DNA Sequencing Service Sequencing Reagents DNA sequencing Phone: (ext.4->4)

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기현 양
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3 Overview 바이오니아는국내최초로 Sequencing Service 를시작하였으며, 매년개선된 high-throughput sequencing service 를제공하고있습니다. Plasmid DNA, PCR product 등을비롯하여수많은 template sequencing 이가능한유전자자동분석장비인 ABI 3730XL 및전문인력등의인프라를보유하여연구자들에게신뢰도높은 data 를제공합니다. 또한, 바이오니아만의합성유전자기술을적용하여 Sequencing Service 와 Oligo Synthesis Service 를동시에이용함으로써빠른시간내에 DNA sequence 결과를얻을수있습니다. 특히 primer walking, Virus/ Vector sequence validation 을빠르게서비스해드리고있습니다. 고객의 sample 을소중한고객자산으로인식하여요구사항에부합될수있도록정확한결과를약속된시간내에전달한다는서비스철학을가지고더높은품질의유전자분석서비스를제공하기위해최선을다하고있습니다. Description 바이오니아의 Sequencing Service 는고객이분석하고자하는 template DNA 를의뢰받아 Automatic DNA Analyzer 를이용하여접수시점으로부터 24 시간이내에신뢰도높은염기서열분석결과 (Phred Score (QV): 20, Guaranteed read lengths: 700 bp) 를제공해드리는서비스입니다. Features and Benefits High-reliable Sequence Analysis: 분석하고자하는다양한샘플에대해최적화된조건으로수행되며, 자동분석장비를이용하여 Phred Score (QV): 20, Guaranteed read lengths: 700 bp 를제공합니다. Fast Turnaround Time: 분석시간은접수시점으로부터 24 시간이내로소요됩니다. Convenience - Universal primer is provided free: 다양한 Universal primer 를무료로제공합니다. Competitive Pricing: 합리적인서비스가격으로이용할수있습니다

BIONEER Sequencing Service Procedure Sample 및 Primer 준비 Sample Plasmid DNA (150~200 ng/μl, vol.

10~15 μl) Non-purified PCR product (20 μl 이상 ) Primer : 5 pmole/μl(5 μm), universal primer 제공, oligo

kr) 접수 접수시간 : 10 시, 15 시, 21 시 ( 샘플도착기준 ) Working day: 접수후 24 hour service Sequencing Sample purity 및 yield

4 BIONEER Sequencing Service Procedure Sample 및 Primer 준비 Sample Plasmid DNA (150~200 ng/μl, vol. 10~15 μl) Purified PCR product (50 ng/μl, vol. 10~15 μl) Non-purified PCR product (20 μl 이상 ) Primer : 5 pmole/μl(5 μm), universal primer 제공, oligo synthesis 동시주문가능 주문접수 Order sheet 작성후 (sequencing@bioneer.co.kr) 접수 접수시간 : 10 시, 15 시, 21 시 ( 샘플도착기준 ) Working day: 접수후 24 hour service Sequencing Sample purity 및 yield 확인 BigDye Terminator Cyclic Sequencing Reaction 수행 Sequencing PCR product clean-up ABI 3730XL running Data 분석및발송 Phred score(qv) 20 이상, read length 보장범위 700 bp 이상 3 가지 format(ab1, seq, PDF file) 과 text file 및분석 report 발송 BIONEER 218

