2107

Similar documents
Microsoft Word - 03-황수명.doc


untitled

ORIGINAL ARTICLE Discordance in Colistin Susceptibility Test for Acinetobacter baumannii Showing Resist

Microsoft Word - 2-황수명.doc

03-ÀÌÁ¦Çö

Can032.hwp

hwp


012임수진

12이문규

Lumbar spine

139~144 ¿À°ø¾àħ

< D B4D9C3CAC1A120BCD2C7C1C6AEC4DCC5C3C6AEB7BBC1EEC0C720B3EBBEC8C0C720BDC3B7C2BAB8C1A4BFA120B4EBC7D120C0AFBFEBBCBA20C6F2B0A E687770>


미생물분류는형태적특징, 생리 생화학적성질과상태, 화학분류학적성질과상태등을이용하여구분하는것이일반적이지만, 이와같은방법을이용하면많은시간을필요로한다. 또한분류가힘든경우나, 정확하지못한결과를얻는경우도있다. 최근미생물분류에도분자생물학적인방법을이용하여, 미생물이가지고있는 DNA를

2003_12_강희정.hwp

untitled

석사논문.PDF

1..

Pharmacotherapeutics Application of New Pathogenesis on the Drug Treatment of Diabetes Young Seol Kim, M.D. Department of Endocrinology Kyung Hee Univ

( )Kju225.hwp

DBPIA-NURIMEDIA

-, BSF BSF. - BSF BSF ( ),,. BSF -,,,. - BSF, BSF -, rrna, BSF.

한국성인에서초기황반변성질환과 연관된위험요인연구

(Establishment and Management of Proteomics Core Facility)

6 JH Byun, et al. IRS-PCR on E. coli 성을나타낸다. CTX-M ESBL 유전자는 mobile genetic element 와연관되어지역사회에서 ESBL 이쉽게전파할수있다 [5, 6]. 병원균의역학적분석을하기위

Microsoft Word - 05-김종배.doc

7.ƯÁýb71ÎÀ¯È« š


<B0E6B3B2C1F6BFAA20C1F6BFAABBE7C8B8C8B9B5E620B8DEC6BCBDC7B8B0B3BBBCBA20C8B2BBF6C6F7B5B5BECBB1D5C0C720B9DFBBFDBEE7BBF320B9D720C6AFBCBAC1B6BBE72E687770>


untitled

<5BC0FAC0DABCF6C1A430355D434D30362D313320BEE7BAB4BCB12D E687770>


(72) 발명자 오인환 서울 노원구 중계로 195, 101동 803호 (중계동, 신 안동진아파트) 서혜리 서울 종로구 평창14길 23, (평창동) 한훈식 서울 강남구 언주로71길 25-5, 301호 (역삼동, 영 훈하이츠) 이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호

(

A 617

α α α α α

서론 34 2

<5B D B3E220C1A634B1C720C1A632C8A320B3EDB9AEC1F628C3D6C1BE292E687770>

03이경미(237~248)ok


( )Kju269.hwp

Journal of Educational Innovation Research 2019, Vol. 29, No. 1, pp DOI: : * Research Subject

296 Korean J Lab Med 2010;30: S. maltophila 감염증치료에는낮은항균제내성률을보이는 trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP/SMX) 이일차치료제로사용되고있으며, quinolone, moxalactam,

Chapter 26

Microsoft Word - 10-Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay to Rapid Detection of Methicillin-Resist

< C6AFC1FD28B1C7C7F5C1DF292E687770>

기관고유연구사업결과보고

, ( ) 1) *.. I. (batch). (production planning). (downstream stage) (stockout).... (endangered). (utilization). *

±èÇ¥³â

( )Kjbt020.hwp

Microsoft Word - 04-정재근.doc

Automated high multiplex qPCR platform for simultaneous detection and quantification of multiple nucleic acid targets

untitled

2018 ASF Standard Operation Procedure 아프리카돼지열병진단개요 : - African swine fever, Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Chapter2.

03-서연옥.hwp

Journal of Educational Innovation Research 2019, Vol. 29, No. 2, pp DOI: 3 * Effects of 9th

15(4장1절 P).PDF

슬라이드 1

review hwp

(Exposure) Exposure (Exposure Assesment) EMF Unknown to mechanism Health Effect (Effect) Unknown to mechanism Behavior pattern (Micro- Environment) Re

Cloning

632 Korean J Lab Med 2010;30:631-6 있어서는장내집락화의유무를조기에검출하여사람간의전파방지및격리를해야한다. 그러므로대변에서의 VRE 선별검사는 VRE의조기검출을위한여러가지선별배지를이용하는것과최근에신속증균 PCR법을사용하는방법등이소개되고있다 [1,

hwp


878 Yu Kim, Dongjae Kim 지막 용량수준까지도 멈춤 규칙이 만족되지 않아 시행이 종료되지 않는 경우에는 MTD의 추정이 불가 능하다는 단점이 있다. 최근 이 SM방법의 단점을 보완하기 위해 O Quigley 등 (1990)이 제안한 CRM(Continu

