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- 주일 빈
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1 Korean J. Food Sci. An. Vol. 33, No. 5, pp. 610~616(2013) DOI ARTICLE 분유에오염된 Cronobacter sakazakii 검출을위한중합효소연쇄반응, 실시간중합효소연쇄반응, 등온검출법의비교 김영주 1 서승우 왕효우 서동주 이민화 손나리 이복희 최창순 * 중앙대학교식품공학부식품영양학과, 1 중앙대학교교육대학원영양교육전공 Comparison of Polymerase Chain Reaction, Real-time Polymerase Chain Reaction, and Loop-Mediated Isothermal Amplification for the Detection of Cronobacter sakazakii in Milk Powder Young-Joo Kim 1, Sheungwoo Seo, Xiaoyu Wang, Dong Joo Seo, Min Hwa Lee, Na Ry Son, Bog-Hieu Lee, and Changsun Choi* School of Food Science and Technology, Department of Food and Nutrition, Chung-Ang University, Anseong , Korea 1 Department of Nutrition Education, Chung-Ang University, Anseong , Korea Abstract Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an emerging detection technology for the amplification of DNA under isothermal conditions. The aim of this study was to develop a rapid and reliable LAMP technique for the detection of Cronobacter sakazakii in milk powder. In order to enhance the sensitivity and specificity, LAMP primers targeting outer membrane protein A (ompa) gene of C. sakazakii were designed using Explorer V4 software. Thirty seven C. sakazakii strains and 13 pathogenic microorganisms were used for comparative detection of C. sakazakii using polymerase chain reaction (PCR), real-time PCR, and LAMP. LAMP developed in this study could specifically detect C. sakazakii strains without cross-reactivity with other foodborne pathogens. LAMP products amplified from ompa gene of C. sakazakii were digested with with HhaI and NruI enzyme. The specificity of LAMP was confirmed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. LAMP could detect C. sakazakii within 1 h without bacterial culture and its detection limit was as low as 1 CFU/mL C. sakazakii in milk. In the comparison of the sensitivity, LAMP showed 10,000- and 100-times higher detection limit than PCR or real-time PCR, respectively. Therefore, this study can conclude that LAMP is a rapid and reliable detection technique for C. sakazakii contaminated in powdered milk. Key words: loop-mediated isothermal amplification (LAMP), Cronobacter sakazakii, ompa, specificity, sensitivity 서 *Corresponding author: Changsun Choi, Department of Food and Nutrition, Chung-Ang University, Anseong , Korea. Tel: , Fax: , cchoi@cau.ac. kr 론 Cronobacter sakazakii는 Enterobacteriaceae과속하는그람음성간균이며, 포자를형성하지않는통성혐기성균이다 (Friedemann, 2007). 1980년 Enterobacter sakazakii라고명명되었으나, 2008년에 Cronobacter species로재분류되면서 C. sakazakii로학명이변경되었다 (Iversen et al., 2008). 현재알려진 Cronobacter spp. 는 C. sakazakii, Cronobacter dublinensis, Cronobacter malonaticus, Cronobacter muytjensii, Cronobacter turicensis이다 (Iversen et al., 2008). C. sakazakii는모든연령대에서질환을일으킬수있으나, 특히생후 1개월이하의신생아, 조산아, 저체중아등의영유아에게수막염, 패혈증, 신생아괴사성장염과같은증상을일으키는매우위험한급성기회감염균이다 (Arad et al., 2001; Farmer et al., 1980; Guillaume-Gentil, 2005). 현재까지집계된바에의하면, C. sakazakii의발생율은낮으나 C. sakazakii에감염된영유아의치사율은 33-80% 이상으로매우치명적이다 (Guillaume-Gentil, 2005). 1958년영국에서처음으로 C. sakazakii 감염에의해 2명의신생아가뇌수막염으로사망한사례를보고한이후 2003년까지발생한 76건의 C. sakazakii 식중독으로 19명이사망하였다 (Iversen and Forsythe, 2003). 610
2 Comparison of PCR and LAMP for the detection of C. sakazakii 611 C. sakazakii균의기존검출법은세균배양, 생화학적검사, 혈청학적분석이있지만이러한방법들은시간이많이소요되고정확하지않다는문제점이있다 (Derzelle et al., 2007). 미국 Food and Drug Administration(U.S. FDA) 는 C. sakazakii의검출법으로세균분리배양법, polymerase chain reaction(pcr), real-time PCR 방법을추천하였다. 시간이많이소요되며민감도가낮은세균분리배양법에비하여 PCR 은민감도와특이도가좋으나 DNA를확인하기위해전기영동과정과전문적인기술자가필요하기때문에보편적으로사용하기어려운단점이있다 (Orlandi and Lampel, 2000). Real-time PCR은 PCR보다민감도가높고 DNA 증폭정도를실시간으로확인이가능하고전기영동과정없이형광물질을이용하여신속하고정확하게확인할수있지만그과정이정교하고복잡하며고가의장비가필요하다는단점이있다 (Liu et al. 2006; Yamazaki et al., 2008). 최근에는등온조건하에서민감하고빠르게 DNA를증폭할수있는등온증폭법 (loop-mediated isothermal amplification, LAMP) 이개발되었다 (Notomi et al., 2000). LAMP 검출법은표적유전자를증폭한다는점에서는 PCR과유사하지만, 일정한온도에서온도변화없이특정유전자의증폭이가능하기때문에반응시간을단축할수있다. LAMP 는 DNA가닥의변성반응을위해등온조건하에서 Bst DNA polymerase와표적 DNA의특정염기서열을바탕으로특이적으로디자인된 4개혹은 6개의 primer와몇가지간단한장비만으로표적유전자를다량증폭할수있다 (Notomi et al., 2000). 이러한 LAMP기법은 Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Mycobacterium avium, Yersinia pseudotuberculosis, Mycoplasma pneumoniae, Porphyromonas gingivalis와같은병원성미생물의신속검출기술로활용되고있어식중독병원체의조기검출예방에활용할수있을것으로생각되고있다 (Enosawa et al., 2003; Saito et al., 2005; Yamazaki et al., 2008; Yoshida et al., 2005). 따라서본연구에서는 C. sakazakii를특이적으로증폭할수있는 LAMP 기술을개발하고, C. sakazakii가오염된조제분유에서 PCR, real-time PCR, LAMP 검출법의민감도와특이도를비교함으로써현장적용성을평가하였다. 재료및방법 공시균주 C. sakazakii의 LAMP 검출법개발을위하여 C. sakazakii ATCC 29004, C. sakazakii ATCC 개의표준균주를사용하였다. 