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설윤 추
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1 Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Journal 26: 6 (20) 연구논문 항생제다제내성균 Pseudomonas aeruginosa 에대한생육저해물질생산방선균의분리및항균활성 강동희, 배호경, 김현수 * solation and Antibacterial Activity of Actinomycetes Producing Growth nhibition Compounds Against Multiantibiotic esistant Pseudomonas Aeruginosa Kang, Dong Hee, HoKyung Bae, and Hyunoo Kim* 접수 : 20 년 월 26 일 / 게재승인 : 20 년 2 월 24 일 20 The Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Abstract: ) Of the 00 Actinomycetes isolates obtained from soil, one isolate grown on maltose as the sole carbon source produced compound BHKP, which inhibited the growth of multiple drug resistant 024. Ultraviolet radiation mutagenesis curtailed production of BHKP. Mutation of the BHKP producer using NmethylN`nitroNnitrosoguanidine obviated the antibacterial activity to 024, but not towards 022. The mixing of BHKP and BHK culture extracts inhibited 024, 022 and 3. The combined application of BHKP culture extract and chizandra chinensis Baillon extract inhibited 024, 022, 026, 3, 3, 3 and 242. Use of various concentrations of BHKP culture extract and ampicillin markedly increased antibacterial activity against multidrug resistant P. aeruginose 3. Keywords: multiantibiotic resistance, pseudomonas aeruginosa, antibiotics, actinomycetes 계명대학교자연과학대학미생물학과 Department of Microbiology, College of Natural cience, Keimyung University, 040, Korea Tel: , Fax: hskim@kmu.ac.kr. 서론 의학의진보는과거불치병으로알려졌던많은질환의치료를가능하게하면서인간의생명연장과질병에의한고통, 장애요인을감소시켜인간의존엄성을유지하는데이바지하였다. 그러나한편으로는감염에취약한노령인구의증가, 만성퇴행성질환자의증가, 항생제남용및장기간의항생제사용으로인한항생제내성균증가, 각종인체내삽입술의확대등의학이발달할수록병원감염은급속히증가하고있어매우심각한문제점을야기시키고있다. 원내감염은일반병동보다는중환자실이나면역저하환자대상병동에서병원감염률이높게발생하는경향을보여주고있으며, 특히중환자실은일반입원실보다약 6 배높게발생하는것으로보고되고있다 []. 국내병원내감염보고에서나타난균주중가장많은것은 taphylococcus aureus (20 22%) 이며그다음으로많이분리되는균이 Pseudomonas aeruginosa ( %) 이다. 그외에도 Escherichia coli, erratia, Actinobacter, Klebsiella, Enterobacter, treptococcus 등이분리되고있다 [2,3,4]. 이중에서 는건강한사람의소화기에상재하며피부, 비점막 (nasal mucosa) 및인두 (throat) 등에서도상재할수있으며폐렴, 비뇨기계감염, 창상감염, 패혈증등의원내감염의원인이된다 [,6]. 는병원내폐렴및요로감염에서흔히동정되는 Gram 음성간균 ( 병원성폐렴.%, 요로감염 6.3%) 으로알려져있으며, Gram 음성간균에의한병원균혈증에서도 Escherichia coli 와 Klebsiella spicies 에이어세번

