수단으로여러식품의제조에적용되고있다 (Alan 2003, Cheigh 1994, Kitazawa 등 2004). 다당을생산하는유산균은점성강화, 물성강화, 유화제로서의잠재성때문에발효낙농산업에서상당한관심을받아왔다 (Grobben 등, 1996). 그들은또한항암 (Ebina

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주리 강전
6 years ago
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1 과제구분기본수행시기전반기 연구과제및세부과제 청정특화작목활용면역증강안전김치산업화 1) 면역증강우수유산균선발및김치제품화 ( 현장 ) 색인용어된장, 검은콩 연구분야 농촌자원 농촌자원 수행기간 08~ 10 08~ 10 소속 ( 과 / 연구소 ) 친환경농업연구과친환경농업연구과 책임자 윤향식 윤향식 ABSTRACT To use LAB as a Kimchi starter, we investigate about diversity analysis of lactic acid bacteria in various fermented foods, characterization of EPS-producing LAB, immune activity analysis of EPS-producing LAB and health function (antitumor, ACE inhibition and antibacterial activities) of LAB. To study about the profile of the lactic acid bacteria(lab), fermented foods were investigated to get pure cultures for LAB starters. The cell morphology of the isolates was observed under an optical microscope depending on the shape and size to classified into the genera Lactobacillus and the cocci bacteria. Consequently, The most predominant bacteria were determined as the isolates belonging to Lb. sakei and Ln. mesenteroides in kimchi. To analyze EPS production, TLC and image analysis were used. We investigated the effect of EPS-producing LAB isolated from various fermented foods on cytokine(ifn-γ, IL-6, IL-12, TNF-a and IL-4) production by murine macrophage cell cultures using with ELISA and RT-PCR. As the results, most of EPS containing LAB samples were higher than LAB fraction. Lb. paracasei KB28 was 2586 pg/ml and P. pentosaceus MJK7 showed 2716pg/mL highly. To know health function, we investigated antitumor effect of Lb. paracasei KB28 and P. pentosaceus MJK7, angiotensin convert enzyme inhibition rate of high EPS producing LAB and antibacterial activity of 22 LAB isolated from various fermented foods. All lysates of LAB showed strong antiproliferative effect to H460 cells and particularly Lb. paracasei KB28 and P. pentosaceus MJK7 were effective with inhibition rates around 60% at 20μg/mL by MTT assay. The ACE inhibiting activity of Lb. paracaseikb28 and P. pentosaceusmjk7 were 77.02% and 61.85%, respectively. Also, from the tests, Lb. paracasei KB28 may be useful as a starter to control the lactic acid fermentation of Kimchi. Keywords : Kimchi, EPS-producing LAB, Lactobacillus paracasei, immune activity 1. 연구목적 유산균은 GRAS(generally recognized as safety) 로면역활성화작용, 항아토피, 항알러지, 충치예 방, 항산화작용, 항암작용과 CLA 생성, 식품의저장기간을연장시키거나영양및풍미를증진시키는