5 기술지원및서비스문의 (Technical Support & Service Inquiry) Tel: (4 번 -4 번 ) 또는 042) ,3 sequencing@bioneer.co.kr 상담시간 : 평일오전 9:00 ~ 오후 6:00 ( 주말, 휴일휴무 ) Sequencing 서비스안내 1. Standard Sequencing Service plasmid/pcr product 를분석하고자하는 primer 를이용하여고객이원하는 region 을분석하는서비스이며, 대부분의 normal 샘플에대해최적화되어있습니다. 2. Full length sequencing (primer walking) 길이가긴 insert 를포함한 plasmid 혹은 PCR product 를 primer walking 으로분석하는서비스입니다. 3 kb 기준으로약 1 주일소요되며, size 에따라추가기간이발생됩니다. 서비스완료후 data 는각 single data 및 assemble 후 contig file 형식으로제공되며, primer 는 design 된 primer 정보와함께 dry 된상태로발송됩니다. 3. Difficult sequencing GC/AT rich, repeat sequence, secondary structure 등의 standard sequencing 으로는분석이어려운 structure 를가지고있는 template 를대상으로하는서비스입니다. Difficult sequencing process 는바이오니아만의노하우로최적화되어있으며, standard sequencing 과는다른분석조건및시약이사용됩니다. 4. End sequencing BAC, Fosmid, Cosmid DNA 등 large construct 를대상으로한서비스입니다. 5. Ready-to-load (without editing) DNA Analyzer (ABI 3730XL) running 이전단계까지준비된샘플을대상으로한서비스입니다 (dry 또는 Hi-Di TM formamide 에 elution 된상태로접수가능, 단 BigDye V3.1 만가능 ). 6. Custom DNA Sequencing PCR product 의 direct sequencing 시 high quality data 를얻기위해서는 PCR optimization 이수행되어야합니다. 이에당사에서는다량의샘플에대해최상의맞춤서비스를제공하며, genomic DNA 와세부의뢰정보를보내주시면 primer design 을포함하여 PCR 조건최적화및 Sequencing 까지일련의과정을서비스합니다. 부가서비스 (Additional Service) 안내의뢰샘플의종류에따라선택적으로부가서비스를이용하실수있으며, 부가서비스에사용되는모든 material 은당사제품으로서비스하고있습니다. Colony/ Cell stock Cell stock Cultured Cell Plasmid DNA Genomic DNA Non-purified PCR product Purified PCR product 1. Plasmid DNA extraction 액체배지에서배양된 cell 을보내주시면 plasmid DNA extraction 을수행합니다. Agar plate 혹은 cell stock 형태로의주문도가능하며, 별도의배양비용이추가됩니다. 2. PCR clean-up 1 PCR purification: PCR product 의 direct sequencing 시에는반드시 product 내불순물을제거하기위한 PCR clean up 과정이선행되어야하며, high quality data 를얻기위해서는 non-specific band 를제거하는것이중요합니다. 일반적으로 spin column 을이용한정제는 non-specific band 가존재하지않을경우적합하며, 당사제품인 PCR Purification Kit (AccuPrep PCR Purification Kit) 을사용합니다. 2 Agarose gel extraction: Agarose gel 에서원하는 band 만분리하여추출하는방법으로서 PCR product 내 non-specific band 가존재할경우적합하며, 당사제품인 PCR Purification Kit (AccuPrep Gel Purification Kit) 을사용합니다. 3. PCR & Purification 최적화된 PCR 조건, product size 등의정보와함께 genomic DNA 및 specific primer 를보내주시면 PCR 후 size 확인과 purification 을수행하며, 당사 primer synthesis service 도이용가능합니다. 본서비스과정에는당사제품인 high fidelity PCR premix(accupower ProFi Taq PCR PreMix) 및 PCR Purification Kit 를사용합니다. 서비스이용안내 바이오니아 Sequencing Service Order Sheet 를작성하신후아래안내사항에따라 sample 및 primer 를준비하셔서보내주시면됩니다. 1. Sequencing order sheet 작성안내 1 Order sheet 를다운받으셔서고객정보및샘플정보등해당사항을기입해주시면됩니다. 2 Sample 및 primer name 은알파벳, 숫자, 괄호, 하이픈 (-) 을사용하여간단하게기입해주시기바랍니다. 3 작성하신의뢰서는 (sequencing@bioneer.co.kr) 로보내시면접수가됩니다

2. Sample 및 primer 준비안내 ( 최적적정조건 : 1 rxn 기준 ) 1 Sample 준비 Type Concentration Volume/rxn Purity Plasmid DNA 100 ng/μl 10 μl PCR product 50 ng/μl 10 μl Non-purified PCR product 50 ng/μl 20 μl A

2 Primer 준비 Type Concentration Volume/rxn 세부안내 Universal primer 무상제공 - 당사보유 universal primer 를사용하실경우 name 만기재해주시면됩니다.

5 ml microcentrifuge tube 로준비하실경우상단에기재된샘플이름과 order sheet 에기재하신샘플이름을동일하게적어주시기바랍니다. 4. 배송안내 1 샘플박스에소속기관과의뢰자명을정확히기입하시고, 아래의당사연계배송회사를통하여 sample 및 primer 를배송하시면됩니다.