2 20 Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Journal 26: 6 (20) 째로흔하며, 전체균혈증의 위를차지할정도로드물지않다 []. 이러한 에의한감염의치료는실제임상에서조기에발견하여적절하게치료하는것이쉽지않으며, 에의한 bloodstream infection 은심각하고치명적일수있는상태로 % 62% 의사망률을보여균혈증으로인한사망의경우 2 위를차지하는것으로알려져있다 []. 오늘날사용중인항생물질은의학의발달과함께지속적으로발견, 개발되어질병치료에널리사용되고있으나, 점차내성이생긴병원성미생물이출현하게되면서현의학계에서는심각성이크게대두되고있는실정이다. 특히 와 Acinetobacter baumannii 의경우지금까지 Gram 음성세균감염의치료의최후의보루로여겨지던 carbapenem 계열의항생제마저도내성인균주가확산되어큰문제가되고있다 [,]. 의경우, 다수의항생제및항균화학요법제에도내성을보이는다제내성녹농균 (MPA, multiresistant Pseudomonas aeruginosa) 으로폐렴이나패혈증등에발병시치료가힘든내성균으로분류되고있다 [,]. 다제내성 Acinetobacter (multi drug resistant Acinetobacter baumanii, MAB) [,3] 은최근일본에서사망자가보고되어경각심을야기시켰으며, 새로운내성균주들의출현에따른내성균대처를위한항생물질의개발은빠르게진행되고있다. 현재의항생물질요법의기초를이룬 penicillin 의실용화이후주로방선균을대상으로새로운항생물질의탐색이진행되고있으며, 현재까지의알려진항생물질은 만여종에이르고, 이중에서 60% 이상이방선균으로부터생산되고있다. 최근에는방선균을대상으로암이나바이러스에의한질병에유효한물질의연구도진행중이며, 내성균이나그람음성균등특정균주에유효 한신항생물질이나항생물질의유도체연구가활발하게이루어지고있다 [,]. 본연구에서는다제내성을가진병원성 Pseudomonas 에특이적으로작용하는항생물질을개발하기위한기초연구로서토양에서항생제다제내성 에대한항균성물질을생산하는방선균을분리하고, 다양한조건하에서생산된항균성물질을한약재및항생제와혼합하여항균활성을확인하고자하였다. 2. 재료및방법 2.. 방선균의분리방선균의분리는지리산 (3 지역 ), 경북일대및대구계명대학교주위 (40 지역 ) 에서채취한토양을사용하였다. 각각의토양시료 g 을멸균수 ml 에현탁후 4,, 6 으로희석하여 oat meal 배지 (oat meal g, agar g/l) 와 Humic acid Vitamin (HV) agar 배지 [6] 에 0 µl 씩도말하고, 2 에서 일간배양한후육안으로 colony 형태와광학현미경을통하여 00 균주를순수분리하였다 시험균주시험균주는 Gram 양성세균인 Bacillus subtilis PC 2, Gram 음성세균인 Escherichia coli KCTC 62 와항생제다제내성균인 를사용하였다. 는대구가톨릭대학교병원진단검사의학과미생물부에서환자의가검물로부터분리한후 Microcan 으로항생제감수성검사를실시하여항생제 3 종이상에대해내성을가지는 Table. Antibiotics sensitivity of Pseudomonas aeruginosa by Microcan Antibiotics Amikacin Ampicillin Ampicillin/sulbactam Aztreonam Cefepime Cefotaxime Ceftazidime Ceftriaxone Cephalothin Ciprofloxacin Gentamicin mipenem Levofloxacin Meropenem Piperacillin Piperacillin/tazobactam Ticarcillin/CA Tobramycin Trimethoprim/sulfametho trains Pseudomonas aeruginosa ensitivity : ntermediate, : esistant, : ensible, : Untested.