2 수단으로여러식품의제조에적용되고있다 (Alan 2003, Cheigh 1994, Kitazawa 등 2004). 다당을생산하는유산균은점성강화, 물성강화, 유화제로서의잠재성때문에발효낙농산업에서상당한관심을받아왔다 (Grobben 등, 1996). 그들은또한항암 (Ebina 등, Oda 등, 1983), 면역활성 (Hosono 등, 1998), 마이크로파이지 (Nishimura-Uemura 등, 2003) 와림포사이트 (Kitazawa 등, 1998) 활성화능을지니고있다. GRAS 로인증된그들식품등급의미생물들에의해생산되는다당은식물또는동물기원인상업적인첨가제로중요한천연대체제이다. 다당생성유산균의사용은향상된조직감과진보된안정성을가진안전하고, 천연적이며, 건강한최종산물을얻을수있다. 이와같은결과는신제품개발에중요한영향을줄수있을것이다. 그러므로본연구에서는면역활성과생리활성이우수한유산균을선발하여발효식품에스타터로이용하기위해, 김치등발효식품에서유산균을분리한후, 다당생성균주를선발하여, 면역활성과항암활성, 항고혈압활성, 항균활성등을분석하였다. 2. 연구방법 가. 시판및가정에서제조한김치발효식품에서유산균탐색 (1) 선택배지를이용한유산균분리시중에판매하는김치 17종을구입하여시료로사용하였다. 이를멸균생리식염수 (0.85% (w/v)) 에 10-1,-3,-5,-7 로희석한후, 선택배지에도말하여알맞은조건으로배양하였다. 사용한선택배지로는 0.5% L-cystein hydrochloride(merck, Darmstadt, Germany) 를추가한변형된 MRS(Merck, Darmstadt, Germany), 양피를포함하는 BL(BD, Sparks, MD, USA), phenylethyl alcohol(bbl, Sparks, MD, USA), Enterococcosel(BBL, Sparks, MD, USA) 아가와같은 4개의배지를사용하였다. 호기적인조건하에서 37 에서 48시간동안배양한후, 선택배지에서형성된전형적인유산균콜로니를 BL배지로옮겼다. 분리물을 BL아가에서 3번동안서브컬쳐하고사용전까지 -80 에서저장하였다. (2) Colony 및 cell 형태학적조사배양된 colony 의형태적관찰을하고, 광학현미경관찰 ( 1000) 을통해 cell 형태를구분하였다 (Kim 등, 2006). (3) 생화학적특성분석또한 catalase, oxidase test, 15, 45 배양, gram staining test를거쳐생화학적특징을확인하였다. - Catalase test: 30% hydrogen peroxide sol n 을한방울떨어뜨린후기포가발생하면 (+, positive), 기포발생안하면 (-, negative) - Oxidase test: Oxidase strip 이용, 균을묻힌후, Strip 의색깔이 15 초후에 dark blue 나 violet 으로바뀌면 (+, Positive) 안바뀌면 (-, negative) 로표기하였다. (4) SDS-PAGE 분석을이용한분류선택배지로부터분리된순수균주에 2 X sample dye buffer 를가한후, sonicator (homogenizer/stirrer-sonicator GE 130PB, Sonics and Materials Inc., Newtown,CT,USA) 를 2분동안처리하여단백질을용출시킨다. 단백질변성을위해 100 에서 5분동안가열하고 13,000rpm 에서 5분동안원심분리한다. 상등액은 10% polyacrylamide separating gel (Dongin Bio., Korea) 을이용한전기영동장치 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) 로 140V, 90분동안분석되었다 (Kim 등, 2006). 0.25% Coomassie brilliant blue R-250 (Sigma, St. Louis,MO,USA) 로 30분동안염색한후, destaining 용액으로탈색하여 high-performance camera (Olympus, Tokyo, Japan) 로스캔하여 Whole cell protein 패턴분석하였다. 단백질패턴분석은육안으로밴드의선명도, 넓이, 위치및숫