6 2. Sample 및 primer 준비안내 ( 최적적정조건 : 1 rxn 기준 ) 1 Sample 준비 Type Concentration Volume/rxn Purity Plasmid DNA 100 ng/μl 10 μl PCR product 50 ng/μl 10 μl Non-purified PCR product 50 ng/μl 20 μl A 260/A280 : ~ 1.8 A 260/A230: 2.0 ~ 2.2 Genomic DNA 30 ng/μl 30 μl * 1 rxn 기준이며, 샘플은 1.5 ml tube 혹은 plate 로준비해주시고, 재분석에필요한샘플양을감안하여충분한양을보내주시기바랍니다. 2 Primer 준비 Type Concentration Volume/rxn 세부안내 Universal primer 무상제공 - 당사보유 universal primer 를사용하실경우 name 만기재해주시면됩니다. Specific primer 5 pmol/μl (5 μm) 5 μl Ordered primer Sequencing primer 적정조건 : 18~22 mer, TM 50~56 당사홈페이지온라인주문을하시면생산된올리고의일부는바로 sequencing 에사용됩니다 3. 샘플형태에따른준비사항 1 Single tube 형태 : 1.5 ml microcentrifuge tube 로준비하실경우상단에기재된샘플이름과 order sheet 에기재하신샘플이름을동일하게적어주시기바랍니다. 4. 배송안내 1 샘플박스에소속기관과의뢰자명을정확히기입하시고, 아래의당사연계배송회사를통하여 sample 및 primer 를배송하시면됩니다. ( 실의뢰자명기재 ) 2 택배발송 ( 현대택배, ), 퀵서비스 ( 대전지역에한함, 스피드퀵, ) { 보내실곳 : 대전시대덕구문평서로 8-11 바이오니아 Sequencing 팀 (TEL: )} 3 배송비정책 - 10 rxn 이상당사부담 - 10 rxn 미만고객부담 4 고객님의샘플을해당지역의지사나대리점을확인하시어보내주시면빠르고편하게이용하실수있습니다. 2 Plate 형태 : V-type bottom 의 96 well plate 에각 well 순서에맞도록넣어주시고, cross-contamination 이되지않도록 cap 을이용하여 sealing 하시길권장합니다. BIONEER 220

7 5. BIONEER 보유 universal primer list Primer name Sequence (5 -> 3 ) Length [bases] T7 promoter TAATACGACTCACTATAGGG 20 T7 terminator GCTAGTTATTGCTCAGCGG 19 T3 AATTAACCCTCACTAAAGGG 20 SP6 ATTTAGGTGACACTATAG 18 EBV-R GTGGTTTGTCCAAACTCATC 20 BGH-rev CTAGAAGGCACAGTCGAGGC 20 M13F(-40) GTTTTCCCAGTCACGAC 17 M13R(-40) CAGGAAACAGCTATGAC 17 M13F(-20) GTAAAACGACGGCCAGT 17 M13R(-20) GCGGATAACAATTTCACACAGG 22 pgex5 GGCAAGCCACGTTTGGTG 18 pgex3 GAGCTGCATGTGTCAGAGG 19 pqe-forward CCCGAAAAGTGCCACCTG 18 pqe-reverse GTTCTGAGGTCATTACTGG 19 EGFP-C CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG 22 EGFP-N CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG 22 RVprimer3 CTAGCAAAATAGGCTGTCCC 20 RVprimer4 GACGATAGTCATGCCCCGCG 20 GLprimer1 TGTATCTTATGGTACTGTAACTG 23 GLprimer2 CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA 23 CMV-F CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 21 CMV30 AATGTCGTAATAACCCCGCCCC GTTGACGC 30 CMV24 TATTAGGACAAGGCTGGTGGG CAC 24 Gal4AD TACCACTACAATGGATG 17 Gal4BD-F TCATCGGAAGAGAGTAG 17 Gal4BD-R TTTCTTTGGAGCACTTGAGC 20 MATCHMAKER 3 GTGAACTTGCGGGGTTTTTCA GTATCTACGAT pbad-for ATGCCATAGCATTTTTATCC 20 pbad-rev GATTTAATCTGTATCAGG 18 SV40-pArev CCTCTACAAATGTGGTATGG 20 SV40-pAF AAATAAAGCAATAGCATCAC 20 malef GGTCGTCAGACTGTCGATGAA GCC 24 pcold-f ACGCCATATCGCCGAAAGG 19 pcold-r TCCCCGCCAAATGGCAGGGA 20 3AOX GCAAATGGCATTCTGACATCC 21 5AOX GACTGGTTCCAATTGACAAGC 21 pbabe-f TGACCTGGGAAGCCTTGGCT 20 pbabe-r TTGCTGACTAATTGAGATGCAT GCTTT 27 V5_Reverse ACCGAGGAGAGGGTTAGGGA 20 pjet1.2f CGACTCACTATAGGGAGAGCGG C 23 pjet1.2r AAGAACATCGATTTTCCATGGC AG 24 27F AGAGTTTGATCMTGGCTCAG R TACGGYTACCTTGTTACGACTT F CCAGCAGCCGCGGTAATAC R TACCAGGGTATCTAATCC 18 ITS1 TCCGTAGGTGAACCTGCGG 19 ITS2 GCTGCGTTCTTCATCGATGC 20 ITS3 GCATCGATGAAGAACGCAGC 20 ITS4 TCCTCCGCTTATTGATATGC 20 ITS5 GGAAGTAAAAGTCGTAACAA GG 22 LCO1490 GGTCAACAAATCATAAAGATA TTGG 25 HCO2198 TAAACTTCAGGGTGACCAAAA AATCA 26 Ordering Information Cat. no. Service Description Unit Price ( 원 ) Sequencing Service S Standard Sequencing <96 rxn 6,000 S Standard Sequencing 96 rxn 5,000 S Full length Sequencing kb 60,000 S Ready-to-load Service rxn 3,000 S Difficult Sequencing Service rxn 12,000 S End Sequencing Service rxn 20,000 S Custom DNA Sequencing Service rxn Inquire Additional service S Plasmid DNA Preparation rxn 1,500 S PCR purification rxn 1,500 S Agarose Gel-Extraction rxn 2,500 S PCR & Purification rxn 3,000 S Custom Sequencing Primer Synthesis (25 nmol기준 ) mer