또한, 본연구에서개발한 C. sakazakii LAMP 검출법의특이도검사를위해식품으로부터분리한 35개의 C. sakazakii 균주를중앙대학교식품영양학과식품미생물연구실에서제공받았으며, Arcobacter buzleri ATCC 49616, Bacillus cereus ATCC 13061, B. cereus ATCC 10876, Escherichia coli O157:H7 ATCC 43890, E. coli O157:H7 ATCC 43889, Listeria monocytogenes ATCC 19114, L. monocytogenes ATCC 15313, Salmonella Typhimurium ATCC 43174, Salmonella Enteritidis ATCC 43076, Staphylococcus aureus ATCC 12600, S. aureus ATCC 10768, Vibrio parahaemolyticus ATCC 4664, V. parahaemolyticus ATCC 을 American Type Culture Collection(ATCC; USA) 에서구매하여음성대조군으로사용하였다. C. sakazakii균주는 Brilliance TM Enterobacter Sakazakii Agar(Oxoid, UK) 에서 37 o C 조건으로 24시간 1차배양하여단일집락을선택하였으며 Tryptic Soy Broth(TSB; Difco, Becton Dickinson, USA) 에서 1차배양과동일한조건으로 2차배양하여 DNA 추출에사용하였다. A. buzleri는 Arcobacter Selective Broth (Oxoid) 에 1.2% Agar Technical(Oxoid) 을첨가하여사용하였으며 B. cereus는 Tryptic Soy Agar(Oxoid), E. coli O157: H7은 Sorbitol McConkey Agar(Oxoid), L. monocytogenes 는 Listeria Selective Agar Base(Oxoid), Salmonella spp. 는 Rappaport-Vassiliadis Soya Peptone Agar(Oxoid), S. aureus 는 Baird-Parker Agar(Oxoid), V. parahaemolyticus는 2% NaCl이함유된 TSA에각각 1차배양하여단일집락을선택하였으며, TSB에 2차배양한후 DNA 추출에사용하였다. DNA 추출 2차배양이끝난 37개의 C. sakazakii와 13개의음성대조군균주를각각 1.5 ml 튜브에옮겨담고 100 o C 끓는물에 10분간중탕한후 ice에서냉각시켰다. 8,000 rpm에 2분간원심분리하여상층액을새로운 1.5 ml 튜브에옮겨담았으며, 이것을각균주의 DNA로사용하였다. C. sakazakii의 LAMP 검출법개발 LAMP 검출법개발을위한표적유전자로는 C. sakazakii 의병원성과상관성이잘알려진 outer membrane protein A(ompA) gene(genbank accession number: GQ845410) 을표적유전자로선정하였다. LAMP 프라이머디자인에는 Explorer V4 software(fujitsu System Solution) 를이용하였으며, C. sakazakii ompa gene을증폭할수있는 LAMP 프라이머후보군을다수확보한후예비연구에서비특이반응이없는최적의프라이머를선정하여본연구에서사용하였다 (Table 2). LAMP 검출법을수행하기위해 1 reaction buffer (New England BioLabs, USA), 20 mm dntp, Bst polymerase 8 U, inner primer인 FIP와 BIP를각각 40 pmol, outer primer 인 F3와 B3을각각 20 pmol, template DNA 2 µl로반응혼합액을구성한후 diethyl pyrocarbonate (DEPC)-treated distilled water로최종용량을 25 µl로맞추었다. 이혼합액은 MJ MINI Personal Thermal Cycler(Bio-Rad, USA) 로 64 o C에서 60분, 80 o C에서 10분간반응시켰다. LAMP product
3 612 Korean J. Food Sci. An., Vol. 33, No. 5 (2013) Table 1. Comparison of PCR and LAMP detection in the reference bacterial stains used in the study No. Original ID LAMP PCR No. Original ID LAMP PCR 1 C. sakazakii 1 FDA C. sakazakii FSM 292 FDA C. sakazakii 2 FDA C. sakazakii FSM 293 FDA C. sakazakii 3 FDA C. sakazakii FSM 294 FDA C. sakazakii 5 FDA C. sakazakii FSM 295 FDA C. sakazakii 6 FDA C. sakazakii FSM 297 FDA C. sakazakii 2.40 FDA C. sakazakii FSM 298 FDA C. sakazakii 2.44 FDA C. sakazakii FSM 299 FDA C. sakazakii 2.46 FDA C. sakazakii FSM 300 FDA C. sakazakii 2.47 FDA C. sakazakii FSM 302 FDA C. sakazakii 2.80 FDA C. sakazakii FSM 303 FDA C. sakazakii 2.81 FDA C. sakazakii ATCC C. sakazakii 2.82 FDA C. sakazakii ATCC C. sakazakii 2.83 FDA A. butzleri ATCC 14 C. sakazakii 2.84 FDA B. cereus ATCC 15 C. sakazakii FDA B. cereus ATCC 16 C. sakazakii FSM 262 FDA E. coli O157:H ATCC 17 C. sakazakii FSM 265 FDA E. coli O157:H ATCC 18 C. sakazakii FSM 270 FDA L. monocytogenes ATCC 19 C. sakazakii FSM 271 FDA L. monocytogenes ATCC 20 C. sakazakii FSM 272 FDA S. Enteritidis ATCC 21 C. sakazakii FSM 273 FDA S. Typhimurium ATCC 22 C. sakazakii FSM 274 FDA S. aureus KCCM 23 C. sakazakii FSM 275 FDA S. aureus ATCC 24 C. sakazakii FSM 287 FDA V. parahaemolyticus ATCC 25 C. sakazakii FSM 290 FDA V. parahaemolyticus 4664 KACC Table 2. Oligonucleotide sequences of PCR, real-time PCR, and LAMP for the detection of C. sakazakii outer membrane protein A (ompa) gene Primer Oligonucleotide sequence Reference F3 5'-CCC GGT GAA GGA TTT AAC CG-3' LAMP B3 5'-CGT CGT TAG GGA TAA AGC CG-3' BIP 5'-CAG GCC GCA CCG AAA GAT AAC AAT CGT GGA ACT GGG ACC A-3' In this study FIP 5'-TGC AAT CGC GAT AGC CGT CTT TCA AGG AAA AGC GCA TGG C-3' Real-time PCR Forward Reverse Probe 5'-CCG GAA CAA GCT GAA AAT TGA-3' 5'-TCT TCG TGC TGC GAG TTT G-3' FAM-5'-ACT CTG ACA CAC CGC GCA TTC CTG-3'-TAMRA Liu et al., 2006 는 1% agarose gel을사용하여전기영동을실시하였으며, Launch DocIT LS (UVP Advanced BioImaging Software version a, UK) 로분석하였다. LAMP 검출법의특이도검사 PCR에의하여얻어지는 DNA 산물과달리 LAMP 검출법은연속적인 DNA 증폭산물을생산하므로전기영동을실시하는경우사다리 (ladder-like) 와같은유형으로나타난다. 이러한 DNA 증폭산물의특이도검정을위해서증폭부위에존재하는특이염기서열을 GeneCutter (DNASTAR) 로확인하였다. C. sakazakii ompa 증폭산물의염기서열분석에서확인된부위를 HhaI과 NruI을사용하여 restriction fragment length polymorphism(rflp) 을수행하여특이도검정을하였다. RFLP는 1 reaction buffer, 10 U NruI 또는 HhaI, 2 µg의 Bovine serum albumin(bsa), 4 µl의 LAMP product DNA로반응혼합액을구성한후 DEPC-treated distilled water를이용하여최종반응용량을 20 µl로맞추었다. RFLP는 37 o C 조건에서 2시간반응시키고, 65 o C에서 25분간반응시켜효소를불활성화하였다. 결과는전기영동후 Launch DocIT LS로분석하였다. 양성대조군과음성대조군에대한 C. sakazakii LAMP 검출법의특이도를검증하기위하여표준균주를포함한 37 개의 C. sakazakii와 13개의병원성미생물에대하여 LAMP 및 PCR을실시하였다. LAMP 검출법은본연구에서개발한 C. sakazakii LAMP 검출법을사용하였으며 PCR은다음과같이수행하였다. PCR mixture는 1 reaction buffer (Bioneer, Daejeon, Korea), 20 mm dntp, Top polymerase 1 U, template DNA 2 µl와 forward, reverse primer를각각 20 pmol씩포함하였으며, LAMP 검출법개발을위하여제작된 outer primer인 F3와 B3를 PCR primer로써사용하였