Analysis of objective and error source of ski technical championship Jin Su Seok 1, Seoung ki Kang 1 *, Jae Hyung Lee 1, & Won Il Son 2 1 yong in Univ

Abstract Background : Most hospitalized children will experience physical pain as well as psychological distress. Painful procedure can increase anxie

:,,.,. 456, 253 ( 89, 164 ), 203 ( 44, 159 ). Cronbach α= ,.,,..,,,.,. :,, ( )


<B8F1C2F72E687770>

605.fm

슬라이드 1

목차 ⅰ ⅲ ⅳ Abstract v Ⅰ Ⅱ Ⅲ i

.,,,,,,.,,,,.,,,,,, (, 2011)..,,, (, 2009)., (, 2000;, 1993;,,, 1994;, 1995), () 65, 4 51, (,, ). 33, 4 30, (, 201

untitled

Kinematic analysis of success strategy of YANG Hak Seon technique Joo-Ho Song 1, Jong-Hoon Park 2, & Jin-Sun Kim 3 * 1 Korea Institute of Sport Scienc

대한한의학원전학회지26권4호-교정본(1125).hwp

°Ç°�°úÁúº´5-44È£ÃÖÁ¾

untitled

Jkbcs016(92-97).hwp

주간건강과질병 제 12 권제 16 호 연구단신, Brief report 년국내표본감시기관의료관련감염병 ( 항생제내성균 6 종 ) 발생현황 질병관리본부감염병관리센터의료감염관리과이승재, 이은주, 박현정, 이상은, 김성남, 이형민 * * 교신저자 : s

대한진단검사의학회지제 26 권제 5 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:374-9 원저 수혈의학 한국인에서 8 가지 ABO 대립유전자의빈도분석 송상훈 1 장호은 2 유광철 2 이현정 2 박경운 1,2 송정한 1,2 한규섭 1 서울대학교의과대학검사의

<3037C1D6BCBCC0CD2E687770>

歯1.PDF

50(2)-04.fm

DBPIA-NURIMEDIA

Microsoft Word - 5-장경수.doc

γ

304.fm

untitled

DBPIA-NURIMEDIA

135 Jeong Ji-yeon 심향사 극락전 협저 아미타불의 제작기법에 관한 연구 머리말 협저불상( 夾 紵 佛 像 )이라는 것은 불상을 제작하는 기법의 하나로써 삼베( 麻 ), 모시( 苧 ), 갈포( 葛 ) 등의 인피섬유( 靭 皮 纖 維 )와 칠( 漆 )을 주된 재료

<30382EC0C7C7D0B0ADC1C22E687770>

<35335FBCDBC7D1C1A42DB8E2B8AEBDBAC5CDC0C720C0FCB1E2C0FB20C6AFBCBA20BAD0BCAE2E687770>

( ) ) ( )3) ( ) ( ) ( ) 4) 1915 ( ) ( ) ) 3) 4) 285

Analyses the Contents of Points per a Game and the Difference among Weight Categories after the Revision of Greco-Roman Style Wrestling Rules Han-bong

Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 1, pp DOI: * The

Transcription:

대한진단검사의학회지제 28 권제 4 호 2008 Korean J Lab Med 2008;28:286-92 DOI 10.3343/kjlm.2008.28.4.286 원저 임상미생물학 혈액에서분리된 Staphylococcus aureus 의 Coagulase 유전자의다형성과독소유전자에의한유전형분석 김용균 김재석 김한성 송원근 조현찬 이규만 한림대학교의과대학진단검사의학교실 Molecular Typing of Staphylococcus aureus Isolated from Blood on the Basis of Coagulase Gene Polymorphism and Toxin Genes Yong-Kyun Kim, M.D., Jae-Seok Kim, M.D., Han-Sung Kim, M.D., Wonkeun Song, M.D., Hyoun Chan Cho, M.D., and Kyu Man Lee, M.D. Department of Laboratory Medicine, Hallym University College of Medicine, Seoul, Korea Background : Coagulase is produced by all strains of Staphylococcus aureus. The 3 coding region of the coagulase (coa) gene contains varying numbers of 81 bp tandem repeats. S. aureus produces a variety of extracellular protein toxins. Here, we typed S. aureus strains isolated from blood by coa gene restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns and toxin gene profiles. Methods : A total of 120 strains of S. aureus were isolated from blood cultures during 2003-2006 at Kangdong Sacred Heart Hospital. The isolates were typed by PCR RFLP analysis of the coa gene and by multiplex PCR for detection of genes encoding enterotoxins (sea, seb, sec, sed, and see), toxic shock syndrome toxin-1 (tst), exfoliative toxins (eta and etb), meca and fema. Results : All the S. aureus strains were classified into 16 types on the basis of coa gene RFLP and could be further differentiated into 34 types according to the combined patterns of coa gene RFLP and toxin gene profiles. Of 85 methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains, 43 (50.6%) and 36 (42.4%) belonged to the RFLP pattern L5 and pattern L1, respectively. MRSA strains belonging to pattern L5 frequently carried tst (93.0%) or sec gene (81.4%), and strains belonging to pattern L1 frequently carried sea (88.9%) or see gene (44.4%). The rate of the pattern L5 in MRSA strains increased over the past few years and was higher in intensive care unit than in other wards. Conclusions : We typed S. aureus strains isolated from blood on the basis of coa gene RFLP and toxin genes. The strains belonging to coa gene RFLP pattern L5 and L1 appeared to be the major types of MRSA isolasted from bacteremia and revealed specific toxin gene profiles according to the coa gene RFLP patterns. (Korean J Lab Med 2008;28:286-92) Key Words : Staphylococcus aureus, Coagulase, Restriction fragment length polymorphism, Enterotoxins, Methicillin resistance 접수 : 2008년 1월 14일접수번호 : KJLM2107 수정본접수 : 2008년 5월 9일게재승인일 : 2008년 5월 27일교신저자 : 김재석우 134-701 서울시강동구길1동 445 강동성심병원진단검사의학과전화 : 02-2224-2327, Fax: 02-2224-2214 E-mail: jaeseok@hallym.or.kr 서론 Staphylococcus aureus는병원감염과지역사회획득감염의주요병원균으로다양한질환을일으킨다. 메티실린내성균주의출현이후 methicillin-resistant S. aureus (MRSA) 에 286

Coagulase Gene Typing of S. aureus 287 의한병원감염은전세계적으로중요한문제가되었으며, 국내전국의료기관에서분리된 S. aureus 중 MRSA는 68.8% 로보고된바있다 [1]. S. aureus에의한균혈증의경우그원인의삼분의이가병원감염과관련있는것으로알려져있으며 [2], 이러한병원감염을차단하고예방하기위하여검출되는균주들에대한역학적분석이요구된다. S. aureus 균주의역학적분석을위한기법으로는항균제내성양상, 혈청형, 리보타이핑, 파지타이핑, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) 및 PCR에기반한방법등이사용된다. PCR에기반한방법은 16S에서부터 23S까지의 rrna intergenic spacer region, coagulase 유전자및 protein A 유전자등을이용한다 [2]. Coagulase는모든 S. aureus 균주에서생산되는세포외단백으로검사실에서 S. aureus를동정하는데있어중요한기준으로사용되고있다 [3]. Coagulase는사람프로트롬빈을활성화시켜혈전을생성하는데, 그병독성에대해서는논란이있다 [4]. Coagulase를암호화하는유전자의 3 염기말단부위에는 81 bp의반복되는일련의염기서열들이존재하는데, 균주에따라그반복되는수와염기서열에차이를보인다 [5, 6]. 이러한 coagulase 유전자의다형성에기반하여유전형을분석하기위해 PCR 및제한효소절편길이다형성 (restriction fragment length polymorphism, RFLP) 법을사용한여러보고들이있다 [7-11]. S. aureus는 30 여개이상의외독소들을생산하며, 대표적인외독소로는장독소 (staphylococcal enterotoxin, SE), toxic shock syndrome toxin-1 (TSST-1) 및표피박리독소 (exofoliative toxin, ET) 등이있다 [12]. SE는다섯개의주요항원형 (SEA, SEB, SEC, SED 및 SEE) 을포함하여최근까지 19개의항원형이알려져있으며 [13], TSST-1는 1개의혈청형이알려져있다. ET는사람에게서 staphylococcal scaled skin syndrome (SSSS) 의원인이되며, 생물학적활성도는같지만그항원형에서 ETA와 ETB로분류된다 [14]. 이러한독소의검출을위한 DNA-DNA 교잡법이나다상중합효소연쇄반응 (multiplex PCR) 과같은분자유전학적방법들은통상적인면역학적방법의검사보다빠르고민감하며, 독소생성능의발현과상관없이균주의유전정보를제공하는장점을가진다 [15, 16]. 본연구에서는 2003년부터 2006년까지일개 3차병원입원환자의혈액에서분리된 S. aureus 균주들을대상으로 coagulase 유전자 3 말단의다형성부위를 PCR RFLP법으로분석하고, 독소유전자및 meca 유전자를다상중합효소연쇄반응법으로검출하여, 그유전형양상을파악하고자하였다. 대상및방법 1. 균주수집과검체정보 2003년 1월부터 2006년 12월까지한림의대강동성심병원의검사실에의뢰된혈액배양검체중동일환자에서 2번이상분리되어균혈증의원인으로의심되는 S. aureus 120주를대상으로하였다. 균주의동정은 coagulase, DNase 및 mannitol salt agar 검사와 Microscan WalkAway 96 (Dade Behring Inc., West Sacramento, CA, USA) 을사용하였으며, 항균제내성검사는 Microscan WalkAway 96 (Dade Behring Inc.) 을사용하였다. 분리된균주는탈지분유혼탁액에넣어 -70 C 에보관하였다. 검체가의뢰된환자연령의중앙값은 61.4세이며, 6개월에서 94세까지다양한연령층을포함하였다. 환자의성별은남자 69 명, 여자 51 명이었다. 일반병동에서 70주, 중환자실에서 47주가분리되었으며, 3주는의뢰처가확인되지않았다. 연도에따라 2003년에 21주, 2004년에 42주, 2005년에 24주, 2006년에 33 주가수집되었다. 2. DNA 추출 -70 C 에보관되었던균주를혈액한천배지에접종하여 37 C, 5% CO 2 조건에서 24시간배양후, InstaGene Matrix (Biorad, Hercules, CA, USA) 을사용하여제조사의지침대로 DNA 를추출하였다. 3. Coagulase 유전자 (coa) PCR RFLP 시발체는 coagulase 유전자의 3번염기말단부위내의반복되는부위들을포함하면서시발체내에다형성부위가포함되지않도록기존에고안된것을사용하였으며, 염기서열은 COA-1 (ATAGAGATGCTGGTACAGG) 과 COA-2 (GCTTCCGAT- TGTTCGATGC) 이다 [9]. 반응액은 10 buffer 5 μl, 각각 2.5 mm의 dntp 4 μl, 20 pmol의각시발체 (COA-1, COA-2), 1.25 U의 Taq polymerase (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA) 및 InstaGene (Bio-rad) 으로추출한 DNA template 10 μl 로구성하여총 50 μl 를만들었다. 반응은 Mastercycler gradient (Eppendorf AG, Hamburg, Germany) 를사용하여 94 C 에서 45 초간전변성후, 94 C 20초, 57 C 45초, 70 C 15초주기로 35회반복하였으며, 최종연장반응은 72 C 에