8 FAQ [ 접수 ] Q: Sequencing 의뢰를할때필요한것이무엇인가요? A: 의뢰하고자하는 sample 과 primer 를준비하여보내주시고, sequencing order sheet 를다운받으셔서작성하여 sequencing@ bioneer.co.kr 로메일을보내주시면샘플이도착하는즉시접수가이루어집니다. Q: Order sheet 는어디서받을수있나요? A: 바이오니아홈페이지에서다운받아사용하시면됩니다. ( SequencingService-overview.aspx) Q: 바이오니아에서제공하는 Universal primer 는무엇이있나요? A: 앞서기술지원및서비스문의에기재된 Universal primer list 를참조하여주시기바랍니다. Q: 바이오니아에서주문한올리고를 sequencing 하고싶습니다. A: 바이오니아올리고서비스를이용하여주문하시되, comment 란에 sequencing 에사용해주세요 와같이기재하시면, primer 합성후 sequencing team 으로전달되어쉽게동시주문하실수있습니다. Q: 의뢰샘플의배송방법과배송료에대해설명해주세요. A: 아래주소로배송하여주시고, 본사및서울지사영업사원혹은바이오니아지역대리점을통해샘플을보내주시면됩니다. 배송료는 10 rxn 미만 - 고객부담, 10 rxn 이상 - 당사부담이오니참고하시기바랍니다. ( 주소 - 대전광역시대덕구문평동문평서로 8-11 바이오니아 Sequencing 팀 ) Q: 재반응접수란무엇인가요? A: 재반응접수는초기반응과동일 sample 및동일 primer 에대해결과개선의여지가있는건에한하여 1 회무료로자동접수됩니다. 이는결과보고에기재되어확인가능하며, 결과발송 2 일이내에재반응결과를받아보실수있습니다. Q: 추가반응과재반응의차이점이무엇인가요? A: 추가반응이란초기반응샘플을다른 primer 를사용해 sequencing 하는것으로, 동일샘플을사용하더라도서비스비용이부가됩니다. 결과개선의여지가있어무료로 1 회에한하여초기반응을반복시행하는재반응과는차이가있으므로서비스이용에유의하시기바랍니다. Q: 추가반응을의뢰하고싶습니다. A: Sequencing order sheet 내에초기반응샘플의접수번호를 comment 란에기재하셔서접수하시고, 추가의뢰 primer 를보내주시면됩니다. [ 결과 ] Q: Sequencing service 를통해얻을수있는 read length 가얼마나되나요? A: single extension 의경우일반적으로약 1.2 kb 까지분석되며당사 guarantee 범위는 700 bp 입니다. 양방향분석시약 1.2 kb 의 high quality data 를받아보실수있습니다. Q: 분석소요시간은얼마나걸리나요? A: 접수후 24 시간이내에결과를받아보실수있습니다. 접수가완료되면접수메일이발송되고결과발송예정시각을알려드립니다. Q: 결과는어떤형태로제공되나요? A: single extension 당 3 가지 format (ab1/ seq/ PDF file) 과 seq merge text file 및 report 가발송됩니다. ab1 file: Chromatogram file 로서, chromas/ Finch TV 등의프로그램으로확인하실수있습니다. seq file: 염기서열을나열한 file 로, 메모장을통해확인하실수있습니다. PDF file: 염기서열을나타내는 signal 을손쉽게확인할수있도록 PDF 형태로변환한 file 입니다. seq merge text file: 의뢰하신모든샘플의분석된 sequence 를 text file 로통합한 file 입니다. Report: 결과분석및개선방법에대한정보및전달사항을포함한보고서입니다. Q: Sequencing report 상에 group a, b, c, d 가뭔가요? A: Low quality data 를 data 양상에따라 group 으로나누어이해가쉽도록하였습니다. a 재반응을통해개선의여지가있는그룹입니다. 1 회에한하여무료로자동접수됩니다. b 분석되지않은경우로재반응을통해확인할필요성이있습니다. 1 회에한해무료로자동접수됩니다. c 샘플의구조적원인에의해분석저해를받아동일반응으로는결과개선이되지않으므로재반응을진행하지않습니다. d 기타원인으로인하여, 동일반응으로는결과개선이되지않으므로재반응을진행하지않습니다. [ 결제 ] Q: 결제관련문의는어디로연락하나요? A: 온라인 / 지로 / 기관결제가가능하며자세한사항은고객지원센터 ( ) 로문의하시면친절히답변해드리겠습니다. Q: 견적서를받아볼수있을까요? A: 가격정보는 ordering information 을참조하여주시고, 견적서발행을원하신다면고객지원센터 ( ) 로요청하여주시기바랍니다. 대량건의경우가격조정이가능하므로담당영업사원과상담하여주시기바랍니다. BIONEER 222