3 항생제다제내성균 Pseudomonas aeruginosa 에대한생육저해물질생산방선균의분리및항균활성 2 균주 (No. 022, 024, 034, 026, 3, 3, 3, 242) 를선별하여사용하였으며, 균주의항생제내성은 Table 과같다. Microcan 은 Ca 2+ 와 Mg 2+ 가함유된 MuellerHinton 배지에다양한항생제가희석되어있어검사대상인미생물의최소억제농도 (MC) 또는정량적인감수성 (usceptible, ntermediate, esistant) 을억제하는가장낮은항균제농도를확인하는것이가능하다 항생물질생산균주의검색토양에서분리된방선균 00 균주는항생물질생산능을확인하기위해본연구실에서주로사용하는항생물질생산배지인 A6 배지 (soybean meal g, glucose g, NaCl g, CaCO 3 g/l), V 배지 (bacto casitone. g, yeast extract. g, glycerol g, NaCl 2. g/l) 와 Y 배지 (yeast extract g, glucose g, NaCl g, bactosoytone g, MgO 4 H 2 O 0. g/l) 를사용하여각각의배지 20 ml (0 ml erlenmeyer flask) 에분리균주의 slant 로부터 백금이접종하여 2, 0 rpm 에서 일간배양하였다. 시험균주는 LB 배지 (peptone g, yeast extract g, sodium chloride g/l, ph 6.) 와 Nutrient 배지 (beef extract 3 g, peptone g/l, ph 6., Difco Co.) 에계대배양한후 4 에보관하여사용하였다. 항균성물질생산능은 agar diffusion 법으로측정하였으며, 배양액을 4,,000 rpm 에서 분간원심분리후상등액 20 μl 를 paper disc ( 6 mm, Whatman Co.) 에첨가하여일반시험균주인 B. subtilis PC 2 와 E. coli KCTC 62 가함유된평판배지위에얹고 3 에서 24 시간배양하여 inhibitory zone 이형성되는균주를 차로선발하였다. 차선별균주는 Y 배지에 일간배양한후일반시험균주인 B. subtilis PC 2 와 E. coli KCTC 62 에항균활성이가장우수한균주를공시균주로선발하였으며, Actinomycetes BHKP 로명명하였다 항생물질생산조건의검토공시균주 BHKP 의항균성물질생산에미치는탄소원의영향은 Y 배지 20 ml (0 ml erlenmeyer flask) 에탄소원으로 glucose, maltose, saccharose, fructose, starch, lactose, mannose 를각각 % 씩첨가하여공시균주 BHKP 의포자현탁액 ( spores/ml) 0 μl 를접종후 2, 0 rpm 에서 일간배양한후항균활성을측정하였다. 질소원의영향은선정된탄소원이첨가된 Y 배지에각각유기질소원으로 peptone, soytone, yeast extract, tryptophan 및무기질소원으로 NH 4NO 3, (NH 4) 2O 4, NH 4Cl 를 0.% 첨가하여탄소원과동일한방법으로배양한후항균활성을측정하였다. 2.. 항균성물질의추출및농축항균성물질은공시균주 BHKP 를 M 배지 (yeast extract g, maltose g, NaCl g, bactosoytone g, MgO 4 H 2O 0. g/l) 에접종하여 2, 0 rpm 에서 일간배양한후,000 rpm 에서 분간원심분리하여배양상등액을분리하고 rotary vacuum evaporator (EYELA, Tokyo ikakikai Co. A3. Japan) 를이용하여감압농축한후멸균증류수로용해시켜실험에사용하였다. 항균성물질의추출은배양상등액에동량의 ethyl acetate 를첨가하여수행하였으며, 추출물의농축은 Na 2O 4 를적당량첨가하여수분을제거한후 evaporator 로감압농축하여소량의 ethyl acetate 에용해시켜실험에사용하였다 변이주분리항균성물질의생산증대를위하여공시균주 BHKP 의포자현탁액을멸균수로 4 으로희석한다음 oat meal 배지에도말하여각각 30 초, 60 초, 0 초간 24 nm 의 U.V. 를조사하여 2 에서 일간배양하였다. U.V. 처리후생성된 colony 형태와포자색을관찰하여공시균주 BHKP 와다른 균주를선발하였으며, M 배지에접종하여동일한방법으로항균활성을측정하였다. NTG (NmethylN'nitroNnitrosoguanidine) 를이용한변이처리는공시균주 BHKP 의포자현탁액 ( spores/ml) 을,000 rpm, 분간원심분리한후 NTG 가첨가된 0. M Trismaleate buffer (ph.0) ml 로현탁하였다. 현탁액을 2 에서 20 분, 40 분, 60 분간반응시킨후,000 rpm 에서 분간원심분리후상등액을제거하고 Trismaleate buffer 로 2 회세척하였다. 