288 김용균 김재석 김한성외 3 인 서 10 분간실시하였다. 반응산물은 2.0% 아가로오즈겔에넣고, 1 TAE buffer에서 100 V, 30분동안전기영동하여확인하였다. 이후반응산물 20 μl 를 AluI ( 바이오니아, 대전, 대한민국 ) 2 U를사용하여제조사의지침대로반응시켰다. 절단된증폭산물은 2.5% 아가로오즈겔에넣어 1 TAE buffer, 100 V에서 30분동안전기영동후확인하였다. 4. Multiplex PCR를통한독소유전자및mecA 유전자검출시발체는 Mehrotra 등 [17] 의방법에따라두가지의조합 (set A, set B) 으로구성하였다. Set A 조합의반응액은 10 buffer S M L XL 10 μl, 각각 2.5 mm의 dntp 4 μl, 0.5 mm의 MgCl 2 2 μl, 20 pmol의각시발체 (SEA, SEB, SEC, FEMA), 40 pmol의 SED 시발체, 60 pmol의 SEE 시발체, 1.25 U의 Taq polymerase (Roche Diagnostics), DNA template 10 μl 로구성하여총50μL 를만들었다. Set B 조합의반응액은 10 buffer 5 μl, 각각 2.5 mm의 dntp 4 μl, 0.5 mm의 MgCl 2 1 μl, 20 pmol 의각시발체 (TST, ETB, MECA, FEMA), 50 pmol의 ETA 시발체, 1.25 U의 Taq polymerase (Roche Diagnostics), Insta- Gene (Bio-rad) 으로 DNA template 10 μl 로구성하여총 50 μl 를만들었다. 반응은 Mastercycler gradient (Eppendorf AG) 를사용하여 94 C 에서5분간전변성후, 94 C 1분, 53 C 1분, 72 C 30초주기로 35회반복하고, 최종연장반응은 72 C 에서 7 분간실시하였다. 반응산물은 3.0% 아가로오즈겔에넣어 1 TAE buffer, 100 V에서 35분동안전기영동후확인하였다. 결 과 1. coa 유전자크기의다양성 S. aureus 120주모두에서 coa 유전자가검출되었으며, Ishino 등 [10] 이정한크기분류기준에따라 S, M, L, XL로분류하였고 (Fig. 1), 각각 6주 (5%), 13주 (10.8%), 97주 (80.8%), 4주 (3.3 %) 가해당하였다. Fig. 1. Agarose gel electrophoresis of PCR-amplified coa genes from S. aureus strains. RCR amplification with primers COA-1 and COA-2 [9] resulted in single fragment bands of four different sizes: S, M, L, and XL. Lanes contain molecular size standard (100 bp ladder). S1 S2 S3 M1 M2 M3 M4 M5 2. coa 유전자의 PCR RFLP 유형 coa 유전자의 PCR 증폭산물을 AluI 으로처리한후전기영동하여관찰하였다 (Fig. 2). 총 16 가지의 RFLP 유형이나타났으 L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 XL1 Fig. 2. Agarose gel electrophoresis of PCR-amplified coa genes digested with the restriction endonuclease AluI from representative strains of S. aureus. Lanes contain molecular size standard (100 bp ladder).