9 [ 기타 ] Q: 서비스진행후샘플을보관하나요? 보관한다면보관기간은어떻게되나요? A: 네. Sample 및 primer 모두접수번호로구분하여최대 1 개월보관합니다. 이기간내에추가반응접수를원하신다면초기접수번호를 order sheet 에기재해주시면됩니다. 장기보관에따른 degradation 으로인한문제는책임지지않으므로, primer 를장기보관하실경우에는 1 개월을주기로교체하시길권장합니다. Q: 부가서비스이용은어떻게하나요? A: Order sheet 의 order information 에체크하여주시면됩니다. Sheet 가구버전일경우 comment 란에기재하여주시기바랍니다. Q: 사용되는시약및기기에대해알고싶습니다. A: 아래 Information 을참고하여주시기바랍니다. Sequencing Process Information 1) Material & Instruments 1 MyGenie TM 96 Gradient Thermal Block (Block PCR 장비, Bioneer 사 ) 2 BigDye Terminator v3.1 sequencing kit (Applied Biosystems, USA) 3 ABI3730XL (Applied Biosystems, USA) 2) Method 1 Sequencing PCR <PCR 에사용된 template 양은아래표를참조하시면됩니다.> DNA size/ DNA amount Template PCR product DNA amount 100~200 bp 5~10 ng 200~500 bp 10~20 ng 500 bp~1 kb 20~50 ng Double strand Cosmid, BAC Genomic DNA 1~2 kb 50~100 ng 2 kb 2 Purification 3 ABI3730XL Running 100~200 ng 200~500 ng 300~600 ng 2~3 μg 223

10 02 Sequencing Reagents AccuPower DNA Sequencing Kit 225 Top TM DNA Sequencing Kit 226 SilverStar TM Staining Kit 227

AccuPower DNA Sequencing Kit Experimental data Description AccuPower DNA Sequencing Kit 는 sequencing 에필요한모든성분이 premix type 으로하나의 tube 에동결건조처리된 sequencing kit 로서, 빠르고정확하게염기서열을분석할수있습니다.