4 Comparison of PCR and LAMP for the detection of C. sakazakii 613 Fig. 1. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) of LAMP DNA products using HhaI and NruI restriction enzyme. M: 100-bp DNA ladder, Lane 1: Negative control, Lane 2: C. sakazakii LAMP product. Lane 3: Digestion of C. sakazakii LAMP product with HhaI restriction enzyme, Lane 4: Digestion of C. sakazakii LAMP product with NruI restriction enzyme. 다 (Table 2). PCR 반응은 94 o C에서 5분간 DNA를변성시킨후 94 o C에서 30초, 57 o C에서 30초, 72 o C에서 30초를 1 cycle로하여총 35 cycle로반응시킨후 72 o C에서 5분간더진행시켰다. PCR product는 1% agarose gel를이용하여전기영동을실시하고 Launch DocIT LS로분석하였다. 24시간배양하고, 균수를측정하여접종액으로준비하였다. 조제분유는 0.1% bacteriological peptone water(pw) 로 20% 분유액을만들었으며, 10 ml의분유액에 C. sakazakii ATCC 29004를 7 Log, 6 Log, 5 Log, 4 Log, 3 Log, 2 Log, 1 Log, 0 Log, -1 Log CFU/mL 수준으로각각인위오염시켰다. C. sakazakii가인위접종된샘플의 DNA는 Genomic DNA Extraction kit(bioneer) 를사용하여추출하였으며, LAMP, PCR, real-time PCR을각각실시하여 C. sakazakii 의검출민감도를비교분석하였다. LAMP 및 PCR법은 C. sakazakii의특이도검사와동일하게진행하였으며, real-time PCR은 Liu 등 (2006) 이선행연구에서보고한 TaqMan probe법을이용하여검출민감도를비교하였다. 1 premix Ex Taq(Takara Biotech, China), C. sakazakii 16S-23S internal transcribed spacer(its) 를표적유전자로증폭하는 forward와 reverse primer를각각 5 µm, probe 10 µm, template DNA 2 µl로반응혼합액을구성한후 DEPC-treated distilled water를이용하여반응용량을 25 µl로맞추었다. Thermal Cycler Dice Real Time System(Takara, Japan) 을이용하여 95 o C에서 10초, 55 o C에서 20초, 72 o C에서 15초간총 45 cycle로 PCR을수행하였다 (Liu et al., 2006). 결과및고찰 LAMP, PCR, real-time PCR의분유내 C. sakazakii 검출민감도비교실제조제분유나 powder형식품에서 C. sakazakii균의검출가능성을확인하기위해시판중인조제분유를구입하여검출민감도실험을실시하였다. 접종원은표준균주인 C. sakazakii ATCC 29004로 brain heart infusion broth에 LAMP 검출법의특이도 37개의 C. sakazakii균주와 13개의음성지표균인병원성미생물을사용하여 LAMP 검출법과 PCR법의특이도를검증한결과, LAMP 검출법및 PCR법모두 37개의 C. sakazakii균주에대해서는양성반응을보였으며음성지표균에대해서는모두음성반응을보였다 (Table 1 and Fig. 2). 본 Fig. 2. Specificity of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of C. sakazakii using reference strains. M: 100-bp DNA ladder, Lane 1: negative control, Lane 2: Cronobacter sakazakii ATCC 29004, Lane 3: Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Lane 4: Salmonella Typhimurium ATCC 43971, Lane 5: Arcobacter butzleri ATCC 49616, Lane 6: Listeria monocytogenes ATCC 19114, Lane 7: Listeria monocytogenes ATCC 15313, Lane 8: Vibrio parahaemolyticus KCCM 4664, Lane 9: Vibrio parahaemolyticus ATCC 43996, Lane 10: Escherichia coli O157:H7 ATCC 43889, Lane 11: Escherichia coli O157:H7 ATCC 43890, Lane 12: Bacillus cereus ATCC 13061, Lane 13: Staphylococcus aureus ATCC
5 614 Korean J. Food Sci. An., Vol. 33, No. 5 (2013) 연구에서얻어진 LAMP product를 GC GC 염기서열을특이적으로절단하는제한효소 HhaI으로반응시킨결과, 2개의 cutting site가존재하여 66 bp, 90 bp, 24 bp 3개분절로관찰되었다. 또한 TCG CGA, AGC GCT 염기서열을특이적으로절단하는제한효소 NruI으로반응시킨결과, 한개의 cutting site가존재하여각각 164 bp, 79 bp 2개분절로관찰되었다. 이와같이 LAMP products에대한 RFLP 결과로 C. sakazakii LAMP 검출법에의해증폭된 DNA가 C. sakazakii-specific ompa임이확인되었다 (Fig. 1). 본연구에서표적유전자로선정한 C. sakazakii의 ompa 는유전자염기서열의변이가적고, 종특이적인특징이있어선행연구에서개발한 PCR 또는 real time PCR 개발에사용되었다 (Ye et al., 2009). ompa 유전자에의하여합성되는 outer membrane protein A는그람음성장내세균의세포외막에존재하는단백질로 N-말단에 β-barrel 도메인을가지며 C-말단은 α-helix구조로양친매성구조를가지고있다 (Alex and Georg, 1998; Singh et al., 2003). E. coli나 S. Typhimurium과같은그람음성장내세균과같이 C. sakazakii균의 outer membrane protein A도인간의소장상피세포에침입과병원성에관여한다고보고되어있다 (Mohan Nair and Venkitanarayanan, 2007; Singh et al., 2003). 또한 C. sakazakii의 outer membrane protein A는병원성을가진박테리오파지나박테리오신의수용체로작용하고, 대식세포의세포자살 (apoptosis) 을막아면역계로침투하는기능이알려져있다 (Alex and Georg, 1998; Singh et al., 2003). LAMP 검출법에의한분유내 C. sakazakii 검출민감도 LAMP 검출법에의한분유에접종된 C. sakazakii의검출한계는 1CFU/mL이었다 (Fig. 3). 반면, PCR법에의한검 출한계는 10 4 CFU/mL이었으며, real-time PCR법에의한검출한계는 10 2 CFU/mL이었다. 이를통해본연구에서개발한 C. sakazakii LAMP 검출법이 PCR에비해민감도가 10,000배, real-time PCR에비해 100배높은것을확인하였다. LAMP 검출법에사용되는 Bst DNA polymerase는 5' 3' exonuclease 부분이결핍되어있어유전자의여러구역에서 primer를동시에사용하더라도 inner primer가 outer primer 에방해받지않고증폭이가능하다. 따라서 LAMP 검출법은 4개혹은 6개의 primer로원하는유전자를신속하게검출할수있으며결과에있어서 PCR에비하여높은특이도를가진다 (Nagamine et al., 2002). 최근연구보고에따르면 LAMP 검출법은형광물질을이용하거나 pyrophosphate 이온에의한 magnesium pyrophosphate의백색침전물의혼탁도를이용하여시각적인판단을할수있기때문에전기영동과정이생략할수있다 (Hara-Kudo et al., 2005; Mori et al., 2001). 또한유전자증폭반응이 o C의등온조건하에수행되기때문에고가의장비가필요없이항온수조와같은장비만있으면분석이가능하다는장점이있다 (Hara-Kudo et al., 2007). Ye 등 (2009) 은 16S-23S rdna internal transcribed spacer (ITS), ompa gene, α-1,4-glucosidase gene(glua) 세가지유전자를검출할수있는 PCR로 243개의조제분유의 C. sakazakii 오염도를조사하였고, 그결과 ompa gene에대한 PCR이민감도와특이도가가장높은것으로보고하였다. Liu 등 (2009) 은 ITS를타겟으로디자인된 4개의 primer를사용하여 LAMP를수행하였으며분유에오염된 C. sakazakii 를 10 1 CFU/mL 수준까지검출하였다고보고하였다 (Liu et al., 2009). 본연구에서개발한 C. sakazakii LAMP 검출법 Fig. 3. Sensitivity of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of C. sakazakii in milk powder. M: 100-bp DNA ladder, Lane 1: positive control, Lane 2: negative control, Lane 3: 7 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 4: 6 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 5: 5 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 6: 4 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 7: 3 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 8: 2 Log 10 CFU/ ml C. sakazakii in milk powder, Lane 9: 1 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 10: 0 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder, Lane 11: -1 Log 10 CFU/mL C. sakazakii in milk powder.