Coagulase Gene Typing of S. aureus 289 며, S 크기의 coa 유전자는 3가지 ( 유형 S1-S3), M 크기는 5가지 ( 유형 M1-M5), L 크기는 7가지 ( 유형 L1-L7), XL 크기의경우 1가지 ( 유형 XL 1) 의유형을나타내었다. 120주중 RFLP 유형 L1 과유형 L5에해당하는균주가각각 37주 (30.8%) 와 46 주 (38.3%) 로높은빈도를차지하였으며, 나머지유형들은 1주에서 8주까지해당하였다 (Table 1). 있었으며, sea는 49 주 (40.8%), sec는 40 주 (33.3%), see는 24주 (20.0%), tst는 47주 (39.2%) 에서검출되었다. seb, sed, eta 또는 etb가검출된균주는없었다. fema는 120주모두에서검출되었으며, meca는 85 주 (70.8%) 에서검출되었다. 4. 메티실린내성에따른 RFLP 유형과독소유전자양상 3. 독소유전자양상및 meca 유전자의검출 120 주중 94 주 (78.3%) 에서하나이상의독소유전자를갖고 Microscan WalkAway 96 (Dade Behring Inc.) 의항균제내성검사에서 MRSA는전체 120주중 85주 (70.8%) 였으며, 모두 meca 유전자가검출되었다. MRSA 85주는 RFLP 유형 S1, Table 1. A number of 120 S. aureus blood isolates according to RFLP patterns, staphylococcal toxic genes, meca gene, and methicillin resistance PCR-amplified coa gene size* RFLP pattern N Toxin gene meca gene MRSA (N=85) MSSA (N=35) S (N=6) S1 1 sec, tst + 1 S2 1 - + 1 tst - 1 S3 4 sea, tst - 2 sea, see, tst - 1 M (N=13) M1 1 - - 1 M2 1 - - 1 M3 1 - - 1 M4 2 - - 2 - - 1 M5 8 sea - 3 see - 1 sea, see - 3 L (N=97) L1 37 - - 1 - + 4 sea + 16 sea, see + 16 L2 3 - + 2 sec, tst + 1 L3 3 sea - 1 sea, see - 2 L4 1 sec, tst + 1 L5 46 - - 1 sea - 1 sea, see - 1 - + 2 tst + 6 sea, sec + 1 sec, tst + 32 sea, sec, tst + 2 L6 4 - - 4 L7 3 - - 1 sec - 2 XL (N=4) XL1 4 - - 4 *, The categorization of size of coa gene is based on the size reported by Ishino et al.[10];, The coa gene RFLP patterns are arbitrarily categorized in this study. Abbreviations: RFLP, restriction fragment length polymorphism; MRSA, methicillin-resistant Staphylococcus aureus; MSSA, methicillin-susceptible S. aureus.