3 자관찰을통해실시하였다. Broad range protein molecular marker (Promega, Madison,WI,USA) 와상업균주를 Reference 로하여비교분석하였다. 그결과로 Species level 의동정결과를얻을수있었다. (5) 16S rrna Sequencing 분석 (Kim 등, 2006) Universal bacterial primer pair; 27F (5 -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ) and 1492R (5 -GGTTACCTTGTTACGACTT -3 ) for PCR amplification of the 16S rrna gene (ca bp product). 16s rrna 유전자분석은 SolGent Co. Ltd. (Daejon,Korea) 에의뢰하여실시하였다. 그결과는 DNA Data Bank of Japan(.ddbj.nig.ac.jp) 을사용하여해석하였다. (6) 유연관계분석 (Felsenstein, 1993) 분리물의 16S rrnagene sequences 는 CLUSTAL W software(version 1.8) 에의해정렬하였다. 나. 균체외다당생성유산균의면역활성및생리활성분석 (1) 균체외다당생성분석 EPS 생성분석은 casamino acid, 3% glucose, 3% sucrose 및 3% lactose 등이첨가된 chemically defined medium 을이용하여측정하였다. 분리균을 CDM 에접종하여 37, 48시간동안배양한후, 배양액을 TLC 로분석하여정량은 Multi gauge 를이용한 image analysis 로정량분석하였다 (2) 분리균주의면역활성및생리활성분석 ( 가 ) 면역활성 - IFN-γ 측정방법 1 실험동물준비실험동물은 ( 주 ) 오리언트에서분양받은 8주령의 BALB/c 수컷마우스를대조군및실험군으로나누어사용하였다. 고형사료와물은제한없이공급하면서 12시간씩낮과밤의생활리듬을주었으며항온항습상태에서 1주간적응시켰다. 2 유산균의준비유산균을 MRS 배지에접종하여 37, 48시간동안배양한다. 이를멸균생리식염수로 2회세척한다. 이에증류수를가한후, autoclave 를이용하여 100, 30분동안열처리하고동결건조한다. 열처리하기전일부시료를채취하여생균수를측정하여 g당유산균수를측정한다. 3 IFN-γ 측정을위한비장세포부유액의준비및비장세포의배양 > 마우스의비장을적출하여우태아혈청 (Fetal bovine serum, FBS) 10% 가함유된 RPMI-1640 (Invitrogen 사, 미국 ) 으로세척하였다. 마이크로슬라이드글래스 (Micro slide glass) 로비장을잘게으깬뒤 0.40 μm나일론세포여과기 (nylon cell strainer) 로여과하였다 rpm에서 10분간원심분리한후적혈구용해완충액으로적혈구를파괴하였다. 2회원심분리한후 10% FBS RPMI-1640 에비장세포를재부유하였다. 위상차현미경관찰을통해 spleen cell 의농도를측정한다. 48 well plate 에상기재부유한비장세포를 세포 / ml의농도 500uL 시딩 (seeding) 한후, 유산균을접종하여 48시간동안 37, 5% CO 2 인큐베이터에서배양하였다. 배양후상층액은 1000 rpm에서 10 분간원심분리하였고분석때까지 -20 에서보관하였다. 500uL 시딩액을예로들면, 300uL Spleen cell 부유액과 200uL 의유산균현탁액을각각준비하여섞어서 500 ul이되게준비한다. 유산균농도는 1well 당 Spleen cell 과동일농도 ( ) 와 10배적은농도 ( ), 10배많은농도 ( ) 3포인트로준비한다. 인터페론 -γ(ifn-γ) 의측정은 OPT EIA 세트 (Pharmingen 사, 제조국 ) 를이용하였다. ( 나 ) 암세포증식억제활성평가

암세포주 (MCF7 ; 유방암, NCI-H460 ; 폐암 ) 에대한추출물의증식억제효과는 Athukorala 등 (2006) 의방법에따라세포의증식을측정하기위한방법중하나인 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl )-2,5-diphenyl tetra- zolium bromide(mtt) assay 를이용하여측정하였다. 각각의암세포는유산균을 2.

4 암세포주 (MCF7 ; 유방암, NCI-H460 ; 폐암 ) 에대한추출물의증식억제효과는 Athukorala 등 (2006) 의방법에따라세포의증식을측정하기위한방법중하나인 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl )-2,5-diphenyl tetra- zolium bromide(mtt) assay 를이용하여측정하였다. 각각의암세포는유산균을 2.5에서 40ug/mL 농도가되도록처리한후, 10% FBS, penicillin(100 units/ml), steptomycin(50μg/ml) 을첨가한 RPMI 1640배지에서 37, 5% CO2 조건으로배양하였다. ( 다 ) ACE 저해활성측정 ACE 저해활성의측정은 Cushman 과 Cheung 의방법을변형하여측정하였으며, ACE(Angiotensin Converting Enzyme, peptidyldipeptidase, EC ) 1U을 0.1M Potassium phosphate buffer(ph 7.0)5 ml에용해시켰으며기질인 Hippuryl-His-Leu (HHL) 은 0.1M Potassium phosphate buffer(ph 8.3) 와 0.3M NaCl 에용해시켜 5mM의 HHL 기질용액을만들었다. ( 라 ) 항균활성시료는발효식품에서분리한분리균주 22종을사용하였으며, reference 유산균을사용하였다. 배지는 MRS broth, MRS agar, BHI broth, BHI soft agar 을사용하였고, 병원균주로는식중독균인 Escherichia coli KCTC1467 (gram +), Samonella typhimurium KCTC2515 (gram +), Listeria monocytogenes ATCC19115 (gram -), Staphylococcus aureus KCTC 1916 (gram -) 을사용하였다. 3. 연구결과 가. 시판및가정에서제조한김치발효식품에서유산균탐색 (1) 선택배지를이용한유산균분리 Figure 1. The isolation procedure of LAB from fermented foods 그림 1은발효식품으로부터유산균을분리하는공정을나타내었다. 즉, 우선발효식품에서분리한유산균을순수배양하여현미경으로콜로니와셀을형태학적으로분리한후, 다시전기영동을통한단백질패턴으로분리한다. 같은패턴끼리모아그룹핑을한다. 표 1은시판김치의원재료에따라분리한것으로배추김치 9종, 무우김치 4종, 오이김치 4종을사용하였다. Table 1. Fermented foods used in this study