6 Comparison of PCR and LAMP for the detection of C. sakazakii 615 은 10 0 CFU/g까지검출되어 Liu 등의연구에비해더높은민감도를나타내었다. Hu 등 (2009) 은 C. sakazakii 16S- 23S rrna gene를증폭할수있는 LAMP 검출법을개발하고, 조제분유에인위적으로오염된 C. sakazakii를검출하였다. Hu 등 (2009) 은 PCR의검출한계가 10 3 CFU/mL인데반하여, LAMP법의검출한계는 1.1 CFU/mL로민감도가 1,000배높은것으로보고하였다. Hu 등 (2009) 의선행연구는본연구에서개발한 LAMP 검출법의검출한계인 10 0 CFU/g과동등한수준이었으나, 16S-23S rrna gene은 Cronobacter species와 Enterobacter species 간의상동성이높아특이도와민감도가떨어지는제한점이있었다. 이와대조적으로본연구는 C. sakazakii 특이도가높은 ompa gene을표적으로선정하여민감도와특이도가높은 LAMP 검출법을개발하였다는장점이있다. 본연구에서개발한 C. sakazakii LAMP 검출법은민감도와특이도가높을뿐만아니라분유에오염된병원체검출에도적용이가능하였다. 특히 1시간이내오염된병원체의유전자를증폭할수있는 LAMP 검출법은 C. sakazakii 를포함하여병원성미생물에의한식중독사고발생시신속하고쉽게원인체를규명할수있는현장적용이용이한효과적인도구로사용될것으로기대된다. 요약본연구에서는영유아에게치명적인감염을일으키는 C. sakazakii에대하여 LAMP 검출법을개발하였다. LAMP법에의한 C. sakazakii의검출율은 100% 였으며 13개의음성지표군에대해서는모두음성반응을보여특이도가매우높은것으로판단되었다. 또한, HhaI과 NruI 두개의제한효소를 LAMP product에반응시킨결과, 유전자의특정염기서열이절단되는것을확인하였으며, 이를통해 LAMP 검출법에의해증폭된 DNA가 C. sakazakii-specific ompa 임을확인하였다. 조제분유에오염된 C. sakazakii를 LAMP 법으로검출시검출한계는 10 0 CFU/mL이었으며이는기존의 PCR법이나 real-time PCR법에비해 ,000배높은수준으로민감도가매우높은것으로판단되었다. 이와같이높은특이도와민감도를가진 LAMP 검출법은 C. sakazakii와같은급성기회감염균이나병원성미생물에의한식중독발생시현장에서병원체를간편하고신속하게검출할수있는기술로기대된다. 감사의글본연구는농림수산식품부농림수산식품기술기획평가원수산실용화연구사업 (# ) 지원에의하여이루어진것임. 참고문헌 1. Alex, P. and Georg, E. S. (1998) Structure of the outer membrane protein A transmembrane domain. Nat. Struct. Biol. 5, Arad, I., Baras, M., Gofin, R., Bar-Oz, B., and Peleg, O. (2001) Does parity affect the neonatal outcome of very low birth weight infants. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 94, Derzelle, S., Dilasser, F., Maladen, V., Soudrie, N., Leclercq, A., Lombard, B., and Lafarge, V. (2007) Comparison of three chromogenic media and evaluation of two molecular-based identification systems for the detection of Enterobacter sakazakii from environmental samples from infant formulae factories. J. Food Prot. 70, Enosawa, M., Kageyama, S., Sawai, K., Watanabe, K., Notomi, T., Onoe, S., Mori, Y., and Yokomizo, Y. (2003) Use of loop-mediated isothermal amplification of the IS900 sequence for rapid detection of cultured Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. J. Clin. Microbiol. 41, Farmer, J. J., Asbury, M. A., Hickman, F. W., and Brenner, D. J. (1980) Enterobacter sakazakii: A new species of Enterobacteriaceae isolated from clinical specimens. Int. J. Syst. Bacteriol. 30, Friedemann, M. (2007) Enterobacter sakazakii in food and beverages (other than infant formula and milk powder). Int. J. Food Microbiol. 116, Guillaume-Gentil, O., Sonnard, V., Kandhai, M. C., Marugg, J. D., and Joosten, H. (2005) A simple and rapid cultural method for detection of Enterobacter sakazakii in environmental samples. J. Food Prot. 68, Hara-Kudo, Y., Nemoto, J., Ohtsuka, K., Segawa, Y., Takatori, K., Kojima, T., and Ikedo, M. (2007) Sensitive and rapid detection of vero toxin-producing Escherichia coli using loop-mediated isothermal amplification. J. Med. Microbiol. 56, Hara-Kudo, Y., Yoshino, M., Kojima, T., and Ikedo, M. (2005) Loop-mediated isothermal amplification for the rapid detection of Salmonella. FEMS Microbiol. Lett. 253, Hu, L., Zhang, W., Zhang, X., Yuan, Y., Zhang, Y., Zhang, H., Ma, X., and Su, X. (2009) Development of a loop-mediated isothermal amplification assay for rapid detection of Enterobacter sakazakii in powdered infant formula. Wei Sheng Wu Xue Bao. 49, Iversen, C. and Forsythe, S. J. (2003) Risk profile of Enterobacter sakazakii, an emergent pathogen associated with infant milk formula. Trends Food Sci. Tech. 14, Iversen, C., Mullane, N., McCardell, B., Tall, B. D., and Lehner, A. (2008) Cronobacter gen. nov., a new genus to accommodate the biogroups of Enterobacter sakazakii, and proposal of Cronobacter sakazakii gen. nov., comb. nov., Cronobacter malonaticus sp. nov., Cronobacter turicensis sp. nov., Cronobacter muytjensii sp. nov., Cronobacter dublinensis sp. nov., Cronobacter genomospecies 1, and of three subspecies, Cronobacter dublinensis subsp. dublinensis subsp. nov., Cronobacter dublinensis subsp. lausannensis subsp. nov. and
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FSequencing 01. DNA sequencing Phone: 1588-9788 (ext.4 4) E-mail: sequencing@bioneer.co.kr 01. 242 FAQs 247 개요 상세 설명 바이오니아는 국내 최초로 를 시작하였으며, 매년 개선된 high-throughput sequencing service를 제공하고 있습니다. Plasmid
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농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 : ~ ) 과제의최종보고서로제출합니다 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 (
농림축산식품부장관귀하 본보고서를 미생물을활용한친환경작물보호제및비료의제형화와현장적용매뉴 얼개발 ( 개발기간 :2014. 7. 29 ~ 2016. 7. 28.) 과제의최종보고서로제출합니다. 2016. 7. 28. 주관연구기관명 : 고려바이오주식회사 ( 대표자 ) 김영권 ( 인 ) 협동연구기관명 : 목원대학교산학협력단 ( 대표자 ) 고대식 ( 인 ) 협동연구기관명
22(3)-07.fm
J. Fd Hyg. Safety Vol. 22, No. 3, pp. 179~191 (2007),QWTPCN QH (QQF *[IKGPG CPF 5CHGV[ Available online at http://www.foodhygiene.or.kr Î ÜôÚ ò Ù Â 1 Â 2 Âú äâ Ö 3 Â Ùý* w w w, 1 w tœw, 2 w yw, 3 w yl
(72) 발명자 박종현 서울특별시 송파구 양재대로 1218, 올림픽선수촌아 파트 201-1302호 (방이동) 이영덕 경기도 남양주시 화도읍 녹촌로 87-29, 신창현두산 위브아파트 101동 1604호 이 발명을 지원한 국가연구개발사업 과제고유번호 108147-02-1-
(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) (11) 공개번호 10-2012-0107780 (43) 공개일자 2012년10월04일 (51) 국제특허분류(Int. Cl.) C12N 1/20 (2006.01) A23C 9/12 (2006.01) (21) 출원번호 10-2011-0025505 (22) 출원일자 2011년03월22일 심사청구일자 전체 청구항
04-다시_고속철도61~80p
Approach for Value Improvement to Increase High-speed Railway Speed An effective way to develop a highly competitive system is to create a new market place that can create new values. Creating tools and