또한 7-deaza dgtp 를포함하고있어 band 의 compression 을최소화시킬수있습니다. Features and Benefits Sensitivity & reproducibility 모든구성성분을진공건조시켜 1 회분씩제공하므로편리하게사용할수있으며, 특허받은물질이첨가되어있어제품의안정성이높고, 보관성이뛰어나며실험재현성을최대화합니다.

11 AccuPower DNA Sequencing Kit Experimental data Description AccuPower DNA Sequencing Kit 는 sequencing 에필요한모든성분이 premix type 으로하나의 tube 에동결건조처리된 sequencing kit 로서, 빠르고정확하게염기서열을분석할수있습니다. 주형 DNA 를증폭시키기위해 thermal cyclic technique 을사용하여고온에서 sequencing 반응을수행하므로, double strand DNA 의 alkaline denaturation 과정이필요없을뿐만아니라주형 DNA 의 2 차구조나높은 GC 함량에의한문제점을최소화시킬수있습니다. 또한 7-deaza dgtp 를포함하고있어 band 의 compression 을최소화시킬수있습니다. Features and Benefits Sensitivity & reproducibility 모든구성성분을진공건조시켜 1 회분씩제공하므로편리하게사용할수있으며, 특허받은물질이첨가되어있어제품의안정성이높고, 보관성이뛰어나며실험재현성을최대화합니다. G/A/T/C 각 tube 에반응에필요한모든구성성분이 premix 되어진공건조상태로존재합니다. G mix : ddgtps/dntps A mix : ddatps/dntps T mix : ddttps/dntps C mix : ddctps/dntps 각 mix 는 buffer, Top DNA polymerase 를모두포함하고있습니다. *Sequencing 반응에영향을주지않는특정 dye 를포함하여, mix 과정을직접확인, 반응액의손실우려에대한모니터링이가능합니다. * 반복적이고번거로운 pipetting 조작을최소화, mixing time 을줄이고이에따른실험오류를방지합니다. Figure. 1. The sequence analysis of plasmid DNA. DNA sequence analysis of purified plasmid DNA 1 μg of the purified sample was sequenced using AccuPower DNA Sequencing Kit(K-1010) and stained by Silverstar TM Staining Kit (K-1050) Reference 1. Template DNA 와 primer 의적정농도 PCR product(200 bp 기준 ) Primer(17-24 mer) 100 ~ 300 ng 20 ~ 30 pmoles Plasmid DNA(3,000 bp 기준 ) 1 ~ 2 μg Primer(17-24 mer) 20 ~ 30 pmoles Reference 2. Primer Sequences M13/pUC(-47) Forward Primer 24 mer 5 -d(cgccagggttttcccagtcacgac)-3 M13/pUC(-48) Reverse Primer 24 mer 5 -d(agcggataacaatttcacagga)-3 Ordering Information Cat. no. K Product Description AccuPower DNA Sequencing Kit, 24 rxns, 0.2 ml 8-strip tube PreMix type Storage : Store at

Top DNA Sequencing Kit Features and Benefits Cat. no. K-1020 Contents : 100 samples을반응할수있는양 500 U Top DNA polymerase 200 μl 4d/ddNTP Mixes(7-Deaza dgtp), each 500 μl 10 x Reaction Buffer 1.