290 김용균 김재석 김한성외 3 인 S2, L1, L2, L4, L5를나타냈으며, 각각 1주 (1.2%), 1주 (1.2%), 36주 (42.4%), 3주 (3.5%), 1주 (1.2%), 43주 (50.6%) 였다 (Table 1). MRSA 85주중 76주 (89.4%) 에서하나이상의독소유전자를갖고있었으며, sea, sec, see, tst가각각 35 주 (41.2%), 38주 (44.7%), 16주 (18.8%), 43주 (50.6%) 에서검출되었다. MRSA 중주요유형인 L1과 L5 에서각각특정독소유전자의빈도가높았는데, 유형 L1의 36주중 32 주 (88.9%) 에서 sea를갖고있었으며, 이중 16주 (44.4%) 에서는 sea와동시에 see를갖고있었다. 유형 L5의 43 주에서는 40주 (93.0%) 에서 tst를갖고있었으며, 이중 34 주 (79.1%) 에서 tst와동시에 sec를갖고있었다. Methicillin-susceptible S. aureus (MSSA) 35주는 RFLP 유형 S3, M1, M2, M3, M4, M5, L1, L3, L5, L6, L7, XL1를나타냈으며, 메티실린내성균주에비해상대적으로다양한분포를보였다 (Table 1). MSSA 35주중 18 주 (51.4%) 에서하나이상의독소유전자가검출되어 MRSA에비해낮은빈도를나타냈으며, sea, sec, see, tst가각각 14주 (40.0%), 2주 (5.7%), 8주 (22.9%), 14주 (40.0%) 에서검출되었다. MRSA와 MSSA가동시에나타난 RFLP 유형은 L1과 L5 였으며, 나머지유형에서는유형에따라균주들의메티실린내성이구분되었다. RFLP 유형 L1과 L5 균주들은대부분 MRSA였으며, L1의균주중 MRSA는 97.3%, L5의균주중 MRSA는 93.5% 였다. 5. 수집연도에따른분석수집연도에따라 MRSA의빈도는 2003년 57.1%, 2004년 69.0%, 2005년 79.2%, 2006년 75.8% 였다. MRSA 중가장주요한 RFLP 유형인 L5의균주들은연도에따라 MRSA에서차지하는빈도가증가하는추세를보였다 (2003년, 25.0%; 2004 년, 55.2%; 2005년, 47.4%; 2006년, 60.0%). 6. 분리된병동에따른양상일반병동에서 70주, 중환자실에서 47주가분리되었으며, 3 주는장소를확인할수가없었다. 일반병동에서분리된 70주중 MRSA는 45 주 (64.3%) 였으며, 주요한 RFLP 유형은 L1과 L5 로서각각 22 주 (48.9%), 20주 (44.4%) 가해당하였다. 중환자실에서분리된 47주중 MRSA는 38 주 (80.9%) 로일반병동에비해빈도가높았으며, 주요한 RFLP 유형은 L1과 L5 로각각 13주 (34.2%) 와 23 주 (60.5%) 가해당하였다. 고찰 S. aureus의 coa 유전자의 3 말단의다형성에기반하여유전형을분석하는방법으로는 PCR RFLP 방법이나직접염기서열분석이사용된다 [7-11, 18, 19]. 염기서열분석이높은해상도를보이는것으로알려져있으나 [18, 19], 본연구에서는실행과정의편리함과해석의용이함을이유로 PCR RFLP 방법을사용하였다. PCR RFLP 방법을사용한기존의보고들을보면, 시발체의고안과제한효소의선택에따라 coa 유전자의크기와 RFLP 유형에서차이를보이며 [7, 9], 현재까지표준화된방법은없다. 본연구에서는 coa 유전자의크기와 RFLP 유형이각각 4가지와 16가지가나타났으나, 본연구와동일한방법을사용한 Hookey 등 [9] 의보고에서는각각 4가지와 10가지, Ishino 등 [10] 의보고에서는각각 8가지와 31가지가나타났다. 연구에따라 RFLP 유형의수와종류가다르게나타나는것은대상균주들의수와분리된지역및역학적배경등의차이에서기인하는것으로생각된다. 본연구에서 coa 유전자의크기는 Ishino 등 [10] 이보고한크기에따라 S, M, L, XL로분류하였는데, RFLP 유형은실제데이터를비교하는데어려움이있어본연구에서임의로분류하였다. coa 유전자의 RFLP 유형에따른 S. aureus 균주들의분석은직접염기서열분석이나 PFGE 방법에비해분별력이낮은것으로보고된다 [18-20]. 하지만 RFLP 유형에따라대부분의메티실린내성균주를구분할수있고 [11], 혈청형분석에비해서는높은분별력을보이며, arbekacin-resistant MRSA를구분하는데유용하다는보고도있다 [10]. 영국에서분리된 MRSA를대상으로한보고에서는 coa 유전자 RFLP 유형분석이계통유전학적분석, 파지타이핑의방법과비교하여대등한분별력을나타내었다 [9]. 기존의보고들에서 MRSA 균주들의 RFLP 유형의수는 MSSA 에비해상대적으로적은것으로나타난다 [7, 9, 11]. 본연구에서도 MSSA의균주들에서는전체 16 가지의 RFLP 유형중 12 가지가나타났으며, MRSA의균주들에서는상대적으로적은 5 가지의유형이나타났다. 또한 MRSA 85주중 RFLP 유형 L1 과 L5 가각각 36주와 43주로 MRSA의대부분 (93.0%) 을차지하였는데, 이러한양상은 MRSA 균주들간의높은유전적연관성과관련있을것으로생각된다 [21]. 본연구에서독소유전자의빈도는 sea, sec, see, tst 각각 40.8%, 33.3%, 20.0%, 39.2% 였으며, seb, sed, eta, etb는검출되지않았다. MRSA에서의독소유전자의빈도 (89.4%) 는

