의생존율을보였으며, μg/ml 농도이상에서는생존율이 7% 이하로감소하였다 (Fig. 2). 따라서장시간노출에도세포생존율에영향을미치지않는낙과배물추출물을실험에사용하였으며 2 μg/ml 농도까지를실험조건으로설정하였다. 세포내 melnin 생성억제효과 Melnin은 tyrosinse 효소의생합성을통해세포소기관인 riosome에서합성되기시작한다. Tyrosinse 효소 2 7 1.69.646.633.623.639
B16F1 Melnom 세포에서낙과배물추출물의멜라닌생성저해효과 323 1) 2) 3) 4) ) 6) Fig. 1. HPLC hromtogrms 1) stnr n lirtion urve of rutin. Stnr pek:.1,., 1, 2 μg/μl, 2) FPWE, 3) 2% EtOH extrt, 4) % EtOH extrt, ) 7% EtOH extrt, n 6) 1% EtOH extrt. 를통해아미노산의일종인 tyrosine에서몇단계의합성을통해흑화된 melnin 입자가생성된다 (16,17). 낙과배물 Cell viility (%). 12 1 8 6 4 2 on 12 2 7 1 Conentrtion (μg/ml) Fig. 2. Cell viility of wter extrts from fllen per (FPWE) on B16F1 melnom ells. Cells were trete with vrious onentrtions (. 1 mg/ml) of FPWE. The t shown represent the men±sd erive from three etermintions. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. 추출물이 melnin 합성에미치는영향을확인하기위하여 α-msh로자극한 B16F1 melnom 세포를이용하여 melnin 생성저해효과를측정하였다. 그결과 melnin 생성은 α-msh의처리로증가하였으며, 낙과배물추출물은, 12, 2 μg/ml 처리했을때농도의존적으로저해효과를나타내었다. 또한, 낙과배물추출물 2 μg/ml 농도로처리했을때미백제로알려진양성대조군 rutin과각각 72% 와 74% 로 melnin 저해활성이유의한수준을보였다 (Fig. 3). 따라서낙과배물추출물의 melnin 저해활성이우수함을확인하였다. 세포내 tyrosinse 활성측정 Tyrosinse는 melnin 생성과정에관여하는효소로써 tyrosine 을기질로하여 DOPA로전환시키며나아가 DOPA quinone으로산화시키는등의일련의효소반응을통하여 melnin을생성한다 (1). 낙과배물추출물의 melnin 생합성과관련한 tyrosinse의저해활성을 α-msh로자극한 B16F1 melnom 세포를이용하여측정하였다 (Fig. 4).
324 신보연 정보람 정종기 조승식 방미애 Melnin ontents (%). 14 12 1 8 6 4 2 on MSH Arutin 12 2 Mushroom tyrosinse tivity (%). 16 14 12 1 8 6 4 2 e' L-tyrosine L-DOPA e e' ' ' ' ' on Arutin 12 2 7 1 ' Conentrtion (μg/ml) Conentrtion (μg/ml) Fig. 3. Effets of FPWE on melnin ontents in B16F1 melnom ells. Cells were trete with vrious onentrtions ( 2 μg/ml) of FPWE. The t shown represent the men± SD erive from three etermintions. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. Fig.. Effets of FPWE on mushroom tyrosinse tivity. Purifie tyrosinse ws mixe with FPWE n inute with.3 mg/ml L-tyrosine of 2 mg/ml L-DOPA for 3 min t 37 C, Results re mens±sd from 3 seprte experiments. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. Tyrosinse tivity (%). 14 12 1 8 6 4 2 Reltive tyrosinse mrna. level (fol). 1.6 1.4 1.2 1..8.6.4.2 on MSH Arutin 12 2 Conentrtion (μg/ml). on MSH Arutin 12 2 Conentrtion (μg/ml) Fig. 4. Effets of FPWE on tyrosinse tivity in B16F1 melnom ells. Tyrosinse tivity in B16F1 melnom ells trete with vrious onentrtions ( 2 μg/ml) of FPWE. The t shown represent the men±sd erive from three etermintions. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. Fig. 6. Inhiition effets of FPWE on the expression of tyrosinse mrna in B16F1 melnom ells. Tyrosinse tivity in B16F1 melnom ells trete with vrious onentrtions ( 2 μg/ml) of FPWE. The t shown represent the men± SD erive from three etermintions. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. 