5 Kimchi (17) Types of materials Samples Chinese cabbage a b c d e f g h m Radish i j k l Cucumber n o p q (2) 형태학적인관찰에의해분리한유산균수및분리율총 239개의유산균이 17종의김치로부터선택배지를통에분리되엇다. 이들모두그램음성, 비포자, oxidase 와 catalase 음성을나타내었다. 분리물은 8개의표 2와같이 8개의타입으로분류되었으며 Lactobacilli 그룹은 LL, LM1, LM2, LS biotype 으로구성되었으며, Cocci 그룹은 CL, CM, CS와 CP biotype 으로구성되었다. 그중 Lactobacilli 그룹의 LM1 이 20.1% 로가장분리율이높았으며, Cocci 그룹 CM이 19.7% 로다음순위를차지하였다. 그러나 Cocci 그룹의 CP biotype 은 0.4% 로그비율이가장낮은것으로나타났다. Table 2. Total number and the isolation rate of LAB from various fermented food by morphological observation. Bacterial group Biotypes No. of the isolates Isolation rate(%) long LL Lactobacilli middle1 LM middle2 LM small LS large CL Cocci middle CM small CS pp CP TOTAL (3) SDS-PAGE 분석을이용한유산균분류

Figure 2. Whole cell protein patterns of Leuconostoc mesenteroides between the LAB isolates from fermented foods and the reference strains by SDS-PAGE analysis).

6 Figure 2. Whole cell protein patterns of Leuconostoc mesenteroides between the LAB isolates from fermented foods and the reference strains by SDS-PAGE analysis).lanes: M, Standard size marker (Promega, USA); sample lanes (1-3); reference strains (4-7): 4, Leuconostoc mesenteroides strains L13; 5, L18; 6, L19; 7, L21. 그림 2 는 SDS-PAGE 로표준균주와발효식품에서분리한 Leuconostoc mesenteroides 의단백질패 턴을살펴본결과이다. 그림에서와알수있듯이표준균주와기본밴드의패턴이일치하는것을알수 있었다. 이와같은방법으로다른유산균들도분류하였다. (4) 16S rrna 시퀀싱에의한유산균분리물의종확인 DDBJ database( 에서얻은분리물과종의유형간에 16S rrna 시퀀싱의유사성은표 3과같다. 15개의전형적인종의상동성은 % 를나타내었다. 분리물들은확인되었으며그중 Lactobacillus sakei 가 77개로 32.2% 로가장높은검출율을보여주었으며, Leuconostoc mesenteroides 가 71개로 29.7% 를나타내었다. 반면에 Leuconostoc lactis JCM 6123 와 Pediococcus pentosaceus 는각각 1개가검출되어가장낮은검출율을나타내었다. 그림 3은표 3에서나타난검출율을막대그래프로표시한결과이다. 이연구에서분리물의 16SrRNA 시퀀싱결과들은 DDBJ/ GENEBANK( 에등재하였다. 또한유연관계트리는그림 4에나타내었다. Table 3. Species identification of the LAB isolates in various fermented food by 16S rrna sequencing Species identification Identity (%) Accession No. No. of the isolates Detection rate (%) Enterococcus faecium strain 99.9 DQ