Coagulase Gene Typing of S. aureus 291 MSSA에서 (51.4%) 보다높게나타났다. 이러한양상은국내에서분리된균주를대상으로보고한것과유사하였다 [22]. 하지만독일지역의혈액배양검체에서분리된균주에서는 sea (17.4%), seb (5.9%), sec (8.7%), sed (10.5%), see (0.5%), tst (18.3%), eta (0.5%), etb (0.0%) 의분포를보여상대적으로 seb, sed가높은빈도를나타내고, 메티실린내성에따라독소유전자의빈도가유의한차이를보이지않는것으로나타나는데 [23, 24], 이러한독소유전자의양상의차이는지역에따라분포하는균주들이서로다른역학적, 유전적배경을갖고있기때문으로생각된다. 본연구에서는 coa 유전자의 RFLP 유형과함께독소유전자의검출을병행하여유전형의양상을파악하고자하였다. 균주들은 coa 유전자의 RFLP 유형에따라 16가지로분류되었으며, 독소유전자의양상에따라 34가지의유형으로세분할수있었다 (Table 1). MRSA 85주중주요한유전형의균주는 sec와 tst 를갖고있는 L5 가 32주 (37.6%), sea를갖고있는l1이 16주 (18.8%), sea, see를갖고있는 L1이 16주 (18.8%) 였다. 특히, RFLP 유형 L5는 Ishino 등 [10] 이일본에서분리된 MRSA의 77% 를차지한다고보고한 RFLP 유형과동일한것으로생각되는데, 일본의 MRSA에서도 sec와 tst의높은빈도가보고된바있다 [25]. 연도에따라 MRSA 균주중유형 L5 균주의빈도는증가하는추세이며, 중환자실에서의빈도가일반병동보다높았다 (60.5% vs 44.4%). 이러한양상의원인을밝히기위한추가적인연구는필요할것으로생각된다. 본연구에서는환자의혈액에서분리된 S. aureus 균주를대상으로 coa 유전자의 RFLP 유형과독소유전자에따라유전형양상을파악하였다. coa 유전자 RFLP 유형 L5 및 L1 의균주가 S. aureus 균혈증환자에서분리되는주요 MRSA 균주로생각되며, RFLP 유형에따라특정독소유전자유형을보였다. 요약배경 : 모든 Staphylococcus aureus는 coagulase를생산한다. Coagulase 유전자 (coa) 의 3 말단에는 81 bp의반복되는염기서열이존재한다. S. aureus는여러외독소를생산한다. 본연구에서는 coa 유전자의제한효소절편길이다형성 (restriction fragment length polymorphism, RFLP) 유형과독소유전자의양상에따라혈액에서분리된 S. aureus 균주들의유전형을분석하였다. 방법 : 2003년부터 2006년까지강동성심병원의혈액배양검 체에서수집된 S. aureus 120주를대상으로하였다. coa 유전자를대상으로 PCR RFLP 분석을시행하였으며, 장독소유전자 (sea, seb, sec, sed, see), toxic shock syndrome toxin-1 유전자 (tst), 표피박리독소유전자 (eta, etb), meca 및 fema 유전자를대상으로다상중합효소연쇄반응을시행하였다. 결과 : 모든 S. aureus 균주들은 coa 유전자의 RFLP 유형에따라 16가지로분류되었으며, 독소유전자의양상과연관지어 34가지로분류되었다. MRSA 85균주중 43균주 (50.6%) 는 RFLP 유형 L5이었으며, 36균주 (42.4%) 는유형 L1였다. 유형 L5의 MRSA 균주에서는 tst (93.0%) 와 sec 유전자 (81.4%) 가높은빈도로검출되었으며, 유형 L1의 MRSA 균주에서는 sea (88.9%) 와 see 유전자 (44.4%) 의빈도가높았다. MRSA 균주중유형 L5 균주의빈도는연도에따라증가하는추세이며, 중환자실에서의빈도가일반병동보다높았다. 결론 : 혈액배양검체에서분리된 S. aureus 균주들을대상으로 coa 유전자의 RFLP 유형과독소유전자에따라유전형을분석하였다. coa 유전자 RFLP 유형 L5 및 L1 의균주가균혈증환자에서분리되는주요 MRSA 균주로생각되며, 각각특정독소유전자유형을나타내었다. 참고문헌 1. Kim JS, Kim HS, Song W, Cho HC, Lee KM, Kim EC. Antimicrobial resistance profiles of Staphylococcus aureus isolated in 13 Korean hospitals. Korean J Lab Med 2004;24:223-9. ( 김재석, 김한성, 송원근, 조현찬, 이규만, 김의종. 국내 13개의료기관에서수집된 Staphylococcus aureus의항균제감수성양상. 대한진단검사의학회지 2004;24: 223-9.) 2. Bannerman TL and Peacock SJ. Staphylococcus, Micrococcus and other catalase-positive cocci. In: Murray PR, Baron EJ, et al., eds. Manual of Clinical Microbiology. 9th ed. Washington DC: ASM Press 2007; 392-402. 3. Kloos WE and Schleifer KH. Genus Staphylococcus In: Sneath PHA, Mair NS, et al. eds. Bergey s manual of systematic bacteriology. 1st ed. Baltimore: Williams and Wilkins 1986:1013-35. 4. Lowy FD. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med 1998;339: 520-32. 5. Kaida S, Miyata T, Yoshizawa Y, Igarashi H, Iwanaga S. Nucleotide and deduced amino acid sequences of staphylocoagulase gene from Staphylococcus aureus strain 213. Nucleic Acids Res 1989;17:8871. 6. Kawabata S, Morita T, Miyata T, Iwanaga S, Igarashi H. Isolation