위결과 (Fig. 3) 와마찬가지로낙과배물추출물처리시농도의존적으로 tyrosinse 활성을저해시켰으며 rutin 의저해활성보다는미약했지만유사한정도로높은저해활성을나타내었다. 낙과배물추출물의 mushroom tyrosinse 활성측정낙과배물추출물의 melnin 생합성에있어서 tyrosinse의직접적인작용을미치는지알아보기위하여 mushroom tyrosinse의활성을측정하였다. Tyrosinse의기질은 L-DOPA와 L-tyrosine을이용하였으며양성대조군은 1 mm rutin을사용하였다. 그결과 L-tyrosine을기질로사용했을때 1 mm rutin은 6% 의저해활성을나타내었고, L-DOPA를기질로사용했을때는저해활성을나타내지않았다 (18). Arutin은 tyrosinse에기질이결합하는부위에작용하여기질이 tyrosinse에결합하는것을방해하는것으로알려져있으며, rutin은 tyrosinse 작용 중 tyrosine hyroxylse 작용을억제하는것으로생각된다 (1,3). 낙과배물추출물은.12~1 mg/ml의농도로 mushroom tyrosinse의저해활성을측정하였으며 L-tyrosine 및 L-DOPA를기질로사용했을때모두저해활성이나타나지않았다 (Fig. ). 이는낙과배물추출물이 melnin 생성에있어서직접저해하는것이아닌세포내에서 tyrosinse의발현을조절한다는가능성을나타낸다. 낙과배물추출물의 tyrosinse mrna 발현저해효과낙과배물추출물이 melnin 합성관련 tyrosinse mrna 발현에미치는영향을확인하기위해서 α-msh 처리한 B16 세포로 rel time PCR을수행하였다. α-msh를단독처리한경우 tyrosinse mrna의발현이증가하였으며, 양성대조군인 rutin 1 ppm에서발현이억제하는것을확인하였다. 낙과배물추출물의효과는, 12, 2 μg/ml 농도에서측정하였으며, 그결과 α-msh 자극에의
B16F1 Melnom 세포에서낙과배물추출물의멜라닌생성저해효과 32 MiTF tyrosinse β-tin α-msh - + + + + + FPWE - - - 12 2 Arutin - - 1 Reltive MiTF protein. level (fol). 1.8 1.6 1.4 1.2 1.8.6.4.2 2. on MSH Arutin 12 2 Conentrtion (μg/ml) Fig. 7. Effets of FPWE on protein expression in B16F1 melnom ells. Expression levels of tyrosinse were nlyze y western lot. The tyrosinse or MiTF protein levels in eh smple ws normlize to the quntity of β-tin. The t shown represent the men±sd erive from three etermintions. Signifint ifferenes were etermine y Dunn s multiple rnge test t P<.. Reltive tyrosinse protein. level (fol). 2 1. 1. e on MSH Arutin 12 2 Conentrtion (μg/ml) 해유도된 tyrosinse mrna 발현이낙과배물추출물처리에의해농도의존적으로감소함을확인하였다 (Fig. 6). 낙과배물추출물의 tyrosinse, MiTF 단백질발현억제효과 B16F1 세포에 α-msh를처리하게되면 AMP의양이증가하게되며, 이는 PKA를매개로하여 CREB를활성화시키고활성화된 CREB는 MiTF의발현을유도한다. MiTF는 tyrosinse를비롯해 melnin 생성관련효소발현의전사인자로서 melnin 생성효소의발현량이늘어나흑화에기여하게된다 (19). 낙과배물추출물이 α-msh 자극에의해유도된 melnin 생성과 tyrosinse 활성을억제시키는것을위실험을통해확인하였다. 이러한결과가 melnin 생성에관련된단백질발현과도연관이있는지를확인하기위해낙과배물추출물의미백효과를 melnin 생합성과정에서중요한전사인자인 MiTF와 tyrosinse 단백질발현정도를통해측정하였다 (Fig. 7). 그결과 α-msh를단독처리한경우 MiTF와 tyrosinse 각단백질의발현이현저히증가하였으며, 낙과배물추출물을, 12, 2 μg/ml 농도로처리한결과낙과배물추출물처리에의해 MiTF 단백질발현이농도의존적으로감소하는것으로나타났다. Tyrosinse 발현역시농도의존적으로감소하여앞선실험들과동일한결과를확인할수있었다. 따라서낙과배물추출물은 melnin 합성에관여하는유전자발현을통하여 melnin 생성을저해하는것으로보이며, melnin 생합성의신호전달기전은추가적인연구가필요하다고생각된다. 요약본연구에서는낙과배물추출물에존재하는미백기능유효성분으로써 rutin을선정하여 HPLC를통해가장높은함량을보인낙과배물추출물로미백효과를알아보았다. 낙과배물추출물의미백효과를알아보기위하여 B16F1 melnom 세포를이용하여세포내 tyrosinse 저해효과, melnin 생성저해효과, tyrosinse와관련된단백질발현에미치는영향을연구하였다. 그결과낙과배물추출물은 tyrosinse 활성과 B16F1 melnom 세포의 melnin 생성저해효과를나타내었다. 또한, MiTF와 tyrosinse의발현의억제를통해미백효과를나타내는것으로확인되었으며, mushroom tyrosinse 결과를통해 melnin 생성과정에있어 tyrosinse를직접저해하는것이아닌세포내에서 tyrosinse의발현조절을통해저해하는것으로확인하였다. 따라서낙과배물추출물은천연 rutin 미백기능성화장품소재개발로이용가능성이높은것으로판단된다. 낙과배를이용한새로운뷰티케어소재를개발하고이들의피부기능성을밝혀냄으로써낙과배의다양한활용성이증대될것으로기대되며, 이를통하여국내과실농가및관련사업에기여할것으로생각된다. 감사의글본연구는농림축산식품부생명산업기술개발사업 (31319-3-3-HD2) 에의해이루어졌으며이에감사드립니다.