7 CICC6078 Lactobacillus arizonensis 99.7 AJ Lactobacillus brevis 99.8 AB Lactobacillus casei 99.9 D Lactobacillus curvatus 99.7 AM Lactobacillus paracasei 99.9 AJ Lactobacillus plantarum 99.9 DQ Lactobacillus sakei 99.9 AB Leuconostoc citreum IH AF Leuconostoc lactis JCM AB Leuconostoc mesenteroides 99.8 EF Pediococcus pentosaceus 99.9 DQ Streptococcus thermophilus DQ Weissella cibaria 99.8 AM Weissella hellenica 99.9 AB Total The isolation rate (%) Lactobacillus casei Lactobacillus brevis Lactobacillus arizonensis Enterococcus faecium strain... Lactobacillus sakei Lactobacillus plantarum Lactobacillus paracasei Lactobacillus curvatus Weissella hellenica Weissella cibaria Streptococcus thermophilus Pediococcus pentosaceus Leuconostoc mesenteroides Leuconostoc lactis JCM 6123 Leuconostoc citreum IH22 Figure 3. The rate of isolation of the 15 lactic acid bacterial species among the 239 LAB isolates from the 17 kinds of kimchi

8 Figure 4. Phylogenic tree revealed the relationships of the representative LAB isolates from Kimchi. Parenthesis indicates accession numbers obtained from DDBJ database. (6) 김치에서유산균종류별발생빈도표 4는김치 17 종류에서유산균종류별발생빈도를나타낸것이다. 그결과 Lactobacillus sakei 와 Leuconostoc mesenteroides 가각각 13종류의김치에서나타났고, Lactobacillus brevis, Leuconostoc lactis JCM, Pediococcus pentosaceus, Weissella cibaria 등은각각 1종씩에서만나타났다. 이는 Lactobacillus sakei 와 Leuconostoc mesenteroides 가김치에서가장발생빈도가높은균주라는것을확인할수있었다. Table 4. Frequency of occurrence of the LAB species in Kimchi.

9 나. 균체외다당생성유산균의면역활성및생리활성분석 (1) 다양한발효식품에서분리한유산균의균체외다당생산발효식품에서 33개의다당을생성하는유산균을얻었다. 유산균에서의다당생성은탄소원으로 3 가지다른당을포함하는 CDM 배지로수행하였으며, 그들의다당생성능은 TLC 와이미지분석을사용하여분석하였다. 다당생성유산균들은그들의다당생성능에따라선발하였으며, 16s rrna gene sequence 로정성하였으며그결과는표 5와같다. Lb. casei 가 glucose 를함유하는 CDM 배지에서총다당함량이 mg/l 로가장생산량이높았으며, 구성은결합당 47.4, 유리다당 mg.l 을나타내었다. Sucrose 를포함하는 CDM 배지에서는 W. cibaria 가총다당 mg/l, lactose 포함배지에서는 Ln. mesenteroides 가 mg/l 로가장다당생산량이높은것으로나타났다. 또한균주에따라다당을생성할수는당의종류가다른것으로나타났으나, Ln. citreum, Lactococcus lactis subsp. lactis, Lb. paracasei 등 3종은 glucose, sucrose, lactose 포함배지에서모두당을생성하는것으로나타났다.

10 (2) 균체외다당생성유산균의면역활성및생리활성다당을생성하는유산균은면역활성과혈중콜레스테롤감소와같은기능이있는것으로잘알려져있다. 그림 5는균체와균체외다당포함시료를사용하여유발된마우스의마이크로파아지에서 IFN-γ 생성능을조사한결과이다. ( 가 ) 유산균과균체외다당을포함한유산균의면역활성

11 Figure 5. IFN-γ production in mouse macrophage stimulated with combination of lactic acid bacteria cell and exopolysaccharide fraction. Figure 6. mrna Expression of TNF-α, IL-6 and IL-12 by Lactobacillus paracasei (LP) and Pediococcus pentosaceus (PP) in mouse macrophage. 다당의면역활성을측정하고다양한균전처리에대한면역활성을측정한결과대부분의균체외다 당포함시료가균체시료보다높는 IFN-γ 생성능을보였으며, 특히 Lb. paracasei 의경우 2,586 pg/m:, P.pentosaceus MJK7 은 2,716 pg/ml 로높게나타났다. 이두균주가생성하는다당의 IL-6, IL-12, TNF-a 효과를 RT-PCR 로검토해본결과는그림 6 과같다. 그결과모든 cytokine 에서시 료의농도가높아질수록높은활성을나타내었다. 그러나 P.pentosaceus MJK7 는일정농도이상에