세척한현탁액은 3 으로희석하여 FM 배지 (mannitol 20 g, soya flour 20 g, agar 20 g/l) 에 0 μl 씩도말하여 2 에서 일간배양하였다. 생성된균주는공시균주 BHKP 와비교하여 colony 형태와포자색이다른 균주를선발하였다. 분리균주는 M 배지에서동일한방법으로배양하여항균활성을검토하였다. 2.. 항균성물질의혼합에따른항균활성공시균주 BHKP 가생산하는항균성물질은다른방선균배양액의 ethyl acetate 추출물, 한약재추출물및기존의항생제와혼합하여항균활성을확인하였다. 다른방선균은 차균주선별에서 B. subtilis PC 2 에항균활성을강하게나타낸 균주를선발하여 V 배지 20 ml 에각균주를접종한후 2, 0 rpm 에서 일간배양하였다. 항균성물질추출은공시균주 BHKP 배양액의추출과동일한방법으로수행하였다. 추출물은소량의 ethyl acetate 를사용해 mg/ml 농도로용해시켜공시균주 BHKP 의 ethyl acetate 추출물 ( mg/ml) 과각각 μl 씩 (total 20 μl) 혼합후시험균주에대한항균활성을측정하였다. 한약재추출물과혼합시항균활성은선행연구결과를참조하여 에항균활성이알려진한약재 ( 형개, 황금, 조협, 백질려, 오미자, 감조, 마황, 방풍, 고삼, 박하 ) 를사용하였다. 각한약재 g 에 methanol 0 ml 를첨가하여 24 시간실온에서추출한후여과, 감압농축하였으며, mg/ml 의농도로조제하여공시균주 BHKP 의 ethyl acetate 추출물 ( mg/ml) 과각각 μl 씩혼합후시험균주에대한항균활성을측정하였다. 기존항생제와혼합시항균활성은항생제다제내성균주인 균주에대하여항균력이약한 apramycin, ampicillin, cholramphenicol 과 nalidixic acid 을선정하여

4 22 Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Journal 26: 6 (20) Table 2. Antibacterial activity of BHK on various carbon sources Carbon sources Glucose Maltose accharose Fructose tarch Lactose Mannose ncubation time (days) trains E. coli KCTC 62 B. subtillis PC 2 A B C D E F G H nhibitory zone (, mm) A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242, : No inhibition. 수행하였다. 공시균주 BHKP 배양추출액 ( mg/ml) 을각각의항생제농도 (0. mg/ml, mg/ml, 2. mg/ml, mg/ml) 에따라각각 μl 씩동량혼합후시험균주에대하여항균활성을측정하였다. 3. 결과및고찰 3.. 항균성물질생산균주의분리다양한토양시료로부터 00 균주의방선균을분리하였으며, 이들분리균주중항균성물질생산균주는 A6 배지, V 배지와 Y 배지에 일간배양후배양액중일반시험균주 B. subtilis PC 2 와 E. coli KCTC 62 에항균활성이우수한 20 균주를 차선별하였다. 선별한 20 균주를 Y 배지에접종하여 3 일간배양한결과배양 일째항균활성이가장우수한균주를선발하였으며 ( 결과미게재 ), 광학현미경으로관찰한결과 Fig. 에보는바와같이균사의발육상태가양호하고전형적인방선균형태를보여 Actinomycetes BHKP 라고명명하였다. 첨가한후 일간배양하여항균활성을확인하였다. Table 2 에서보인바와같이공시균주 BHKP 는탄소원으로 maltose 를사용하였을때항생제다제내성 균주중 024 균주에항균활성 (, mm) 을나타내었다. 또한일반시험균주인 E. coli KCTC 62 와 B. subtilis PC 2 에항균활성이각각 mm 와 mm 로가장강한결과를나타내었다. 나머지탄소원은 E. coli KCTC 62 와 B. subtilis PC 2 에저지원 ~ mm 의항균력을보였으나, 항생제다제내성 에는항균력을보이지않았다. 질소원의영향은탄소원으로 maltose 가첨가된 Y 배지에각종질소원을 0.% 가되도록첨가하여 일간배양하여항균성물질생성능을조사한결과항균력의변화를보이지않았다 ( 결과미게재 ). 이결과에서공시균주 BHKP 의배양은 Y 배지에탄소원으로 maltose (M 배지 ) 를사용하여실험을수행하였다 공시균주 BHK 의변이주분리공시균주 BHKP 의다제내성 에대한항균력증대를위해 U.V. 및 NTG 를사용하여변이주를분리하였다. 그결과 U.V. 처리시는우수한균주를분리하지못하였으나 ( 결과미게재 ), NTG 처리시에는분리된 균주를 M 배지에 일간배양한후시험균주에대한항균활성을확인하였다. 