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Short ommunication Journal of piculture 33(3) : 221~226 (218) DOI: 1.17519/apiculture.218.9.33.3.221 Detection of Sugar ane (Saccharum officinarum)-specific Gene from Sugar and Sugar-honey younghee Kim,
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α α α α α α α α 太陰調胃湯加減方 dbdb 마우스 肝에 대한 아디포사이토카인 및 발현에 미치는 영향 SREBPs 와 섞어서 하고 마커 또한 하여 전기 영동을 하였다 전기영동을 한 후에 에 를 쪼여서 각 를 확인하였다 이 를 프로그램을 이용해 수치화하 여 분석하였다 肝 조직 동결 절편 분리한 조직은 로 시간 동안 고정 시킨 후 에 세척한 후 물기를
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(2005\263\342\271\351\274\255_final.hwp)
제 2 절 식 의약품 종합정보서비스 243 제1장 평 가 분 야 제1절 식품규격평가 분야 제2절 식품안전평가 분야 제3절 의약품평가 분야 제4절 생약평가 분야 제5절 생물의약품평가 분야 제6절 의료기기평가 분야 제 1 절 식품규격평가 분야 245 제1장 평가분야 제1절 식품규격평가 분야 제1 항 식품의 기준 규격 1. 식품공전 식품의 기준 규격은 식품위생법
대한진단검사의학회지제 26 권제 1 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:9-13 원저 임상미생물학 뇌척수액에서실시간 - 이중 - 역전사중합효소연쇄반응을이용한장바이러스의검출 허세란 1 진선경 1 장호은 1 박경운 1,2 송정한 1,2 김의종 2 분당
대한진단검사의학회지제 26 권제 1 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:9-13 원저 임상미생물학 뇌척수액에서실시간 - 이중 - 역전사중합효소연쇄반응을이용한장바이러스의검출 허세란 1 진선경 1 장호은 1 박경운 1,2 송정한 1,2 김의종 2 분당서울대학교병원진단검사의학과 1, 서울대학교의과대학검사의학교실 2 Detection of Enterovirus
09권오설_ok.hwp
(JBE Vol. 19, No. 5, September 2014) (Regular Paper) 19 5, 2014 9 (JBE Vol. 19, No. 5, September 2014) http://dx.doi.org/10.5909/jbe.2014.19.5.656 ISSN 2287-9137 (Online) ISSN 1226-7953 (Print) a) Reduction
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE Feb.; 29(2), IS
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE. 2018 Feb.; 29(2), 93 98. http://dx.doi.org/10.5515/kjkiees.2018.29.2.93 ISSN 1226-3133 (Print) ISSN 2288-226X (Online) UHF-HF
- i - - ii - - iii - - iv - - v - - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - - 19 - α α - 20 - α α α α α α - 21 - - 22 - - 23 -
KISEP Rhinology Korean J Otolaryngol 2000;43:391-5 소아만성부비동염의원인균분석 최영철 김태철 전은주 박용수 Microbiologic Study of Chronic Sinusitis in Children Young-Chul Choi
KISEP Rhinology Korean J Otolaryngol 2000;43:391-5 소아만성부비동염의원인균분석 최영철 김태철 전은주 박용수 Microbiologic Study of Chronic Sinusitis in Children Young-Chul Choi, MD, Tae-Chul Kim, MD, Eun-Ju Jeon, MD and Yong-Soo
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 1, pp DOI: * A Analysis of
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 1, pp.99-117 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.28.1.201803.99 2015 * A Analysis of the Characters and Issues about the 2015 Revised Social
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 3, pp DOI: (NCS) Method of Con
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 3, pp.181-212 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.27.3.201709.181 (NCS) Method of Constructing and Using the Differentiated National Competency
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE. vol. 29, no. 10, Oct ,,. 0.5 %.., cm mm FR4 (ε r =4.4)
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE. 2018 Oct.; 29(10), 799 804. http://dx.doi.org/10.5515/kjkiees.2018.29.10.799 ISSN 1226-3133 (Print) ISSN 2288-226X (Online) Method
슬라이드 1
Real Time PCR 목차 1. PCR 및 Real Rime PCR 원리 2. Real Time PCR 검출방법 3. Real Time PCR 정량방법 4. Takara Real Time PCR 시약 5. 금일실험내용 Polymerase Chain Reaction Taq DNA Polymerase - Thermostable DNA polymease from
제 출 문 식품의약품안전청장 귀 하 이 보고서를 어묵류 등 6개 의무적용품목의 위해관리 지침서 개발 (한국보 건산업진흥원/천석조) 과제의 연구결과보고서로 제출합니다. 2004. 11. 주관연구기관명 : 한국보건산업진흥원 주관연구책임자 : 천 석 조 제 1세부과제명 :
최종보고서 정책-식품-2004-56 어묵류 등 6개 HACCP 의무적용품목의 위해관리 지침서 개발(자료편) Development of Guidelines on the Hazard Control of Mandatory HACCP Application Food Items(Database) 한국보건산업진흥원 식 품 의 약 품 안 전 청 제 출 문 식품의약품안전청장
목차 Ⅰ. 개요 1 Ⅱ. 용어의정의 4 Ⅲ. 관련규정 13 Ⅳ. 신청서기재항목및기술문서제출자료 14 Ⅴ. 제조 수입허가신청서기재항목 15
체외진단용의료기기 ( 인플루엔자바이러스및 A형간염바이러스 ) 의허가 심사가이드라인 2015. 2. 의료기기심사부체외진단기기과 - 1 - 목차 Ⅰ. 개요 1 Ⅱ. 용어의정의 4 Ⅲ. 관련규정 13 Ⅳ. 신청서기재항목및기술문서제출자료 14 Ⅴ. 제조 수입허가신청서기재항목 15 Ⅵ. 기술문서등의심사를위한제출자료 37 Ⅶ. 성능시험에대한상세사항 44 Ⅷ. 참고문헌
한수지 52(2), , 2019 Note Korean J Fish Aquat Sci 52(2), ,2019 국내유통김 (Porphyra sp.) 의미생물오염도평가 노보영 황선혜 1 조용선 1 * 한국식품연구원식품표준센터, 1 한국식품연구원식품분석
한수지 52(2), 80-84, 209 Note Korean J Fish Aquat Sci 52(2),80-84,209 국내유통김 (Porphyra sp.) 의미생물오염도평가 노보영 황선혜 조용선 * 한국식품연구원식품표준센터, 한국식품연구원식품분석센터 Microbial Contamination Levels in Porphyra sp. Distributed in
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25 3 (2004 9 ) J Korean Oriental Med 2004;25(3):20-31 1), 2), 3) 1) 2) 3) Grope for a Summary Program about Intellectual Property Protection of Traditional Knowledge (TK)etc. Discussed in WIPO Hwan-Soo
Cloning
Takara 와함께하는 Cloning 2014-11-13 다카라코리아바이오메디칼 목차 Cloning 이란? Cloning Flow Chart Cloning DNA / RNA 추출 High Fidelity PCR 제한효소 /ligation/e.coli 형질전환 Clone 확인 이것만은꼭!!! 2 Cloning 이란? Clone 세포나개체의증식에의해서생긴유전적으로동일한세포군
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- 1 - ( 단위 : 건수 ) 특허 논문 구분 출원등록 SCI 비 SCI 기술실시 ( 이전 ) 상품화 ( 시제품 ) 기타 1차년도목표 1 1 1 달성 6 2 2 목표 1 0 2 2 2차년도 달성 0 4 1 2 3차년도목표 2 1 2 2 달성 3 1 3 2 계 목표 4 1 5 5 2 2 달성 9 5 10 4 3 2(5) l l l l - 2 - l l l l
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The e-business Studies Volume 17, Number 6, December, 30, 2016:237~251 Received: 2016/11/20, Accepted: 2016/12/24 Revised: 2016/12/21, Published: 2016/12/30 [ABSTRACT] Recently, there is an increasing
EZ-Cloning kit
EZ TM 5 /3 RACE PCR Kit Instruction Manual Korean Ver. Kit for 10 reactions Cat.# EZ025 EZ TM 5 /3 RACE PCR Kit Table of Contents I. 제품설명... 3 II. 원리... 4 III. 제품구성... 7 IV. 염기서열정보... 8 V. 주의사항... 8 VI.