292 김용균 김재석 김한성외 3 인 and characterization of staphylocoagulase chymotryptic fragment. Localization of the procoagulant- and prothrombin-binding domain of this protein. J Biol Chem 1986;261:1427-33. 7. Goh SH, Byrne SK, Zhang JL, Chow AW. Molecular typing of Staphylococcus aureus on the basis of coagulase gene polymorphisms. J Clin Microbiol 1992;30:1642-5. 8. Chiou CS, Wei HL, Yang LC. Comparison of pulsed-field gel electrophoresis and coagulase gene restriction profile analysis techniques in the molecular typing of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2000;38:2186-90. 9. Hookey JV, Richardson JF, Cookson BD. Molecular typing of Staphylococcus aureus based on PCR restriction fragment length polymorphism and DNA sequence analysis of the coagulase gene. J Clin Microbiol 1998;36:1083-9. 10. Ishino K, Tsuchizaki N, Ishikawa J, Hotta K. Usefulness of PCRrestriction fragment length polymorphism typing of the coagulase gene to discriminate arbekacin-resistant methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains. J Clin Microbiol 2007;45:607-9. 11. Lawrence C, Cosseron M, Mimoz O, Brun-Buisson C, Costa Y, Samii K, et al. Use of the coagulase gene typing method for detection of carriers of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Antimicrob Chemother 1996;37:687-96. 12. Dinges MM, Orwin PM, Schlievert PM. Exotoxins of Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Rev 2000;13:16-34. 13. Thomas D, Chou S, Dauwalder O, Lina G. Diversity in Staphylococcus aureus enterotoxins. Chem Immunol Allergy 2007;93:24-41. 14. Ladhani S, Joannou CL, Lochrie DP, Evans RW, Poston SM. Clinical, microbial, and biochemical aspects of the exfoliative toxins causing staphylococcal scalded-skin syndrome. Clin Microbiol Rev 1999;12:224-42. 15. Johnson WM, Tyler SD, Ewan EP, Ashton FE, Pollard DR, Rozee KR. Detection of genes for enterotoxins, exfoliative toxins, and toxic shock syndrome toxin 1 in Staphylococcus aureus by the polymerase chain reaction. J Clin Microbiol 1991;29:426-30. 16. Becker K, Roth R, Peters G. Rapid and specific detection of toxigenic Staphylococcus aureus: use of two multiplex PCR enzyme immunoassays for amplification and hybridization of staphylococcal enterotoxin genes, exfoliative toxin genes, and toxic shock syndrome toxin 1 gene. J Clin Microbiol 1998;36:2548-53. 17. Mehrotra M, Wang G, Johnson WM. Multiplex PCR for detection of genes for Staphylococcus aureus enterotoxins, exfoliative toxins, toxic shock syndrome toxin 1, and methicillin resistance. J Clin Microbiol 2000;38:1032-5. 18. Schwarzkopf A and Karch H. Genetic variation in Staphylococcus aureus coagulase genes: potential and limits for use as epidemiological marker. J Clin Microbiol 1994;32:2407-12. 19. Shopsin B, Gomez M, Waddington M, Riehman M, Kreiswirth BN. Use of coagulase gene (coa) repeat region nucleotide sequences for typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain. J Clin Microbiol 2000;38:3453-6. 20. Tenover FC, Arbeit R, Archer G, Biddle J, Byrne S, Goering R, et al. Comparison of traditional and molecular methods of typing isolates of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 1994;32:407-15. 21. Carles-Nurit MJ, Christophle B, Broche S, Gouby A, Bouziges N, Ramuz M. DNA polymorphisms in methicillin-susceptible and methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 1992;30:2092-6. 22. Kim JS, Song W, Kim HS, Cho HC, Lee KM, Choi MS, et al. Association between the methicillin resistance of clinical isolates of Staphylococcus aureus, their staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) subtype classification, and their toxin gene profiles. Diagn Microbiol Infect Dis 2006;56:289-95. 23. Schmitz FJ, MacKenzie CR, Geisel R, Wagner S, Idel H, Verhoef J, et al. Enterotoxin and toxic shock syndrome toxin-1 production of methicillin resistant and methicillin sensitive Staphylococcus aureus strains. Eur J Epidemiol 1997;13:699-708. 24. Lehn N, Schaller E, Wagner H, Kronke M. Frequency of toxic shock syndrome toxin- and enterotoxin-producing clinical isolates of Staphylococcus aureus. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 1995;14:43-6. 25. Nishi J, Yoshinaga M, Miyanohara H, Kawahara M, Kawabata M, Motoya T, et al. An epidemiologic survey of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by combined use of mec-hvr genotyping and toxin genotyping in a university hospital in Japan. Infect Control Hosp Epidemiol 2002;23:506-10.