변이균주중 BHKN 균주는공시균주 BHK P 가항생제다제내성 024 를저해하는것 (Table 2) 과다르게 Table 3 에서보는바와같이 022 에항균활성을보였다. E. coli KCTC 62 와 B. subtilis PC 2 에대한 BHKN 균주의항균활성은각각 mm 와 mm 으로나타났다. Table 3. Antibacterial activity of isolated mutant BHK by NTG treatment Fig.. Micrograph of BHK mycelia ( 00) 항균성물질의생산조건공시균주 BHKP 의항균성물질생산성증대를위한탄소원의영향은 Y 배지의 glucose 대신여러가지탄소원을 % trains E. coli B. subtillis Mutant KCTC 62 PC 2 A B C D E F G H nhibitory zone (, mm) N A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242, : No inhibition.

5 항생제다제내성균 Pseudomonas aeruginosa 에대한생육저해물질생산방선균의분리및항균활성 23 Table 4. Antibacterial activity of mixture by BHK and another strain culture extract Test sample trains BHK ( mg/ml) + Another culture extract ( mg/ml) nhibitory zone (, mm) E. coli KCTC 62 B. subtillis PC A B C D E F G H A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242, : No inhibition 항균성물질의혼합에따른항균활성공시균주 BHKP 가생산하는항균성물질은배양액만으로내성균 024 를제외하고저해활성을보이지않아 (Table 2) 다양한유래의항균성물질을실험재료및방법에따라 ethyl acetate 로추출, 농축하여혼합처리후항균활성을검토하였다 다른방선균유래항균성물질과의항균활성공시균주 BHKP 의항균성물질은 M 배지에 일간배양한후 ethyl acetate 로추출하여 mg/ml 의농도로하여사용하였으며, 분리한다른방선균 균주배양액의 ethyl acetate 추출물 ( mg/ml) 과각각 μl (total 20 μl) 씩 paper disc 에첨가하여활성을측정하였다. 그결과 Table 4 에서보는바와같이공시균주 BHKP 와다른방선균유래항균성물질의혼합은 BHK4 균주와 BHK 균주의 Table. Antibacterial activity of extract mixture concentration by BHK and strain Concentraion (mg/ml) trains BHK + train nhibitory zone (, mm) E. coli KCTC 62 B. subtillis PC A B C D E F G H A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242. : No inhibition. 항균성물질을제외하고 E. coli KCTC 62 에대한항균활성이떨어졌으며, B. subtilis PC 2 에대한항균활성은상승하였다. 공시균주 BHKP 와 BHK 균주의항균성물질혼합은내성균 024, 022 와 3 에각각 mm, mm 와 mm 의항균활성을나타내었으며, 첨가농도별항균활성은 Table 에서보는바와같이 mg/ml 와 2. mg/ml 의농도에서 B. subtilis PC 2 에만나타났고, mg/ml 의농도에서는 022 에 mm 의항균활성을나타내었다. 공시균주 BHKP 의항균성물질은단독으로사용하기보다 BHK 균주의항균성물질과함께각각 mg/ml 의농도로혼합하여사용시다양한내성균 에대해항균활성이상승하는것으로확인되었다 한약재유래항균성물질과의항균활성한약재추출물은 mg/ml 의농도에서 E. coli KCTC 62, B. subtilis PC 2 와다제내성 에항균효과가없었다 ( 결과미게재 ). 공시균주 BHKP 의항균성물질과혼합시한약재추출물의농도는상승효과를확인하기위해항균효과가없었던 mg/ml 로하였으며, 공시균주의 ethyl acetate 추출물 ( mg/ml) 과각각 μl 씩 (total 20 μl) 혼합후시험균주에대한항균활성을확인하였다. 그결과 Table 6 에서보는바와같이공시균주의 ethyl acetate 추출물과한약재추출물의혼합은백질려추출물을제외하고 E. coli KCTC 62 에대한항균활성이떨어졌으며, B. subtilis PC 2 에대한항균활성은황금, 조협, 백질려, 오미자, 방풍및박하추출물을각각혼합시상승하였다. 공시균주 BHKP 의 ethyl acetate 추출물과오미자추출물 (e) 의혼합시항균활성은항생제다제내성 3, 022, 3, 024, 242, 3 과 026 에 ~ mm 로나타나항균활성상승효과가가장우수하였고, 감초 (f) 와고삼 (i) 에서도 3 에각각 mm 와 mm 로나타나항균활성상승효과를확인하였다. 공시균주 BHKP 의 ethyl acetate 추출물은오미자추출물과혼합처리시다수의내성균에항균활성상승효과가있으며, 감초와고삼을