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The Korean Journal of Microbiology, Vol. 45, No. 3, September 009, p. 86-90 Copyright 009, The Microbiological Society of Korea s Semi-quantitative RT-PCR w v H9N y» ù» 1 Á Á 3 Á 4 Á x 5 Á 5 Á 5 Á 5 Á«x
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주요유방염세균의검출및 항생제감수성검사 임숙경 1. 검사시료 1. 시료채취 유방염우유 2. 체세포수측정 3. 대상세균 - Staphylococcus aureus - Coagulase negative staphylococci -Escherichia coli 3. 균분리방법 E. coli CHEC Agar 직접도말 (37 18-24h) 보라색집락 EMB Agar
뉴스지14호-칼라
2 3 4 5 6 TaKaRa Taq TM / TaKaRa Ex Taq TM / TaKaRa LA Taq TM / Pyrobest TM DNA Polymerase/ TaKaRa Z -Taq TM TaKaRa Taq TM TaKaRa Ex Taq TM TaKaRa LA Taq TM TaKaRa Z-Taq TM Pyrobest TM DNA Polymerase 7
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 3, pp DOI: * Strenghening the Cap
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 3, pp.27-43 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.28.3.201809.27 * Strenghening the Capacity of Cultural Arts Required in Special Education
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연구기관 한국식품연구원 농림부 연구기관 한국식품연구원 농림부 Analytical Semi-preparative Solution A 1) Solution B 2) Mixing Spreading Coating medium Corona treated OPP 3) film Casting Drying
인문사회과학기술융합학회
Vol.5, No.5, October (2015), pp.471-479 http://dx.doi.org/10.14257/ajmahs.2015.10.50 스마트온실을 위한 가상 외부기상측정시스템 개발 한새론 1), 이재수 2), 홍영기 3), 김국환 4), 김성기 5), 김상철 6) Development of Virtual Ambient Weather Measurement
중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction:pcr) 에의한 HPV와 EBV의검출 Table 1. Oligonucleotide primers of PCR for HPV and EBV Nucleotide sequence Product size Huma
KISEP Head and Neck Korean J Otolaryngol 2001;44:0611 상악암에서중합효소연쇄반응을이용한인형유두종바이러스와 EpsteinBarr Virus 의검출 조재식 임상철 정형수 임회정 김정현 The Detection of Human Papillomavirus and EpsteinBarr Virus DNA in Maxillary
Lumbar spine
Lumbar spine CT 32 111 DOI : 10.3831/KPI.2010.13.2.111 Lumbar Spine CT 32 Received : 10. 05. 23 Revised : 10. 06. 04 Accepted : 10. 06. 11 Key Words: Disc herniation, CT scan, Clinical analysis The Clinical
Automated high multiplex qPCR platform for simultaneous detection and quantification of multiple nucleic acid targets
PCR FlashGel System 2013. 04. 24 PCR 2013. 04. 24 순서 1. PCR 이란 2. PCR 실험의기본조건 3. PCR 효소선택가이드 4. Hot Start PCR의원리 5. PCR 실험시 Troubleshooting 6. PCR 장비 _TP350 소개 PCR(Polymerase Chain Reaction) PCR 이란? -
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理 葉 CNFH-88-04 行 87 年 9 1 88 年 6 30 類 葉 Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus mutans Streptococcus sanguis Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Candida
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 4, pp DOI: * A Study on Teache
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 4, pp.149-171 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.27.4.201712.149 * A Study on Teachers and Parents Perceptions on the Introduction of Innovational
고품격 cdna 합성을위한 RT Kit M-MLV RTase 의 RNase H domain 에 mutation 시키므로 RNase H activity 를낮추고, mrna 의 degradation 을방지하여 cdna 합성효율을높임 d... qpcr RT Kit 의 cdn
TOYOBO 여름행사 21 행사기간ㅣ 2014 년 6 월 16 일 ~ 8 월 22 일까지 고품격 cdna 합성을위한 RT Kit 완벽한 qpcr 을위한최상의 Solution qpcr Master Mix ㅣ ReverTra Ace -a- kit ㅣ qpcr RT kit ㅣ qpcr RT Master Mix ㅣ qpcr RT Master Mix with gdna
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200176 .,.,.,. 5... 1/2. /. / 2. . 293.33 (54.32%), 65.54(12.13%), / 53.80(9.96%), 25.60(4.74%), 5.22(0.97%). / 3 S (1997)14.59% (1971) 10%, (1977).5%~11.5%, (1986)
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 4, pp DOI: 3 * The Effect of H
Journal of Educational Innovation Research 2018, Vol. 28, No. 4, pp.577-601 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.28.4.201812.577 3 * The Effect of Home-based Activities Using Traditional Fairy Tales
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 3, pp DOI: : A basic research
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 3, pp.379-404 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.27.3.201709.379 : A basic research for the after-school forest activities program models:
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sugar cane 계분 (%) a ATCC : American type Culture Collection, b IFO : Institute for fermentation, osaka, c MPNU : Mycological lab. Pusan National University d Mycelial
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농업생명과학연구 49(4) pp.31-37 Journal of Agriculture & Life Science 49(4) pp.31-37 Print ISSN 1598-5504 Online ISSN 2383-8272 http://dx.doi.org/10.14397/jals.2015.49.4.31 국가산림자원조사 자료를 적용한 충남지역 사유림경영율 추정 서연옥
04_이근원_21~27.hwp
1) KIGAS Vol. 16, No. 5, pp 21~27, 2012 (Journal of the Korean Institute of Gas) http://dx.doi.org/10.7842/kigas.2012.16.5.21 실험실의 사례 분석에 관한 연구 이근원 이정석 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 (2012년 9월 5일 투고, 2012년 10월 19일
식물병연구 Research Article Open Access Res. Plant Dis. 22(3): (2016) 콩황화모틀모자이크바이러스의신속검출을위한역전사등온증폭법 Rev
식물병연구 Research Article Open Access Res. Plant Dis. 22(3): 178-183 (2016) http://dx.doi.org/10.5423/rpd.2016.22.3.178 콩황화모틀모자이크바이러스의신속검출을위한역전사등온증폭법 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification
DNA/RNA Amplification Overview AccuPower PreMix series 는세계적으로기술력을인정받은특허기술로보다경제적인가격과편리한방법으로실험할수있는제품입니다. Conventional PCR, Real-Time PCR 수행을위한 DNA ampli
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제1장 제17장 성홍열 및 사슬알균 감염증 사슬알균 (Streptococci)은 증식 중의 특징적으로 쌍 또는 사슬모양의 그람양성 알균 으로 catalase 음성, 통성혐기성균이며, 보통 한천배지에서는 발육이 어렵고 혈액이나 혈청 등을 첨가한 배지에서 잘 발육한다. 포도당이나 다른 탄수화물을 분해하나 포도당 을 분해하여 가스를 생성하지 않는다. 이들은 최소
14.531~539(08-037).fm
G Journal of the Korea Concrete Institute Vol. 20, No. 4, pp. 531~539, August, 2008 š x y w m š gj p { sƒ z 1) * 1) w w Evaluation of Flexural Strength for Normal and High Strength Concrete with Hooked
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TAKARA 1. PCR 2. qpcr 2014. 02. 13. 최유미 DNA? DNA 생물체 > 기관 > 세포 >DNA DNA (Deoxyribonucleic acid) 세포내에서생물의유젂정보를보관하는물질 구성 : Adenine, Thymine, Cytosine, Guanine 종특이적, 개체특이적 PCR (Polymerase Chain Reaction)
19-2011-63.남민지.hwp
농업생명과학연구 45(6) pp.163-173 Journal of Agriculture & Life Science 45(6) pp.163-173 농산물우수관리제도 (GAP) 적용을 위한 고추농가의 미생물학적 위해도 평가 남민지 1 허록원 2 이원경 2 김경열 2 정도영 3 김정숙 4 심원보 4* 정덕화 2,4 1 한국보건산업진흥원HACCP지원사업단, 2 경상대학교
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-Original Paper-35 41. 2009. 토양으로부터분리한토착유효미생물을이용한음식물쓰레기의자원화 이상우 함선녀 신택수 김혜경 연익준 * 김광렬 * (2008 8 21, 2009 1 23 ) Resource of Food Waste using Indigenous Bacteria Isolated from Soils Sang-Woo Lee Sun Nyeoo
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 2, pp DOI: : Researc
Journal of Educational Innovation Research 2017, Vol. 27, No. 2, pp.251-273 DOI: http://dx.doi.org/10.21024/pnuedi.27.2.201706.251 : 1997 2005 Research Trend Analysis on the Korean Alternative Education
27 2, 1-16, * **,,,,. KS,,,., PC,.,,.,,. :,,, : 2009/08/12 : 2009/09/03 : 2009/09/30 * ** ( :
27 2, 1-16, 2009. * **,,,,. KS,,,., PC,.,,.,,. :,,, : 2009/08/12 : 2009/09/03 : 2009/09/30 * ** (: jjhkim@cau.ac.kr) 2 한국교육문제연구제 27 권 2 호, 2009 Ⅰ.,. 2008 3,536, 10 99.9% (, 2008). PC,, (, 2007). (, 2008),.,
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w y wz 8«( 2y) 57~61, 2005 J. of the Korean Society for Environmental Analysis p w w Á Á w w» y l Analysis of Influence Factors and Corrosion Characteristics of Water-pipe in Potable Water System Jae Seong
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Chromosomal Alterations in Hepatocellular Carcinoma Cell Lines Detected by Comparative Genomic Hybridization Sang Jin Park 1, Mahn Joon Ha, Ph.D. 1, Hugh Chul Kim, M.D. 2 and Hyon Ju Kim, M.D. 1 1 Laboratory
DBPIA-NURIMEDIA
The e-business Studies Volume 17, Number 4, August, 30, 2016:319~332 Received: 2016/07/28, Accepted: 2016/08/28 Revised: 2016/08/27, Published: 2016/08/30 [ABSTRACT] This paper examined what determina
저작자표시 - 비영리 - 변경금지 2.0 대한민국 이용자는아래의조건을따르는경우에한하여자유롭게 이저작물을복제, 배포, 전송, 전시, 공연및방송할수있습니다. 다음과같은조건을따라야합니다 : 저작자표시. 귀하는원저작자를표시하여야합니다. 비영리. 귀하는이저작물을영리목적으로이용할
저작자표시 - 비영리 - 변경금지 2.0 대한민국 이용자는아래의조건을따르는경우에한하여자유롭게 이저작물을복제, 배포, 전송, 전시, 공연및방송할수있습니다. 다음과같은조건을따라야합니다 : 저작자표시. 귀하는원저작자를표시하여야합니다. 비영리. 귀하는이저작물을영리목적으로이용할수없습니다. 변경금지. 귀하는이저작물을개작, 변형또는가공할수없습니다. 귀하는, 이저작물의재이용이나배포의경우,
Selection chart of Bioneer s cdna synthesis products Categories Application Product cdna Synthesis Kits One step RT-PCR Kits One step RT-qPCR Kits RTa
Selection chart of Bioneer s cdna synthesis products Categories Application Product cdna Synthesis Kits One step RT-PCR Kits One step RT-qPCR Kits RTase 표준 cdna 합성 높은효율의 cdna 합성 복잡한 2 차구조 RNA 의 cdna 합성
03. In011.hwp
V 3+CD4+ T Selective Expansion of TCR V 3+CD4+ T Cells in Collagen-induced Arthritis in DBA/1 Mice Jae Seon Lee, Mi La Cho, Jung Eun Lee, So Youn Min, Chong Hyeon Yoon, Wan Uk Kim, Jun Ki Min, Sung Hwan
09È«¼®¿µ 5~152s
Korean Journal of Remote Sensing, Vol.23, No.2, 2007, pp.45~52 Measurement of Backscattering Coefficients of Rice Canopy Using a Ground Polarimetric Scatterometer System Suk-Young Hong*, Jin-Young Hong**,
서론 34 2
34 2 Journal of the Korean Society of Health Information and Health Statistics Volume 34, Number 2, 2009, pp. 165 176 165 진은희 A Study on Health related Action Rates of Dietary Guidelines and Pattern of
Chapter 26
11 주 RNA 합성 11.1 DNA-dependent synthesis of RNA: Bacteria에서의 transcription l RNA polymerase (5 subunits로구성 : 2α, β, β, σ) l 효소에의한 RNA 합성의특징 - Complementary sequence to template DNA - RNA chain의합성방향 : 5
(460 신용길).fm
식물병연구 Res. Plant Dis. 19(1) : 36 44 (2013) http://dx.doi.org/10.5423/rpd.2013.19.1.036 Research Article Open Access Research in Plant Disease The Korean Society of Plant Pathology RT-PCR 에의한카네이션괴저바이러스와카네이션둥근반점바이러스정밀진단
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중합효소연쇄반응과객담검체를 이용한 mycobacteria 의 검출민감성비교 연세대학교보건환경대학원 의생명과학전공 이정민 중합효소연쇄반응과객담검체를 이용한 mycobacteria 의 검출민감성비교 지도이혜영 교수 이논문을석사학위논문으로제출함 2007 년 06 월일 연세대학교보건환경대학원 의생명과학전공 이정민 이정민의석사학위논문을인준함 심사위원 심사위원 심사위원
534 강경태ㆍ김민주ㆍ박선영ㆍ최종덕ㆍ허민수ㆍ김진수., Choi et al. (1998), Jeong et al. (2004), Ha et al. (2005), Lee (2006), Baker (2016), Vugia et al. (2013) 2003.,,,,. HACC