12 서 cytokine 의활성이낮아지는것으로나타났다. ( 나 ) 발효식품에서분리한유산균의항암활성그림 7과 8은암세포주 ( 페암세포주 H460 와유방암세포주 MCF7) 에대한추출물의증식억제효과를나타낸것이다. Lb. paracasei KB28 과 P. pentosaceus MJK7 는매우강한암억제활성을보여주었다. 페암세포주에대한억제활성은두균주모두 20 ug/ml 에서첨가시약 60% 를나타내었으며, 유방암세포주에대한억제활성은 20 ug/ml 에서첨가시 Lb. paracasei KB28 가 50%, P. pentosaceus MJK7 가 30% 를나타내었다. 1 폐암 Cytotoxicity(%) A 20 Cytotoxicity(%) B LP (ug/ml) PP (ug/ml) Figure 7. Cytotoxical activities of culture of LAB isolated from fermented foods on the viability of H460(human lung cancer cell line) cells in MTTassay. 2 유방암

13 Cytotoxicity(%) Cytotoxicity(%) A LP (ug/ml) B PP (ug/ml) Figure 8. Cytotoxical activities of culture of LAB isolated from fermented foods on the viability of MCF-7 (breast cancer cell line) cells in MTT assay. ( 다 ) 발효식품에서분리한유산균의 ACE 저해활성 발효식품에서분리한다당생성유산균의항고혈압활성은표 6 과같다. Table 6. ACE inhibitory activity of EPS produced LAB from fermented foods. Species identification Strain no. ACE inhibitoty activity(%) Lactobacillus reuteri df Pediococcus pentosaceus kf Weissella confusa mjj Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus cj Leuconostoc citreum kl Lactobacillus paracasei kb Lactobacillus coryniformis Cb Leuconostoc mesenteroides cq Streptococcus thermophilus dk Lactobacillus casei cp Pediococcus pentosaceus mjk Lactobacillus brevis kf Lactobacillus paracasei cg Control 항고혈압활성은 Lb. reuteri DF2 가 93.42% 로가장높았으며, P.pentosaceus KF %, W.confusa MJJ % 등의순으로나타났다. Lb. paracaseikb28 의항고혈압활성은 77.02% 를나 타내었다. ( 라 ) 발효식품에서분리한유산균의항균활성

14 항균활성은 agar spot assay 방법으로그림 9 와같이측정하였으며그결과는표 7 과같다

15 continued Lb. arizonensis KC31 와 Lb.brevis KF23 균주에서높은항균활성을나타내었다.

16 Figure 9. Inhibition of Staphylococcus aureus KCTC1916 by isolated lactic acid bacteria using agar spot assay. A: Lb.arizonensis KC31. B:Lb.brevis KF23.(These strains showed high inhibition activity all against tested strains). 4. 결과요약 본연구는기능성이우수한유산균을김치용스타터로이용하기위해, 다양한발효식품으로부터유산균의분포를조사하고, 다당생성유산균의면역활성, 항암, ACE 저해, 항균활성등의건강기능성을규명하는연구를수행하였다. 발효식품으로부터유산균의분포도를검토하고다양한유산균을분리한결과, 발효식품으로부터 239개의유산균을순수분리하였다. 분리한유산균을동정하고분포도를조사한결과김치에서는 Lb. sakei 와 Ln. mesenteroides 가우점종으로나타났다 γ 5. 인용문헌 Alan D. Welman and Ian S. Maddox Exopolysaccharides from lactic acid bacteria. perspectives and challenges TRENDS in Biotechnology, 21(6). p. 269~274 Ebina, T., Ogata, N. and Murata, K Antitumor effect of Lactobacillus bulgaricus 878R. Biotherapy, 9: Grobben, G.J., Van Casteren, W.H.M., Schols, H.A., Oosterveld, A., Sala, G., Smith, M.R., Sikkema, J. and De Bont, J.A.M Analysis of the exopolysaccharides produced by Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus NCFB2772 grown in continuous culture on glucose and fructose. Appl. Microbiol. Biotechnol.48:

17 Hosono, A., Lee, J., Ametani, A., Natsume, M., Hirayama, M., Adachi, T. and Kaminogawa, S Characterization of a water-soluble polysaccharide fraction with immunopotentiating activity from Bifidobacterium adolescentis M Biosci. Biotechnol. Biochem. 61: Kim, Y.G., Ohta, T., Takahashi, T., Kushiro, A., Nomoto, K. and Yokokura, T Probiotic Lactobacillus casei activates innateimmunity via NF-kappa Band p38 MAPkinase signaling pathways. Microbes Infect. 8: Kitazawa, H., Harata, T., Uemura, J., Saito, T., Kaneko, T. and Itoh, T Phosphate group requirement for mitogenic activation of lymphocytes by an extracellular phosphopoly saccharide from Lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus. Int J. Food. Microbiol.40: Nishimura-Uemura, J., Kitazawa, H., Kawai, Y., Itoh, T., Oda, M. and Saito, T Functional alteration of murine macrophages stimulated with extracellular polysaccharides from Lactobacillus delbrueckiis sp.bulgaricus OLL1073R-1. Food Microbiol. 20: Oda, M., Hasegawa, H., Komatsu, S., Kambe, M. and Tsuchiya, F Anti-umor polysaccharide from Lactobacillus sp. Agric. Biol. Chem.47: 연구결과활용 연도 ( 연차 ) 활용구분제목 2010(3 년차 ) 학술성과 - 유산균스타터를첨가한배추즙의품질특성 2009(2 년차 ) 특허출원 2008(1 년차 ) 학술성과 - Immunomodulatory effect of exopolysaccharide-producing LAB from fermented foods on cytokine production by Mouse Spleen - 시판김치의품질특성 7. 연구원편성

18 구분 소속 ( 과 / 연구소 ) 직급성명수행업무 참여기간 책임자친환경농업연구과지방농업연구사윤향식연구총괄 08~ 10 공동연구자친환경농업연구과지방농업연구사노재관연구협조 08~ 10 공동연구자친환경농업연구과지방농업연구사김기식연구협조 08~ 10 공동연구자친환경농업연구과지방농업연구관노창우연구자문 08~ 10 공동연구자농촌자원과지방생활지도사연영흠연구자문 08~ 10 공동연구자괴산군센터지방생활지도사전영희연구자문 08~ 10 공동연구자충북대학교교수한남수연구자문 08~ 10 주요전문용어해설 유산균 : 글루코오스등당류를분해하여젖산을생성하는세균으로유산균이라고도한다. 젖산발효에의 해생성되는젖산에의해서병원균과유해세균의생육이저지되는성질을유제품, 김치류, 양조식품등의식품제조에이용한다. 또, 포유류의장내에서식하여잡균에의한이 상발효를방지하여정장제 ( 整腸劑 ) 로도이용되는중요한세균이다. 그람양성균이며, 통성 혐기성또는혐기성이다. 락토바실러스속과스트렙토코커스속에여러종류가알려져있다. SDS-PAGE : Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis(sds-page) 는단백질 을정제하는동안이를 monitor 하고정제된단백질의동질성을알기위한가장좋 은방법이다. SDS-PAGE 는일반적으로단위체의분자량을결정하고, 정제된단백질 의단위체구성을알기위해사용된다. 면역 : 면역이란 (immunity) 외부로부터침입하는미생물, 동종이조직이나체내에생긴불필요한산물들과특이하게반응하여항체를만들며, 이것을제거하여그개체의항상성을유지하는현상이다.

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α α α α α α α α 太陰調胃湯加減方 dbdb 마우스 肝에 대한 아디포사이토카인 및 발현에 미치는 영향 SREBPs 와 섞어서 하고 마커 또한 하여 전기 영동을 하였다 전기영동을 한 후에 에 를 쪼여서 각 를 확인하였다 이 를 프로그램을 이용해 수치화하 여 분석하였다 肝 조직 동결 절편 분리한 조직은 로 시간 동안 고정 시킨 후 에 세척한 후 물기를