6 24 Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Journal 26: 6 (20) Table 6. Antibacterial activity of mixture by BHK and oriental herb extracts Extracts trains BHK ( mg/ml) + Oriental plants ( mg/ml) a b c d e f g h i j nhibitory zone(, mm) E. coli KCTC 62 B. subtillis PC 2 A B C D E F G H A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242. a: chizonepeta tenuifolia va, japonica ( 형개 ), b: cutellaria baicalensis ( 황금 ), c: Koraiensis nakai ( 조협 ), d: Fructus Tribuli ( 백질여 ), e: chizandra chinensis ( 오미자 ), f: Glycyrrhiza uralensis ( 감초 ), g: Ephedra sinica ( 마황 ), h: Ledebouriella seseloides ( 방풍 ), i: ophora flavescens Aiton ( 고삼 ), j: Mentha arvensis var. piperascens ( 박하 ), : No inhibition. 각각혼합하였을때는항균력이다소더강하게나타나는것을확인하였다 항생제와의항균활성시판항생제와의항균활성은다제내성 에대한항생제감수성검사에사용되지않았던항생제 apramycin, ampicillin, cholramphenicol, nalidixic acid 와 kanamycin 을대상으로 0. mg/ml, mg/ml, 2. mg/ml 와 mg/ml 농도로조제한다음다제내성 에대한항균활성을확인하였다. Kanamycin 은 Table 에서보는바와같이다제내성 균주에대하여 0. mg/ml 의농도에서항균력이강하게나타났으나, 나머지항생제는농도에따라항균활성이전혀없거나약하게나타났다. 단백질합성을억제하는 apramycin, chloramphenicol 과 kanamycin 은 mg/ml 의농도에서 균주에항균력을나타냈으나, 세포벽합성을억제하는 ampicillin 은 균주에항균활성이전혀나타나지않았다. 세균의 DNA gyrase 활성을방해하는 nalidixic acid 는다제내성 026 과 3 에항균활성을나타냈다. 이결과로부터공시균주 BHKP 의 ethyl acetate 추출물과혼합시사용될항생제는항균력이높았던 kanamycin 을제외한 apramycin, ampicillin, cholramphenicol 과 nalidixic acid 로하였으며, BHKP 추출물과각각 0. mg/ml, mg/ml, 2. mg/ml 와 mg/ml 의농도가되도록조절하여동량으로혼합을한후항균활성을확인하였다. Table 에서보는바와같이공시균주 BHKP 추출물은시판항생제와혼합시 Table 과비교하여 3 과 242 를제외하고모두우수한항균활성을나타내었으며, 항균력이동일하거나증가하였다. Ampicillin 은단독으로처리시다제내성 균주에모두항균활성이없었으나, 공시균주 BHKP 추출물과혼합시다제내성 3 에특이적으로 항균활성을보였다 (Table, Fig. 2). 공시균주 BHKP (P. aeruginosa 024 저해 ) 와다제내성 에항균활성이다른 (Table 2, Table 3) 변이주 BHKN ( 022 저해 ) 추출물도 ampicillin 과 2. mg/ml, mg/ml 의농도로각각혼합시 Fig. 2 와같이다제내성 3 에항균활성이나타냈으며, BHKP 추출물과동일한항균활성을나타내었다. Table. Antibacterial activity of commercial antibiotics Concentration of antibiotic (mg/ml) Apramycin Ampicillin Chloramphenicol Nalidixic acid Kanamycin A B C D E F G H nhibitory zone (, mm) A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242. : No inhibition.