12 Top DNA Sequencing Kit Features and Benefits Cat. no. K-1020 Contents : 100 samples을반응할수있는양 500 U Top DNA polymerase 200 μl 4d/ddNTP Mixes(7-Deaza dgtp), each 500 μl 10 x Reaction Buffer 1.6 ml Stop Solution 100 μl M13/pUC(-47) forward primer(10 pmoles/ μl) 1 ea. Technical Manual Cat. no. K-1021 Contents : 500 samples을반응할수있는양 Description Top TM DNA Sequencing Kit 는 Sequencing 에필요한모든성분이공급되는 sequencing kit 로서빠르고도안전한 silver staining 에의해유전자서열을분석할수있습니다. Thermus thermophilus 의 DNA polymerase sequencing grade (Top DNA polymerase) gene 을 E.coli 에 cloning 한다음유전자조작에의해 5 ->3 exonuclease 의활성을제거시킨 sequencing grade Top DNA polymerase 를사용함으로써일정한 band intensity 와 background 를최소화시킨최상의 sequencing 결과를얻을수 있습니다. 2,500 U Top DNA polymerase 1 ml 4d/ddNTP Mixes(7-Deaza dgtp), each 2.5 ml 10 x Reaction Buffer 8 ml Stop Solution 500 μl M13/pUC(-47) forward primer(10 pmoles/μl) 1 ea. Technical Manual *Caution: 녹일시에는 ice 상태에서온도를유지시켜주십시오. Enzyme 은첨가된안정화물질에의해장기보관시안정합니다. Storage : Store at -20 Table1. Comparison of Top DNA polymerase with other sequencing grade enzymes Sequencing Grade Enzyme Top DNA polymerase Taq polymerase T7 Sequenase Klenow Fragment Processivity High High Moderate Low Rate of incorporation (dntps/sec) Exonuclease activity >600 >600 > >3 exonuclease inactivated by deletion 5 ->3 exonuclease inactivated by deletion 3 ->5 exonuclease inactivated by deletion 3 ->5 exonuclease inactivated by deletion MW(Dalton) 60,000 80,000 84,000 75,000 Readable data(bp) Organism Thermus thermophilus HB27 Thermus aquaticus T7 bacteriophage E. coli Ordering Information BIONEER Cat. no. Product Description K-1020 Top TM DNA Sequencing Kit, 100 rxns, Each tube K-1021 Top TM DNA Sequencing Kit, 500 rxns, Each tube 226

Enhancing solution 에의해높은민감도를가지는 Silverstar TM Staining kit 는적은양 (1 pg DNA/mm2 band cross-selection) 의 DNA 도검출가능하며, DNA sequencing 용 gel 뿐만아니라 DDRT, SSCP, VNTR, RAPD 등다양한분석에적용할수있습니다.

13 SilverStar Staining Kit Storage: Store at room temperature Silver Staining 에사용되는물은반드시 3 차증류수를이용하십시오. Experimental data Description 기존의 Silver staining system 보다 DNA 검출민감도를 20 배이상높일수있도록고안된 enhancing solution( 등록특허 ; KOR, US) 을포함한제품입니다. Enhancing solution 에의해높은민감도를가지는 Silverstar TM Staining kit 는적은양 (1 pg DNA/mm2 band cross-selection) 의 DNA 도검출가능하며, DNA sequencing 용 gel 뿐만아니라 DDRT, SSCP, VNTR, RAPD 등다양한분석에적용할수있습니다. 방사선동위원소를사용하지않으므로안전하게실험을할수있을뿐만아니라, kit 를구성하는각각의시약들이 1 회용으로개별포장되어있어사용하기에편리합니다. Silver 에의한 DNA 분석의또하나의장점은신속한결과확인입니다. 방사선동위원소에의한 detection 결과는하루이상의시간이경과된후확인이가능한반면 gel 의 fixing, staining, developing 3 단계에의해이루어지는 DNA silver staining 은 1 시간 30 분안에결과를확인할수있습니다. Figure. 1. Pattern of differentially displayed mrna using RT/PCR PreMix. A total RNA was purified from endothelial cell(-) and Ras induced endothelial cell(r). dt-({g/a/c} indicates oligo dt11-(g/a/c) primer and AP1 indicates arbitrary primer 1. Procedures 1. Glass Coat Treatment : for long glass (separation) 2. Glass Bind Treatment : for short glass (binding) 15 min 15 min 3. Gel making & Pre-running/Running 2-4 hr 4. Fixing : by 10% acetic acid 30 min 5. Enhancing : by Enhancing solution 30 min 6. Staining : by Silver Nitrate 30 min 7. Developing : by Sodium Carbonate 5-10 min 8. Stopping& Washing : 10% acetic acid 5 min 9. Drying : on Ordering Information Cat. no. K-1050 SilverStar TM Staining Kit, 20 Gels Product Description 227

14 BIONEER 228

Sequencing Service DNA sequencing Phone: (ext.4->4)

Sequencing Service DNA sequencing Phone: (ext.4->4) DNA sequencing Phone: 1588-9788 (ext.4->4) Email: sequencing@bioneer.co.kr 01 3 Overview 바이오니아는국내최초로 를시작하였으며, 매년개선된 high-throughput sequencing service 를제공하고있습니다. Plasmid DNA, PCR product 등을비롯하여다양한종류의 template