326 신보연 정보람 정종기 조승식 방미애 REFERENCES 1. Song HS, Moon HJ, Prk BE, Choi BS, Lee DJ, Lee JY, Kim CJ, Sim SS. 27. Anti-oxint tivity n whitening tivity of moo extrts. Ykhk Hoeji 1: -7. 2. Ael-Mlek Z, Swope VB, Suzuki I, Akli C, Hrriger MD, Boye ST, Ure K, Hering VJ. 19. Mitogeni n melnogeni stimultion of norml humn melnoytes y melnotropi pepties. Pro Ntl A Si USA 92: 1789-1793. 3. Me K, Fuku M. 1996. Arutin: mehnism of its epigmenting tion in humn melnoyte ulture. J Phrmol Exp Ther 276: 76-769. 4. Bttini G, Monzni E, Csell L, Sntgostini L, Pglirin R. 2. Inhiition of the teholse tivity of iomimeti inuler opper omplexes y koji i. J Biol Inorg Chem : 262-268.. Chun HJ, Choi WH, Bek SH, Woo WH. 22. Effet of queretin on melnogenesis in Meln- melnoyte ells. Kor J Phrmogn 33: 24-21. 6. Curto EV, Kwong C, Hermersörfer H, Gltt H, Sntis C, Viror V, Hering VJ Jr, Dooley TP. 1999. Inhiitors of mmmlin melnoyte tyrosinse: in vitro omprisons of lkyl esters of gentisi i with other puttive inhiitors. Biohem Phrmol 7: 663-672. 7. Chllie JS, Willims AH. 1968. Phenoli ompouns of the genus Pyrus-Ⅰ: The ourrene of flvones n phenoli i erivtives of 3,4-ihyroxyenzyl lohol 4-gluosie in Pyrus lleryn. Phytohemistry 7: 119-13. 8. Cho EJ, Bng MA, Cho SS. 21. vlition of nlytil metho of mrker ompouns in extrt of per pome s funtionl helth ingreient. J Koren So Foo Si Nutr 44: 1682-1686. 9. Yu TJ. 1989. Sikpumogm. Mununng, Seoul, Kore. p 166. 1. Lee PH, Prk SY, Jng TH, Yim SH, Nm SH, In MJ, Kim DC, Che HJ. 214. Effets of omplex rohyrse tretment on physiologil tivities of per peel n ore. J Koren So Foo Si Nutr 43: 44-41. 11. Choi HJ, Prk JH, Hn HS, Son JH, Son GM, Be JH, Choi C. 24. Effet of polyphenol ompoun from Koren per (Pyrus pyrifoli Nki) on lipi metolism. J Koren So Foo Si Nutr 33: 299-34. 12. Prk WP, Jung JH, Cho SH, Kim CH. 24. Qulity hrteristis of unshiu ornge n per pkge with pper inorporte with ntimiroil gents. J Koren So Foo Si Nutr 33: 171-1719. 13. Chen JS, Wei C, Mrxhll MR. 1991. Inhiition mehnism of koji i on polyphenol oxise. J Agri Foo Chem 39: 1897-191. 14. Ure K, Aro P, Tsukmoto K, Msgn D, Plumo A, Prot G, Hering VJ. 1994. The inherent ytotoxity of melnin preursors: revision. Biohim Biophys At 1221: 272-278. 1. Hosoi J, Ae E, Su T, Kuroki T. 198. Regultion of melnin synthesis of B16 mouse melnom ells y 1α,2-ihyroxyvitmin D 3 n retinoi i. Cner Res 4: 1474-1478. 16. Cho YJ. 24. Stuy on the tyrosinse tivity inhiition n free ril svenging tivity of nturl mterils. MS Thesis. Sookmyung Womn s University, Seoul, Kore. 17. Hwng EY, Kim DH, Hwng JY, Kim HJ, Prk TS, Lee IS, Son JH. 212. A stuy on the epigmenting effet of Crthmus tintorius see, Cyperus rotunus n Shizonepet tenuifoli extrts. Koren J Foo Si Tehnol 44: 76-81. 18. An SM, Koh JS, Boo YC. 21. p-coumri i not only inhiits humn tyrosinse tivity in vitro ut lso melnogenesis in ells expose to UVB. Phytother Res 24: 117-118. 19. Lee P. 29. Inhiitory effet of Must Biley A see extrt on melnin proution in α-melnin stimulting hormone-stimulte B16 ell. Koren J Plnt Res 22: 447-482.