7 항생제다제내성균 Pseudomonas aeruginosa 에대한생육저해물질생산방선균의분리및항균활성 2 Table. Antibacterial activity of mixture by same concentration of BHK and antibiotics Test sample (mg/ml) BHK + Antibiotics Apramycin Ampicillin Chloramphenicol Nalidixic acid A B C D E F G H nhibitory zone (, mm) A: 024, B: 022, C: 034, D: 026, E: 3, F: 3, G: 3, H: 242. : No inhibition. 균주를최종선발하였으며, Y 배지에탄소원을 maltose 로하여배양시다제내성균중 022 에항균활성을나타내었다. BHKP 의항균성물질은 B. subtilis PC 2 에강한항균활성을보이는다른분리방선균주의배양액과혼합시다제내성균 3 균주 (024, 022, 3) 에대해 mg/ml 농도에서항균력이나타났으며, 한약재추출물과혼합시에는특히오미자에서시험내성균 균주 (3, 022, 3, 024, 242, 3, 026) 에항균활성이나타났다. BHKP 의항균성물질과시판항생제를혼합시항균활성은항생제 apramyin 과 cholramphenicol 의경우 2. mg/ml 혼합시우수한항균력상승효과를나타내었으며, ampicillin 과혼합한경우에는다제내성 3 에강한항균력이확인되었다. 방선균 BHKP 가생산하는항균성물질은정제를통해항생제다제내성 에대해항균활성이증대될것으로사료되며, 다른한약재추출물과시판항생제성분과의혼합처리시에는항균활성을상승시키는작용을하는것으로확인되었다. 따라서방선균 BHKP 가생산하는항균성물질및한약재추출물의혼합사용으로항생제다제내성 에대한신약개발과시판항생제의사용량감소에도움이될것으로사료된다. 감사 본연구는지식경제부지원계명대학교전통미생물자원개발및산업화연구센터에의한것입니다. eferences A: BHKN ( mg/ml), B: BHK ( mg/ml). a: Ampicillin mg/ml, b: Ampicillin 2. mg/ml, c: Ampicillin mg/ml, d: Ampicillin 0. mg/ml. Fig. 2. Antibacterial activity of mixture by ampicillin with BHK N and ampicillin with BHK on 결론 본연구는토양에서분리된방선균으로부터항생제다제내성 를대상으로항균효과를증대시키는물질을검토하였다. 분리방선균으로부터항균활성이우수한 BHKP. Bonten, M. J. (2002) nfection in the intensive care unit: prevention strategies. Curr. Opin. nfect. Dis. : Park, K. H. (200) Nosocomial infection rates and risk factors in intensive care units of a university hospital. M.D. Thesis. University of Chosun, Donggu, Gwangju, Korea. 3. Oh, H.. (200) A study on the nosocomial infection control and development of evaluation indices and model in Korea. Ph.D. Thesis. National University of eoul, Gwanakgu, eoul, Korea. 4. Cho, Y.. (2000) A study on the validity of the hospital infection surveillance records collected by ward liaison nurses. M.D. Thesis. National University of eoul, Gwanakgu, eoul, Korea.. Yoo, J.. (200) Characterization of multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa and functional analysis of PA24 gene. Ph.D. Thesis. University of Korea, eongbukgu, eoul, Korea. 6. Doring, G., M. Horz, J. Ortelt, H. Grupp, and C. Wolz (3) Molecular epidemiology of Pseudomonas aeruginosa in an intensive care unit. Epicemiol. nfect. : Gaynes,. and J.. Edwards (200) Overview of nosocomial infections caused by gramnegative bacilli. Clin. nfect. Dis. 4: 44.. Vidal, F., J. Mensa, M. Almela, J. A. Martinez, F. Marco, C.