한수지 49(5), 533-540, 2016 Original Article Korean J Fish Aquat Sci 49(5),533-540,2016 HACCP 구축을위한굴 (Crassostrea gigas) 가공공장의위해평가 강경태 김민주 1 박선영 1 최종덕 1 허민수 2 김진수 1 * 한국식품안전관리인증원, 1 경상대학교해양식품생명의학과 / 해양산업연구소,
Product Description Apoptosis 혹은 necrosis등에의하여죽거나손상된세포에서방출되는 Lactate dehydrogenase(ldh) 의양을고감도로측정함으로써 cytotoxicity/cytolysis를간단하게측정할수있는 kit 입니다. Cytot
EZ-LDH Cell Cytotoxicity Assay Kit Cat. No. DG-LDH500 DG-LDH1000 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. 1 ( 주 ) 대일랩서비스부설두젠생명공학연구소 Product Description Apoptosis 혹은 necrosis등에의하여죽거나손상된세포에서방출되는
(079-088)Kjbt015.hwp
대한수혈학회지:제18권 제2호, 2007 다중 단일염기 시발체 확장반응을 이용한 ABO 유전자형 검사 현정원 1 장호은 2 허세란 2 송상훈 1 박경운 1,2 송정한 1,2 한규섭 1 = Abstract = 서울대학교 의과대학 검사의학교실 1, 분당서울대학교병원 진단검사의학과 2 ABO Genotyping using a Multiplex Single-base
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The Korean Journal of Applied Statistics (2014) 27(1), 13 20 DOI: http://dx.doi.org/10.5351/kjas.2014.27.1.013 Maximum Tolerated Dose Estimation by Stopping Rule and SM3 Design in a Phase I Clinical Trial
01 Buffers & Gel Stain Buffers 3 Gel Stain SilverStar Staining Kit 6
Buffers & Gel Stain Chemicals Buffers & Chemicals Phone: 1588-9788 (ext.4->2) Email: reagents-support@bioneer.co.kr 01 Buffers & Gel Stain Buffers 3 Gel Stain SilverStar Staining Kit 6 Buffers Overview
한수지 51(5), , 2018 Original Article Korean J Fish Aquat Sci 51(5), ,2018 단순가공어류수산물제조공정중의식품학적위해요소분석 정민철 강민균 장유미 이도하 박슬기 신일식 1 김영목 * 부경대학교식품
한수지 51(5), 518-523, 2018 Original Article Korean J Fish Aquat Sci 51(5),518-523,2018 단순가공어류수산물제조공정중의식품학적위해요소분석 정민철 강민균 장유미 이도하 박슬기 신일식 1 김영목 * 부경대학교식품공학과, 1 강릉원주대학교해양식품공학과 Hazard Analysis of Food Safety
ECG & EP CASES Young-Keun On, MD, PhD Division of Cardiology, Department of Medicine Cardiac & Vascular Center, Samsung Medical Center Sungkyunkwan University School of Medicine, Seoul, Korea A case of
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국내구토형바실러스세레우스감시및독소유형 Surveillance and toxin profile of emetic toxin producing Bacillus cereus in Korea 질병관리본부국립보건연구원감염병센터장내세균과 Ⅰ. 들어가는말 Bacillus 속의박테리아는대부분의환경속에존재하고있으며, 현재약 148개의종으로분류되고있다. 이중에서 Bacillus
Surpass the limit of Polymerase Chain Reaction (PCR) PCR Enzyme Guide High Fidelity PCR 효소 범용적인 PCR 효소 특수목적을위한 PCR 효소 - Epigenetics - Multiplex PCR -
Surpass the limit of Polymerase Chain Reaction (PCR) PCR Enzyme Guide High Fidelity PCR 효소 범용적인 PCR 효소 특수목적을위한 PCR 효소 - Epigenetics - Multiplex PCR - Direct PCR High Fidelity PCR 효소 - NGS targeted sequencing,
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대한안과학회지 제 49 권 제 5 호 2008 J Korean Ophthalmol Soc 49(5):727-731, 2008 DOI : 10.3341/jkos.2008.49.5.727 다초점 소프트콘택트렌즈의 노안의 시력보정에 대한 유용성 평가 김현경 1 김효명 2 정성근 1 가톨릭대학교 의과대학 성모병원 안과학교실 1, 고려대학교 의과대학 안암병원 안과학교실
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE Dec.; 27(12),
THE JOURNAL OF KOREAN INSTITUTE OF ELECTROMAGNETIC ENGINEERING AND SCIENCE. 2016 Dec.; 27(12), 1036 1043. http://dx.doi.org/10.5515/kjkiees.2016.27.12.1036 ISSN 1226-3133 (Print) ISSN 2288-226X (Online)
6 JH Byun, et al. IRS-PCR on E. coli 성을나타낸다. CTX-M ESBL 유전자는 mobile genetic element 와연관되어지역사회에서 ESBL 이쉽게전파할수있다 [5, 6]. 병원균의역학적분석을하기위
![6 JH Byun, et al. IRS-PCR on E. coli 성을나타낸다. CTX-M ESBL 유전자는 mobile genetic element 와연관되어지역사회에서 ESBL 이쉽게전파할수있다 [5, 6]. 병원균의역학적분석을하기위](/thumbs/91/105844316.jpg "6 JH Byun, et al. IRS-PCR on E. coli 성을나타낸다. CTX-M ESBL 유전자는 mobile genetic element 와연관되어지역사회에서 ESBL 이쉽게전파할수있다 [5, 6]. 병원균의역학적분석을하기위")
Original Article http://dx.doi.org/10.3947/ic.2012.44.1.5 Infect Chemother 2012;44(1):5-10 pissn 2093-2340 eissn 2092-6448 Infection & Chemotherapy Infrequent-Restriction-Site 중합효소연쇄반응 (ISR-PCR) 을사용한지역사회발생
대한진단검사의학회지 : 제 22 권제 5 호 2002 Korean J Lab Med 2002; 22: 임상미생물학 Escherichia coli O157 의산처리후배양법과증균후 PCR 법의비교 백인기 한태희 인제대학교의과대학상계백병원진단검사의학과 Compar
대한진단검사의학회지 : 제 22 권제 5 호 2002 Korean J Lab Med 2002; 22: 331-5 임상미생물학 Escherichia coli O157 의산처리후배양법과증균후 PCR 법의비교 백인기 한태희 인제대학교의과대학상계백병원진단검사의학과 Comparison of Detection of Escherichia coli O157 Between
K O R E A C E N T E R S F O R D I S E A S E C O N T R O L & P R E V E N T I O N PHWR Vol. 5 No. 41 www.cdc.go.kr/phwr 2012 10 12 5 41 ISSN:2005-811X Comparison of drug-susceptibility test to the anti-tuberculosis
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논문 10-35-03-03 한국통신학회논문지 '10-03 Vol. 35 No. 3 원활한 채널 변경을 지원하는 효율적인 IPTV 채널 관리 알고리즘 준회원 주 현 철*, 정회원 송 황 준* Effective IPTV Channel Control Algorithm Supporting Smooth Channel Zapping HyunChul Joo* Associate
실험 Set Up Guide 실험주제 Real Time PCR 실험원리 Quantitative Real-Time PCR (qrt-pcr) 은 1992년에도입되어생명공학에응용되기시작하였이기술은잘알려져있는 PCR기법을개량한것이다. PCR은핵산의효소증폭을이용하며, 극히적은양
실험 Set Up Guide 실험주제 Real Time PCR 실험원리 Quantitative Real-Time PCR (qrt-pcr) 은 1992년에도입되어생명공학에응용되기시작하였이기술은잘알려져있는 PCR기법을개량한것이다. PCR은핵산의효소증폭을이용하며, 극히적은양의시료를대량으로증폭할수있다는장점과그과정이간단하여 Cloning, Sequencing 등의기본기술로응용되었다.
한수지 47(5), , 2014 Original Article Kor J Fish Aquat Sci 47(5), ,2014 MPN 및 H-NS 유전자를표적으로하는 PCR assay 를병용한장염비브리오 (Vibrio parahaemolyticus)
한수지 47(5), 556-561, 2014 Original Article Kor J Fish Aquat Sci 47(5),556-561,2014 MPN 및 H-NS 유전자를표적으로하는 PCR assay 를병용한장염비브리오 (Vibrio parahaemolyticus) 의정량 김태옥 박권삼 * 군산대학교식품생명공학과 Quantification of Vibrio