8 26 Korean ociety for Biotechnology and Bioengineering Journal 26: 6 (20) Casals, J. M. Gatell, E. oriano, and M. T. Jimenez de Anta (6) Epidemiology and outcome of Pseudomonas aeruginosa bacteremia, with special emphasis on the influence of antibiotic treatment. Analysis of episodes. Arch. ntern. Med. 6: 26.. Falagas, M. E., P. K. Koletsi, and. A. Bliziotis (2006) The diversity of definitions of multidrugresistant (MD) and pandrugresistant (PD) Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa. J. Med. Microbiol. : Pankuch, G. A., H. eifert, and P. C. Appelbaum (20) Activity of doripenem with and without levofloxacin, amikacin, and colistin against Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii. Diagn. Microbiol. nfect. Dis. 6:.. Zaborina, O., J. E. Kohler, Y. Wang, C. Bethel, O. hevchenko, L. Wu, J.. Turner, and J. C. Alverdy (2006) dentification of multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa clinical isolates that are highly disruptive to the intestinal epithelial barrier. Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. :.. nglis, T. J., K. A. Benson, L. O eilly,. Bradbury, M. Hodge, D. peers, and C. H. Heath (20) Emergence of multiresistant Pseudomonas aeruginosa in a Western Australian hospital. J. Hosp. nfect. 6: Jung, J. Y., M.. Park,. E. Kim, B. H. Park, J. Y. on, E. Y. Kim, J. E. Lim,. K. Lee,. H. Lee, K. J. Lee, Y. A. Kang,. K. Kim, J. Chang, and Y.. Kim (20) isk factors for multidrug resistant Acinetobacter baumannii bacteremia in patients with colonization in the intensive care unit. BMC nfect. Dis. : 22.. Neu, J. M. and G. D. Wright (2003) nhibition of sporulation, glycopeptide antibiotic production and resistance in treptomyces toyocaensis NL 00 by protein kinase inhibitors. FEM Microbiol. Lett. : 20.. Bang, B. H. and E. J. Jeong (200) solation and optimal producing conditions of broad spectrum antibiotics from treptomyces sp. Y. Korean J. Food & Nutr. 22: Hayakawa, M. and H. Nonomura () Huminc acid vitamin agar, a new medium for the selective isolation of soil actinomycetes. J. Ferment. Technol. 6: 00.

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1. 2010 6 1, 2 4 Ⅰ,Ⅱ 2013,, -,. - Human Cell.. -,., Biosand Filter(BSF) - BSF Main Filtering (Biofilm) BSF, BSF ( ),. -, BSF BSF. - BSF BSF ( ),,. BSF -,,,. - BSF,. -. -. -. - 2. BSF -, rrna, BSF. 2. -